Спосіб одержання поліфенольного комплексу з гепатопротекторною активністю з галінсоги дрібноквіткової

Реферат: Винахід належить до фармації та медицини, а саме до способів одержання комплексів біологічно активних речовин із рослинної сировини з гепатопротекторною дією з подальшим їх використанням як лікарських субстанцій при створенні препаратів у різних лікарських формах. Спосіб здійснюють шляхом екстракції трави галінсоги дрібноквіткової (Galinsoga parviflora Cav.) 10-кратною кількістю 69-71 % етанолу протягом 12-13 годин, одержаний екстракт концентрують до 1/20 початкового об'єму, очищують хлороформом при співвідношенні водного залишку і хлороформу як 1:1 та висушують. UA 106088 C2 (12) UA 106088 C2 UA 106088 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Винахід належить до фармації та медицини, а саме до способів одержання комплексів біологічно активних речовин із рослинної сировини з гепатопротекторною дією з подальшим їх використанням як лікарських субстанцій при створенні препаратів у різних лікарських формах. Останнім часом спостерігається тенденція до значного збільшення частоти захворювань печінки та жовчовивідних шляхів. За даними ВООЗ, число хворих із різною патологією гепатобіліарної системи перевищує 2 млрд. осіб [1]. В Україні за останні 10 років поширеність хронічних гепатитів і цирозів печінки збільшилася щонайменше в 2,5 рази. Комплексна терапія захворювань печінки різного ґенезу вимагає використання безпечних багатофункціональних препаратів - гепатопротекторів, які сприяють збереженню та відновленню пошкоджених тканин печінки [2]. З цих позицій представляють інтерес поліфенольні сполуки природного походження, що виявляють антиоксидантний ефект, потенціюють ендогенні антиоксидантні системи гепатоцитів, тощо [3]. Відомий спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин, що має гепатопротекторну дію [4]. Спосіб здійснюють шляхом екстрагування подрібненої сухої трави гороху посівного 10-кратною кількістю 49-51 % етанолу протягом 11-12 годин. Одержаний екстракт упарюють до водного залишку, який очищують від речовин ліпофільної природи хлористим метиленом при співвідношенні водний залишок: хлористий метилен 3:4 з подальшим сушінням до сухого залишку. Недоліком цього способу можна вважати надмірні витрати хлористого метилену. За прототип вибрано відомий спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з гіпоазотемічною, гепатопротекторною, антиоксидантною та протизапальною активністю [5], згідно з яким як рослинну сировину використовують листя робінії псевдоакації, екстракцію здійснюють 12-кратною кількістю 29-31 % етанолу протягом 13-15 годин. Одержаний після упарювання при температурі 65 °C водний залишок додатково відстоюють протягом 12 годин і фільтрують, а очищення хлороформом здійснюють при співвідношенні водного залишку та хлороформу як 2:1 у чотири етапи. До недоліків способу за прототипом можна віднести необхідність відстоювання об'єднаного та сконцентрованого екстракту протягом 12 годин, що призводить до адсорбції значної кількості фенольних сполук на осаді речовин ліпофільної природи та збільшення часових затрат на здійснення вище наведеного способу. Задачею винаходу є створення економічно доцільного способу отримання поліфенольного комплексу рослинного походження з гепатопротекторною активністю, який завдяки використанню нетрадиційної сировини, а саме трави галінсоги дрібноквіткової, у поєднанні з сукупністю параметрів заявленого способу забезпечує одержання кінцевого продукту з вираженою фармакологічною дією. Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі одержання поліфенольного комплексу з гепатопротекторною активністю шляхом екстракції подрібненої рослинної сировини етанолом, упарювання до водного залишку, очищення хлороформом з подальшим сушінням, згідно з винаходом, передбачено, що як рослинну сировину використовують траву галінсоги дрібноквіткової (Galinsoga parviflora Cav.), екстракцію здійснюють 10-кратною кількістю 69-71 % етанолу протягом 12-13 годин, одержаний екстракт концентрують до 1/20 початкового об'єму та очищують хлороформом при співвідношенні водного залишку і хлороформу як 1:1. Всі параметри заявленого способу визначено експериментальним шляхом з урахуванням біологічної активності одержаних комплексів, ефективності, доступності реактивів. Галінсога дрібноквіткова (Galinsoga parviflora Cav.) - неофіцінальна рослина, проте її застосовують у народній медицині. Траву використовують, як кровоспинний, ранозагоювальний, протицинготний, гіпотензивний та матковий засіб, її жують при стоматитах, гінгівітах, пошкодженнях слизової оболонки ротової порожнини. Крім того, коріння вважають жарознижуючим засобом. Експериментально підтверджена кровоспинна дія препарату на матку, вплив на артеріальний тиск не відмічено [6]. Авторами вперше було досліджено гепатопротекторну дію фенольних сполук із трави галінсоги дрібноквіткової, не відому з джерел інформації. Дослідним шляхом було визначено, що оптимальним екстрагентом для вилучення фенольних сполук з вибраної сировини є 70 % етанол. Визначені експериментальним шляхом такі ознаки, як кількісне співвідношення сировини і екстрагенту 1:10 та тривалість екстракції протягом 12-13 годин, є необхідними і достатніми для ефективного здійснення заявленого способу і одержання кінцевого продукту з очікуваним видом активності. Спосіб здійснюється таким чином. Подрібнену до розміру часток 2,0-3,0 мм суху траву галінсоги дрібноквіткової екстрагують методом перколяції 10-кратною кількістю 69-71 % етанолу протягом 12-13 годин. Одержаний екстракт концентрують під вакуумом при температурі 50 1 UA 106088 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 60 °C до 1/20 початкового об'єму та очищують від речовин ліпофільної природи хлороформом у співвідношенні водний залишок - хлороформ 1:1 з подальшим сушінням до сухого залишку. В результаті здійснення заявленого способу одержують поліфенольний комплекс у вигляді сухого екстракту, що відповідає вимогам Державної фармакопеї України [7]. Він являє собою порошок жовтого кольору, втрата в масі при висушуванні не перевищує 5 %, розчинний у спирто-водних сумішах, гарячій воді, малорозчинний у метанолі та етанолі. Його вихід складає 10-12 %. Винахід ілюструється прикладами. Приклад 1. 5 кг подрібненої до 2,0-3,0 мм сухої трави галінсоги дрібноквіткової вміщують у перколятор та екстрагують 70 % етанолу протягом 12,5 години зі швидкістю збору екстракту 4 л/год. Одержаний екстракт (50 л) упарюють при температурі 50 °C під вакуумом у вакуумциркуляційному апараті, до водного залишку обсягом 2,5 л. Водний залишок після охолодження до кімнатної температури очищують хлороформом в реакторі з мішалкою в 5 етапів, додаючи послідовно по 2,5 л хлороформу на кожному етапі з подальшим перемішуванням протягом 10 хвилин і відстоюванням протягом 2 години на кожному етапі. Одержаний водний концентрат висушують у вакуум-сушильній шафі до отримання сухого екстракту. Приклад 2. Вивчення гепатопротекторної дії поліфенольного комплексу з трави галінсоги дрібноквіткової, одержаного за заявленим способом, проводили на моделі гострого токсичного ураження печінки тетрахлорметаном (ТХМ) [3], який вводили внутрішньошлунково мишам у вигляді 50 % олійного розчину в дозі 10 мл/кг одноразово. За препарат порівняння вибрано Силібор. Для визначення гепатопротекторної активності досліджуваний препарат та препарат порівняння вводили тваринам внутрішньошлунково у лікувально-профілактичному режимі протягом 3 днів. На третій день введення препаратів проводили за 1 годину до та через 2 години після впливу токсину. Поліфенольний комплекс застосовували у формі водного розчину в дозі 50 мг/кг, 200 мг/кг та 500 мг/кг. Препарат порівняння Силібор - в дозі 200 мг/кг [3]. Тварини груп інтактного контролю та модельної патології одержували внутрішньошлунково питну воду в еквівалентному об'ємі. Лабораторних тварин (рандомбредні миші самці масою 15-20 г) розподілили на групи відповідно до препарату, що вони одержували, та його дози: 1. Інтактний контроль, n=13. 2. Модельна патологія (ТХМ), n=13. 3. Поліфенольний комплекс з трави галінсоги дрібноквіткової (50 мг/кг) + ТХМ, n=8. 4. Поліфенольний комплекс з трави галінсоги дрібноквіткової (200 мг/кг) + ТХМ, n=8. 5. Поліфенольний комплекс з трави галінсоги дрібноквіткової (500 мг/кг) + ТХМ, n=8. 6. Силібор (200 мг/кг) + ТХМ, n=9. Через добу після введення токсину мишей декапітували під легким ефірним наркозом. Гепатопротекторну дію препаратів оцінювали за активністю трансамінази сироватки крові. Також враховували коефіцієнт маси печінки, що характеризував ступінь вираженості запального процесу в органі та вказував на тяжкість ураження гепатоцитів [3]. Визначення активності аланінамінотрансферази (АлАТ) в сироватці крові проводилося спектрофотометричним методом, який базується на тому, що кінцеві продукти трансамінування (глютамінова та піровиноградна кислоти) реагують з динітрофенілгідразином у лужному середовищі з утворенням забарвленого комплексу. Інтенсивність забарвлення при 540 нм прямо пропорційна активності ферменту. Останню визначали за калібрувальним графіком [8]. Розраховували коефіцієнт маси печінки (співвідношення маси органа і маси тіла тварин) [3]. Результати дослідження наведені в таблиці. 2 UA 106088 C2 Таблиця Дослідження гепатопротекторної активності поліфенольного комплексу з трави галінсоги дрібноквіткової у тварин з тетрахлорметановим гепатитом Група дослідних тварин Інтактний контроль Модельна патологія (ТХМ) Поліфенольний комплекс (50 мг/кг) + ТХМ Поліфенольний комплекс (200 мг/кг) + ТХМ Поліфенольний комплекс (500 мг/кг) + ТХМ Силібор (200 мг/кг) + ТХМ Масовий коефіцієнт печінки, % n M±m 13 5,09±0,11 АлАТ, ммоль/(год. • л) n M±m 7 1,10±0,19 13 6,28±0,24* 7 4,34±0,02* 8 5,51±0,29 # 8 2,56±0,06* 8 5,55±0,23 # 8 2,78±0,06* 8 5,08±0,24 #& 8 2,79±0,12' 9 5,95±0,27* 9 3,17±0,18* #& # # # Примітка. * - достовірні відмінності відносно групи інтактного контролю (р