Спосіб одержання поліфенольного комплексу “флавітин” з протизапальною, анальгетичною, противиразковою та антиоксидантною активністю

Спосіб одержання поліфенольного комплексу з протизапальною, анальгетичною, противиразко вою та антиоксидантною активністю, що включає екстракцію рослинної сировини при співвідношенні сировина екстрагент 1 10, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують листя винограду, краще сорту Дабуги, екстракцію проводять 50 % спиртом етиловим з подальшим упарюванням до водного залишку, фільтрацією, ресорбцією фенольних сполук з осаду водою, об'єднанням фільтрату з одержаним водним розчином, упарюванням і сушінням Винахід відноситься до фармації, зокрема до способів одержання комплексів біологічно активних речовин з лікарської сировини, а саме поліфенольного комплексу з листя винограду, краще сорту Дабуги, з вираженою протизапальною, анальгетичною, противиразковою та антиоксидантною дією, і може бути використаний як активна діюча речовина лікарських засобів комплексної дії Запальний процес, а також болісний синдром, що його супроводжує, є супутниками великої КІЛЬКОСТІ хвороб До того ж для багатьох хворих характерна наявність сукупності різних хвороб, які потребують комплексного лікування 3 підвищенням несприятливого екологічного стану довкілля, підвищенням алергізацм населення виникла тенденція до більш поширеного використання препаратів рослинного походження Відомий спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин, що має гепатопротекторну дію [Патент 30879А, Україна, А61К 38/43, А61К 9/20, заявл 16 06 1998р , опубл 15 12 2000р Бюл №7], який полягає у екстракції трави гороху посівного етанолом, упарюванні екстракту до водного залишку з подальшим очищенням хлористим метанолом Продукт, одержаний зазначеним способом, має моноспрямовану фармакологічну активність і не може розглядатися як препарат комплексної дії Відомий також спосіб одержання фенольних сполук, які проявляють гепатозахисну активність [Патент 20932А, Україна, А61К 31/05, А61К 35/78, заявл 27 10 1993р , опубл 27 02 1998р Бюл №1] Спосіб здійснюють шляхом екстрацм подрібнених пагонів карагани деревовидної гарячою водою при співвідношенні сировина екстрагент 1 10 протягом 40-50 хвилин при температурі 90°С з наступним настоюванням протягом 10 хвилин Як і у попередньому випадку засіб, одержаний за даним способом, має переважно гепатозахисну активність, тобто не має комплексної фармакологічної дії Завданням винаходу є створення способу одержання поліфенольного комплексу з листя винограду, краще сорту Дабуги, при здійсненні якого одержують цільовий продукт з вираженою протизапальною, анальгетичною, противиразковою та антиоксидантною активністю Поставлене завдання вирішується таким чином, що в способі одержання поліфенольного комплексу з протизапальною, анальгетичною, противиразковою та антиоксидантною активністю, що включає екстракцію рослинної сировини при співвідношенні сировина екстрагент 1 10 додатково передбачено, що у якості рослинної сировини використовують листя винограду, краще сорту Дабуги, екстракцію проводять 50% спиртом етиловим з подальшим упарюванням до водного залишку, фільтрацією, ресорбцією фенольних сполук з осаду водою, об'єднанням фільтрату з одержаним водним розчином, упарюванням і сушкою 00 (О ю 59681 Параметри заявленого способу визначені ексції 50% спиртом етиловим при співвідношенні сипериментальним шляхом і обумовлюють одерровина екстрагент 1 10 Одержаний екстракт жання поліфенольного комплексу "Флавітин" з упарювали до 0,7л водного залишку з видаленням високою фармакологічною дією конденсату спирту етилового і відстоювали протягом 5 годин Осад відфільтровували і обробляли Для заявленого способу характерні економіч0,2л води для ресорбції фенольних сполук Фільтність, безпечність, високий вихід цільового продукрат поєднували з одержаним водним розчином ту, простота відтворення у стандартних виробнифенольних сполук, упарювали і піддавали сушці чих умовах фармацевтичних підприємств Одержаний вихід сухого екстракту 15,8% при воЗаявлений спосіб здійснюють наступним чилогості 4,3% ном подрібнену сировину (листя винограду, краще сорту Дабуги) піддають екстракції 50% спиртом Приклад 2 етиловим при співвідношенні сировина і екстраВивчення протизапальної дії поліфенольного гент 110, одержаний екстракт упарюють до видакомплексу "Флавітин" проводили на моделі гостролення спирту етилового, водний залишок відфільго карагенінового запалення задньої КІНЦІВКИ нелітровують від осаду, осад обробляють водою для нійних білих щурів різної статі вагою 140-200г ресорбції фенольних сполук, одержаний водний Запалення викликали субплантарним введенрозчин останніх поєднують з фільтратом, упарюням 1% розчину карагеніну в об'ємі 0,1мл в одну із ють і піддають сушці КІНЦІВОК білих щурів Дослідний комплекс "Флавітин" вводили у шлунок однократно у вигляді водОдержаний поліфенольний комплекс являє ного розчину за 0,5 годин до моделювання запасобою порошок темно-брунатого кольору, кислулення в дозах 25, 50 і 100мг/кг вато-гіркого смаку з характерним специфічним запахом Розчиняється у воді, 50% спирті етилоВ якості препарату порівняння використовувавому, погано розчиняється у етиловому ефірі та ли вольтарен (ЕД5о=8мг/кг) хлороформі Показником протизапальної дії вибрано ступінь пригнічення набряку стопи задньої КІНЦІВКИ Винахід ілюструється прикладами щурів Приклад 1 1200г листя винограду сорту Дабуги подрібнюРезультати ДОСЛІДІВ наведено у таблиці 1 вали до розміру часток 2-Змм і піддавали екстракТаблиця 1 Протизапальна активність поліфенольного комплексу "Флавітин" Доза, мг/кг Умови ДОСЛІДІВ Поліфенольний плекс "Флавітин" Вольтарен Контроль ком 25 50 100 8 Збільшення об'єму стопи через 4 години (М±т) 2,9±,1 8х 4,0±0,35 2,3±0,2х 2,2±0,21х 4,5±0,18 Пригнічення запального набряку, % від контролю 35,6 11,2 48,9 51,1 Примітка х - по відношенню до контролю при р < 0,05 Оцінка одержаних результатів показує, що поліфенольний комплекс "Флавітин" має виражену протизапальну активність Дані по використанню субстанції "Флавітин" в дозах 25, 50 і 100мг/кг свідчать про наявність протизапальної активності різного ступеню вираженості, яка знаходиться в межах 11,2-48,9% Найбільш виражена протизапальна активність "Флавітину" в дозі 100мг/кг і складає 48,9%, що практично дорівнює активності вольтарену Приклад З Анальгетичну активність "Флавітину" вивчали у дослідах на нелінійних білих щурах вагою 140200г на моделі оцтовокислих судом Синдром болю відтворювали внутрішньочеревинним введенням 0,75% розчину оцтової кислоти із розрахунку 1 мл на 100г маси щурів За тваринами спостерігали протягом ЗО хвилин і підраховували за цей проміжок часу КІЛЬКІСТЬ "судом", які супроводжувалися витягуванням задніх КІНЦІВОК та вигинанням спини Препаратом порівняння був анальгін (ЕДбо=50мг/кг) Критерієм анальгетичної активності було вибрано зменшення КІЛЬКОСТІ судом у ПІДДОСЛІДНИХ тварин Результати проведених досліджень на наявність анальгетичної дії досліджуваного поліфенольного комплексу "Флавітин" наведені у таблиці 2 59681 Таблиця 2 Анальгетична активність поліфенольного комплексу "Флавітин" КІЛЬКІСТЬ "судом" за ЗО Доза, мг/кг Умови ДОСЛІДІВ хвилин (М±т) х 34,2±5,0 Х 26,4±5,2 Х 31,2±5,1 Л 31,4±5,4 60,4±6,2 25 50 100 50 Поліфенольний комплекс "Флавітин" Анальгін Контроль Пригнічення больового подразнення, % від контролю 43,4 56,3 48,3 48,0 х Примітка - по відношенню до контролю при р < 0,05 Анальгетична активність "Флавітину" у дозі 100мг/кг дорівнює активності анальгіну, а в дозі 50мг/кг - перевищує його активність Приклад 4 Вивчення противиразкової активності "Флавітину" у дозі 50мг/кг проводили на нелінійних щурах масою 130-180г, використовували модель гострого експериментального ураження шлунку, викликано го поєднаним введенням ульцерогенних факторів преднізолону (20мг/кг) і 80% етилового спирту в об'ємі 0,6мл/100г маси живої ваги тварини Водний розчин "Флавітину" і препарат порівняння метилурацил вводили у шлунок за 0,5-1 годину до введення ушкоджуючих факторів Результати експерименту наведені в таблиці З Таблиця З Противиразкова активність поліфенольного комплексу "Флавітин" Доза, мг/кг Умови ДОСЛІДІВ Поліфенольний комплекс "Флавітин" Метилурацил Контроль Ступінь ушкодження слизової Противиразкова активність, оболонки шлунка % від контролю 50 2,20±0,01 126 45 х 35 2,60±0,2 4,0±0,04 Примітка х - по відношенню до контролю при р < 0,05 Аналіз результатів показав, що досліджуваний комплекс "Флавітин" має виражену противиразкову активність, яка на 10% перевищує таку саму у метилурацила Приклад 5 Вивчення антиоксидантної активності поліфенольного комплексу "Флавітин" проводили на моделі експериментального гострого гепатиту у дослідах на білих нелінійних щурах масою 180-240г Експериментальний гострий гепатит моделювали внутрішньочеревним введенням щурам класичного гепатотоксину - тетрахлорметану, 25% масляний розчин якого вводили з розрахунку 0,2мл на 100г маси тіла тварини Заявлений поліфенольний комплекс "Флаві тин" у дозах 25мг/кг, 50мг/кг і ЮОмг/кгта препарат порівняння токоферол (Вітамін Є) у дозі 50мг/кг вводили тваринам внутрішньошлунково за допомогою спеціального зонду за 1 годину до ін'єкції гепатотоксину ДОСЛІДНІ тварини були поділені на 6 груп тварини з експериментальним гепатитом, інтактні тварини, тварини, ліковані токоферолом та групи тварин, лікованих "Флавітином" у дозах 25мг/кг, 50мг/кг, 100мг/кг Антиоксидантну активність (інтенсивність вільнорадикальних процесів) оцінювали за концентрацією малонового діальдепду (МДА) у гомогенатах печінки Дані експерименту наведені у таблиці 4 Таблиця 4 Антиоксидантна активність поліфенольного комплексу "Флавітин" Умови досліду 1 Тварини з експериментальним гепатитом Інтактні тварини рин 2 Доза, мг/кг 3 7 74,0±3,2х 7 37,0±2,1 КІЛЬКІСТЬ тва Концентрація МДА у гомоге- Антиоксидантна наті печінки, ммоль/л активність, % 4 5 8 59681 Продовження таблиці 4 1 Тварини, ліковані поліфенольним комплексом"Флавітин" Тварини, ліковані токоферолом 2 7 7 7 7 3 25 50 100 50 Використання "Флавітину" у дозах 25мг/кг та 100мг/кг викликало антиоксидантний ефект у порівнянні з інтактними тваринами (11,1% та 33,6% ВІДПОВІДНО) Найбільш виражена антиоксидантна активність спостерігалась при використанні "Флавітину" у дозі 50мг/кг-47,3%, яка перевищувала активність токоферолу у аналогічній дозі - 43,1% Таким чином, експериментальне встановлено, що поліфенольний комплекс "Флавітин", одержа Комп'ютерна верстка Т Чепелєва 4 65,8±3,8 ХХ 39,9±2,8 ХХ 49,1±3,8 хх 42,1±3,0 5 11,1 47,3 33,6 43,1 ний у ВІДПОВІДНОСТІ з заявленим способом, характеризується комбінацією високих протизапальних, анальгетичних, противиразкових та антиоксидантних властивостей Заявлений спосіб простий і економічний, не потребує спеціального обладнання та дефіцитних або шкідливих для здоров'я людини і довкілля реагентів Спосіб може бути впроваджений на будьякому фармацевтичному підприємстві зі стандартним обладнанням Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна