Спосіб одержання поліфенольного комплексу з переважно гемостатичною та діуретичною активністю

Спосіб одержання поліфенольного комплексу з переважно кровоспинною та діуретичною активністю, що включає екстракцію рослинної сировини 50% етанолом, упарювання, відокремлення осаду, обробку етанолом для розділення речовин білкової та полісахаридної природи, упарювання та сушку очи щеного водно-спиртового екстракту, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують пагони ожини сизої, екстракцію проводять при співвідношенні сировина : екстрагент 1:8-9, одержаний екстракт упарюють до видалення етанолу та відстоюють, відокремлений осад принаймні тричі промивають гарячою водою, а одержану водну фракцію об'єднують з надосадовою рідиною до початку стадії упарювання останньої перед обробкою рівною кількістю 95% етанолу. Винахід відноситься до хіміко-фармацевтичної галузі, зокрема, до способів одержання комплексів біологічно активних речовин з рослинної сировини, а саме поліфенольного комплексу з переважно кровоспинною та діуретичною активністю з пагонів ожини сизої. Створення ефективних і нешкідливих препаратів з комплексною фармакологічною, зокрема гемостатичною та діуретичною дією є актуальним завданням сучасної фармації та медицини. Одним із шляхів вирішення даної проблеми є створення нових засобів, рослинного походження, яке здебільшого не мають побічних ефектів. Відомий спосіб одержання протимікробного, кровоспинного та цитотоксичного засобу [Деклараційний патент 56771А, Україна МПК7 А61К35/78, заявл. 05.09.2002, опубл. 15.05.2003, Бюл. №5], який полягає у екстракції знежиреного хлороформом шроту з кори рослин роду вільха 70% етанолом методом дрібної мацерації при загальному співвідношенні сировина : екстрагент 1:10 - 1:15 з наступною фільтрацією та упарюванням одержаного сумарного екстракту. До недоліків відомого способу можна віднести використання такого реактиву як хлороформ, що потребує використання додаткових засобів захисту персоналу, ускладнює технологічний процес та підвищує вартість одержаного засобу. Відомий також спосіб одержання лікарського засобу з капілярозміцнювальною, мембраностабілізувальною та кровоспинною дією [Деклараційний патент 58820А, Україна, МПК7 А61К35/78, заявл. (19) UA (11) 83527 (13) (21) a200607844 (22) 13.07.2006 (46) 25.07.2008, Бюл.№ 14, 2008 р. (72) ВОЛКОВОЙ ВАЛЕРІЙ АРКАДІЙОВИЧ, UA, ЛУК'ЯНОВА ЛАРИСА ВОЛОДИ МИРІВНА, UA, КОВАЛЬОВ СЕРГІЙ ВОЛОДИ МИРОВИЧ, U A, ГІСЦЕВА ОЛЬГА АРКАДІЇВН А, U A (73) НАЦІОН АЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, UA (56) UA 69626 A, 15.09.2004. UA 56771 A, 15.05.2003. UA 58820 A, 15.08.2003. UA 36804 A, 16.04.2001. UA 59681 A, 15.09.2003. UA 73884 C2, 15.09.2005. UA 73063 C2, 15.06.2006. UA 59681 A, 15.06.2003. Лікарськи рослини: Енциклопедичний довіник/За ред. А.М. Гродзінського.-К.:Українська енциклопедія, 1990. C2 1 3 83527 4 05.11.2002, опубл. 15.08.2003, Бюл. №8] шляхом зої входять: сума флавоноїдів у перерахунку на одержання водного настою з пагонів ожини сизої у рутин 1,38%, дубильних речовин 7,4%, що суттєво співвідношенні 1:10. перевершує вміст БАР у більшості лікарських росВідомий спосіб простий у виконанні, проте лин з кровоспинною дією, наприклад гірчака перодержаний за таким способом засіб має певні нецевого. доліки. По-перше, засіб необхідно готувати безпоЯкщо використання пагонів ожини сизої у якосередньо перед вживанням, бо одержаний водний сті засобу з кровоспинною дією є відомим, то їх настій не підлягає тривалому зберіганню, по-друге, діуретична активність, виявлена авторами, не візасіб у такій лікарській формі не піддається точнодома з доступних джерел інформації. му дозуванню діючої речовини. Крім того, одержаЕкспериментальним шляхом було визначено ний за відомим способом засіб має відносно вузьспіввідношення сировини до екстрагенту як 1:8-9, кий спектр фармакологічної дії. яке забезпечує одержання засобу з заданою фарНайближчим за сукупністю технологічних примакологічною дією і відповідає технологічним вийомів до заявленого способу є спосіб одержання могам практичного здійснення заявленого спосокомплексу поліфенольних сполук з протизапальбу. Менша кількість екстрагенту не дозволяє ною та кардіопротекторною дією [Деклараційний ефективно провести екстракцію і створює складпатент 69626А, Україна, заявл. 21.10.2003, опубл. нощі технологічного характеру при обробці великої 15.09.2004, Бюл. №9], який передбачає екстракцію кількості сировини, наприклад, закупорювання 50% етиловим спиртом трави чини весняної при зливного отвору. Збільшення кількості екстрагенту співвідношенні сировина : екстрагент 1:7 протягом нераціонально, тому що вичерпна екстракція си48 годин, упарювання одержаного екстракту до ровини забезпечується заявленою кількістю екст1/7-1/8 попереднього об'єму, обробку упареного рагента. комплексу 96% етиловим спиртом при співвідноВинаходом передбачено додаткове промишенні 1:1,5, відокремлення осаду упарювання навання відокремленого осаду гарячою водою, що досадової рідини до 1/5 - 1/6 попереднього об'єму і забезпечує вилучення з нього тієї частини полі сушку. фенольних сполук, які залишилися в осаді, причоПроте наведений спосіб призначений лише му, одержаний водний витяг об'єднують з надосадля одержання засобу, який проявляє протизападовою рідиною, яка містить цільовий продукт. льну, кардіопротекторну та антиоксидантну активТаким чином підвищується продуктивність та ність. економічність заявленого способу. Завданням винаходу є створення способу Заявлений спосіб здійснюють наступним чиодержання поліфенольного комплексу з переважном. но гемостатичною та діуретичною дією, який шляВисушені при температурі не вище 40°С пагохом екстракції пагонів ожини сизої при заданих ни ожини сизої товщиною не більше 5,0мм, загопараметрах способу дозволяє одержати засіб у товлені у період з липня по вересень, подрібнюформі сухого екстракту з вираженою фармакологіють, завантажують у екстрактор і заливають 50% чною дією, який може бути використаний як активетанолом у співвідношенні сировина : екстрагент на діюча речовина при створенні лікарських засо1:8-9. Екстракцію проводять методом перколяції. бів у різних лікарських формах. Одержаний екстракт упарюють до видалення етаПоставлене завдання вирішується таким чинолу, відстоюють, наприклад, 2-3 години при темном, що у способі одержання поліфенольного пературі 6-10°С і відокремлюють осад від надосакомплексу з переважно кровоспинною та діуретичдової рідини шляхом фільтрації. Осад, принаймні ною активністю, який включає екстракцію рослинтричі, промивають водою, бажано 60-70°С для ної сировини 50% етанолом, упарювання, відовилучення залишків поліфенольних сполук. Одеркремлення осаду, обробку 96% етанолом, жаний після промивання водний витяг об'єднують упарювання та сушк у надосадової рідини, згідно з з надосадовою рідиною і обробляють рівною кільвинаходом непередбачено, що в якості рослинної кістю 95% етанолу з метою розділення речовин сировини використовують пагони ожини сизої, ексбілкової та полісахаридної природи. Очищений тракцію проводять при співвідношенні сировина і спиртово-водний екстракт упарюють до густого екстрагент 1:8-9, одержаний екстрагент упарюють залишку і піддають сушці, бажано під вакуумом. до видалення етанолу, відокремлений осад проОдержують гігроскопічний порошок ясномивають водою, а одержану водну фракцію об'єдбрунатного кольору, розчинний у воді та нижчих нують з надосадовою рідиною до початку стадії спиртах. Вихід - 5,03% від повітряно-сухої сировиупарювання останньої. ни. Ожина сиза (Rubus caesius) родини розоцвітих Винахід ілюструється прикладами. (Rosaceae) - відома дикоросла і культурна плодоПриклад 1. во-ягідна рослина, досить поширена в Україні. Для одержання засобу у формі сухого екстракВегетативні органи ожини містять значну кількість ту за заявленим способом 1,0кг подрібнених пагодубильних речовин, вітаміну С, а також органічні нів ожини сизої екстрагували у перколяторі 8 літкислоти, токофероли, філохінони, похідні флаворами 50% етанолу. Одержані витяги упарили під ноїдів, вітаміни К, Е, Р, F мінеральні речовини. вакуумом до видалення спирту і водний залишок Флавоноїдні сполуки здатні зменшувати проник(1л), залишили на 2 години при 6°С для відстоюність судинних стінок артеріол і капілярів, вітаміни вання. Темно-зелений смолистий осад, що випав Ρ і F - забезпечують еластичність кровоносних (10,02г), відокремили і промили гарячою 70°С восудин, збільшують їх стійкість. дою 3 рази по 50мл. Осад відкинули, а водний Авторами досліджено, що до складу ожини сивитяг об'єднали з надосадовою рідиною і оброби 5 83527 6 ли рівною кількістю (1л) 95% етанолу з метою відди проводились за методом Альтгаузена, який ділення речовин білкової і полісахаридної приробазується на визначенні часу появи перших ниток ди. Очищений спирто-водний розчин упарили до фібрину. Для цього на підігріте до температури густого водного залишку (400мл) і висушили на 37°С предметне скло наносили каплю крові, яку вакумно-ротаційному апараті. Одержали гігроскобрали з вушної вени морської свинки та краплю пічний порошок (50,02г) ясно-брунатного кольору, дослідного розчину. Через кожні 15-20сек голкою розчинний у воді і нижчих спиртах. Вихід склав проводили по краплі крові, фіксуючи появу першої 5,03% від маси повітряно-сухої сировини. нитки фібрину. Приклад 2. Дію засобу, одержаного за заявленим спосоГемостатичну активність поліфенольного комбом, вивчали в дозах 7, 12, 17мг/мл у порівнянні з плексу з пагонів ожини сизої, одержаного за заявдією препаратів порівняння - екстрактом грициків леним способом, вивчали in vitro. Висновок про звичайних і 5% розчином амінокапронової кислоти. наявність гемостатичного ефекту робили за часом Результати експерименту, оброблені методом зсідання крові у порівнянні з контролем - фізіологіваріаційнної статистики, представлені в таблиці 1. чним розчином та препаратами порівняння. ДосліТаблиця 1 Вивчення гемостатичної активності екстракту, одержаного за заявленим способом Досліджені засоби Контроль Засіб, одержаний за заявленим способом Амінокапронова кислота Екстракт грициків звичайних Аналіз даних таблиці 1 свідчить про те, що засіб, одержаний за заявленим способом, визиває активацію процесу зсідання крові та призводить до гіперкоагуляції, зменшуючи тромбіновий час. Найефективнішою дозою за гемостатичною активністю як нового засобу, так і екстракту грициків звичайних, є 7мг/кг. У цій дозі засіб, одержаний за заявленим способом, перевищує препарати порівняння - амінокапронову кислоту в 1,03 рази, грицики звичайні в 1,44 рази. Даний екстракт може бути використаний для лікування кровотеч. Приклад 3. Вивчення діуретичної активності засобу, одержаного за заявленим способом, проводили у дослідах на безпородних білих щурах обох статей 200-280г за методом Е.Б. Берхіна. Дослідних тварин було поділено на 5 груп по 6 тварин у кожній: група 1 - контрольна; групи 2-4 - тварини, що одержували засіб, одержаний за заявленим способом, у дозах 10, 20, 30мг/кг; група 5 - тварини, що одержували препарат порівняння - фуросемід (ефективна доза - 20мг/кг). При вивченні водного діурезу тварин тримали на постійному харчовому раціоні при вільному доступі до води. Як їжу в цей період щурам давали лише зерна пшениці. До водного навантаження (3% від маси тіла) тварин протягом Доза, мг/мл 7 12 17 50 7 12 17 Час зсідання крові, сек. 230,00±0,64 108,00±1,02 126,00±0,86 142,00±0,63 111,70±1,08 156,00±1,38 162,00±1,16 180,00±1,19 2-3 годин позбавляли їжі й води. Досліджувані речовини вводили перорально (внутрішньошлунково), у вигляді водних розчинів, стабілізованих твіном-80. Одночасно проводили контрольні дослідження на тваринах з аналогічним воднохарчовим раціоном, яким замість досліджуваних речовин вводили розчинник у еквівалентній кількості. Після цього тваринам у шлунок за допомогою зонду вводили водне навантаження в кількості 3% від маси тіла щурів. Відразу ж після водного навантаження щурів поміщали в індивідуальні клітки, пристосовані для збору сечі. Кількість сечі враховували щогодини на протязі 4 годин. Кількість сечі, виділеної контрольною групою тварин, приймали за 100%. Розрахунок робили за наступною формулою: V × 100% ДА = о , де Vк ДА - діуретична активність в %; Vo - об'єм сечі, виділеної тваринами дослідної групи, мл; Vк - об'єм сечі, виділеної тваринами контрольної групи, мл. Результати дослідження представлені у таблиці 2. 7 83527 8 Таблиця 2 Вивчення діуретичної активності засобу, одержаного за заявленим способом Досліджувані засоби Доза, мг/кг Контроль Засіб, одержаний за заявленим способом Фуросемід Дані таблиці 2 свідчать, що найбільш активну діуретичну дію має засіб, одержаний за заявленим способом, в дозі 30мг/кг, який збільшував діурез через 4 години на 47,9% у порівнянні з контролем, та на 17,7% - з фуросемідом. Найбільш перспективною дозою для подальшого вивчення засобу, одержаного за заявленим способом, як діуретичного засобу є 30мг/кг. Додаткові дослідження, проведені авторами, виявили помірні протизапальну, аналгетичну та жарознижуючу активності засобу, одержаного за заявленим способом. Таким чином, заявлений новий спосіб одержання з пагонів ожини сизої поліфенольного ком Комп’ютерна в ерстка Л.Литв иненко 10 20 ЗО 20 Діурез за 4 години, мл/100г (М±m) 2,88±0,8 3,53±0,55 3,30±0,71 4,26±0,51 3,75±1,14 Активність до контролю, % 100,00 122,60 114,60 147,90 130,20 плексу з переважно кровоспинною і діуретичною активністю та супутньою комплексною фармакологічною дією: протизапальною, аналгетичною, жарознижуючою. Засіб, одержаний за заявленим способом, є нетоксичним, без побічних дій, придатним до тривалого застосування, насамперед, при профілактиці та лікуванні кровотеч різного генезу. Заявлений спосіб може бути здійснений в умовах стандартного фармацевтичного підприємства, з використанням стандартного обладнання та екологічно безпечних реактивів. Спосіб передбачає використання доступної вітчизняної рослинної сировини. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601