Вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3 та вірусної діареї великої рогатої худоби “бовісвак-3″

Реферат: Вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3 та вірусної діареї великої рогатої худоби містить активну речовину і цільові добавки. Як активну речовину вакцина містить суміш з виробничих штамів "М-9" вірусу інфекційного ринотрахеїту, "R-4" вірусу парагрипу-3, "VR" збудника вірусної діареї ВРХ, що адаптовані до перещеплюваної культури клітин НТ, інактивовані формальдегідом і взятих у співвідношенні 1:1:1. UA 113821 U (12) UA 113821 U UA 113821 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель, що передбачається, належить до вірусології та біотехнології, а саме до виготовлення вакцин. Інфекційний ринотрахеїт, парагрип-3, вірусна діарея належать до масових вірусних захворювань ВРХ, які спостерігаються практично повсюдно, як в промислових комплексах з великою концентрацією тварин, так і в невеликих господарствах. До теперішнього часу відомо кілька комбінованих вакцин різної валентності проти змішаних вірусних інфекцій, проте їх застосування не завжди супроводжується позитивним ефектом, головним чином, через недостатню імуногенну активність і вузький антигенний спектр. Стримуючим фактором в отриманні ефективних комбінованих вакцин є складність створення стабільної композиції сумісних і неконкуруючих між собою антигенів, збалансованих як в антигенному, так і імуногенному відношенні. Існує вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту (ІРТ) та парагрипу-3 (ПГ-3) великої рогатої худоби "Рипавак" (Пат. UA № 4495, А61К39/00, 17.01.2005, бюл. № 1), що містить виробничі штами вірусів інфекційного ринотрахеїту та парагрипу-3, але не містить компонента вірусної діареї (ВД). Відома бівалентна інактивована концентрат-вакцина проти інфекційного ринотрахеїту та вірусної діареї великої рогатої худоби (Пат. UA № 4626, А61 КЗ9/265, 17.01.2005, бюл. № 1), містить компонент вірусу ІРТ, ад'ювант та інактиватор. Використовують штам "Молдавський" вірусу ІРТ, додають компонент вірусу діареї штам "ВК-1", але не містить компоненту парагрипу3. Існує вакцина "ТРІВАК (ВІЕВ)" (патент RU 2111011, А61К 39/295, опубл. 20.05.1998) для профілактики інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3 та вірусної діареї - хвороби слизових великої рогатої худоби, що містить антигени з атенуйованих штамів вірусів інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3 і діареї - хвороби слизових. Як штами вірусів вакцина містить штам 4,5 6,5 Herpes virus bovis "ТК-А (ВІЕВ) В-2" з активністю 10 -10 ТЦД50/мл, штам Virus diarrhea-mucosal 40 60 disease bovinum "BK-1 (B-l) N 28 "з активністю 10 -10 ТЦЦ50/мл, штам Paramyxovirus" ПТК-45/86 5,0 7,0 "з активністю 10 -10 ТЦД50/мл. Відома тетравалентна комбінована вакцина "Хіпрабовіс-4" проти ІРТ, ПГ-3, ВД і респіраторно-синцитіального вірусу (PC) - HIPRABOVIS®4 (Combined vaccine, IBR, РІ3, BVD and BRS viruses) (http://www.vetfactor.com/ru/product/vakts hiprabovis 4_inak_jiv_30_d) містить інактивований штам вірусу ринотрахеїту великої рогатої худоби (IBR, штам LA), парагрипу-3 (РІЗ, штам SF4) і діареї великої рогатої худоби (BVD, NADL) та атенуйований штам вірусу PC (BRS, LYM P56). До недоліків слід віднести те, що: 1. Містить живий компонент PC вірусу, що збільшує рівень антигенного навантаження на організм щепленої тварини. Також, у зв'язку із відсутністю актуальності респіраторносенцитіальної інфекції на території України, широкомасштабне щеплення тварин проти цієї інфекції не доцільно. 2. Містить штами вірусів ІРТ, ВД і ПГ-3, що є актуальними для території Іспанії. 3 3. Доза щеплення становить 3 см на тварину. Це рішення може бути найбільш близьким аналогом. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити вакцину інактивовану проти ІРТ, ПГ3 та ВД великої рогатої худоби "БОВІСВАК-3", що створює ефективний захист сприйнятливих тварин різних статевовікових груп по відношенню до різних підтипів і основних антигенних варіантів епізоотичних штамів збудників, що циркулюють в господарствах на території України, а саме для профілактики ІРТ, ПГ-3 та ВД шляхом щеплення великої рогатої худоби (ВРХ). Технічний результат від використання запропонованої корисної моделі полягає в розширенні арсеналу високоімуногенних, нешкідливих і ареактогенних асоційованих вакцин інактивованих проти інфекційних хвороб ВРХ, що супроводжуються ураженням органів дихання, а також у підвищенні стабільності, антигенну та імуногенної активності асоційованої вакцини і створення напруженої і тривалої імунітету у щеплених тварин. Поставлена задача вирішується наступним чином, запропонована вакцина містить як активну речовину суміш із виробничих штамів "М-9" вірусу інфекційного ринотрахеїту, "R-4" вірусу парагрипу-3, "VR" збудника вірусної діареї ВРХ, що адаптовані до перещеплюваної культури клітин НТ, сорбованих на гідроксиді алюмінію та інактивованих формальдегідом і стабілізованих гліцерином. Технологія виготовлення вакцини інактивованої проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу3 та вірусної діареї великої рогатої худоби "БОВІСВАК-3" складається з ряду етапів виробництва: 1. Накопичення біомаси виробничих штамів "М-9" вірусу інфекційного ринотрахеїту, "R-4" вірусу парагрипу-3, "VR" збудника вірусної діареї ВРХ на перещеплюваних культурах клітин. 1 UA 113821 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2. Виготовлення суміші вірусу з адсорбентом (гідроксидом алюмінію). 3. Виготовлення суміші адсорбованого вірусу з консервантом. 4. Інактивація адсорбованого й консервованого вірусу. 5. Перевірка інактивованого вірусу на повноту інактивації і стерильність. 6. Перевірка вакцини на вміст залишкової кількості формальдегіду. 7. Створення серії, маркування та пакування вакцини. Виробничі штами "М-9" вірусу інфекційного ринотрахеїту, "R-4" вірусу парагрипу-3, "VR" збудника вірусної діареї ВРХ відповідають паспортним даним та задепоновані в Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів, з реєстраційним номером 605, 606 та 604, відповідно. Згідно з паспортними даними: 1. Вірус ІРТ культивується і проявляє цитопатогенну дію у моношарових культурах клітин у вигляді округлення клітин та формування їх у групи, що нагадують "гроно винограду". 2. Вірус ВД культивується і проявляє цитопатогенну дію у моношарових культурах клітин у вигляді округлення клітин та появі пустот у моношарі клітин. 3. Вірус ПГ-3 культивується і проявляє цитопатогенну дію у моношарових культурах у вигляді округлення клітин, утворення сімпластів та багатоядерних клітин і появи пустот у моношарі клітин. Вакцина складається з: - вірусного матеріалу: виробничі штами "М-9" вірусу інфекційного ринотрахеїту, "R-4" вірусу парагрипу-3, "VR" збудника вірусної діареї ВРХ – 60 %; - гідроксиду алюмінію і фосфатного буфера (ад'ювант) по 10 %; - гліцерину (консервант) – 17 %; - формальдегіду - 0,05 %; - тіомерсалу - решта. Приклад 1 Для контролю якості вакцини проводять вибірку з різних місць серії у кількості, що визначена в формулі (1):   0,4  , (1) де П - необхідна для контролю кількість упаковок (об'єм вибірки); 0,4 - поправочний коефіцієнт; N - кількість флаконів у серії. Із вибірки відбирають 4 флакони: 2 з яких використовують для проведення випробування, а решту направляють в архів контролера для зберігання впродовж 27 місяців. Проби вакцини, які направляють у архів контролера, опечатують і супроводжують документом встановленої форми, де вказують: назву препарату, дату відбору проб (число, місяць, рік), номери серії і контролю, об'єм серії, позначення ТУ У, посаду й підпис особи, яка відбирала проби. В разі отримання незадовільних результатів випробувань хоча б по одному з показників, по ньому проводили повторні випробування на подвійній кількості зразків з цієї ж серії і на подвійній кількості тварин. Результати повторних випробувань вважали кінцевими і поширювали на всю серію. В разі отримання незадовільних результатів повторних випробувань серію препарату вважали такою, що не відповідає вимогам ТУ У її бракували і знищували. Приклад 2. Визначення зовнішнього вигляду, кольору, наявність сторонніх домішок (плісняви, осаду, що не розбивається), порушення укупорки та тріщин флаконів - проводили візуально в пронизуючому світлі. Результат: Рожева рідина з пухким осадом білого кольору, який при збовтуванні легко розбивається у однорідну суспензію. Недоліки, такі як наявність сторонніх домішок, порушення укупорки та тріщин флаконів, не виявлені. Приклад 3. Визначення стерильності. Стерильність препарату перевірялась за ДСТУ 4483:2005 "Препарати ветеринарні і імунобіологічні. Методи визначення бактеріальної і грибкової контамінації". 3 3 Для чого було взято 4,0 см вакцини, по 1,0 см якої вносили в чотири пробірки з тіогліколевим середовищем (ТГС). Посіви витримувались у термостаті 14 діб за двох температурних режимів: одна половина - за температури від 20 °C до 25 °C, друга половина - за температури від 30 °C до 35 °C. Посіви продивлялись у розсіяному світлі на першу, четверту і в останню добу культивування. ТГС попередньо перевіряли на стерильність. Для чого по три пробірки із середовищем витримували у термостаті 14 діб за відповідної температури. Результат: Вакцина стерильна. Приклад 4. Визначення нешкідливості вакцини. З метою визначення нешкідливості використані білі миші. Перевірка здійснювалась за ГСТУ 46.024-2002 "Препарати ветеринарні. 2 UA 113821 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Методи визначення нешкідливості". Дослідження проводили на 10 мишах масою 18-20 г, яким 3 середня проба вакцини вводилась підшкірно в дозі 0,2 см , а 10 мишей, яким препарат не вводили, залишили у контролі. За піддослідними мишами вели спостереження впродовж 10 діб. Результат: Вакцина нешкідлива - жодного випадку загибелі, захворювання або появи будьякої місцевої реакції на введення не зафіксовано. Приклад 5. Визначення антигенної активності. Антигенні властивості вакцини інактивованої проти ІРТ, ПГ-3 та ВД великої рогатої худоби досліджували на морських свинках. Для чого було сформовано 2 дослідні групи тварин по 6 голів у кожній: 3 1 група - вакцину ввели внутрішньом'язово одноразово в дозі 1 см ; 2 група - контроль (інтактні тварини). Від тварин дослідної і контрольної груп були отримані проби сироватки крові до введення вакцини та через 21 добу після щеплення. В сироватці крові досліджена наявність специфічних до вірусів ІРТ та ВД антитіл в реакції нейтралізації відповідно СОУ 85.20-37-621:2007 "Мікробіологія ветеринарна. Реакція нейтралізація вірусу в культурі клітин. Метод постановки", антитіл до вірусу ПГ-3 в реакції затримки гемаглютинації (РЗГА) згідно з СОУ 85.20-37-306:2005 "Велика рогата худоба. Методи лабораторної діагностики парагрипу-3". Результат: Вакцина антигенноактивна - титри антитіл до вірусів ІРТ та ВД були на рівні 1:32, а ПГ-3-1:256. Приклад 6. Визначення повноти інактивації Зразок вакцини у стерильних умовах центрифугували 25 хв. за 4000 об/хв. для відокремлення вірусної маси від ад'юванту, стерильною піпеткою відбирають культуральну рідину, яку використовували для визначення повноти інактивації. Повнота інактивації вірусу оцінювалась за відсутністю його розмноження у чутливій культурі клітин впродовж трьох пасажів. Для чого формалін, який міститься у зразку вакцини, нейтралізували 1,6 М розчином метабісульфіту натрію у співвідношенні 1:50. Наявність вірусу визначали за його цитопатогенною дією на культурі клітин. Результат: Вакцина інактивована - впродовж трьох пасажів не спостерігалось цитопатичної дії вірусу. Приклад 7. Визначення концентрації водневих іонів (рН) Визначали концентрацію водневих іонів (рН) за допомогою рН - метра марки рН-150. Дослідження проводили на двох зразках препарату у відповідності до інструкції, що додавалась до рН - метра. Результат: Концентрація водневих іонів (рН) була на рівні 7,2. Приклад 8. Визначення вільного формальдегіду у препараті Визначення вільного формальдегіду у препараті проводили згідно з Державною фармакопеєю України 2001. Результат: Вільний формальдегід у препараті дорівнював 0,05 %. На основі отриманих даних можна зробити висновок, що інактивована вакцина проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3 та вірусної діареї великої рогатої худоби "БОВІСВАК-3" стерильна, нешкідлива, антигенноактивна, інактивована та відповідає вимогам ТУУ за показниками: зовнішнього вигляду, кольору, маркування, наявність сторонніх домішок, концентрація водневих іонів та вміст вільного формальдегіду. Вакцина з позитивним результатом пройшла міжвідомчі комісійні випробування в СТОВ "Скіф" Котелевського району, Полтавської області. Основними споживачами вакцини є скотарські господарства всіх напрямків та форм власності. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 50 55 60 1. Вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3 та вірусної діареї великої рогатої худоби, яка містить активну речовину і цільові добавки, яка відрізняється тим, що як активну речовину вона містить суміш з виробничих штамів "М-9" вірусу інфекційного ринотрахеїту, "R-4" вірусу парагрипу-3, "VR" збудника вірусної діареї ВРХ, що адаптовані до перещеплюваної культури клітин НТ, інактивовані формальдегідом і взятих у співвідношенні 1:1:1. 2. Вакцина за п. 1, яка відрізняється тим, що як цільову добавку вона містить ад'ювант, стабілізатор, інактиватор, антисептик і фунгіцидний засіб. 3. Вакцина за п. 2, яка відрізняється тим, що як ад'ювант вона містить суміш гідроокису алюмінію та фосфатного буферу, як антисептик і як фунгіцидний засіб - тіомерсал, як інактиватор - формальдегід, як стабілізатор - гліцерин. 3 UA 113821 U Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4