Вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу врх “бовісвак-3 past”

Реферат: Вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу великої рогатої худоби містить активну речовину і цільові добавки. Як активну речовину вона містить суміш з виробничих штамів «М-9» вірусу інфекційного ринотрахеїту, «R4» вірусу парагрипу-3, «VR» збудника вірусної діареї ВРХ, що адаптовані до перещеплюваної культури клітин НТ, та комплекс соматичних проективних антигенів виробничого штаму № 478 Pasteurella haemolytica. Як цільову добавку містить інактивуючу речовину формальдегід, як сорбент і ад'ювант - алюмінію гідроксид та фосфатний буфер, як антисептик і як фунгіцидний засіб - тіомерсал, як стабілізатор - гліцерин та додатково містить імуностимулюючий засіб сапонін. UA 114095 U (12) UA 114095 U UA 114095 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до області ветеринарної мікробіології, а саме до вірусології, біотехнології і ветеринарії, і стосується створення нових вакцин, які можуть бути використані для попередження інфекційних хвороб ВРХ (ВРХ), що супроводжуються порушенням респіраторних функцій різного ступеня тяжкості. Інфекційний ринотрахеїт (ІРТ), парагрип-3 (ПГ-3), вірусна діарея (ВД) належать до масових вірусних захворювань ВРХ (ВРХ), які широко розповсюджені як в промислових комплексах з великою концентрацією тварин, так і в невеликих господарствах на території України та в світі. Ці масові вірусні захворювання ускладнюються бактеріальною хворобою - пастерельозом. Пастерельоз викликається грамнегативною паличкою Pasteurella spp. Це важке інфекційне захворювання передається при безпосередньому контакті. Пастерельоз найбільш поширений в комплексах, де висока концентрація тварин. Хвороба представляє небезпеку не тільки для тварин, але і для людей. До теперішнього часу розроблені декілька комбінованих вакцин різної валентності проти даних інфекцій, проте їх застосування не завжди супроводжується позитивним ефектом, головним чином через недостатню імуногенну активність і вузький антигенний спектр. Стримуючим фактором в отриманні ефективних комбінованих вакцин є складність створення стабільної композиції сумісних і неконкуруючих між собою антигенів, збалансованих як в антигенному, так і в імуногенному відношенні. Існує вакцина проти парагрипу-3, респіраторно-синцитіальної інфекції і пастерельозу ВРХ (http://www.msd-animal-health.ru/products/preparat_05/bovilisbovipast.aspx), котра утримує віруси парагриппу-3 (штамм SF-4 Reisinger), респіраторно-синцитіальний (PC) (штамм EV 908) і бактерії Pasteurella haemolitica (серотипы Al и А6), інактивовані формальдегідом, але не містить компоненту ВД та ІРТ. Відома інактивована вакцина БіоБос Респі 4 (BioBos Respi 4) проти респіраторносинцитіальної інфекції, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу ВРХ (http://eurovet.com.ua/news_popup.php?detailed=150&action=product), котра утримує вірус респіраторно-синцитіальної інфекції ВРХ (штам ВІО-24), вірус парагрипу-3 ВРХ (штам ВІО-23), вірус діареї ВРХ (штам ВІО-25) та Mannheimia (Pastereulla) haemolytica (штам DSM 5283, серовар 1 А) інактивовані, але не містить вірусу ІРТ. Відома інактивована вакцина комбінована проти ІРТ, ПГ-3, PC, ВД та пастерельозу ВРХ (пат. RU № 2403061, А61К 39/295, 10.11.2010), що містить активну речовину і цільові добавки, як активну речовину вона містить суміш інактивованих штамів вірусів інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та респіраторно-синцитіальної інфекції, а також пастерельозу. Недоліком є використання PC компонента, який не актуальний на сьогодні для України внаслідок його обмеженого розповсюдження, що несе додаткове антигенне навантаження на організм тварин (найближчий аналог). В основу корисної моделі поставлено задачу розробити вакцину інактивовану проти ІРТ, ПГ3, ВД та пастерельозу ВРХ "Бовісвак-3 Past", що створює ефективний захист сприйнятливих тварин різних статевовікових груп по відношенню до різних підтипів і основних антигенних варіантів епізоотичних штамів збудників, що циркулюють в господарствах на території України, а саме для профілактики інфекційного ринотрахеїту (ІРТ), парагрипу-3 (ПГ-3), вірусної діареї (ВД) та пастерельозу шляхом щеплення ВРХ. Запропонована корисна модель розширює арсенал комбінованих вакцин проти інфекційних хвороб, що супроводжуються ураженням респіраторного тракту, а також у підвищенні стабільності, антигенну та імуногенної активності комбінованої вакцини і створення тривалого імунітету у щеплених тварин і народжених телят проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу ВРХ (ВРХ). У корисній моделі в складі вакцини використовують нові виробничі штами вірусів інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї ВРХ з широким антигенними спектром, а також за рахунок створення синергетичної композиції полівалентної вакцини при об'єднанні нових виробничих штамів вірусів з відомими вакцинами штамами пастерел. Поставлена задача вирішується тим, що вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу ВРХ "БОВІСВАК-3 Past", що містить активну речовину і цільові добавки, згідно з корисною моделлю, як активну речовину містить суміш із виробничих штамів "М-9" вірусу інфекційного ринотрахеїту, "R-4" вірусу парагрипу-3, "VR" збудника вірусної діареї ВРХ що адаптовані до перещеплюваної культури клітин НТ, та комплекс соматичних проективних антигенів виробничого штаму № 478 Pasteurella haemolytica, як цільову добавку вона містить інактивуючу речовину формальдегід, сорбент і ад'ювант алюмінію гідроксид та фосфатний буфер, як антисептик і як фунгіцидний засіб - тіомерсал, як 1 UA 114095 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 стабілізатор - гліцерин та додатково містить імуностимулюючий засіб - сапонін, при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: Суміш виробничих штамів "М-9", "R-4", "VR" та комплексу соматичних протективних антигенів виробничого штаму № 478-Pasteurella haemolytica ВРХ 55,0-61,0 гідроксид алюмінію 8,0-11,0 фосфатний буфер 8,0-11,0 формальдегід 0,03-0,04 сапонін 0,8-1,2 тімеросал 0,008-0,015 гліцерин решта. Технологія виготовлення вакцини інактивованої проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу3, вірусної діареї та пастерельозу ВРХ "Бовісвак-3 Past" складається з ряду етапів виробництва. Приготування сольових розчинів та живильних середовищ для культивування перещеплювальних клітин та виготовлення живильного середовища для культивування виробничих штамів пастерел. Вирощування культур клітин для репродукції виробничих штамів вірусів ІРТ, ВД та ПГ-3 і напрацювання партії вірусної біомаси. Культивування виробничих штамів пастерел та накопичення їх біомаси на бульйоні Хотінгера. Інактивація біомаси пастерел. Перевірка інактивованої біомаси пастерел на повноту інактивації та стерильність. Виготовлення адсорбенту. Виготовлення суміші вірусу з адсорбентом. Виготовлення концентрованої суміші пастерел з адсорбентом. Підготовка консерванту. Виготовлення суміші адсорбованого вірусу з консервантом. Інактивація адсорбованого й консервованого вірусу. Перевірка інактивованого вірусу на повноту інактивації і стерильність. Створення серії, маркування та пакування вакцини. Виробничі штами "М-9" вірусу інфекційного ринотрахеїту, "R-4" вірусу парагрипу-3, "VR" збуднику вірусної діареї та №478 Pasteurella haemolytica ВРХ відповідають паспортним даним та депоновані в Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів, з паспортами де вказані їх властивості. Приклад 1 Для перевірки якості вакцини проводили вибірку із різних місць кожної серії у кількості, що визначена в формулі:   0,4  , де П - необхідна для контролю кількість упаковок (об'єм вибірки) N - кількість упаковок у серії. Із вибірки відбирали 4 флакони: 2 з яких використовували для проведення випробування, а решту направляли в архів контролера для зберігання впродовж 27 місяців. Проби вакцини, які направляли у архів контролера, опечатували і супроводжували документом встановленої форми, де вказували: назву препарату, дату відбору проб (число, місяць, рік), номери серії і контролю, об'єм серії, позначення ТУ У, посаду й підпис особи, яка відібрала проби. Приклад 2. Стерильність препарату перевірялась за ДСТУ 4483:2005 "Препарати ветеринарні і імунобіологічні. Методи визначення бактеріальної і грибкової контамінації". Для цього було 3 3 взято 4,0 см вакцини, по 1,0 см якої вносили в чотири пробірки з тіогліколевим середовищем (ТГС). Посіви витримувались у термостаті 14 діб за двох температурних режимів: одна половина - за температури від 20 °C до 25 °C, друга половина - за температури від 30 °C до 35 °C. Посіви продивлялись у розсіяному світлі на першу, четверту і в останню добу культивування. Тіогліколеве середовище (ТГС) попередньо перевіряли на стерильність. Для цього по три пробірки із середовищем витримували у термостаті 14 діб за відповідної температури. Вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу ВРХ "Бовісвак-3 Past" за результатами досліджень стерильна, у посівах зареєстровано відсутність росту бактерій та грибів. Приклад 3. З метою визначення нешкідливості використані білі миші. Перевірка здійснювалась за ГСТУ 46.024-2002 "Препарати ветеринарні. Методи визначення нешкідливості". Дослідження проводили на 10 мишах масою 18-20 г, яким середня проба вакцини вводилась підшкірно в дозі 3 0,2 см , а 10 мишей, яким препарат не вводили, залишили у контролі. За піддослідними мишами вели спостереження впродовж 10 діб. Вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу ВРХ "Бовісвак-3 Past" за результатами досліджень - нешкідлива, тому що серед щеплених вакциною мишей не було виявлено жодного випадку 2 UA 114095 U 5 10 загибелі або захворювання, а в місцях введення препарату були відсутні ознаки запального процесу. Приклад 4 Антигенні властивості вакцини інактивованої проти інфекційного ринотрахеїту (ІРТ), парагрипу-3 (ПГ-3), вірусної діареї (ВД) та пастерельозу ВРХ "Бовісвак-3 Past" досліджували на морських свинках 2-х групах по 5 голів у кожній. Вакцину вводили внутрішньом'язово в стегно 3 п'яти морським свинкам в дозі 2 см . Через 14 діб проводили повторне введення, та через 14 діб після ревакцинації, від них одержували сироватку крові. Проби сироватки крові досліджували на наявність специфічних до вірусів ІРТ та ВД антитіл в реакції нейтралізації відповідно СОУ 85.20-37-621:2007, до вірусу ПГ-3 в реакції затримки гемаглютинації (РЗГА) згідно з СОУ 85.20-37-306:2005. Результати визначення антигенної активності вакцини інактивованої проти ІРТ, ПГ-3, ВД та пастерельозу ВРХ "Бовісвак-3 Past" наведені в таблиці 1. Таблиця 1 № 1 2 Титр антитіл, Iog2 до вірусу ІРТ до вірусу ПГ-3 до вірусу ВД Група тварин До через 21 до через 21 до через 21 добу щеплення добу щеплення добу щеплення Щеплені 0 1:64 0 1:128 0 1:64 тварини Інтактні 0 0 0 0 0 0 тварини 15 20 25 30 З даних, наведених в таблиці 1, видно, що вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу ВРХ "Бовісвак-3 Past" має виражену антигенну активність. Приклад 5 Імуногенність серії вакцини щодо збудника пастерельозу перевіряли на 30 білих мишах. Мишей розподіляли на три групи по 10 голів у кожній наступним чином: І група - дослідні тварини, II група - контрольні тварини, III група - інтактні тварини. Вакцину вводили мишам І 3 групи підшкірно дворазово з інтервалом 14 діб у дозі 0,5 см . Мишам II групи підшкірно 3 дворазово з інтервалом 14 діб у дозі 0,5 см вводили фізіологічний розчин. Через 14 діб після другого введення вакцини мишей першої та другої груп (20 голів) заражали внутрішньочеревно культурою контрольного штаму № 478 Pasteurella haemolytica у дозі 2LDso КУО добової бульйонної культури. За мишами спостерігали протягом 10 діб, обліковуючи захворювання та (або) загибель контрольних та щеплених тварин. Вакцину вважають імуногенною в тому випадку, коли виживає після контрольного зараження не менше 80 % вакцинованих мишей і спостерігається загибель не менше 80 % мишей у контрольній групі за 10 днів спостереження. Результати визначення імуногенної активності вакцини інактивованої проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу ВРХ "Бовісвак-3 Past" наведені в таблиці 2. 35 Таблиця 2 Групи піддослідних лабораторних тварин Вакциновані миші Невакциновані миші Відсоток тварин, що вижили після контрольного зараження штамом № 478Pasteurella haemolytica 40 100 0 Інтактні миші Створена інактивована вакцина проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу ВРХ "Бовісвак-3 Past" стерильна, нешкідлива, антигенноактивна та створює напружену імунну відповідь до вищевказаних збудників. Вакцина з позитивним результатом пройшла міжвідомчі комісійні в господарствах України та має реєстраційне посвідчення ВВ-00743-02-15. 3 UA 114095 U Основними споживачами спеціалізуються на вакцини є господарства різної розведенні та форми власності, що утриманні ВРХ. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 15 Вакцина інактивована проти інфекційного ринотрахеїту, парагрипу-3, вірусної діареї та пастерельозу великої рогатої худоби, що містить активну речовину і цільові добавки, яка відрізняється тим, що як активну речовину вона містить суміш з виробничих штамів «М-9» вірусу інфекційного ринотрахеїту, «R-4» вірусу парагрипу-3, «VR» збудника вірусної діареї ВРХ, що адаптовані до перещеплюваної культури клітин НТ, та комплекс соматичних проективних антигенів виробничого штаму № 478 Pasteurella haemolytica, як цільову добавку містить інактивуючу речовину формальдегід, як сорбент і ад'ювант - алюмінію гідроксид та фосфатний буфер, як антисептик і як фунгіцидний засіб - тіомерсал, як стабілізатор - гліцерин та додатково містить імуностимулюючий засіб - сапонін, при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: суміш виробничих штамів «М-9», «R-4», «VR» та комплексу соматичних протективних антигенів виробничого штаму № 478 - Pasteurella haemolytica ВРХ 55,0-61,0 гідроксид алюмінію 8,0-11,0 фосфатний буфер 8,0-11,0 формальдегід 0,03-0,04 сапонін 0,8-1,2 тіомерсал 0,008-0,015 гліцерин решта. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4