Спосіб визначення аlрhа-токоферолу

Изобретение относится к химическим методам определения (/-токоферола с применением хроматографических методов очистки, в частности тонкослойной хроматографии (ТСХ)9 и может быть использовано в сельскохозяйственных, медицинских и фармацевтических л а б о раториях при определении содержания •^-токоферола и синтетических антиокислителей фенольного ряда, а также сантохина и дилудина в кормах, пищевых продуктах, в органах и тканях животных, а также для контроля произ водства витамина Е и синтетических антиокислителей. Цель изобретения повышение чувствительности способа определения ct-токоферола. Способ заключается в щелочном омылении образц о в , экстракции неомыляемой части гексаном, тонкослойнохроматографическом разделении, проведении цвёт,ной реакции непосредственно на пластинке, элгоировании цветного комплекса с пластинки и фотометрировании элюата. Проявление пластинок проводят путем их обработки раствором железоаммонийных к в а с ц о в , высушивания и обработки их раствором б а т о фенантролина с последующим элюированием окрашенного адсорбированного слоя смесью, содержащей фосфорную кислоту, серную кислоту и метанол при следующем соотношении компонент о в , о б , £ : фосфорная кислота 5-7^ серная кислота 0 , 1 - 0 , 3 , метанол остальное. 2 табл. СО СО СО 1 1332223 Изобретение относится к чичмческим методам определения витаминов группы Е (токоферолов) с применением хроматографических методов очистки, ^ в частности тонкослойной хроматографии (ТСХ). Способ заключается в том, что проявление пластинок проводят путем их обработки раствором желеэоаммоний- Ю ных квасцовt высушивания и обработки раствором батофенантролина, а в качестве элюента используют смесь# состоящую из фосфорной кислоты, серной кислоты и метанола при следующем 15 соотношении компонентов, об.%: Фосфорная кислота 5-7 Серная кислота 0,1-0,3 Метанол Остальное Наиболее существенными отличитель- 20 ными признаками предлагаемого способа являются следующие, 1, Проявление пластинок проводят путем их обработки раствором железо25 аммонийных квасцов, высушивания и обработки раствором батофенантролина. 2. В качестве элюента используют смесь, состоящую из фосфорной кислоты, серной кислоты и метанола при 30 следующем соотношении компонентов, об.%: Фосфорная кислота 5*7 Серная кислота 0,1-0,3 Метанол Остальное 35 Предлагаемый способ позволяет вдвое повысить чувствительность определений и дает возможность определять синтетические антиокислители фенольного ряда, сантохин и дилудин. 40 Определение витамина Е проводят следующим образом. П р и м е р 1, Определение витамина Е в желтке куриных яиц, Навеску желтка куриного яйца 45 (0,1-0,2 г) переносят в колбочку для омыления, добавляют 50 мл этанола, 100 мг пирогаллола и 2 г гранулированного едкого натра, присоединяют обратный холодильник и омыляют на 50 глицериновой бане 20 мин при 90-95 С. Затем охлаждают и трижды эк страгируют неомыляемую фракцию гексаном порциями по 50 мл. Затем гексановый экстракт отмычают до нейтральной : 55 реакции по универсальной индикаторной бумая,ке, высушивают безводным сульфатом натрия и выпаривают в токе азота на роторном испарителе, Далее сухой остаток растворяют в 0,2 мл хлороформа и количественно переносят на стартовую линию хроматографической пластинки в виде полосы длиною 80 мм. Рядом наносят свидетель примерно 0,5-1 мкг d -токоферола, Хроматографическое разделение токоферолов на подготовленных пластинках осуществляют в камереt насыщенной парами хлороформа, через которую в течение 15 мин продувают азот. Когда фронт растворителя приблизится к верхнему краю пластинки, необходимо извлечь ее из камеры и высушить в токе азота при 35-40 С, Затем обильно опрыскивают пластинку 0,5%-ным раствором железоаммонииных квасцов в этаноле, высушивают в токе теплого воздуха и опрыскивают 0,5%ным раствором батофенантролина в і этаноле. Обработанную пластинку выдерживают в горизонтальном положении 35 мин. При этом образуется розовокрасное пятно витамина Е на белом бесцветном фоне пластинки. Затем подсушивают пластинку при 20-25 С, определяют локализацию o -токоферола f по свидетелю и количественно переносят окрашенный участок адсорбента в пробирку с притертой пробкой. Затем в пробирку приливают 3 мл элюирующей смеси, состоящей из метанола, фосфорной и серной кислот в объемном соотношении 93,8:6:0,2, энергично встряхивают 15-20 с и фильтруют через обеззоленный фильтр (красная лента). Сполоснув пробирку 1 мл этой же смеси, переносят ее на тот же фильтр. Полученный розовый фильтрат фотометрируют при 492 нм по сравнению с элюирующей смесью. Содержание витамина Е рассчитывают по калибровочному графику, построенному по d-токоферолу. П р и м е р 2, Определение изомеров витамина Е в травяной муке из люцерны. Навеску травяной муки 0,05-0,1 г омыляют спиртовой щелочью и дальнейшие операции проводят так же, как описано в примере 1, По окончании хроматографии проявляют пластинки так же, как и при анализе жептка куриных яиц. Положение d-токоферола определяют по свидетепю, а ^+ утокоферолов - пр величине Rp, Все дальнейшие процедуры такие же, как З 1332223 и при определении витамина Е в примеоперации проводят аналогично примере Ї , При отсутствии специальных свиру 3. детелей допустимо определение конП р и м е р 6, Определяют витамин центрации изомеров витамина Е по каЕ в желтке яиц, как описано в примелибровочному графику, построенному ре 1, но используют злюирующую смесь по o -токоферолу, f с различным соотношением фосфорной П р и м е р 3. Определение сантокислоты, серной кислоты и метанола. хина в кормах, Определение оптимального состава Навеску корма (1 г) заливают 10 элюирующей смеси при определении ви30 мл хлороформа и взбалтывают на тамина Е и синтетических антиокисшюттель-аппаряте в течение 15 мин. лителей показано в т а б л . 1 , Затем фильтруют через слой безводного сульфата натрия. Корм дважды проПолученные данные позволяют заклюмывают по 10 мл хлороформа и пере15 чить, что допустимым соотношением носят на ту же воронку с сульфатом компонентов в элюирующей смеси являнатрия. Затем полученный экстракт ются : упаривают на роторном испарителе дофосфорная кислота 5-7 суха и растворяют в 1 мл хлороформа» Серная кислота 0,1-0,3 На стартовую линию хроматографичесМетанол Остальное 20 кой пластинки наносят 0,05 мл полу-' При использовании разработанной ченного раствора в виде полосы длиэлюирующей смеси достигается количеной 60-80 мм, рядом наносят в виде ственное элюирование цветного комточки свидетель - 0 , 0 1 мл раствора плекса, образованного батофенантросантохина в хлороформе (100 мкг/мл). 25 лином и железоаммонийными квасцами под воздействием витамина Е или ТСХ проводят в камере, насыщенной синтетических антиокислителей. При1 парами хлороформа. После т о г о , как использовании цветной элюирующей фронт растворителя поднимется по смеси цветной комплекс эпюируется с л пластинке доверху, ее извлекают из камеры, подсушивают и далее обрабаты- З о щ е т и н к и не полностью. Экспериментально также установлено, что испольвают, как описано в примере 1, Сантозование в составе элюирующей смеси хин проявляется в виде розово-красно других спиртов (этанол, бутанол, прого пятна на белом фоне. Далее окрапанол и д р , ) , взамен метанола не шенный участок силикагеля соскаблиі вают и обрабатывают, как описано в 35 позволяет полностью элюировать цветпримере 1, Содержание сантохина в ной комплекс. Кроме того, использокорме определяют по калибровочному вание серной Кислоты в количествах графику, меньше 0,1 об,% также значительно П р и м е р 4. Определение санснижает эффективность элюирующей тохина в премиксе. 40 смеси г а увеличение ее количества в Осуществляют так же, как в примеэлюенте более 0,3 об,% также нецелере 3, но после экстракции полученный сообразно, так как значительно повышается кислотность среды и устойчираствор не упаривают, а в мерной колвость окраски раствора снижается. бе доводят хлороформом до 100 мл, Замена серной нислоты соляной или Из них 0 ( 05 мл наносят на стартовую другими минеральными кислотами также линию хроматографической пластинки и приводит к снижению эффективности обрабатывают, как описано в примере 3, элюирующей смеси, П р и м е р 5. Определение дилуОрто-фосфорная кислота введена дина в корме. в состав элюирующей смеси в качестве 50 Осуществляют так же, как в приместабилизатора окраски. Оптимальным ре 3, но на хроматографическую пласее количеством в элюирующей смеси ' тинку наносят 0,1 мл полученного является 6 об,%. Поскольку при уменьраствора, Хроматограмму проявляют, шении ее количества ниже 5 об,% или как и в примере 1„ но розово-красное при увеличении более 7 об.% стабиль55 пятно дилудина появляется на пластинность окраски элюата падает, то до- , ке не сразу, а через 3-5 мин после пустимыми пределами использования опрыскивания хроматограммы раствором фосфорной кислоты в элюирующей смеси батофенантролина. Все последующие является 5-7 об,%. 1332223 П р ч м е р 7, Определяют витамин Ь и синтетические антиокислители в корме предлагаемым способом. Аналогично проводят анализ этого же 5 образца известньзм способом, С этой целью отбирают 1 кг измельченной пшеницы, в которую вводят по 10 мг • • _ . 60 0,64 сантохина . 0 10 97,6 0 40 0,43 10 96,9 3 60 0,18 БОА 10 98,8 1 50 0,29 . БОТ • • • 98,4 дилудина . 10 10 97.3 k 60 0.52 Известный способ 16,15*0,14 ot-токофе рилацетат а 10 96 ,0 2 60 0,63 сантохина , 10 83 5 40 0,42 дилудина 10 54 .0 20 100 0,19 t BOA 10 58»о 15 40 10 41 |3 30 EOT •К • • , количество определений равно 6, •80 0,28.. 0,52 1332223 Составитель Л.Борисова Редактор А.Ворович Техред А. Кравчук Корректор М.Шароши Заказ 3826/40 Тираж 7 76 Подписное В И П Государственного комитета СССР НИИ по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4