Біопрепарат для профілактики та лікування шлунково-кишкових захворювань

УКРАЇНА (13) А (5і)б А 61 К 35/66 ОПИС ДО ПАТЕНТУ ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО НА ВИНАХІД без проведення експертизи по суті на підстав! Постанови Верховної Ради України N? 3769X11 від 23 XII 1993 р Публікується D редакції заявника (54) БІОПРЕПАРАТ ДЛЯ ПРОФІЛАКТИКИ ТА ЛІКУВАННЯ ШЛУНКОВО-КИШКОВИХ ЗАХВОРЮВАНЬ 1 (21)95041763 (22)19.04.95 - • (24)30.04.98 (46)30.04.98. Бюп.Ьк 2 '" • / * '• : . . (56) Блохина И.Н., Дорофейчук В.Г. Дисбактериозы. Л., 1979.С.387. (72) Нарожнов Валентин Васильович, Немирб Сергій Анатолійович, Тарасенко Неля Костянтинівна (73) Міжгалузеве науково-технічне колективне підприємство "Укрінком" (57) Биопрепарат для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний, включающий биомассу энтеробактерий Escherlchia coll и наполнитель, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что он содержит дополнительно Streptococcus faecaUs, а в качестве штаммов Escherlchia coll содержит биомассу штаммов Е.соН Г-1-59, Є. coli Г-2-60, Г-3-61 при следующем соотношении компонентов, об.%: Биомасса E.coll Г-1-59 1 *108~1 -10 живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора 18-19 Биомасса Е.соИ Ґ-2-60 1 -108— 1-109 живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора 18-19 Биомасса Е.соН Г-3-61 1 -108-1 '10 9 живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора 18-19 Биомасса Streptococcus faecalls Г-4-62 1-10B-1-109 живых микробных клеток в 1 мл физиологического раствора . 36-38 - Наполнитель • • 10-5 С > о Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового биопрепарата, который используется для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний человека и животных. В настоящее время имеются биопрепараты, подавляющие развитие патогенных и условно-патогенных бактерий - коли, бифидум, лактобактерин, бактисуптил, биослорин. Наиболее близким аналогом является препарат колибактерин [1]. Колибэктерйн - биологический препарат из живой культуры кишечной палочки штамма М-17, выделенного из кишечника здорового человека. Штамм характеризуется антагонистической активностью в отношении ряда патогенных микроорганизмов, вт.ч, возбудителей дизентерии, брюшного тифа и паратифов, холерных вибрионов, патогенных стафилококков и условно-патогенных бактерий. Отличительным свойством штамма является способность адсорбироваться и раз 21979 E.coll Г-1-59, ЕсоИ Г-2-60 Е.соІІ Г-3-61, множаться на культуре клеток, защищая их Streptococcus faecalfs Ґ-4-§2 в соотношении от последующего инфицирования вирулент18/19-18/19:18/19.36/38 соответственно и наными штаммами шигелл С целью повышеполнитель 10/5 ния эффективности колибактерииа ведется Приготовление суспензии микробных селекция антибиотикоустойчивых вариан- 5 культур, входящих в биопрепарат, осущесттов производственного штамма. вляется раздельным культивированием Применение колибактерина рассчитано штаммов. Последовательность операций на временно персистирование, a s ряду слувключает: чаев и приживление лечебного штамма в посев петлей каждого штамма бактерий кишечнике, что достигается систематиче- 10 на мясо-пептонный агар и инкубацию при ским энтеральным введением препарата на 37е С в течение 24 ч; протяжении нескольких недель Колибактепересев взвеси бактерий на бактериолорин эффективен при разных формах хронигические матрацы на коммерческую среду и ческого колита и длительных дисфункциях кишечника невыясненной этиологии, проте- 15 термостатирование 24 ч при 37° С; смыв колоний бактерий физиологичекающих на фонеfij/ісбактериоз а и не поддаским раствором: ющихся антибактериальной терапии; смешивание бактерий в определенном оказывает положительное действие при оссоотношении (1:1:1:2); трых кишечных инфекциях в стадии реконвведение защитной среды и лиофильная взлесценции, предупреждая развитие 20 сушка препарата. хронических форм; способствует санации Раздельное культивирование штаммов, длительных бактериовыделителей при хровходящих в биопрепарат, позволяет по-луническом течении кишечных инфекций, норчать высокий титр микробных клеток в 1 дозе мализует микрофлору кишечника, повышает общую резистентность организма, регули- 25 препарата, устраняет антагонизм, наблюдающийся при совместном культивировании. рует витаминный баланс. Суточное количеНа основании штаммов с типичными морство колибактерина, вводимое в 2 приема фологическими, культуральными. биохимичесоставляет от 4 доз для детей 6--12-месячноскими свойствами приготовлены шесть го возраста до 6-10 доз для взрослых. Курс лечения, в зависимости от тяжести и дли- 30 вариантов препарата с различным содержанием микробных клеток в составе препарата. тельиости заболевания, продолжается от 3 недель до 2 месяцев. Вариант 1. Препарат, содержащий, Недостатками колибактерина являются: об.%низкий титр бактериальных клеток в 1 дозе препарата; низкая антибиотикоустойчи- 35 Биомасса Є.соіі Г-1-59 0.5-106 вость. низкая адгезивность: длительный живых микробных клеток в курс лечения, слабая приживляемость в ки1 мл физраствора 36 шечнике человека. Биомасса E.coli Г-2-60 0.5-108 В основу изобретения поставлена задаживых микробных клеток в ча создания биопрепарата, для профилакти- 40 1 мл физраствора 18 ки и лечения желудочно-кишечных Биомасса E.coli Г-3-61 0,5-108 заболеваний человека и животных, 9 котоживых микробных клеток в ром содержание нескольких штаммов знте1 мл физраствора 18 робактерий обеспечивает высокий титр Биомасса Streptococcus faeживых микробных клеток в 1 дозе, широкий 45 calls Г-4-62 0,5-108 живых спектр антагонистической активности в отмикробных клеток в 1 мл ношении патогенных и условно-патогенных физраствора 18 микроорганизмов высокую адгезивную акНаполнитель 10 тивность, выраженные иммуномодулирующие свойства и за счет этого достигается 50 Вариант 2. Препарат, содержащий, эффективность профилактики и лечения жео6.%: лудочно-кишечных заболеваний и коррекБиомасса E.coli Г-1-59 1 -10 ция микрофлоры кишечника человека и живых микробных клеток в животных. 1 мл физраствора 18 Поставленная задача решается тем, что 55 Биомасса E.coli Г-2-60 1-108 биопрепарат для профилактики и лечения живых микробных клеток в желудочно-кишечных заболеваний человека 1 мл физраствора 36 и животных, содержащий биомассу энтероБиомасса Е.соМ Г-3-61 1-108 бактерий согласно изобретению включает живых микробных клеток в биомассу 4-х штаммов энтеробактерий: 21979 1 мл физраствора 18 Биомасса Streptococcus faecalis Г-4-62 1-Ю8живых микробных клеток в 1 мл физраствора ' 18 Наполнитель 10 •' * Вариант 3. Препарат, содержащий, ' об%: I Биомасса E.coll Г-1-59 б-™* | живых микробных клеток в 1 мл физраствора 18 ' Биомасса E.coll Г-2-60 5-10в живых микробных клеток в ! . 1 мл физраствора 18 • Биомасра E.coll Г-3-61 5-Ю 8 живых микробных клеток в 1 мл физраствора 36 Биомасса Streptococcus faecalfs Г-4-62 5-Ю 8 живых микробных клеток в 1 мл физраствора • • 18 Наполнитель 10 Вариант 4. Препарат, содержащий, об.%: Биомасса Е.соИ Г-1-59 1-Ю9 • живых микробных клеток в 1 мл физраствора 18 Биомасса Е.соМ Г-2-60 1-109 живых микробных клеток в 1 мл физраствора 18 Биомасса Е.соИ Г-3-61 1-Ю9 живых микробных клеток в 1 мл физраствора 18 Биомасса Streptococcus faecalis Г-4-62 1-Ю9 живых микробных клеток в 1 мл . физраствора , • 36 Наполнитель 10 Вариант 5. Препарат, содержащий, об.%: Биомасса Е.соН Г-1-59 5 *109 • живых микробных клеток в 1 мл физраствора 18 Биомасса Е.соИ Г-2-60 5-Ю 9 живых микробных клеток в 1 мл физраствора 18 Биомасса Е.соИ Г-3-61 5-Ю 9 живых микробных клеток в 1 мл физраствора ' 18 Биомасса Streptococcus faecalfs Г-4-62 5 • 109 живых микробных клеток в 1 мл физраствора • 36 Наполнитель 10 Вариант 6. Препарат, содержащий, об.%: Биомасса E.coll Г-1-59 1 *109 живых микробных клеток в 1 мл физраствора 19 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Биомасса E.coli Г 2-60 1 • 109 живых микробных клеток в 1 мл физраствора 19 Биомасса Е.соИ Г-3-61 1-Ю9 живых микробных клеток в 1 мл физраствора 19 Биомасса Streptococcus faecalls Г-4-62 1 -109 живых микробных клеток в 1 мл физраствора 38 Наполнитель • 5 Необходимость наполнителя обусловлена его защитным действием для бактериальных клеток при лиофильном высушивании. Изготовленные варианты препарата разливали в стерильные ампулы, высушивали лиофильно, ампулы запаивали. Дли определения специфической активности исследовали антагонистическую активность вариантов препарата в отношении тест-культур (табл.1). Исследование осуществляли методом отсроченного антагонизма. Оптимальные количества живых микробных клеток каждой культуры препарата в 1 мл физиологического раствора составляют 1 • 10 — 1' 10 при объемном содержании культур соответственно 18, 18, 18, 36%. Дальнейшее увеличение количества микробных клеток не изменяет существенным образом специфическую активность препарата в отношении тест-культур микроорганизмов. Таким образом, предлагаемые количественные характеристики живых микробных клеток е препарате экспериментально подтверждаются. Одним из множества факторов побочного действия химиотерапии является дисбактериоз кишечника Ликвидация дисбактериозного состояния одна из задач биопрепарата. Изучение степени восприимчивости бактериальных культур, входящих в биопрепарат к антибиотикам, наиболее часто применяемых в химиотерапии показало, что предлагаемый биопрепарат, в отличие от известных, характеризуется резистентностью к широкому спектру антибиотиков. Под наблюдением находилось 22 обследуемых, у которых способом диагностики злокачественных новообразований установлено снижение индекса некроза опухолевых клеток - ИНОК. В процессе исследования у 9 пациентов был выявлен дисбактериоз кишечника. У всех испытуемых, перед началом обследования документировалось их состояние клиническим, эндоскопическим, рентгенологическим. 21979 морфологическим методами. Было установлено, что у обследованных нарушена микрофлора кишечника. На основании полученных результатов обследования диагностировалась предрасположенность обследуемых к злокачественным новообразованиям. Обследуемые в течение одного месяца принимали бактерийный препарат в соответствии с инструкцией, разработанной авторами. Испытания проводились под наблюдением медперсонала. В итоге испытания препарата у девяти обследуемых с выявленным дисбактериозом кишечника, после лечения дисбактериоз не обнаружен, ИНОК повысился в среднем от первоначального значения на 24,2%'. В тоже время не наблюдалось пациентов с ухудшением или без клинического эффекта. Таким образом, применение предлагавмого биопрепарата больными с дисбактериозом кишечника и ослабленной имунной системой организма приводит к качественному улучшению общего состояния здоровья, восстановлению с п о с о б н о с т и организма к сопротивлению, нормализации микрофлоры кишечника и не вызывает побочных явлений. Эффективность биопрепарата изучена у 36 больных с острыми кишечными инфекциями различной этиологии. Препарат вводился через рот 2 раза в день в течение 5-7 дней. Длительность интоксикации у больных, которые применяли предлагаемый биопрепарат, была на 2,2 дня короче, лихорадка на 2,3 дня короче, патологические примеси исчезли из стула на 1-1,3 дня раньше, чем у больных находящихся на базисной терапии с применением колибактерина. Длительность пребывания в стационаре составляла 14,2 к/д, в то время как срок пребывания-в стационаре больных контрольной группы составлял 18,3 к/д. В табл.2 приведены клинические пока•затели у больных кишечными заболеваниями. Параллельно у детей, перенесших острые кишечные инфекции, изучалось состояние микрофлоры кишечника. Дети были разделены нз две группы; основная - в комплекс лечения включен предлагаемый биопрепарат и контрольная дети находившиеся на базисной терапии с применением колибактерина (тзбл.2).. Результаты обследований показали, что у детей, находящихся на базисной терапии 5 10 15 20 25 30 35 40 8 с применением колибактерина, после перенесения острых кишечных.инфекций, развивается дисбактериоз кишечника второй степени. У детей опытной группы к концу второй недели происходит нормализация микрофлоры кишечника. В кале значительно уменьшалось количество условно-патогенных микроорганизмов (10,2-10,4 г) полнос т ь ю и с ч е з л и грибы рода к а н д и д а , нормализовалось содержание бифидобэктерий. Под наблюдением находилось 25 детей в возрасте от 3 до 14 лет с диагнозом дисбактериоз кишечника II-IV степени. Биопрепарат использовали в качестве монотерапии по следующей схеме 1 доза в день на протяжении 20 дней, затем при необходимости по 1 дозе через день еще 10-20 дней. Ни у кого из больных не отмечено негативного побочного действия и индивидуальной непереносимости препарата. В итоге применения предлагаемого биопрепарста у 7 обследуемых с дисбактериозом І Н Н степени дисбактериоз не обнаружен. Из 18 детей, имеющих дисбактериоз НІIV степени, к концу I курса (10 дней) наблюдалось улучшение - выявлен дисбактериоз Н І ст., что свидетельствует о начавшейся нормализации микробоценоза кишечника. К концу III курса (20дней)наблюдалась нормализация микрофлоры кишечника практически у всех детей. Только у 3 чел. имел место дисбактериоз I ст. На фоне применения бактерийного концентрата наблюдалось улучшение общего состояния здоровья детей - не регистрировались случаи простудных заболеваний, уменьшилось или полностью исчезли проявления естеиовегетативного синдрома, восстановились функции желудочно-кишечного тракта (исчезли поносы, запоры). Промышленная применимость изобре45 тения явствует из того, что предлагаемый биопрепарат обеспечивает существенное повышение знтибиотикорезистенстностя и адгезивности и обеспечивает эффективную защиту от широкого спектра инфекционных 50 агентов бактериальной и грибной природы. Способ его применения несложен и биопрепарат может быть использован в качестве п и щ е в о й д о б а в к и или п и щ е в о г о 55 концентрата. Абсолютная безвредность позволяет широко использовать биопрепарат для нормализации микрофлоры. 21979 10 Таблица 1 Вариант препарата Антагонистическая активность зоны подавления роста, мм Salmonella Shlgell zonnea Proteus vulgarls typhimurium 13 11 11 14 14 13 13 15 13 14 15 14 14 15 14 14 15 13 1 2 3 4 5 ' 6 Та б л и ц а 2 Показатель Базисная терапия+ колибактерин Длительность интоксикации Длительность лихорадки Длительность патогенных . изменений в стуле: кровь слизь консистенция 4,6 5,0 Упорядник Замовлення 4463 Техред М.Келемеш Базисная терапия+ предлагаемый биопрепарат 2,3 3.1 1,0 5,3 1,8 6.3 7,4 5,0 Коректор М.Самборська Тираж • Підписне Державне патентне відомство України, 254655. ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.ГагарІна. 101