Речовина для подолання мультилікарської стійкості

1. Вещество для преодоления мультилекарственной устойчивости, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что в качестве активного вещества оно содержит, по меньшей мере, одно производное фталазинона формулы I где А - незамещенный или одно- или многократно галоидозамещенный фенил, водород, С,-С3-апкил, 2-фурил или 2-тионил, R означает остаток формул N-Y. зинонового производного или ее оптические изомеры в эффективном количестве. 2. Вещество по п. ^ о т л и ч а ю щ е е с я тем, что в качестве производного фталазинона оно содержит соединение формулы И о на 3. Вещество по п. 1, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что в качестве производного фталазинона оно содержит соединение формулы III а. 4 Вещество по п. 1, о т л и ч а ющ е е с я тем, что производным фталазинона является флезеластин или его оптический изомер. 5. Вещество по п. 1, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что производным фталазинона является соединение формулы IV F N-Y, где Y означает водород или С^С.-алкил, причем алкильный остаток может быть замещен гидрокси-группой или алкоксикарбонильной группой, или его оптический изомер или физиологически переносимую кислотно-аддитивную соль этого фтала о с > ил о 26953 Изобретение относится к производным фтзлазинона, обладающим противоаритмическими и анальгетическим действием. Известно производное фталазинонаазеластин, успешно применяемое для лечения и профилактики бронхиальной астмы и аллергических и сезонных ринитов, синтез которого описан в патенте ФРГ ДЕ 2164058. В европейском патенте ЕР 222191 10 описано получение производного азеластина-флезеластина (Д-18024-гидрохлорид) в виде рацемической смеси. Неожиданно было найдено, что произ15 водные фталазинона общей формулы I (ID на (III) о ПСІ (IV) •А N-R Г ГN 20 Ч А N о I где А - фенил (незамещенный, одно- или Предположительно их можно объедимногократно замещенный галоидам), Н или нить в класс Ill-соединения, обладающие С ь з -алкил, 2-фурил или 2-тиенил и R 25 антиаритмической активностью. Кроме топредставляет собой го, соединения обладают анальгетическим действием. Представляемые изобретением соединения обладают также противорвотным N 30 действием. Противорвотное действие установлено в результате торможения рвоты, вызванной циспатином, у бодрствуюпри Y - Н или С, 6-алкил, щих домашних свиней после орального причем алкильный радикал может быть или внутреннего применения последнего. замещен возможно замещенные фенильным кольцом, гидроксильной или алкок- 35 Торможение рвоты у бодрствующих сикарбонильной группой, их физиологисвиней, вызванной циспатином. Результаческие приемлемые соли - продукты кисты представляют собой количество слулотного присоединения, так же как оптичаев (приступов) рвоты за период наблюческие изомеры азеластина и оптические дения. Данные следует рассматривать как изомеры флезеластина обладают антиа- 40 средние значения 5 различных экспериритмической активностью. ментов. Соединение Контроль D 20602 I-V Доза, шт. на свинью 5 15 D 20602 р.с. 50 10 25 50 100 200 Получение соединений формулы I происходит в соответствии с пат. ФРГ DE 2164058, соединения формулы II получают по аналогии с методикой, изложенной в DE 2164058 (пример 10). Время, ч 0-4 10 0-8 10 0-24 8 0 0 9 3 0 18 11 3 0 3 0 1 3 3 2 1 0 0 0 0 0 0 12 2 Соединение формулы III получают аналогично данным примера 2 в ЕР 174464. Соединение формулы IV синтезируют в соответствии с методикой, представленной в ЕР 0222191 (пример 36). 26953 Оптические изомеры азеласн ^ и флезеластина получают с применением метода фракционной кристпллизац!;-5 Абсолютную структуру азеластина определяют с помощью рентгеноструктурнп'О виглиза. Испытание противоаритмическоі;. активности проводят о соответствии со следующими рекомендациями: Отбирают двадцать молодых кроликов смешанной породы обоего пола вегом 1475±75 г (среднее значение ±S В ). Животных забивают ударом по голове, извпекают сердце и полосы передней свободной стенки прапого желудочка, а также вскрывают одну из сосочковых (папиллярных) мышц правого желудочка и закрепляют ее на дне термической ванны для органов ("нетоксичная резина"), заполненной раствором Лока. Раствор имеет следующий состав; Na( 140; К' 5,63; Са2* 2,17, глюкоза 11; НСО3 25; CI 125, всего 309 молей/л, рН 7,4. Путем пропускания смеси 95% О г и 5% СО7 раствор постоянно перемешивают и заряжают кислородом. Температуру в ванне поддерживают на уровне 32°С. Выделенное левое предсердие, папиллярную мышцу и полосы передней свободной стенки правого желудочка раздражают электрическим пуіем с помощью прямоугольных импульсов 1 мсек (продолжительность), сдвоенной пороговой интенсивности и частотой 100/ мин. В ходе эксперимента определяют следующие электрофизиологические параметры, электрическое пороговое значение, эффективный рефракторный период и электропроводность. Эффективный рефракторный период, т.е. минимальный интервал между двумя следующими одна за одной электромеханическими реакциями измеряют с помощью трехкратного порогового раздражения (1 мсек, прямоугольные волны) с применением DISA Muhtsirn на различных временных отрезках по стимулу поступательного раздражения. Проводимость измеряют с применением осциллоскопа (Тектронис 2230) как разницу во времени между подачей поступательного стимула и появлением поверхностного потенциала, регистрируемого с помощью биполярного платинового электролита. Измеряется также возрастающая по силе способность к сокращению (максимальная сократительная способность (сосочковая мышца, левое предсердие/). После 60-минутного выдерживания в контрольном растворе для уравнивания препараты извлекают и 60 мин подвергают действию 10 мкМ опытного раство 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ра. За исключением воздействия їм эффективные рефракторные период!.і, измеряемого только на 30 и 60-ой минуте, анализируют все параметры через 15 мим, т.е. четыре раза, при наличии указанной выше концентрации состава. Данные, приведенные а таблице и н рисунках, представляют собой средние значения irS.E. Влияние составов на рлзличные параметры оценивают статистически с помощью Т-те^сга. Р-значрмия более 0,05 считают показательными. Результаты представлены в табл. 1. Периферическое анальгетическое действие определяют по модели Writhingтеста, а также по модели Randall-Seiittoтеста на боль при воспалительном процессе. Результаты изложены в габл. 2. INPAC-тест Wnthmg'a с испопьпоппнием уксуснокислотного индуцировании Данные в' % относятся к дозе 6 мг/кг перорально (для мыши). ЕД^-знэчения даются в мг/кг. IRS-тест на боль при воспалении по Randall-Schtto. Данные в V относятся к дозе 10 мг/кг перорапыю (для крысы). ЕД50 - значения даются в мг/кг При лечении цитостатичоскими средствами установлено, что после первых успехов в лечении новообразований происходит явление сопротивления печению. Не приносит успехов и лечение другим цитостатическим средством. Это явление называют мулыиустоичивостью к лекарствам (МУЛ), (Vondrik, Bergers, de Jong, Sttetenberg "Устойчивость к цитостатическим лекарствам ил клеточном уровне", Cancer Chemothrr Pharmacol, (1992), 29, 413-429). Представляемые изобретением соединения могут быть использованы также дчя получения лекарственных средств, позволяющих воздействовать на это явление Пригодность соединения для иолучония лекарственных средств, способных преодолеть это явление, определяют в ходе описанного ниже эксперимента. Острая миелоидная лейкемия Brown Norway (МЛБН) напоминает острую ^'ие локлеточную лейкемию у человека в отношении способности роста и химиотерапевтических реакций (для нового обзора по миелоидной лейкемии (МЛБН) см Mlartens и сотр., Leukemia, 4, 241-257, 199w. Для разработки клинически приемлемой устойчивой к лекарствам модели лейкемии выбирают одну из снятых с МЛБН клеточных линий, именуемую LT12. Преимущество этой линии состоит в том, что она может расти как in vivo, так и in vitro. 26953 При введении (in vitro) человеческого гена mdr! в геном ДНК путем переноса 1_Т12-клеткихтановятся устойчивыми в отношении веществ. Для такого переноса, осуществляемого под контролем используемого ранее ускорителя для CMVпромотора, следуя сигналам НВУ-полиаденилации, применяют вектор экспрессии pFRCMV mdrl 1,6, содержащий весь набор с ДНК mdrl І-гена человека. Трапсфицированные отрезки ДНК отбирают с помощью митоксантрона и выдерживают с 200 нм митоксантрона при разделении веществ. Указанный метод дает возможность получить устойчивую к веществам 1_Т12-линию клеток, именуемую LT12/mdr. Конечная точка поточной цитометрии (количественное изучение клеток). С помощью поточной цитометрии можно идентифицировать клетки на основании горизонтального (параметр величины) и вертикального (параметр структуры) рассеивания света. Для каждой клетки измеряют три величины активности, возбуждая ее лазерным лучом (0,6 Ватт, 488 нм). Вертикальное рассеивание, горизонтальное рассеивание (через ленточный фильтр 488 нм) и флуоресценция даунорубицина (через фильтр с длинной лентой 550 нм). Соединив полученные значения рассеивания с данными флуоресценции, можно исследовать содержание дауномицина в популяции клеток. При t = 0 в суспензию клеток добавляют даунорубицин (конечная концентрация 2 мкм) и опытное соединение (конечная концентрация 1,0 мкМ, 3,0 мкМ и 10 мкМ), (2 105 клеток/мл в RPMI-1640-среде без фенола красного). Клетки выдерживают в течение 90 минут при 37°С. С помощью поточного цитометра путем измерения светлой флуоресценции при возбуждении 488-нм лазерным лучом определяют внутриклеточную концентрацию даунорубицина. RPMI-1640 среда без фенола-красного выполняет роль отрицательного контроля. При каждом эксперименте применяют циклоспорин А {0,3, 1 и 3 мкМ) в качестве активного вещества. Мертвые клетки идентифицируют с применением невитального красителя Хехст АГ 33258 {по изменению окрашивания, возбуждение производят) (0,2 Ватт/УФ-лазерным лучом через длиннопроходной фильтр 405 нм). Мертвые клетки и детрит при анализе всегда исключают. Периодическая поточная цитометрия. Периодическая поточная цитометрия представляет собой разновидность обыч 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 8 ной поточной цитометрии, когда производят периодическое измерение пробы через интервалы в несколько часов. Периодические предварительно определенные временные интервалы заложены в микрокомпьютер с указанием данных для 2000 клеток в так называемом List-Mode-Datot. ;ак как все необходимые параметры (например, величина, структура, аккумуляция веществ и т.д.) для каждой клетки получены, можно провести последовательный обзорный анализ данных и повторные исследования. Суспензию клеток хранят в реакционном сосуде с термостатической водной рубашкой, соединенной с кювегой цитометра, при 37°С, Среду, содержащую клетки, сжимают, пропуская под давлением воздуха через кювету. Другой вход в реакционный сосуд служит для добавления веществ, осуществляемый под наблюдением клеток. Поэтому метод периодической поточной цитометрии особенно пригоден для измерения (быстрых) кинетических изменений внутриклеточных концентраций веществ. При таком эксперименте измерения начинают без даунорубицина в клеточной суспензии (2 105 клеток/мл) в RPM1-1640среде без фенола-красного). При t = 0 в клетки добавляют даунорубицин (конечная концентрация 2 мкМ). Негто-поглощение даунорубицина клетками измеряют с интервалом в 60 минут, пока не будет достигнут равномерный уровень аккумуляции веществ В этот момент в клеточную суспензию добавляют испытуемое вещество и снова в течение 60 минут измеряют аккумуляцию веществ. В суспензию клеток в качестве контрольного вещества (положительного) вводят циклоспорин А. Результаты показывают пригодность представляемого изобретением вещества для данных целей. Необработанные LT 12/ mdr-клетки показывают 23% флуоресценцию даунорубицина, неустойчивые клетки дают 100% флуоресценцию даунорубицина. Контрольное вещество цикло-А при концентрации 0,3 мкмоль дает 120%, при 1,0 мкмоль - 110% и при концентрации 3,0 мкмоль - соответственно 130% флуоресценцию даунорубицина. Флезеластин при концентрации 0,1 мкмоль дает 60%, при 0,3 мкмоль - 110%", при 0,5 мкмоль - 130%, при 1,0 мкмоль - 130% и при 3,0 мкмоль - 140% флуоресценцию даунорубицина. Азеластин при концентрации 0,1 мкмоль показывает 50%, при 0,3 мкмоль - 70%, при 0,5 мкмоль - 90%, при 1,0 мкмоль - 110% и при концентрации 3,0 мкмоль - 140%-ную флуоресценцию даунорубицина. 9 10 26953 Т а б л и ц а Характеристика Противоаритмические свойства сердечных препаратов на примере кролика: инкубационный период с лекарствами 60 минут изменение в процентах к контрольной группе Пороговое значение при электрическом раздражении: правая передняя свободная стенка сосочковая мышца правого желудочка левая артериальная сердечная мышца Проводимость правая передняя свободная стенка левая артериальная сердечная мышца Эффективный рефракторный период: правая передняя свободная стенка левая артериальная сердечная мышца Способность к сокращению: левое предсердие сосочковая мышца —. Азеластин D-18024 1 D-20602 D-21111 ICS-205930 5 10 цт 10 цт 10 цт 10 цт 10 ЦТ +29 -1 + 100 +37 +51 +22 + 19 + 102 +35 +34 +25 + 12 +68 +45 +51 -50 + 103 + 137 + 109 +111 .* +40 + 91 + 118 + 111 +57 +9 +7 +26 +25 +21 + 12 +66 +42 +53 +26 -39 -35 -24 -33 -48 -32 -25 -29 11 26953 12 Т а б л и ц а 2 Анальгетическое действие фталазинон-производных общей формулы I R D Активность в тест-модели IWRAC IRSh D-17477 4-СІ-фенил 91% 77% D-18022 4-Р-фенил 75% 53% D-18024 4-Р-фенил D-18445 4-Р-фенил 54% 77% 67% 67% 52% 4 D-18569 D-20602 D-20794 D-20605 D-20979 D-21559 D-21614 4-Р-фенил фенил 4-Р-фенил EDM=1,5 3-хинуклидил 3-хинуклидил 67% 4-С1-фенил 50% EDM=19 4-CI-фенил ED =4,1 2-CI-фенил EDR=4,7 40% 2-фурил Упорядтік Техред М. Келемеш Коректор О.Обручар Замовлення 541 Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Киів-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101