Спосіб вирощування проовігенних ентомофагів

Спосіб вирощування проовігенних ентомофагів, що включає вирощування ентомофагів в організмі природніх комах-хазяїв в умовах біолабораторій, що відрізняє ться тим, що імаго ентомофагів підживлювали у 1-му поколінні водними розчинами нативних дріжджових рибонуклеїнових кислот (РН), або алкілованих тіофосфамідом (РНТ), або циклофосфамідом (РНЦ) в концентрації 0,0040,009%. (19) (21) 98052301 (22) 06.05.1998 (24) 16.10.2000 (33) UA (46) 16.10.2000, Бюл. № 5, 2000 р. (72) Дрозда Валентин Федорович (73) ІНСТИТУТ ЗАХИСТУ РОСЛИН УКРАЇНСЬКОЇ АКАДЕМІЇ АГРАРНИХ Н АУК 29290 5. Спосіб обгрунтовано лише для представників роду Trichgramma, на інші види паразитичних комах спосіб не поширюється. 6. Для прототипу і жодного з аналогів не встановлена післядія стимуляторів на популяції комах. Тому стимулятори необхідно використовувати для кожного покоління. В основу винаходу поставлено завдання розробити ефективний та технологічний спосіб вирощування проовігенних ентомофагів у лабораторному режимі з високими показниками продуктивності, життєздатності та плодючості. Суть способу полягає у тому, що проовігенні вирощувались в організмі природніх комах-хазяїв в умовах біолабораторій. Суттєвою ознакою способу було те, що імаго ентомофагів підживлювали у 1-му поколінні водними розчинами нативних дріжджових рибонуклеїнових кислот (РН) або алкілованих тіофасфамідом (РНТ), або циклофосфамідом (РНЦ) в концентрації 0,004-0,009%. Приклади здійснення способу. Об'єктами досліду були проовігенні ентомофаги, найбільш поширені в практиці біологічного способу захисту рослин: trichgramma dendrolimi Mts. паразит яєць багатьох представників загонів шкідливих комах та Trybliographa rapae Westw. - паразит личинок весняної та літньої капустяних мух. Група проовігенних ентомофагів характеризується такими фізіологічними особливостями, у яких вітеллогенез у самиць завершується на стадії лялечки і імаго паразита відроджується з майже повністю сформованими та визрівшими статевими продуктами. Приклад 1. Для здійснення способу, використовували трихо граму дендролімі, яку вирощували на яйцях дубового шовкопряду. У біолабораторії, за оптимальних гідротермічних умов, після відродження імаго трихограми, формували варіанти досліду. Для цього брали широкогорлі скляні пробірки, відбирали яйця дубового шовкопряду, наклеювали їх на смужки картону не менше 15 у одну пробірку. Готували ватний тампон, який обробили, в залежності від варіанту, водними розчинами препаратів: РН, РНТ та РНЦ, кожен у 4-х концентраціях: 0,002; 0,004; 0,009 та 0,019%. Водними розчинами вказаних препаратів підгодовували імаго паразитів. Таким чином, визначали оптимальні та граничні концентрації найбільш ефективної дії препаратів. Водними розчинами препаратів зволожували рівномірно ватний тампон і клали разом з картонною смужкою з наклеєними яйцями у скляну пробірку. Після цього у пробірку підсаджували самицю і самця трихограми, які щойно відродилися. Трихограму впродовж всього терміну досліду утримували в оптимальних умовах температури, вологості та освітлення. Ефективність способу оцінювали згідно загальноприйнятих у галузі показників біологічного та технологічного характеру. Всього, отриманий позитивний ефект оцінювали за сімома показниками. Основний критерій оцінки ефективності пропонованого способу - порівняння отриманого технічного результату, з результатом досягнутим при реалізації способу-прототипу, що наводиться у таблицях. У табл. 1 наведені результати продуктивності трихограми при вирощуванні її згідно пропонованого способу. Зокрема, обгрунтовані оптимальні концентрації (0,004-0,009%) препаратів РН, РНТ та РНЦ, як складова частина у дієті для імаго трихограми. Згідно з наведених результатів, отримані статистичне вірогідні показники продуктивності паразита, що перевищують прототип. Особливо переконливі результати за показниками плодючості самиць, життєздатності, тривалості життя імаго, тощо. Приклад 2. Популяції трихограми, вирощували як у прикладі 1. Суттєва відмінність полягала у тому, що імаго трихограми водні розчини препаратів не давали. Дієту імаго пропонували тільки у першому поколінні. По суті, обґрунтовували феномен післядії препаратів, що значно спрощує технологічну частину способу. У табл. 2 наведено результати досліджень пропонованого способу. Встановлено, що препарати виявляють не тільки пряму позитивну дію на трихограму, але і виражену післядію. За всіма показниками, спостерігається стабільна ефективність дії препаратів, що значно перевищує дію способу-прототипу. Аналізуючи отримані результати, можна сказати, ефективність прямої дії препаратів у способі не поступається післядії препаратів у третьому поколінні. Переваги, що витікають з цього явища стабільно висока ефективність, технологічність способу та незначна витрата препаратів. Особливо суттєва перевага способу за такими показниками, як частка деформованих особин. У прототипі це 19,5%, тоді як у пропонованому способі, за оптимальних параметрів концентрації препаратів лише 2,9-7,1%. Приклад 3. У мови досліду ті що у прикладі 1. Досліджувалось п'яте покоління трихограми підживлювали імаго паразита тільки у першому поколінні. Отже, визначалась наявність післядії препаратів, що використовувались. У табл. 3 наведені результати досліджень, стосовно вивчення післядії у пропонованому способі. Як видно, за отриманими результатами, спостерігається ефект післядії препаратів і у п'ятому поколінні. Це особливо переконливо спостерігається під час аналізів показників кількості деформованих особин, плодючості, тривалості життя імаго. Отже, встановлено, що використовуючи пропонований спосіб вирощування ентомофагів, післядія позитивного результату впродовж п'яти поколінь, що переконливо спостерігається у наведених у табл. 1-3 результатах. Приклад 4. Лабораторна популяція трибліографи, паразита личинок капустяних мух, яку вирощували згідно прийнятої технології. Лабораторне вирощування трибліографи проводили на личниках весняної капустяної мухи. В свою чергу, личинок мух вирощували на коренеплодах редьки у дерев'яних ящиках, на дно яких насипали 2-3 см прожареного та зволоженого піску. На пісок розсівали яйця мухи і розташовували на них зрізані верхівки коренеплодів. Після відродження імаго трибліографи їх відловлювали і по 150-200 особин розташовували у 0,5 л скляні банки, закриті капроновим ситом. Імаго паразитів підживлювали водними розчинами препаратів РН, РНТ та РНЦ в певних концентраціях. Банки з паразитами утримували при температурі 20-22 гр. С, відносній вологості повітря 70%, тривалості світлового дня 16 год. Зараження личинок мухи трибліографою 2 29290 проводили у ти х ящиках, де розводили мух. Через добу після вильоту паразитів випускали у ящики, де були личинки мухи у коренеплодах редьки. Самиці негайно притупали до пошуку хазяїв. Імаго трибліографи знаходились в ящиках з личинками мухи до кінця життя. Отримані результати наведені у табл. 4. Як видно, популяції трибліографи, що вирощувались згідно пропонованого способу мали суттєві переваги над популяціями, що розвивались згідно способу-прототипу. Особливо відчутна перевага за такими показниками як плодючість самиць, де переваги над прототипом перевищують 40%. Встановлено, що оптимальні концентрації препаратів для досягнення найбільшого ефекту знаходяться в межах 0,004-0,009%. Отже, підживлення трибліографи у першому поколінні у пропонованому способі дає суттєвий результат, що перевищує прототип. Приклад 5. Як і у випадку з трихограмою, досліджували результати післядії препаратів на популяції ентомофага. Умови досліду ті ж, що у прикладі 4. Відмінність у тому, що підживлення імаго препаратами проводили тільки у першому віці. У табл. 5 наведені результати післядії препаратів. Встановлено, що за більшістю показників, популяція трихограми 3-го покоління майже не відрізняється від популяції 1-го покоління, що свідчить про впроваджену післядію препаратів у способі. Феномен післядії спостерігається в межах концентрацій 0,004-0,009%. Приклад 6. Популяція трибліографи вирощувалась як у прикладі 1. Досліджувалось п'яте покоління паразита. Підживлювали імаго тільки у першому поколінні. У табл. 6 наведено отримані результати. Як видно, встановлена виражена післядія препаратів у пропонованому способі, за всіма показниками, що оцінювали популяцію трибліог рафи. Ці параметри значно перевищували показники способу-прототипу. Як і у випадку з трихограмою, встановлена виражена дія на популяцію трибліографи, а також післядія. Таким чином, встановлено, що біостимулятори у пропонованому способі викликають відчутний стимулюючий ефект на перше покоління та на наступні друге-п'яте. Оптимальні концентрації препаратів, як дієта імаго проовігенних ентомофагів знаходиться в межах 0,004-0,009%. Використання пропонованого способу вирощування проовігенних ентомофагів дозволяє, у порівнянні з існуючим способом, суттєво підвищити продуктивність лабораторних популяцій ентомофагів шляхом значного збільшення технологічних параметрів паразитів. Одночасно уніфікується та спрощується технологія вирощування ентомофагів. Біостимулятори у способі необхідно використовувати ли ше один раз за п'ять поколінь ентомофагів. Джерела інформації 1. Методические указания по промышленному производству трихограммы на биофабриках. Ред. Ш.М. Гринберг. - М., 1983. - 76 с. 2. Макаренко Г.Н. Особенности развития триблиографы - паразита весенней и летней капустных мух. Труды ВИЗР. - Л., 1965. - Вып. 24. С. 221-227. 3. Авторское свидетельство СССР № 865243, 1981. МКИ А01К67/00, Малявин И.С., Эгабердиев Л А., Сангов Р. 4. Li Li-Ying Tichogramma sp. and their utilization in Peple's Republic of China. Les Trichograrames, Antibes France, 20-23 avril 1982, Ed INRA Pubb, 1982 (Les Colloques de FINRAn.9). 5. Спосіб вирощування ентомофагів роду Trichogramma, Патент України, MKB А01К67/033, № 20279, Дрозда В.Ф. (прототип). Таблиця 1 Показники продуктивності Trichogramma dendrolmi вирощеної згідно пропонованого способу. Перша генерація трихограми Дієта для імаго РН РНТ РНЦ Прототип Концентрація % Плодючисть, екз. яєць/самку 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 47,4 52,6 56,4 49,6 48,4 59,4 56,8 50,6 51,2 58,4 55,5 49,7 Самиці, що відклали яйця, % 66,9 75,2 77,1 67,7 72,6 79,4 80,2 71,3 61,4 69,8 73,3 64,6 40,1 61,8 70,3 73,4 69,8 62,4 69,4 74,8 69,8 60,9 54,3 66,4 70,7 55,6 Деформовано особин, % 6,4 4,8 3,1 5,9 6,8 4,4 3,2 5,7 5,3 2,9 3,7 6,0 60,1 14,6 Життєздатність, % 3 ТриваТривалість лість розвитку життя покоління, імаго, діб діб 7,0 13,1 7,7 11,5 8,2 11,8 6,8 12,6 5,5 13,0 8,1 12,0 7,5 11,8 5,8 12,6 6,2 12,5 7,4 11,5 8,8 11,0 5,2 12,3 5,8 12,6 Заражено хазяїна, % 71,2 78,4 80,2 70,8 74,3 80,2 81,6 71,8 66,8 75,7 79,1 70,5 55,1 29290 Таблиця 2 Показники продуктивності Trichogramma dendrolmi вирощеної згідно пропонованого способу. Третя генерація трихограми Дієта для імаго РН РНТ РНЦ Прототип Концентрація % Плодючисть, екз. яєць/ самку Самиці, що відклали яйця, % Життєздатність, % Деформовано особин, % Тривалість життя імаго, діб 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 42,8 49,8 50,1 46,5 43,4 47,4 49,3 40,4 40,2 47,5 49,2 39,8 59,4 70,9 69,4 61,3 59,2 68,4 66,7 58,4 60,2 70,4 71,6 66,4 60,9 70,8 71,2 66,5 59,3 68,4 69,8 65,3 66,2 71,4 72,5 61,2 6,9 5,1 4,9 7,1 6,8 3,7 4,2 6,8 7,1 4,3 2,9 5,4 5,2 6,6 6,8 5,3 5,3 7,0 7,1 6,2 5,4 6,8 6,0 5,3 Тривалість розвитку покоління, діб 14,1 12,5 12,0 13,5 15,0 12,5 13,0 14,0 14,0 12,5 13,0 14,3 33,8 55,2 57,3 19,5 4,8 14,8 Заражено хазяїна, % 65,3 75,5 77,3 68,4 59,3 70,5 69,4 58,8 56,8 68,4 70,2 60,1 53,8 Таблиця 3 Показники продуктивності Trichogramma dendrolmi вирощеної згідно пропонованого способу. П'ята генерація трихограми Дієта для імаго РН РНТ РНЦ Прототип Концентрація % 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 Плодючисть, екз. яєць/ самку 40,5 47,6 48,4 43,1 31,9 43,8 40,9 36,2 38,6 45,3 46,2 39,2 30,1 Самиці, що відклали яйця, % Життєздатність, % Деформовано особин, % Тривалість життя імаго, діб 60,9 70,5 68,8 61,4 61,2 68,4 69,5 60,5 60,2 70,5 66,4 54,6 59,6 69,8 70,2 54,3 54,3 66,7 70,2 55,6 57,7 68,8 68,4 60,5 7,8 3,9 5,1 9,8 10,2 4,3 5,2 8,6 11,5 7,3 4,9 9,0 4,8 6,0 5,5 4,5 5,0 6,0 6,5 4,5 4,5 5,0 6,0 4,0 Тривалість розвитку покоління, діб 13,0 12,5 11,5 13,5 13,5 12,5 12,0 13,5 13,0 12,0 11,5 13,5 50,8 55,3 20,7 4,5 14,5 4 Заражено хазяїна, % 63,8 70,4 71,3 66,2 63,8 69,8 71,2 61,7 60,2 68,4 69,7 61,4 51,9 29290 Таблиця 4 Показники продуктивності Trybliographa гарае вирощеної згідно пропонованого способу. Перша генерація трибліографи Дієта для імаго РН РНТ РНЦ Прототип Коцентрація % 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 Плодючисть, екз. яєць/ сам ку Самиці, що відклали яйця, % Життєздатність, % Деформовано особин, % Тривалість життя імаго, діб 104,5 129,8 119,6 107,4 108,4 122,4 130,3 111,4 106,8 119,9 116,4 107,2 68,4 75,2 77,9 70,1 70,4 78,2 80,4 69,7 70,4 77,3 75,2 68,8 68,4 73,4 79,8 70,5 58,4 77,2 81,5 70,7 66,9 72,4 78,4 70,2 6,2 4,8 3,9 5,6 7,9 5,3 4,2 8,6 8,8 4,4 2,8 5,7 13,8 17,4 16,8 14,9 14,5 18,5 17,5 14,0 13,5 16,5 17,5 14,0 Тривалість розрахунку покоління, діб 38,5 37,5 35,5 39,0 39,5 35,5 40,0 41,5 38,5 36,5 38,0 42,0 88,4 59,4 61,8 18,9 11,6 38,5 Заражено хазяїна, % 57,9 62,3 70,1 59,4 69,8 75,4 71,8 58,9 64,6 74,1 77,3 60,2 43,7 Таблиця 5 Показники продуктивності Trybliographa rapae вирощеної згідно пропонованого способу. Третя генерація трнбліографи Дієта для імаго РН РНТ РНЦ Прототип Концентрація % Плодючисть, екз. яєць/ сам ку Самиці, що відклали яйця, % Життєздатність, % Деформовано особин, % Тривалість життя імаго, діб 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 99,7 124,8 119,8 103,5 100,8 118,5 109,4 89,6 109,2 120,6 117,8 99,6 65,2 71,6 77,8 69,3 69,3 75,8 80,1 62,4 70,1 78,4 79,3 71,3 68,2 80,4 79,2 64,6 64,3 77,2 78,4 68,3 66,4 81,3 75,2 70,1 7,3 5,3 4,8 5,8 6,2 4,4 5,3 9,8 11,9 5,2 3,7 6,4 11,5 15,6 14,9 12,6 13,0 16,5 17,5 14,0 15,5 17,5 16,0 14,5 Тривалість розвитку покоління, діб 39,0 38,5 37,5 40,5 38,0 37,8 36,5 40,5 41,5 38,5 37,0 40,5 87,0 56,2 60,8 19,6 11,5 40,5 5 Заражено хазяїна, % 70,2 71,4 73,8 68,4 69,8 72,5 77,4 70,2 65,6 74,7 75,6 60,9 41,9 29290 Таблиця 6 Показники продуктивності Trybliographa rapae вирощеної згідно пропонованого способу. П'ята генерація трибліографи Дієта для імаго РН РНТ РНЦ Прототип Концентрація % Плодючисть, екз. яєць/ самку Самиці, що відклали яйця, % Життєздатність, % Деформовано особин, % Тривалість життя імаго, діб 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 0,002 0,004 0,009 0,019 100,5 119,8 108,4 96,4 93,3 116,4 112,6 89,9 88,4 109,9 116,6 86,8 64,2 70,7 72,7 65,3 62,5 70,6 71,2 64,5 65,6 70,8 72,4 69,4 66,4 75,3 74,3 62,4 63,8 71,3 75,2 65,4 60,5 77,4 72,3 65,4 8,4 6,2 5Д 9,8 6,4 4,6 5,8 10,3 10,2 4,8 5,3 9,8 16,2 15,8 16,7 13,2 12,5 16,5 15,5 10,5 12,4 15,0 16,5 13,0 Тривалість розвитку покоління, діб 40,0 38,5 39,0 42,0 39,5 38,5 38,0 41,5 39,5 37,5 38 41,5 80,2 52,8 59,3 20,5 10,5 41,0 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 34 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 6 Заражено хазяїна, % 59,4 69,8 67,7 60,2 59,4 70,2 69,4 55,3 54,2 69,7 70,3 60,4 40,2