Спосіб спектрофотометричного визначення концентрації прокаїну гідрохлориду у лікарських формах аптечного приготування

Спосіб спектрофотометричного визначення концентрації прокаїну гідрохлориду у лікарських формах аптечного приготування, що включає приготування розчинів випробуваного зразка і зразка порівняння з подальшим вимірюванням їх оптичних густин за довжини хвилі 290 нм та розрахунком концентрації прокаїну гідрохлориду у випробуваному зразку, який відрізняється тим, що розчини одержують шляхом приготування не більше двох розведень водою Р до концентрації 1x10-5 г/мл. (19) (21) u200912831 (22) 10.12.2009 (24) 12.07.2010 (46) 12.07.2010, Бюл.№ 13, 2010 р. (72) ЄВТІФЄЄВА ОЛЬГА АНАТОЛІЇВНА, ГЕОРГІЯНЦ ВІКТОРІЯ АКОПІВНА, БИСАГА ЄЛИЗАВЕТА ІВАНІВНА, САВЧЕНКО ЛЕСЯ ПЕТРІВНА, БОНДАРЄВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛІВНА (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ 3 51177 4 також не дозволяє достовірно контролювати кільбути такими, що забезпечують кінцеву концентракість прокаїну гідрохлориду у лікарській формі. цію розведень 1х10-5 г/мл. Сучасна система забезпечення контролю якості В аптечній практиці використовують прокаїну екстемпоральних лікарських засобів аптечного гідрохлорид таких концентрацій: 0,25%, 0,5%, приготування базується на вимогах Державної 1,0%, 2,0%. Для кожної з них авторами визначено фармакопеї України [ДФУ] до якості субстанцій, які кількість води Р та об'ємів відповідних розведень використовуються для виготовлення зазначених для здійснення заявленого способу. засобів. За ДФУ у субстанції прокаїну гідрохлориду Розчин порівняння (далі: розчин робочого стакількість супровідних домішок контролюється мендартного зразку (РСЗ)) готують наступним чином: тодом тонкошарової хроматографії та не повинна 0,25 г (точна наважка) прокаїну гідрохлориду РСЗ перевищувати 0,05 % [7]. Якість виготовлення ліпоміщають у мірну колбу місткістю 100 мл й додакарської форми контролюється зразу після пригоють 70 мл води Р, перемішують до повного розчитування. За таких умов при кількісному визначенні нення прокаїну гідрохлориду, доводять об'єм вовмісту прокаїну гідрохлориду в лікарській формі дою Р до мітки. 1,0 мл розчину поміщають у мірну аптечного виготовлення необхідність розділення колбу місткістю 250 мл доводять об'єм водою Р до прокаїну гідрохлориду та продуктів його гідролізу мітки. відсутня. Відразу після виготовлення вимірюють оптичЗавдання корисної моделі полягає у створенні ну густину випробуваного розчину та розчину РСЗ простого способу кількісного визначення прокаїну за довжини хвилі 290 нм, специфічної для прокаїну гідрохлориду у лікарських формах аптечного пригідрохлориду, компенсаційний розчин - вода Р. У готування, який завдяки виключенню процедури вимірювальну кювету наливають випробуваний відділення прокаїну гідрохлориду від домішок та розчин і визначають його оптичну густину проти визначенню оптимальної для прокаїну гідрохлорикомпенсаційного розчину. Потім кювету виймають, ду концентрації розведень при сукупності заявлевидаляють її вміст, знову наливають випробуваних ознак дозволяє забезпечити необхідну точний розчин і знову визначають оптичну густину. ність та відтворюваність результатів аналізу при Операцію повторюють, одержуючи не менше здійсненні контролю якості зазначених лікарських трьох значень оптичної густини для випробуваного форм. розчину. У такий самий спосіб отримують не менПоставлене завдання вирішується таким чише трьох значень оптичної густини для розчину ном, що у способі спектрофотометричного визнаРСЗ. Вимірювання проводять за однакових умов з чення концентрації прокаїну гідрохлориду у лікармінімальним інтервалом у часі. Для розрахунків ських формах аптечного приготування, що використовують середні значення одержаних опвключає приготування розчинів випробуваного тичних густин випробуваного розчину і розчину зразку і зразку порівняння з подальшим вимірюРСЗ. Розрахунок концентрації C x прокаїну гідрохванням їх оптичних густин за довжини хвилі 290 нм лориду у випробуваному зразку проводять за віта розрахунком концентрації прокаїну гідрохлориAi Co b 100 ду у випробуваному зразку, корисною моделлю домою формулою: Cx , A st передбачено, що розчини одержують шляхом приготування не більш двох розведень водою Р до де A i - оптична густина випробуваного розчиконцентрації 1x10-5 г/мл. ну; У відповідності з заявленим способом одерA st - оптична густина розчину РС3; жання розведень при приготуванні розчинів випробуваного зразку і зразку порівняння здійснюють C o - концентрація розчину РС3, (г/мл); з використанням води Р - води, вільної від вуглецю b - розведення, (мл); диоксиду, що відповідає вимогам ДФУ [7] та спри- аліквота лікарської форми, (мл). яє підвищенню точності способу. При виконанні аналізу в умовах аптеки або Досліднім шляхом було визначено, що максилабораторії з контролю якості лікарських засобів мально припустима кількість розведень при приговажливі такі аспекти аналітичного способу, як мотуванні розчинів має дорівнювати двом. При збіжливість прийнятного відтворення в умовах іншої льшенні числа розведень суттєво знижується лабораторії чи аптеки, економічні витрати на проточність і достовірність результатів аналізу. ведення даного аналізу. Авторами було визначено оптимальну концен-5 Згідно з вимогами ДФУ стосовно валідації трацію розведень 1x10 г/мл, специфічну для проаналітичних методик і випробувань [7] було підткаїну гідрохлориду, що обумовлює підвищення верджено відтворюваність і точність заявленого точності та відтворюваність заявленого способу в способу в умовах різних лабораторій з контролю умовах різних аптечних закладів та аналітичних якості лікарських засобів і аптек. Для кожної зі сталабораторій. ндартних концентрацій прокаїну гідрохлориду було Заявлений спосіб здійснюється наступним чипроведено вивчення метрологічних характеристик ном. До випробуваного зразку, взятого з приготозаявленого способу кількісного визначення: діапаваної в аптечних умовах лікарської форми прокаїзон застосування, специфічність, лінійність, прену гідрохлориду, поміщеного у мірну колбу цизійність на рівні внутрішньо лабораторної точдодають воду Р, доводять об'єм до потрібної мітності, а також відтворюваність в умовах різних ки. Одержують перше розведення (розведення А). закладів. Отриманні валідаційні характеристики Аналогічним чином одержують при необхідності узгоджувалися з критеріями відповідності згідно до друге розведення (розведення В). Кількість додавимог ДФУ. ної води Р та одержані об'єми розведень мають 5 51177 6 Корисна модель ілюструється прикладами. стю 100 мл й додають 70 мл води Р, перемішують Приклад 1 до повного розчинення прокаїну гідрохлориду, Приготування розчинів випробуваних зразків доводять об'єм водою Р до мітки. 1,0 мл розчину лікарських форм аптечного приготування з різним поміщають у мірну колбу місткістю 250 мл дововмістом прокаїну гідрохлориду: 0,25 %, 0,5 %, дять об'єм водою Р до мітки. 1,0%, 2,0 % здійснюють наступним чином. Відразу після виготовлення вимірюють оптич1) 1,0 мл 0,25 % розчину прокаїну гідрохлорину густину аналітичного та робочого стандартного ду поміщають у мірну колбу місткістю 250 мл й розчинів за довжини хвилі 290 нм, компенсаційний доводять об'єм водою Р до мітки. розчин - вода Р. Вимірювання оптичної густини 2) 5,0 мл 0,5 % розчину прокаїну гідрохлориду отриманих розчинів проводять тричі з вийманням поміщають у мірну колбу місткістю 100 мл й довокювети з використанням кювети завдовжки 1 см дять об'єм водою Р до мітки (розведення А). 4,0 при температурі (20±1) °С за однакових умов з мл розведення А поміщають у мірну колбу місткісмінімальним інтервалом у часі. Розрахунок концетю 100 мл й доводять об'єм водою Р до мітки (рознтрації C x прокаїну гідрохлориду для кожного з ведення В). наведених варіантів проводять за відомою фор3) 1,0 мл 1 % розчину прокаїну гідрохлориду Ai Co b 100 поміщають у мірну колбу місткістю 100 мл й довомулою: Cx , A st дять об'єм водою Р до мітки (розведення А). 10,0 мл розведення А поміщають у мірну колбу місткісде A i ; - оптична густина випробуваного розтю 100 мл й доводять об'єм водою Р до мітки (розчину; ведення В). A st - оптична густина розчину РСЗ; 4) 1,0 мл 2 % розчину прокаїну гідрохлориду поміщають у мірну колбу місткістю 100 мл й доводять об'єм водою Р до мітки (розведення А). 5,0 мл розведення А поміщають у мірну колбу місткістю 100 мл й доводять об'єм водою Р до мітки (розведення В). В усіх варіантах згідно з заявленим способом досягається концентрація розведень 1х10-5г/мл. Розчин робочого стандартного зразку готують наступним чином: 0,25 г (точна наважка) прокаїну гідрохлориду РСЗ поміщають у мірну колбу місткі C o - концентрація розчину РСЗ, (г/мл); b - розведення, (мл); - аліквота лікарської форми, (мл). Заявлений спосіб було здійснено в умовах двох лабораторій з контролю якості лікарських засобів (лаб. 1, лаб. 2) для 0,25 %, 0,5 %, 1,0 %, 2,0 % розчинів прокаїну гідрохлориду. Дані експериментів наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Варіанти досліду (розчин прокаїну гідрохлориду) 0,25 % 0,5 % 1,0 % 2,0 % Введено у % компенсаційного розчину лаб.1 лаб.2 100,00 100,00 100,03 100,03 99,97 99,97 100,00 100,00 Знайдено у % до введеного лаб.1 лаб.2 99,91 99,59 99,94 99,31 100,26 100,05 100,19 99,82 Дані таблиці 1 свідчать про достовірність одержаних результатів з визначення концентрації прокаїну гідрохлориду за заявленим способом. Приклад 2. У відповідності з ДФУ було здійснено валідацію заявленого способу - як експериментальний доказ того, що він придатний для розв'язання поставлених завдань. Основними валідаційними характеристиками заявленого способу як методики кількісного визначення є діапазон застосування, специфічність, лінійність, робасність, правильність, прецизійність на рівні внутрішноьлабораторної точності, а також відтворюваність в умовах різних лабораторій. Саме ці показники свідчать про відтворюваність методики у запропонованих умовах та дозволяють оцінити як вона працює в різних профільних організаціях. У відповідності до вимог ДФУ [7] ці характеристики повинні визначатись з використанням наступних модельних зразків: 1. Лінійність - не менше 5 концентрацій, які охоплюють весь діапазон аналітичної методики (80-120%). Систематична погрішність лаб.1 лаб.2 0,09 0,41 0,06 0,69 0,26 0,05 0,19 0,18 Відносний довірчий інтервал лаб.1 лаб.2 0,99 0,70 1,49 1,32 1,30 1,41 11,1 1,08 2. Правильність - не менше 9 визначень для трьох різних концентрацій, які охоплюють весь діапазон методики. 3. Точність. Для збіжності - не менше 9 визначень, які охоплюють весь діапазон застосування методики (три концентрації/три повтори), або не менше 6 визначень для зразків з близьким до номінального вмістом речовини, яка аналізується . Ці всі показники вивчались нами одночасно для п'яти різних, рівновіддалених концентрацій, які охоплюють весь діапазон застосування, тобто п'ять концентрацій і три паралельних розведення для кожної концентрації. Згідно вмісту прокаїну гідрохлориду у лікарській формі та, враховуючи вимоги АНД [8], був вибраний діапазон застосування заявленого способу від 80 до 120 %. Для оцінки метрологічних характеристик способу були попередньо розраховані критерії прийнятності методики аналізу для кожного з розчинів [9] (Табл. 2): 7 51177 8 Таблиця 2 Критерії прийнятності метрологічних характеристик заявленого способу концентрація випробуваного розчину Допуски за АНД максимально допустима повна невизначеність методики max As максимальна систематична похибка - max критичне значення залишкового стандартного відхилення –RSDo% індекс кореляції - Rc критичне практично незначуще значення вільного члену - а внесок плацебо в сумарне фонове поглинання - exc При вивченні робасності методу спектрофотометричного визначення найважливішими характеристиками є стійкість в часі (у нашому випадку 60 Величини критичних значень в % 0,25 0,5 1,0 2,0 ±8 ±7 ±6 ±5 2,56 2,24 1,92 1,60 0,82 1,4456 0,72 1,2649 0,61 1,0842 0,51 0,9035 0,9951 4,10 0,26 0,9963 3,58 0,23 0,9973 3,07 0,20 0,9981 2,56 0,17 хв.) розчину, що аналізується і розчину порівняння та вплив pH. Отримані результати робасності наведені у таблиці 3. Таблиця 3 Результати вивчення робасності заявленого способу концентрація випробуваного розчину (%) довірчий інтервал t стабільності аналітичного розчину (%) 0,25 0,5 1,0 2,0 ±0,15 ±0,58 ±0,49 ±0,51 Вивчення характеру залежності величини оптичної густини від концентрації проводили за стандартизованою процедурою валідації [9] відповідно до вимог ДФУ, використовуючи 5 вихідних розчинів з точними наважками концентрацій: 80 %, 90 %, 100 %, 110 %, 120 %, з подальшим приготуванням на основі кожного по три паралельних розведення модельних розчинів для аналізу . довірчий інтервал pH впливу коливан ня pH на поглинання оптичної густини (%) ±0,29 ±0,68 ±0,57 ±0,48 критичне значення mах (%) ±0,82 ±0,72 ±0,61 ±0,51 Отримані результати були статистично оброблені методом найменших квадратів згідно з вимогами ДФУ [7]. Вимоги до параметрів лінійної залежності в нашому випадку виконуються на всьому діапазоні концентрацій, який вивчався. Результати вивчення статистичних показників метрологічних характеристик лінійності для випробуваних розчинів 0,25; 0,5; 1,0 та 2,0 % наведені в таблиці 4. Таблиця 4 Результати вивчення лінійності заявленого способу Метрологічні характеристики концентрація випробуваного розчину кутовий коефіцієнт лінійної залежності b Sb вільний член лінійної залежності а Sa критичне значення для вільного члена лінійної залежності а залишкове стандартне відхилення Srest= критичне значення залишкового стандартного відхилення RSDo коефіцієнт кореляції методики r критерій лінійного коефіцієнту кореляції Rc 0,25 1,0128 0,0058 1,65 0,5905 4,10 значення у % 0,5 1,0 1,0019 0,9827 0,0125 0,0125 0,86 1,95 1,2663 1,2579 3,58 3,07 2,0 0,9979 0,0115 0,03 1,1594 2,56 0,3202 1,4456 0,6856 1,2649 0,6832 1,0842 0,6284 0,9035 0,9998 0,9951 0,9990 0,9963 0,9990 0,9973 0,9991 0,9981 9 51177 10 Отримані метрологічної оцінки правильності і лабораторії з контролю якості лікарських засобів. прецизійності (на рівні збіжності та відтворюваносБуло проведено вимірювання оптичної густини ті) методикинаведено в таблиці 5. Відтворюварозчинів однієї аналітичної серії на різному обладність методики досліджували в умовах двох різних нанні, в різні дні, різними аналітиками. Таблиця 5 Результати вивчення правильності та прецизійності заявленого способу Метрологічні характеристики концентрація випробуваного розчину середнє Z % 0,25 99,92 99,75 значення у % 0,5 1,0 99,94 100,26 99,62 100,16 0,56 0,84 0,74 0,63 2,56 2,24 1,92 1,60 0,08 0,25 0,06 0,38 0,26 0,16 0,19 0,65 0,82 критерій невизначеності систематичної погрішності відтворюваність 0,51 об'єднане відносне стандартне відхилення RSDint ra 0,72 0,61 0,51 0,87 0,78 0,01 критичне значення для прецизійності результатів 2,24 1,92 1,60 об'єднане середнє Zint ra 2,0 100,19 100,01 збіжність відносне стандартне відхилення, S z % критичне значення для збіжності результатів As % правильність систематична погрішність % міжлабораторна систематична погрішність z Оцінку отриманих метрологічних характеристик методики для кожного з випробуваних розчинів проводили шляхом порівняння з максимально припустимими значеннями відповідно до припустимих допусків вмісту за АНД. Отримані результати свідчать, що метрологічні характеристики заявленого способу для розчинів прокаїну гідрохлориду 0,25; 0,5; 1,0 та 2,0 % не перевищують встановлених критичних значень. Таким чином заявлено простий, не трудомісткий, експресний, точний та достовірний спосіб спектрофотометричного визначення концентрації прокаїну гідрохлориду у лікарських формах аптечного приготування, який є економічно доцільним та дозволяє контролювати якість виготовлених в умовах аптеки розчинів прокаїну гідрохлориду й може бути коректно відтворений в умовах іншій лабораторії з контролю якості лікарських засобів чи аптеці. Джерела інформації 1. Литвин А.А., Попов Д.М., Чернова СВ. Сравнительная оценка некоторых физико-химических методов анализа при установлении стабильности растворов новокаина.//Фармация. - 1981. -т.30, №3. -С.75-76. 2. Гайдукевич О.М., Мадіха Б. Сидом, Безуглий В.Д. Фотометричне визначення стрептоциду, анестезину та новокаїну в лікарських формах. //Фармацевтич. журн. - 1078. - №1. - С. 63-67. 3. Use of p-dimethylaminobebzalhyde as a colored reagent for determination of procaine hydrochloride by spectrophotometry /Lian Dong Liu, As 2,56 Yuan Liu, Huai You Wang, Yue Sun, Li Ma and Bo Tang //Talanta. - 2000. - Vol.52. - -№ 6. -P. 991-999. 4. Spectrophotometric determination of procaine hydrochloride in pharmaceutical products using l,2naphthoquinone-4-sulfonic acid as the chromogenic reagent /Li Xiao Xu, Yun Xiu Shen, Huai You Wang, Ji Gang Jiang and Yan Xiao //Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. 2003. - Vol.59. - -№ 13. - P. 3103-3110. 5. Xu-Wei Chen, Xin Song and Jian-Hua Wang A sequential injection fluorometric procedure for the determination of procaine in human blood and pharmaceuticals //Journal Analytical and Bioanalytical Chemistry.- 2006. - Vol.385. -№ 4. - P. 737-741. 6. Симон И.С., Шостенко Ю.В. Количественное определение новокаина в присутствии продуктов его гидролиза. //Аптечное дело. - 1964. - №6. С.44-45. (С.43) 7. Державна Фармакопея України /Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр». - 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2001. С.438-439; Доповнення 2. - Харків: Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр». - 2008. - С.85-99. 8. Наказ МОЗ України „Про затвердження Правил виробництва (виготовлення) лікарських засобів в умовах аптеки" від 15.12.2004 р. №626. 9. Евтифеева О.А., Георгиянц В.А. Стандартизованная процедура валидации методик количественного определения эктемпоральных лекарственных средств в условиях аптек и лабораторий по контролю качества//Фармаком. -2007.-№ 1.С.69-81. 11 Комп’ютерна верстка М. Мацело 51177 Підписне 12 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601