Спосіб діагностики грипу

Реферат: Спосіб діагностики грипу включає лабораторне дослідження лейкоцитів периферійної крові пацієнта. 20 мкл нативної крові на предметному склі змішують із аналогічним об'ємом розчину флуорохрому акридину оранжевого в розведенні 1:10000 на ізотонічному розчині натрію хлориду. Після інкубації упродовж 45 хв. досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопу і визначають відсоткове співвідношення лейкоцитів із поліхромним світінням ядер, а саме зеленим, жовто-оранжевим і червоним. Висновок про наявність вірусного зараження роблять за кількісним критерієм реверсного зсуву спектра люмінесценції індукованого вірусом грипу токсичного ураження лейкоцитів Vls  , який знаходять із формули: Vls  kR  3 g  2  yo  1  r  1 , (1). UA 69503 U (12) UA 69503 U UA 69503 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до медицини, зокрема інфекційних хвороб, вірусології та епідеміології, і може бути використана в широкій медичній практиці як доступна інформативна проба для експрес-діагностики захворювання на грип в епідеміологічно-небезпечний період. Відомий спосіб діагностики грипу, що включає отримання периферійної крові пацієнта з наступним лабораторним дослідженням в ній лейкоцитів [1]. За відомим способом визначають вміст лейкоцитів у периферійній крові пацієнта з підозрою на грип, і за показником лейкоцитозу чи лейкопенії у зіставленні з іншими діагностичними показниками і клінічними проявами роблять висновок про наявність або відсутність захворювання на грип, а також фазу його перебігу. Недоліком відомого способу є недостатня інформативність, що випливає з обмеженої діагностичної цінності показника вмісту лейкоцитів у периферійній крові при вірусній інфекції, спричиненій вірусом грипу. Це пояснюється відомими коливаннями показника, що є відображенням фазності патологічного процесу, спричиненого вірусним фактором. До того ж, діагностичний тест на вміст лейкоцитів у периферійній крові полишений специфічності, що також вказує на обмежений характер його діагностичної цінності при грипі. В основу корисної моделі поставлено задачу вдосконалити відомий спосіб, у якому шляхом зміни технології постановки діагностичної проби, спрямованої на виявлення глибинних змін у клітинних (лейкоцитарних) структурах на рівні ініційованих вірусним цитопатичним впливом біоенергетичних процесів, досягають підвищення інформативності діагностичного способу. При вирішенні поставленої задачі було взято до уваги відомі механізми взаємодії вірусів із лейкоцитами як імунокомпетентними клітинами, причому ці механізми здійснюються за закономірностями фізики і хімії поверхневих явищ. У результаті вірусного цитопатичного впливу детермінантні групи глікокаліксу лейкоцитів блокуються макромолекулярними структурами вірусів, а відтак змінюють характер взаємодії із флуорохромом акридином оранжевим. За цих умов молекули акридину оранжевого із мономерної форми, яка забезпечує характерне для ДНК неуражених лейкоцитів яскраво-зелене світіння, вимушено трансформуються у димери [2,3]. Останні в силу притаманної їм властивості висвічувати червоним за умов заблокованості детермінант на поверхні мембран лейкоцитів і кон'югації з ураженою вірусами ДНК, викликають тотальний реверс люмінесценції ядерних структур лейкоцитів крові в мікропрепараті: від переважно короткохвильового зеленого (у здорових) - у бік довгохвильового червоного світіння, що набуває ознак індукованого вірусом токсичного ураження лейкоцитів. Виходячи з наведених міркувань, у відомому способі діагностики грипу, що включає лабораторне дослідження лейкоцитів периферійної крові пацієнта, відповідно до корисної моделі, 20 мкл нативної крові на предметному склі змішують із аналогічним об'ємом розчину флуорохрому акридину оранжевого в розведенні 1:10000 на ізотонічному розчині натрію хлориду, а після інкубації упродовж 45 хв. досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопу і визначають відсоткове співвідношення лейкоцитів із поліхромним світінням ядер, а саме зеленим, жовто-оранжевим і червоним, а висновок роблять за кількісним критерієм реверсного зсуву спектра люмінесценції індукованого вірусом грипу токсичного ураження лейкоцитів Vls  , який знаходять із формули: Vls  kR  3 g  2  yo  1  r  1 , (1) де g - вміст у мікропрепараті клітин, ядра яких висвічують зеленим, %; уо - вміст у мікропрепараті клітин, ядра яких висвічують жовто-оранжевим, %; r - вміст у мікропрепараті клітин, ядра яких висвічують червоним, %; kR - коефіцієнт спектрального реверсу зі значенням 1 або -1, залежно від встановленого порогового значення показника r. Фіг. 1. Індукований грипозною інфекцією зсув спектра вторинної люмінесценції ядер лейкоцитів у бік із відносно більшою довжиною хвилі. ЛЮМАМ Р 8 М3. Фіг. 2. Динаміка змін показника зсуву спектра люмінесценції лейкоцитів хворої на грип людини. Спосіб здійснюють наступним чином. На предметне скло наносять 20 мкл нативної крові і змішують із аналогічним об'ємом розчину флуорохрому акридину оранжевого в розведенні 1:10000 на ізотонічному розчині натрію хлориду, а після інкубації упродовж 45 хв. досліджують у полі зору люмінесцентного мікроскопу і визначають відсоткове співвідношення лейкоцитів із поліхромним світінням ядер, а саме зеленим, жовто-оранжевим і червоним, а висновок про наявність вірусного зараження роблять за кількісним критерієм реверсного зсуву спектра люмінесценції індукованого вірусом грипу токсичного ураження лейкоцитів Vls  , який знаходять із формули: 1 UA 69503 U Vls  kR  3 g  2  yo  1  r  1 , 5 (1) де g - вміст у мікропрепараті клітин, ядра яких висвічують зеленим, %; уо - вміст у мікропрепараті клітин, ядра яких висвічують жовто-оранжевим, %; r - вміст у мікропрепараті клітин, ядра яких висвічують червоним, %; kR - коефіцієнт спектрального реверсу зі значенням 1 або -1, залежно від встановленого порогового значення показника r. Далі за відсотковим показником реверсного зсуву спектра люмінесценції лейкоцитів Vls  відповідно до критеріальних меж (табл. 1) роблять висновок про наявність у пацієнта захворювання на вірусний грип. 10 Таблиця 1 Кількісні критерії реверсного зсуву спектра люмінесценції уражених вірусом грипу лейкоцитів Межі фізіологічної норми і < 12 15 20 Критеріальні межі показника Vls -(10÷14) легкий 30 35 -(31÷40) високий