Живильне середовище для виділення збудника туберкульозу апм-вінтуб

Реферат: Спосіб виділення збудника туберкульозу включає приготування живильного середовища, підготовку патологічного матеріалу, висів патологічного матеріалу на живильне середовище з наступним термостатуванням. Живильне середовище для виділення збудника туберкульозу містить сухий ферментативний пептон, агар-агар, воду. Живильне середовище додатково містить суху адаптовану білково-вуглеводну суміш із залізом та магнієм - Mais при такому співвідношенні, мас. %: агар-агар 1-2 сухий ферментативний пептон 8-12 Mais 1-3 вода дистильована решта, з попередньою обробкою антисептиком дослідної суспензії, яку після інкубування при температурі 36±1 °C протягом 22-24 годин вносять на живильне середовище, що дає змогу знищити спорові форми супутніх мікроорганізмів, не впливаючи на життєздатність мікобактерій туберкульозу. UA 93558 U (54) ЖИВИЛЬНЕ СЕРЕДОВИЩЕ ДЛЯ ВИДІЛЕННЯ ЗБУДНИКА ТУБЕРКУЛЬОЗУ АПМ-ВІНТУБ UA 93558 U UA 93558 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель стосується медичної та ветеринарної мікробіології і може бути використана в науково-дослідних і виробничих лабораторіях медичного та ветеринарного профілю. У медичній та ветеринарній мікробіології відомі способи виділення збудника туберкульозу, живильні середовища та стимулятори росту для виділення збудника туберкульозу. Найбільш близьким до заявленого способу виділення збудника туберкульозу на живильному середовищі є спосіб, який передбачає приготування середовища, підготовку патологічного матеріалу, висів патологічного матеріалу на живильне середовище з наступним термостатуванням [1]. Завдяки такому сучасному способу через достатньо короткий термін після термостатування визначається ріст всіх культур, але він може бути вдосконалений як за терміном визначення росту культур, так й за зменшенням матеріальних витрат на його здійснення. Відоме живильне середовище для виділення збудника туберкульозу, яке містить поживні білкову та поліцукридну складові, хімічні реагенти, розчинник [2]. Але воно не містить достатнього набору інгредієнтів для прискорення виділення збудника. Найбільш близьким до заявленого живильного середовища є живильне середовище для виділення збудника туберкульозу, яке містить сухий ферментативний пептон, агар-агар, воду [1]. Але воно також не містить достатнього набору інгредієнтів для прискорення виділення збудника. Найбільш близьким до заявленого є відомий стимулятор росту, який містить хімічні реактиви (сполуки), до складу яких входять натрій, кисень, водень, вуглець [3]. Такий стимулятор також дозволяє скоротити час росту мікобактерій туберкульозу, але допускає ріст супутньої мікрофлори. Задачею заявленої корисної моделі є створення способу виділення збудника туберкульозу, в якому за рахунок особливих операцій, застосування нового реагенту було б можливим скоротити тривалість інкубування матеріалу до 24 годин, не допускати ріст супутньої мікрофлори та значно прискорити видачу аналізу (у 30-90 разів) при бактеріологічній діагностиці туберкульозу. Задачею заявленої корисної моделі є також створення живильного середовища для виділення збудника туберкульозу, в якому за рахунок нового складу компонентів, їх кількісного співвідношення було б можливим скоротити тривалість інкубування матеріалу до 24 годин, а час діагностики туберкульозу бактеріологічним способом зменшити у 30-90 раз. Задачею заявленої корисної моделі є також створення антисептика, який за рахунок нового складу дозволив би не допускати ріст супутньої мікрофлори і при цьому не бути інгібітором росту мікобактерій туберкульозу на поживному середовищі. Поставлена задача досягається наступним чином. Відповідно до заявленої корисної моделі у способі виділення збудника туберкульозу, що включає приготування живильного середовища, підготовку патологічного матеріалу, висів патологічного матеріалу на живильне середовище з наступним термостатуванням, згідно з корисною моделлю, патологічний матеріал попередньо обробляють антисептиком (0,05 % розчин хлоргексидину) з подальшим інкубуванням 24 години при температурі 36±1 °C з метою знищення (деконтамінації) мікроорганізмів в посівній суспензії, яку вносять на живильне середовище. Причому масове співвідношення антисептика та патологічного матеріалу складає 1:1. Відповідно до заявленої корисної моделі живильне середовище для виділення збудника туберкульозу, що містить сухий ферментативний пептон, агар-агар, воду, згідно з корисною моделлю, додатково містить суху адаптовану білково-вуглеводну суміш для мікобактерій із залізом та магнієм - Mais при такому співвідношенні, мас. %: агар-агар 1-2, сухий ферментативний пептон 8-12, Mais 1-3, вода решта. Відповідно до заявленої корисної моделі антисептик містить реактив, який відрізняється тим, що в 1 мл препарату у формі 0,05 % розчину хлоргексидину біглюконату знаходиться: хлоргексидину біглюконату - 0,5 мг; Сукупність усіх заявлених ознак, які об'єднані єдиним творчим задумом, дозволяє одержати технічний результат, а саме скоротити тривалість інкубування матеріалу до 24 годин, підвищити чутливість методу, скоротити бактеріологічні дослідження у 30-90 разів. За рахунок нових ознак у способі виділення збудника туберкульозу: попередньої обробки підготовленого патматеріалу антисептиком та нового складу живильного середовища для виділення збудника туберкульозу створюється синергетичний ефект, який обумовлює скорочення тривалості інкубування матеріалу з одночасним підвищенням чутливості методу, і як результат - значне скорочення тривалості та обсягу бактеріологічних досліджень. 1 UA 93558 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Введення до складу середовища Mais активізує ріст мікобактерій, збагачує його магнієм та залізом, яких недостатньо в ферментативному пептоні. Живильне середовище призначене для ефективного культивування мікобактерій туберкульозу, їх прискореного виявлення в інфікованому матеріалі (кров, мокротиння, сеча та інші). Ефективність запропонованого живильного середовища полягає у його специфічності, прискореному росту збудників туберкульозу в первинних посівах матеріалу. Одночасно з цим збільшується вихід - "урожайність" мікобактерій туберкульозу на живильному середовищі, що забезпечує більш високу точність діагностики туберкульозу. В результаті досліджень встановлено, що на середовищі, що використане як прототип, ріст мікобактерій з'явився через 20-60 діб всіх культур, які були узяті в дослід. На запропонованому середовищі через 24 години після термостатування відмічався ріст усіх культур. Через 72 години спостерігався газонний ріст колоній мікобактерій. Якісний та кількісний вміст усіх компонентів в заявлених складах, сукупність операцій способу та його режими в заявлених межах є необхідними, оптимальними для проявлення їх позитивних властивостей та досягнення технічного результату. Запропоновані вирішення дозволяють при високому рівні чутливості скоротити бактеріологічні дослідження у 30-90 разів. Спосіб виділення збудника туберкульозу на живильному середовищі відповідно до заявленого вирішення здійснюють у наступній послідовності. Для виділення збудника туберкульозу готують живильне середовище, здійснюють підготовку патологічного матеріалу для його подальшого висіву на живильне середовище, при цьому посівний матеріал обробляють за загальноприйнятою методикою і, крім того, його обробляють запропонованим антисептиком з подальшим висівом на живильне середовище. За контрольне беруть живильне середовище за прототипом. Контролем служили тест-культури мікроорганізмів: Mycobacterium tuberculosis H37 RV збудник туберкульозу людей, Mycobacterium tuberculosis - клінічний штам, резистентний до всіх протитуберкульозних препаратів, Mycobacterium tuberculosis - клінічний штам, чутливий до всіх протитуберкульозних препаратів, Mycobacterium bovis - збудник туберкульозу великої рогатої худоби. Як супутню мікрофлору використовували тест-культури Е. соli (К 12), В. subtilis, S. epidermitidis (1225). Підготовлений контрольний посівний матеріал перед висівом обробляли антисептиком з подальшим інкубуванням при температурі 36±1 °C протягом 22-24 годин і висівали на поживне середовище. Потім патологічний матеріал (посівний матеріал - мокротиння, кров, спинномозкова рідина, частини тканин та інше), так само як і тест-культури мікроорганізмів, перед висівом обробляють антисептиком. До підготовленого згідно із загальноприйнятим методом патологічного матеріалу додають антисептик у масовому співвідношенні 1:1, після чого термостатують протягом 24 годин при температурі 36±1 °C і висівають отриману посівну суспензію в чашки Петрі на живильне середовище у дозі 1 мл. Засіяні чашки Петрі не перевертають і розташовують в термостаті кришками догори, термостатують при температурі 36±1 °C протягом 1-5 діб. Поява росту колоній на 1-5 добу вказує на позитивний результат, а відсутність росту мікобактерій після 5 діб вважається негативним результатом, що підтверджує відсутність захворювання. Відсутність росту тест-культури Е. соli, В. subtilis, S. epidermitidis на середовищі протягом 10 діб вказує на бактерицидну дію антисептика і при цьому допускається хороший ріст збудника туберкульозу. Практичне здійснення заявлених вирішень ілюструється наступними прикладами. Приклад 1 Досліди проводили при мінімальних концентраціях всіх компонентів живильного середовища, мас. %: агар-агар 1,0; сухий ферментативний пептон 8,0; Mais 1,0; вода решта. Антисептик був вибраний в формі 0,05 % розчину хлоргексидину біглюконату. Живильне середовище готували розмішуючи компоненти (які попередньо були перемелені в лабораторному млину протягом 10-55 хвилин) в 100 мл очищеної води і кип'ятили 3-5 хвилин до повного розплавлення агару, фільтрували через ватно-марлевий фільтр, розливали у відповідний посуд, стерилізували при температурі 120±1 °C протягом 15 хвилин в автоклаві і після охолодження при кімнатній температурі до 40-50 °C живильне середовище розливали в асептичних умовах в стерильні чашки Петрі по 20 мл. Через 7-10 хвилин, як правило, проходить застигання середовища, на яке проводять посів. Готове живильне середовище має світлокоричневе забарвлення з рН 7,2±0,2. 2 UA 93558 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Підготовлений антисептик також автоклавували при температурі 120±1 °C протягом 15 хвилин в автоклаві. Підготовленим стерильним антисептиком обробляли тест-культури мікроорганізмів та патологічний матеріал у співвідношенні 1:1, після чого термостатували 24 години при температурі 36±1 °C і висівали отриману посівну суспензію в чашки Петрі на живильне середовище у дозі 1 мл. Засіяні чашки не перевертали і термостатували при температурі 36±1 °C протягом 5 діб. Облік результатів проводили після 24 годин інкубування в термостаті, а в подальшому щоденно до закінчення строку. В результаті проведених досліджень встановлено, що ріст колоній через 24 години спостерігався на чашках з тест-культурами Mycobacterium tuberculosis H37 RV - збуднику туберкульозу людей та Mycobacterium bovis - збуднику туберкульозу великої рогатої худоби і дослідженим патологічним матеріалом. Слід визначити, що на третю добу з'явився на вищезазначених чашках газонний ріст, характерний для збудника туберкульозу. На чашках Петрі, де висівали Mycobacterium tuberculosis - клінічний штам, резистентний до всіх протитуберкульозних препаратів, спостерігався також через 24 години пригнічений ріст колоній, після 72 годин спостерігався газонний ріст. Тоді як на чашках Петрі, де висівали Mycobacterium tuberculosis - клінічний штам, чутливий до всіх протитуберкульозних препаратів, спостерігався газонний ріст колоній як через 24 години, так й після 5 діб. Результати досліджень із патологічним матеріалом були аналогічними вибраним тест-культурам збудника туберкульозу, що підтверджує якість вибраних компонентів. Результати досліджень росту тест-культури Е. coli, В. subtilis, S. epidermitidis на середовищі були відсутні протягом 10 діб, що вказує на бактерицидну дію антисептика і при цьому допускається хороший ріст збудника туберкульозу на запропонованому середовищі. Приклад 2 Методика досліджень проводилась по схемі, як в прикладі 1, але кількість компонентів була середньою в межах зазначених інтервалів. Так для живильного середовища ця кількість складала, мас. %: агар-агар 1,5; сухий ферментативний пептон 10,0; Mais 2,0; вода решта. Антисептик був вибраний у формі 0,07 % розчину хлоргексидину біглюконату. Результати досліджень в порівнянні з прикладом 1 суттєвої різниці не мали. Приклад 3 Методика досліджень проводилась по схемі, як в прикладі 1, але кількість компонентів в живильному середовищі та антисептика була максимальною в межах зазначених інтервалів. Так для живильного середовища ця кількість складала, мас. %: агар-агар 2,0; сухий ферментативний пептон 12,0; Mais 3,0; вода решта. Антисептик був вибраний в формі 0,09 % розчину хлоргексидину біглюконату. В результаті досліджень встановлено, що ріст колоній через 24 години був більш інтенсивний, ніж у прикладі 1 на чашках із тест-культурами Mycobacterium tuberculosis H37 RV збуднику туберкульозу людей та Mycobacterium bovis - збуднику туберкульозу великої рогатої худоби і дослідженим патологічним матеріалом. Газонний ріст з'явився на другу добу на чашках Петрі, де висівали Mycobacterium tuberculosis - клінічний штам, резистентний до всіх протитуберкульозних препаратів, спостерігався ріст колоній через 24 години - більш інтенсивний, ніж у прикладі 1. На чашках Петрі, де висівали Mycobacterium tuberculosis клінічний штам, чутливий до всіх протитуберкульозних препаратів, спостерігався газонний ріст колоній як через 24 години, так й після 5 діб; також як і у прикладі 1 дослідами із патологічним матеріалом підтверджена якість вибраних компонентів (відсутність росту супутньої мікрофлори та хороший ріст на запропонованому середовищі збудникатуберкульозу). Запропоноване поживне середовище просте за способом його приготування, зручне при зберігання і транспортуванні. Всі компоненти заявлених складових продаються в Україні, що є досить зручним для виробничих, науково-дослідних лабораторій ветеринарного та медичного профілю. Джерела інформації: 1. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. М.О. Биргера. - 3-е изд., переработанное и дополненное. - М.: Медицина, 1982. - С. 79-80 (прототип для способу виділення збудника туберкульозу, живильного середовища). 2. Патент України № 18613 від 27.07.93, м.кл. С120 1/02, публ. 25.12.97, бюл. № 6. 3. Патент України № 44660 А від 08.10.01, м.кл. C12N 1/02, публ. 15.02.02, бюл. № 2 (прототип для прискореного росту мікобактерій). 3 UA 93558 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб виділення збудника туберкульозу, що включає приготування живильного середовища, підготовку патологічного матеріалу, висів патологічного матеріалу на живильне середовище з наступним термостатуванням, який відрізняється тим, що живильне середовище для виділення збудника туберкульозу містить сухий ферментативний пептон, агар-агар, воду, додатково містить суху адаптовану білково-вуглеводну суміш із залізом та магнієм - Mais при такому співвідношенні, мас. %: агар-агар 1-2 сухий ферментативний пептон 8-12 Mais 1-3 вода дистильована решта, з попередньою обробкою антисептиком дослідної суспензії, яку після інкубування при температурі 36±1 °C протягом 22-24 годин вносять на живильне середовище, що дає змогу знищити спорові форми супутніх мікроорганізмів, не впливаючи на життєздатність мікобактерій туберкульозу. Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4