Спосіб визначення чутливості лейкоцитів крові до антибіотика

МПК А61В10/00 СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ ЧУТЛИВОСТІ ЛЕЙКОЦИТІВ КРОВІ ДО АНТИБІОТИКА Винахід відноситься до галузі медицини та біології і може бути використаний для визначення дії антибіотиків на лейкоцити крові. Відомі способи визначення чутливості лейкоцитів крові до антибіотика грунтуються на виділенні лейкоцитів крові, приготуванні мазків, їх забарвленні та мікроскопії. [1,2]. Недоліком цих способів є митодична складність, тривалість виконання та низька специфічність. Найбільш близьким по технічній суті і прийнятим за прототип є спосіб визначення чутливості лейкоцитів до антибіоти^-^ка, що включає забір крові, приготувл^ння проби та її дослідження без і в присутності антибіотика [ЗЗ. Недоліком прототипу є складність технологічного процесу та низька об'єктивність визначення чутливості лейкоцитів до антибіотика. Завданням винаходу є розробка такого способу визначення чутливості лейкоцитів крові до антибіотика, який би за рахунок використання цільної крові (без виділення клітин) та використання хемілюмінесцентного аналізу спрощував би технологію і підвищував продуктивність способу та об'єктивність одержаних результатів. Поставлене завдання вирішується тим, що в способі визначення чутливості лейкоцитів крові до антибіотика, який включає забір крові, приготовления проби та її дослідження без і в присутності антибіотика, згідно з винаходом, для приготовляння проби використовують цільну кров, пробу досліджують шляхом хемілюмінесценції та при зміні інтенсивності випромінювання з антибіотиком в три або більше разів роблять висновок про чутливість лейкоцитів до цього антибіотика. Використання цільної крові для приготув-ш-яня проби забезпечує спрощення технології, так як не потрібно виділяти лейкоцити крові, а використання хемілюмінесцентного аналізу забезпечує підвищення об'єктивності отриманих результатів в зв'язку з використанням об'єктивних параметрів випромінювання. Приведені в формулі винаходу допустимі вимірювання інтенсивності випромінювання були знайдені при лабораторних дослідженнях 21 проби крові. Результати досліджень приведені в таблиці. СПОСІБ ВИКОНУЮТЬ ТАКИМ ЧИНОМ. В необхідну кількість флаконів з розчином Хенкса і люмінолом додають цільну кров, отриману з пальця або вени. В один із флаконів нічого не додають, в інші - добавляють різні антибіотики. Далі флакони переносять в гістрації люмінометр або спектрометр хемілюмінесценції.Остання, як відомо, для ре викликана сумар ною квантпродукуючою функцією лейкоцитів (переважно нейтрофільних гранулоцитів та моноцитів). Якщо значення хемілюмінесценції флако на з антибіотиком перевищує значення флакона без антибіотика в три рази то роблять висновок, що данний антибіотик стимулює лейкоцити А. крові. І навпаки, коли значення хемілюмінесценції флакона з антибіотиком в три рази меньше контрольного флакона, то цей антибіотик пригнічує активність лейкоцитів. Якщо різниця хемілюмінесцентних' показників не перевищує трикратну величину то, в такому разі, антибіотик не впливає на функцію лейкоцитів крові. Доза антибіотика розраховується згідно з його фармакокінетикою, представленною в інструкції до данного препарату або в фармакологічному довіднику. Таким чином, пікові значення хемілюмінесценції флаконів зрівнюють і по їх різниці визначають вплив антибіотика на функціональну активність лейкоцитів крові. ПРИКЛАД. Забір крові в кількості одного мл виконали з ліктевої вени хворого Б. (проба № 7), див.таблицю. В флакони з розчином Хенкса і люмінолом додали по 0,2 мл цільної крові. В перший із них нічого не додавали(контроль), в другий додали антибіотик золфін, в третій - абактал, в четвертий - ципринол. Вмістиме флаконів перемішали і внесли в гнізда люмінометра. Регістр^-ували хемілюмінесценцію протягом двох годин. Одержані пікові значення флаконів дорівнювали відповідно 3750, 5240, 4820 та 625 імлульсів/хв. Отже, величина хемілюмінесценції флаконів з зольфіном та абакталом не перебільшувала показник контрольного флакону в три рази, тому ці антибіотики не впливали на функціональну активність лейкоцитів крові хворого. Однак, активність хемілюмінесценції флакона з ципринолом більш ніж в три рази була нижчою за активність лейкоцитів контрольного флакону. Таким чином, цей антибіотик пригнічував дію активних радикалів кисню лейкоцитів, які створювали бактеріцидний ефект. Тому для лікування данного хворого використали зольфін та абактал, а не ципринол. Запропонованим способом визначена чутливість лейкоцитів крові до антибіотиків у 21 хворого і здійстнено вибір антибіотика для лікування. Подальшими клінічними дослідженнями встановлено, що у всіх цих хворих не було виявлено післяопераційних гнійних ускладнень, а у 21 хворого, антибіотики для яких підбирались за прототипом, були виявлені гнійні ускладнення у 7 хворих. Таким чином, запропонований спосіб дозволяє спростити технологію, а також підвищити ефективність визначення чутливості лейкоцитів до антибіотика і тим самим підвищити ефективність лікування за рахунок, адекватного вибору антибіотика. Таблиця Хемілюмінес центні показники проб крові без і в присутності антибіотика (п = 21) проби 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 б ез ант ибіотика 453 262 4500 3200 5132 638 3750 2100 519 829 1034 920 863 1125 826 764 3625 4102 813 2392 показники хемілю мінесце нції(імп цяь си/хв) з ант ибіотиком ЗОЛЬфІН аб ак т ал 564 2106 2329 826 5213 413 5240 1967 469 1682 654 260 7326 8543 754 3034 6564 2249 624 2200 0 + 0 0 0 0 0 0 0 0 + + 0 + 0 0 0 0 5203 480 1325 3151 4349 565 4820 1312 230 2455 965 1852 5244 926 634 1621 12445 1633 2653 8271 + + 0 0 0 0 0 0 + 0 + 0 0 0 + 0 + + ципринол 245 863 12406 6534 628 729 625 4031 425 3174 4720 987 529 844 929 252 825 2238 9421 619 0 + 0 0 0 0 0 + + 0 0 0 0 0 + [+] - антибіотик [-] антибіотик [0] антибіотик ДЖЕРЕЛА ІНФОРМАЦІЇ. Примітка: 21 834 788 0 1427 0 1753 стимулює лейкоцити пригнічує лейкоцити не впливає на активність лейкоцитів 1 Маянский Д.Н., Щербакова Э.Г. // Об оценке функций нейтрофилов человека по их реакции на бактерийный стимул. - Антибиотики. 1983. - » 7. - С.521 - 525. 2 Йорданова А.И., Смолкина Т.В,, Никитин А. В. // Влияние фторхино 0 лонов на взаимодействие фагоцитирующих клеток с патогенами, функ ции лимфоцитов и реакции иммунитета. - Антибиотики и химиотерапия. - 1995, Т.40, № 8. - С.50 - 56. 3 Можокина Г.Н., Грачева М.П., Соколова Г.Б. // Влияние ломефлоксацина на функциональную активность клеток фагоцитарной системы. - Антибиотики и химиотерапия. - 1996, Т.41. - С.25 - 28. прототип.