Спосіб одержання лікарського засобу з плацентарних тканин

1 Спосіб одержання лікарського засобу з плацентарних тканин, що включає подрібнення плацентарних тканин, відмивання їх від крові та обробку кисневмісними сполуками хлору, який відрізняється тим, що обробка кисневмісними сполуками хлору являє собою процес окислювально-гідролітичної модифікації, яку проводять хлористою кислотою в присутності добавок у вигляді сполук кобальту чи нікелю 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що окислювально-гідролітичну модифікацію проводять доти, доки не одержують заздалегідь задане збі льшення вмісту кисню в готовому продукті в порівнянні з вихідною сировиною і заздалегідь заданий масовий вміст загального хлору - вільного й органічно зв'язаного, в перерахунку на суху речовину 3 Спосіб за п 2, який відрізняється тим, що вказане заздалегідь задане збільшення масового вмісту кисню знаходиться в межах 1,8 - 2,1 разів, а заздалегідь заданий вміст загального хлору - в межах 8,0 - 20 мас % 4 Спосіб за будь-яким з пп 1-3, який відрізняється тим, що окислювально-гідролітичну модифікацю проводять при співвідношенні за масою тканина/хлориста кислота 1 (0,2-1,5) при температурі 18-45°С 5 Спосіб за будь-яким з пп 1-4, який відрізняється тим, що сполуки кобальту чи нікелю використовують в співвідношенні за масою тканина/сполука 1 (0,005-0,06) 6 Спосіб за п 5, який відрізняється тим, що сполуки кобальту чи нікелю готують шляхом реагування еквівалентних молярних кількостей натрієвої солі амінокислоти (переважно лізину) і хлориду кобальту чи нікелю О (О (О Винахід стосується медицини і медичної промисловості, зокрема одержання лікарських засобів з плацентарних тканин ВІДОМІ способи одержання препаратів на основі продуктів плаценти в окисленому стані Так, за способом, описаним у А С СРСР № 948001, плаценту обробляють хлором, а за способом, описаним у А С СРСР № 1392684, обробка провадиться диоксидом хлору При використанні для цих цілей диоксиду хлору і хлору утворюється високо-реакційна суміш, яка "спалює" усе, що може хлоруватися й окислюватися, і залишаються тільки не розчинні у воді продукти полісахаридної природи (му ко пол і сахариди), що СТІЙКІ до дм диоксиду хлору і хлору Такий технологічний прийом аналогічний процесу відбілювання целюлози диоксидом хлору при одержанні паперу, коли всі органічні сполуки іншої природи "згоряють" і залишається тільки чиста вибілена целюлоза У способі одержання біологічно активних речовин з плаценти за патентом РФ № 2033797, опубл 30 04 95 р, бюл № 12, ЦІЛЬОВІ продукти також являють собою високомолекулярні водонерозчинні продукти (мукополісахариди), які не здатні до проникнення через КЛІТИННІ мембрани Треба зазначити, що основними діючими речовинами, що одержують з плацентарних тканин є поліпептиди, їх можна одержати в результаті гідролізу плацентарних тканин Поліпептиди мають, з одного боку порівняно невелику молекулярну масу, а, з іншого боку, можуть розчинятися у воді, за рахунок чого вони здатні до проникнення через КЛІТИННІ мембрани Крім того, біологічна активність поліпептидів тим більша, чим більший ступінь їхнього окислення Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб за патентом Російської Федерації № со (О ю 56366 2036650, опубл 09 06 95 р , бюл № 16, ВІДПОВІДНО до якого окислювання здрібненої плаценти проводять хлоритом натрію в солянокислому середовищі Однак цей спосіб також забезпечує порівняно невисокий вміст поліпептидів, невисокий ступінь їхнього окислення, постійну зміну складу готового продукту для різних примірників сировини, тому що процес окислювання виявляється некерованим і проходить до майже повного "спалювання" білкової частини тканин за рахунок утворення ССЬ, ЬЬО, НСІ, NH2CI, NHCI2, NCI3 і т д Полісахаридна частина тканин при обробці кисневими сполуками хлору зберігається і випадає в осад ЦІЛЬОВІ продукти за відомими способами являють собою суспензію (дисперсію), тому що за своєю природою є нерозчинними у воді високомолекулярними сполуками (мукополісахаридами) Внаслідок цього терапевтична дія таких препаратів супроводжується побічними ефектами, що важко переносяться (пірогенні реакції до 40 - 41 °С, еозинофілія, гіподинамія, підшкірні інфільтрати, больовий синдром в області введення й ін) У результаті цього терапія такими препаратами зводиться усього до однієї ін'єкції на тиждень 3 цих причин препарат за патентом РФ № 2033797, що одержав назву "амнюцен", виключений з реєстру лікарських засобів у РФ Цільовий продукт за патентом РФ № 2036650, що одержав назву ПДС (плацента денатурована суспендована), знаходить застосування тільки у ветеринарній медицині для лікування і профілактики післяпологових ускладнень у корів і свиноматок В основу цього винаходу поставлена задача удосконалення відомого способу одержання лікарського засобу з плацентарних тканин з тим, щоб шляхом уведення нових реагентів і нових умов його здійснення домогтися підвищеного вмісту поліпептидів, більш високого ступеня окислення їх окислення, стабільності складу готового продукту і його розчинності у воді і тим самим одержати лікарський засіб бюнормалізуючої дії Під бюнормалізуючою дією лікарського засобу розуміється його здатність при застосуванні в медицині з лікувальною чи профілактичною метою усувати причини патологічного стану організму людини і тварин чи запобігати їм і тим самим забезпечити вирішення таких проблем - досягнення позитивного терапевтичного ефекту (повне видужання) чи стійкої ремісії, незалежно від виду і причини патологи, без небажаних побічних ефектів, - скорочення термінів лікування і забезпечення гарантованого поліпшення стану здоров'я і продовження активного способу життя, - запобігання передчасному розвитку захворювань, пов'язаних з роботою в шкідливих умовах праці, стресами, фізичними, термічними та іншими перевантаженнями, за рахунок профілактичного застосування препарату, - вирішення геронтолопчної проблеми Практично усі ВІДОМІ ДО ЦЬОГО часу лікарські засоби відносяться до розряду засобів симптоматичної дії, тобто вони в тому чи іншому ступені усувають окремі симптоми захворювання, такі як підвищена температура, артеріальна гіпертензія, 4 нежить, кашель і ш Найбільш характерно це виявляється при лікуванні хронічних і особливо хронічно запущених патолопй, таких як захворювання опорно-рухової системи (остеоартрози, поліартрити, хвороба Бехтерева), а також різних захворювань, що є наслідком травматичного впливу на плід під час пологів (дитячий церебральний параліч), перенесених травм черепа, переломів КІНЦІВОК І хребта Особливого значення набуває проблема лікування таких захворювань, як інсульти, інфаркти, вогнепальні поранення У той же розряд варто віднести захворювання, зв'язані з імунодефіцитом (хронічні запальні процеси різних органів і тканин, особливо урогенітальні), ОНКОЛОГІЧНІ процеси тощо Застосування відомих лікарських засобів при зазначених вище і багатьох інших патологічних процесах забезпечує в кращому випадку усунення окремих симптомів захворювання, що, як правило, носить тимчасовий характер При цьому відомо, що всі лікарські засоби, що відносяться до класу ксенобютиків, виявляючи терапевтичний ефект, створюють одночасно токсичну дію на ІНШІ системи чи органи Кінцевий баланс такого лікування має нульове чи негативне значення Це пов'язано з тим, що за допомогою відомих лікарських засобів у більшості випадків неможливо усунути причину захворювання - патологічного стану, що є наслідком порушеного з тих чи інших причин метаболізму (обміну речовин і енергії між кліткою і навколишнім середовищем) Не меншого значення набуває питання профілактики таких захворювань, тому що за допомогою відомих лікарських засобів поки неможлива розробка радикальної системи продовження життя людини в активній формі Поставлена у цьому винаході задача вирішується тим, що у відомому способі одержання лікарського засобу з плацентарних тканин, який включає здрібнювання плацентарних тканин, відмивання їх від крові та їх обробляння кисневими сполуками хлору, обробляння кисневими сполуками хлору являє собою окислювально-гідролітичну модифікацію, яку проводять хлористою кислотою в присутності добавок у вигляді сполук кобальту чи нікелю За способом, що заявляється, обробка плаценти здійснюється індивідуальною ХІМІЧНОЮ сполукою - хлористою кислотою в присутності сполук кобальту чи нікелю, що дає можливість запобігти "спалювання" органіки білкової природи, забезпечити "м'який" гідроліз пептидних і пептидГЛІКОЗІДНИХ зв'язків І зберегти біохімічну природу компонентів у цільовому продукті (пептиди й амінокислоти) В результаті створюється водний розчин що містить отримані з плацентарних тканин поліпептиди, амінокислоти, аміносахариди і гексуронові кислоти в окисленій водорозчинній формі Зазначені добавки забезпечують необхідну керованість і селективність процесу окислювально-гідролітичної модифікації за рахунок того, що вони очевидно вступають у реакцію з поліпептидами і запобігають їх подальшому гідролізу Це дає можливість одержувати лікарський засіб з необхідним ступенем окислення інгредієнтів за раху 56366 тканина/сполука кобальту чи нікелю 1 (0,005 + нок утворення звязків вутлець-кисень, азот0,06) кисень, сірка-кисень, а також азот-хлор шляхом У конкретному варіанті здійснення винаходу заміщення атома водню в амідогрупі (пептидний сполуки кобальту і нікелю готують шляхом реагузв'язок) чи у ВІЛЬНІЙ аміногрупі вання еквівалентних молярних кількостей натрієОдержані продукти являють собою отримані вої солі амінокислоти (переважно лізин) і хлориду шляхом окислювально-гідролітичної модифікації кобальту чи нікелю, що сприяє кращому реагуванбюполімерів плаценти водорозчинні попередники ню сполук з поліпептидами макромолекул у більш високому ступені окислення, ніж природні продукти біохімічних реакцій, що Нижче описується приклад реалізації способу протікають в організмі людини ОкислювальноПриклад 1 гідролітична модифікація бюполімерів плаценти Плаценту, заготовлену в родильних будинках, означає не що інше, як переведення їх у метаболіу замороженому вигляді, подрібнювали, відмивали чний стан Ступінь окислення продуктів модифікавід крові, отриману суспензію завантажували у ції бюполімерів плацентарних тканин за киснем, скляний реактор, оснащений мішалкою і змійовиодержана розрахунково-аналітичним шляхом, у 2 ком для нагрівання або охолодження, додавали рази вище, ніж у природних ендорегуляторів, що попередньо приготовлену суміш в еквівалентних утворюються в організмі людини за рахунок окисмолярних кількостях натрієвої солі амінокислоти лювання білків сполучної тканини ферментами (переважно лізину) і хлориду кобальту або нікелю пролшпдроксилази чи лізшпдроксилази і наступноз розрахунку досягнення концентрації в реакційній го гідролізу А з урахуванням утворення зв'язків суміші 0,05 - 0,6г/л (0,005 - 0,03%), потім завантаазот-хлор, ступінь окислення збільшується більш, жували 5% розчин хлористої кислоти при масовоніж у 3 рази Внаслідок цього лікарський засіб, що му співвідношенні тканина/кислота 1 0,1 - 1,5 і визаявляється, має високу бюнормалізуючу дію, або, тримували при заданій температурі до необхідного іншими словами, є ефективним бюнормалізатоступеня окислення Ступінь окислення визначали ром за відсотковим масовим вмістом кисню і хлору в продуктах реакції і порівнювали з цими ж показниПоліфункцюнальність фармакологічної дії ліками у вихідному продукті Вміст за масою кисню в карського засобу, одержаного за способом, що готовому продукті в порівнянні з вихідною сировизаявляється, пояснюється різною природою аміноною повинен бути більше в 1,8 - 2,1 рази Вміст кислот у поліпептидах, КІЛЬКІСТЮ амінокислот, їхзагального хлору - вільного й органічно зв'язаного ньою ПОСЛІДОВНІСТЮ і ступенем окислення Одно- повинен знаходитися в межах 8,0 - 20 мас % у часне вироблення антитіл на усі види біохімічних перерахунку на суху речовину Вміст кисню визнасполук, що утримуються в препараті, практично чали за відомим методом спалювання, а вміст неможливі, тому спосіб, що заявляється, забезпехлору - за відомим методом Шенігера (спалювання чує одержання цільового продукту, що не має анкиснем на платині з наступним титруванням СІтигенних властивостей юна аргентометрично) Відсотковий вміст компоЗа цією ж причиною наявність у готовому пронентів готового продукту визначали спектрофотодукті низькомолекулярних водорозчинних продукметрично за фармакопеєю тів приводить до повного зникнення токсичних властивостей Поліпептидну фракцію у вигляді водного роз1 Подальшим удосконаленням способу згідно чину відокремлювали від осаду, піддавали очиз винаходом є те, що окислювально-гідролітичну щенню шляхом фільтрації, нейтралізували лужним модифікацію проводять, доки не одержують заагентом до рН = 2,5 - 4,5 і переводили в ін'єкційну здалегідь заданого збільшення масового вмісту лікарську форму відомими методами кисню в готовому продукті в порівнянні з вихідною Фармакологічну активність готового продукту сировиною і заздалегідь заданий масовий вміст визначали за методом "НСТ-тест" (за збільшенням загального хлору - вільного й органічно зв'язаного ферментативної активності нейтрофілів крові) у перерахуванні на суху речовину Це дозволяє Висока фармакотерапевтична ефективність керувати реакцією і змінювати в заданих межах препарату, одержаного у способі, що заявляється, склад готового продукту як бюнормалізатора встановлена при випробуваннях на лабораторних тваринах (миші, пацюки, кроУ конкретному варіанті втілення способу залики, собаки), у процесі КЛІНІЧНИХ випробувань на здалегідь задане збільшення відсоткового масоволюдях і в результаті постклінічного застосування го вмісту кисню в готовому продукті одержують в Нижче приводяться результати доклінічного, КЛІНІмежах 1,8 - 2,1, а заздалегідь заданий масовий ЧНОГО і ПОСТКЛІНІЧНОГО застосування препарату, що вміст загального хлору - в межах 8,0 - 20 мас % заявляється Це дозволяє одержати готовий продукт, який містить поліпептиди в КІЛЬКОСТІ 3,5 - 7,0 мас %, аміПриклад 2 нокислоти в КІЛЬКОСТІ 50 - 60 мас %, аміносахариІмунотропна дія ди в КІЛЬКОСТІ 4 - 5 мас % і гексуронові кислоти в Оцінка імунотропної активності препарату, що КІЛЬКОСТІ 8 - 9 мас %, решта - полісахариди і неорзаявляється, визначена за стандартними методиганічні солі ками, рекомендованими Всесвітньою організацією охорони здоров'я (ВООЗ) Специфічна фармакоЕкспериментально було виявлено, що для логічна (імунологічна) активність перевірена в моодержання вищевказаного складу готового продудельних системах, що КІЛЬКІСНО характеризують кту окислювально-гідролітичну модифікацію необдію випробуваного препарату на основні ланки хідно проводити при співвідношенні за масою ткаімунітету Експерименти були поставлені на морнина/хлориста кислота 1 (0,2 - 1,5) при ських свинках, пацюках лінії Вістар, безпородних температурі 18 - 45°С, і співвідношенні за масою мишах і мишах ЛІНІЙ СВА, 357В1 (СВАХС57В1)П Перевірено вплив препарату, що заявляється, на клітинну і гуморальну імунну ВІДПОВІДЬ (фагоцитарна активність, вплив на наслідок генералізованої СИНЄГНІЙНОІ інфекції, на систему комплементу, на кооперацію Т- і В-лімфоцитів, на реакцію "трансплантат проти хазяїна", на реакцію пперчутливості уповільненого типу, на гуморальну ВІДПОВІДЬ) ЯК препарати порівняння були використані ВІДОМІ лікарські засоби, такі як левамізол, Т-актівин, циклофосфамід, нуклеат натрію, амнюцен, пірогенал За результатами випробувань препарат, що заявляється, значно перевершує за активністю вищевказані препарати і тільки у деяких тестах виявляє таку ж активність, як Т-активін Найбільш характерним показником, що характеризує імуно 56366 8 тропну (імуномодулюючу) активність будь-якого лікарського засобу, є оцінка його впливу на реакцію пперчутливості уповільненого типу (ГУТ) У дослідженнях з індукції ГУТ у сублетально опромінених мишей (іонізуюче випромінювання істотне порушує імунологічну компетентність організму, придушуючи прояв ГУТ) препарат, що заявляється, уводили підшкірно 5-кратно в сумарній дозі 4,0 і 6,0мг/кг, починаючи з наступного дня після опромінення Як видно з представленої нижче таблиці, обробка тварин у дозі 4мг/кг підвищує пперчутливість реакції на 30% стосовно опромінених мишей контрольної групи При дозі 6,0мг/кг індекс реакції практично досягає рівня групи неопромшених тварин, що доводить можливість захисту організму при радіаційному впливі Таблиця 1 Вплив препарату, що заявляється, на реакцію ГУТ Група Препарат 1-а контрольна (інтактна) 2-а контрольна (опромінена) 3-я опромінена, із застосуванням Препарат, що заявпрепарату ляється Доза, мг/кг 4,0 6,0 ЗР, % (М ± м) 20,0 ± 2,46 6,1 ±1,21 7,9 ±1,28 17,8 ±2,94 Р