Аніліди заміщених орто-хлорбензойної кислоти, які проявляють протизапальну, анальгетичну, жовчогінну, антиоксидантну та фунгістатичну активність

Реферат: Аніліди заміщених орто-хлорбензойної кислоти проявляють протизапальну, аналгетичну, жовчогінну, антиоксидантну та фунгістагичну активність загальної формули: R 4 R 3 CONH R 2 Cl H3C R 1 NO2 1 , 2 3 4 де: R =3'-No2, R =R =R =Η; (1) 1 4 2 3 R =R =Η, R =R =OCH3 (2). UA 90722 U (12) UA 90722 U UA 90722 U 5 10 15 Корисна модель належить до хіміко-фармацевтичної промисловості, зокрема, до синтезу нових хімічних сполук, які проявляють протизапальну, аналгетичну, жовчогінну, антиоксидантну та фунгістатичну активність. Пошук нових засобів з широким спектром фармакологічної дії є актуальною проблемою сучасної медицини. Як препарати порівняння за хімічною структурою та фармакологічною дією вибрані диклофенак натрію, анальгін, оксафенамід, α-токоферолу ацетат, грізеофульвін [1]. Головним недоліком препаратів порівняння можна віднести, зокрема наявність у тій чи іншій мірі негативної побічної дії: диклофенаку натрію - ерозійно-виразкові ураження, кровотеча у травневому тракті; анальгіну - пригнічення кровотворення при тривалому вживанні, оксафенаміду - прояв проносного ефекту, протипоказання при виражених дистрофічних процесах у печінці; гризеофульвіну - диспепсичні явища, головний біль, нудота, запаморочення, явища дезорієнтації, кропивниця. У комплексному лікуванні виникає необхідність призначення хворому одночасно декількох лікарських засобів з моноспрямованою фармацевтичною дією, внаслідок чого загальна побічна дія підсилюється. За прототип вибрано - 4-N-антипіриламід 2,3,5-трихлорбензойної кислоти [2]. Сполука за прототипом має загальну формулу: CONH Cl Cl O 25 4 R CONH 2 Cl H3C R 30 1 45 3 R 40 CH3 та проявляє високу антимікробну, протигрибкову, протизапальну, аналгетичну та діуретичну дію, проте діапазон та ступінь фармакологічної активності може бути реально підвищений. В основу корисної моделі поставлена задача по створенню нових хімічних сполук, що проявляють високу протизапальну, аналгетичну, жовчогінну, антиоксидантну та фунгістатичну активність. Поставлена задача вирішується шляхом синтезу нових хімічних сполук, які утворюються взаємодією 3-нітро-2-хлорбензойної або 4,5-диметокси-2-хлорбензойної кислот з тіонілхлоридом без розчинника з наступним амідуванням 2-метил-5-нітроаналіном в одну стадію без виділення хлорангідриду, загальної формули: R 35 N N C6H5 Cl 20 CH3 2 3 NO2 1 , 4 де: R =3'-NO2, R =R =R =Η; (1) 1 4 2 3 R =R =Η, R =R =OCH3, (2) які проявляють протизапальну, аналгетичну, жовчогінну, антиоксидантну та фунгістатичну активність. Заявлені сполуки 2'-метил-5-нітроанілід 3-нітро-2-хлорбензойної кислоти (1) та 2'-метил-5нітроанілід 4,5-диметокси-2-хлорбензойної кислоти (2) - порошки жовтого кольору, погано розчинні у воді, добре у етанолі, діоксані, ДМСО, ДМФА. Структура сполук (1) та (2) підтверджено за допомогою елементного аналізу та ІЧ-спектроскопії, а індивідуальність методом тонкошарової хроматографії. Корисна модель ілюструється наступними прикладами: Приклад 1. Кип'ятять 20-25 хвилин без розчинника суміш 2,01 г (0,01 моль) 3-нітро-2хлорбензойної кислоти та 1,77 г (0,025 моль) тіоніл хлориду. Надлишок тіоніл хлориду відганяють, а потім реакційну суміш змішують з 1,52 г (0,01 моль) 2-метил-5-нітроаніліном в середовищі діоксану у присутності 0,8 мл (0,01 моль) піридину. Осад відфільтровують, сушать, кристалізують з водного етанолу. Одержують сполуку: 2’-метил-4'-нітроанілід 3-нітро-2хлорбензойної кислоти (1). 1 UA 90722 U 5 10 15 20 25 Вихід 2,85 г (85 %), Ттопл. 191-193 °C, М.м. 335,696. Бруто-формула C14H10ClN3O5. Розраховано: С, % 50,09; N, % 12,52; Н, % 3,00. Знайдено: С, % 50,14; N, % 12,57; Н, % 2,94. -1 ІЧ-спектр у КВr, см : 3338, 1672, 1588, 1540, 1354, 755. Rf1: 0,82 в системі ацетон-гексан (1:1); Rf2: 0,38 в системі ацетон-хлороформ-гексан (1:1:2,5). Приклад 2. Кип'ятять 20-25 хвилин без розчинника суміш 2,25 г (0,01 моль) 4,5-диметокси-2хлорбензойної кислоти та 1,77 г (0,025 моль) тіонілхлориду. Надлишок тіонілхлориду відганяють, а потім реакційну суміш змішують з 1,52 г (0,01 моль) 2-метил-5-нітроаніліном в середовищі діоксану у присутності 0,8 мл (0,01 моль) піридину. Осад відфільтровують, сушать, кристалізують з водного етанолу. Одержують сполуку: 2'-метил-4'-нітроанілід 4,5-диметокси-2хлорбензойної кислоти (2). Вихід 2,91 г (83 %), Ттопл. 175-177 °C, М.м. 350,749. Бруто-формула C16H15CllN2О5. Розраховано: С, % 54,79; N, % 7,99; Н, % 4,31. Знайдено: С, % 55,81; N, % 8,04; Н, % 4,33. -1 ІЧ-спектр у КВr, см : 3329, 1658, 1598, 1574, 1542, 1358,744. Rf1: 0,72 в системі ацетон-гексан (1:1); Rf2: 0,33 в системі ацетон-хлороформ-гексан (1:1:2,5). Приклад 3. Вивчення протизапальної активності сполук 1 та 2 проводилося на моделі карагенінового набряку у мишей [3]. Як критерії фармакологічної активності вибрані середня терпевтична доза (DE50, мг/кг), при якій фармакологічний ефект набуває 50 % випадків у експериментальній групі тварин; середня летальна доза (DL50, мг/кг); терапевтичний індекс ТІ (показник відношення LD50/ED50) та відносний терапевтичний індекс. Результати вивчення протизапальної активності та токсичності 2'-метил-4'-нітроанілід 3нітро-2-хлорбензойної кислоти (сполука 1) та 2'-метил-4'-нітроанілід 4,5-диметокси-2хлорбензойної кислоти (сполука 2) у порівнянні з прототипом та диклофенаком натрію наведені в таблиці 1. 30 Таблиця 1 Протизапальна активність та токсичність заявлених сполук 1 та 2 у порівнянні з прототипом та диклофенаком натрію Сполука DL50, мг/кг Терапевтичний індекс DL50/DE50 1 2 Прототип Диклофенак натрію 35 DE50, мг/кг 7,8 10,8 26,8 8,0 >6000 >6500 >6000 360 769,23 601,85 223,88 45 Відносний Т.І. по диклофенаку натрію 17,09 13,37 4,98 1 Як видно за даними таблиці 1, сполуки 1 та 2 мають виражену протизапальну активність, за широтою терапевтичного ефекту перевищують диклофенак натрію у 13,37-17,09 разу та прототип у 2,68-3,43 разу. Приклад 4. Визначення аналгетичної активності сполуки 1 та сполуки 2 проводилося на моделі "гарячої пластинки" на білих лабораторних мишах масою 18-22 г [4]. Результати вивчення аналгетичної активності та токсичності 2'-метил-4'-нітроанілід 3-нітро2-хлорбензойної кислоти (сполука 1) та 2'-метил-4'-нітроанілід 4,5-диметокси-2-хлорбензойної кислоти (сполука 2) у порівнянні з прототипом та анальгіну наведені в таблиці 2. 40 2 UA 90722 U Таблиця 2 Аналгетична активність та токсичність сполук 1 та 2 у порівнянні з прототипом та анальгіном Сполука LD50, мг/кг 1 2 Прототип Анальгін 5 ED50, мг/кг 12,5 14,3 21,4 55,0 >6000 >6500 >6000 1197 Терапевтичний індекс (ТІ) >480,0 >454,55 >280,37 21,76 Відносний ТІ по анальгіну 22,02 20,85 12,84 1 Як видно за даними таблиці 2, сполуки 1 та 2 за широтою терапевтичної дії перевищують анальгін в 20,85-22,02 разу, а прототип у 1,62-1,71 разу. Приклад 5. Вивчення жовчогінної дії 2'-метил-4'-нітроанілід 3-нітро-2-хлорбензойної кислоти (сполука 1) та 2'-метил-4'-нітроанілід 4,5-диметокси-2-хлорбензойної кислоти (сполука 2) та прототипу проводили на білих щурах масою 140-180 г за методою Скакун Н.М., Олійник А.Н. [5]. Результати вивчення жовчогінної активності сполук 1 та 2, прототипу та оксафенаміду наведені у таблиці 3. 10 Таблиця 3 Жовчогінна активність сполук 1 та 2 у порівнянні з прототипом та оксафенамідом Сполука LD50, мг/кг 1 2 Прототип Оксафенамід 15 ED50, мг/кг 10,2 13,1 15,1 154,35 >6000 >6500 >6000 4000 Терапевтичний індекс (ТІ) > 588,24 >496,18 >397,35 25,9 Відносний ТІ по анальгіну 22,71 19,16 15,34 1 Як видно за даними таблиці 3, сполуки 1 та 2 за жовчогінною дією перевищують оксафенаміду 19,16-22,71 разу, а прототип у 1,25-1,4 разу. Приклад 6. Антиоксидантний ефект 2'-метил-4'-нітроанілід 3-нітро-2-хлорбензойної кислоти (сполука 1) та 2'-метил-4'-нітроанілід 4,5-диметокси-2-хлорбензойної кислоти (сполука 2), прототипу та α-токоферолу ацетату оцінювали за рівнем концентрації кінцевого продукту перекісного окиснення ліпідів-малонового діальдегіду (МДА) у гомогенах печінки. Концентрацію МДА визначали за методом [6]. Дослідження проводили на щурах-самцях. Результати антиоксидантної дії сполук 1, 2, прототипу та α-токоферолу ацетату приведені у таблиці 4. 20 Таблиця 4 Антиоксидантна активність сполук 1 та 2 у порівнянні з прототипом та α-токоферолу ацетатом Сполука 1 2 Прототип α-токоферолу ацетат 25 Активність (%) у дозі 50 мг/кг 93,0 81,4 74,16 52,2 DL50 (внутрішньошлунково), мг/кг >6000 >6500 >6000 За даними таблиці 4, сполуки 1 та 2 мають виражену антиоксидантну активність і перевищують по дії α-токоферолу ацетат на 29,2 % (сполука 2) і на 40,8 % (сполука 1), а прототип - на 7,24 % (сполука 2) і на 18,84 % (сполука 1). Приклад 7. Визначення фунгістатичної активності проводилось за відомою методикою [7]. Для вирощування грибів використовувалось середовище Сабуро (рН=6,5-6,7). Навантаження склало 500-600 репродуктивних тілець штамів Candida albicans або Trichophyton rubrum в 1 мл середовища. Фунгістатичну дію оцінювали за мінімальною мікостатичною концентрацією (ММК), вираженою в мкг/мл. 30 3 UA 90722 U Результати вивчення фунгістатичної активності та токсичності 2'-метил-4'-нітроанілід 3нітро-2-хлорбензойної кислоти (сполука 1) та 2'-метил-4'-нітроанілід 4,5-диметокси-2хлорбензойної кислоти (сполука 2) у порівнянні з прототипом, нітрофуралом та грізеофульвіном наведені в таблиці 5. 5 Т аб л иц я 5 Фунгістатична активність та токсичність сполук 1, 2 у порівнянні з прототипом та грізеофульвіном Сполука 1 2 Прототип Грізеофульвін Фурацилін (нітрофурал) 10 15 20 25 30 Штами грибків, ММК (мкг/мл) Candida albicans Trichophyton rubrum 25,0 25,0 25,0 25,0 31,2 31,2 400 64 82,5 За результатами дослідження, наведеними у таблиці 5, сполуки 1 та 2 інгібують ріст Candida albicans у концентрації у 2,56 разу меншій, ніж нітрофурал. Крім того, сполуки 1 та 2 у 24,24 разу менш токсичні, ніж нітрофурал при внутрішньочеревному введені. Також сполуки 1 та 2 проявляють фунгістатичну дію у відношенні Trichophyton rubrum у концентрації 25,0 мкг/мл і перевищують за активністю грізеофульвін у 16 раз. В результаті експерименту встановлено також, що заявлені сполуки є менш токсичними, ніж наведені препарати порівняння та прототип. Таким чином, заявлені сполуки 2'-метил-4’-нітроанілід 3-нітро-2-хлорбензойної кислоти (сполука 1) та 2’-метил-4'-нітроанілід 4,5-диметокси-2-хлорбензойної кислоти (сполука 2) проявляють комплексну біологічну дію при низькій токсичності і можуть бути застосовані у медичній практиці при лікуванні протизапальних процесів та грибкових інфекцій, хвороб жовчного міхура, внаслідок яких виділення та відтік жовчі затримується, а також захворювань різної етіології, які супроводжуються больовими синдромами середньої сили. Джерела інформації: 1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Μ.: ООО "Издательство Новая Волна", 2005. - 1200 с. 2. Деклараційний патент № 61313 (Україна), МПК: С07С 237/00, А61К 31/165. Заявлено 28.12.2012. Опубліковано 17.11.2003. Бюл. № 11. 3. Яковлева Л.В., Зупанец И.А. Использование модели каррагенинового отека у мышей при поиске противовоспалительных средств. // Деп. в УкрНИИНТИ 07.07.87. - №1908. - Ук. 87. 4. Гацура В.В. Методы передових фармацевтических исследований биологически активних веществ. - М.: Медицина, 1971. - 123 с. 5. Фармакологія та токсикологія, 1967. - №3. - С. 334-337. 6. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. // Современные методы в биохимии / Под. Ред. В.Н. Ореховича. - М., 1977. - С. 44-46. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 DL50 (внутрішньочеревинно), мг/кг >2000 >2000 >1500 Аніліди заміщених орто-хлорбензойної кислоти загальної формули: R 4 R 3 CONH R 2 Cl H3C R NO2 1 , 4 UA 90722 U 1 2 3 4 1 4 2 3 де: R =3'-NO2, R =R =R =H (1) або R =R =Η, R =R =ОСН3 (2), які проявляють протизапальну, аналгетичну, жовчогінну, антиоксидантну та фунгістатичну активність. Комп’ютерна верстка М. Ломалова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5