Комплексна протипухлинна, антибактеріальна та антивірусна фармацевтична композиція (варіанти)

1. Протипухлинна, антибактеріальна та антивірусна фармацевтична композиція, яка містить азотнокисле срібло, гексаметилентетрамін, тіосульфат натрію і воду як основу, яка відрізняється тим, що вона додатково містить альфааспарагінову кислоту або аспарагін і нікотинову кислоту при наступному співвідношенні компонентів, мас.%: азотнокисле срібло 0,016-1,6 C2 2 (11) 1 3 використана для виготовлення терапевтичних препаратів внутрішньовенного введення. Відомі також протипухлинні композиції на основі платини (Патент RU 2074861, 1997.03.10 МПК6 C07F15/00) та її сполук, таких як похідні дихлориду цис-діаміндіїмідазоліл платини, які проявляють антипроліферативну та цитостатичну активність (Пат. RU 2114858, МПК6 C07F15/00, А61К31/295, 1998p.). Проте відомі композиції мають також досить високу токсичність і, крім того, не мають комплексної дії на організм внаслідок недостатньо виражених антибактеріальних властивостей. Найбільш близькими до рішення, що заявляється, за призначенням, сукупністю істотних ознак та ефектом, що досягається, є цитостатичний та антивірусний препарат, який містить (мас.%): гексаметилентетрамін, або імідазол, або антипірин 0,007-0,70 азотнокисле срібло 0,0085-0,85 тіосульфат натрію 0,0284-2,84 вода або фізіологічний розчин до 100% (Пат. RU 2094048, 1997p.). Вказаний засіб у зв'язку з використанням солей срібла як цитостатиків є більш прогресивним протипухлинним засобом, проте істотним недоліком композиції-прототипу є його недостатньо висока протипухлинна активність, яка обмежена токсичністю азотнокислого срібла, що негативно діє на живі організми. Крім того, дана композиція не вирішує задачу комплексної терапії, яка включає антибактеріальну дію на організм. В той самий час, злоякісні пухлини і лейкоз часто (в більшості випадків) ускладнені бактеріальними інфекціями. Це пояснюється зниженням захисних функцій імунної системи хворого організму, у тому числі побічною токсичною дією відомих хіміопрепаратів. Крім того в даний час антипірин знятий з виробництва у зв'язку з наявністю більш ефективних компонентів. Основною задачею, на вирішення якої направлена група винаходів, що заявляється, є створення фармацевтичних композицій, які мають вищу в порівнянні з відомим засобом протипухлинну активність і одночасну антибактеріальну та антивірусну дію на організм. Додатковим технічним результатом винаходів, що заявляються, є зниження токсичної дії лікарських засобів на живий організм. Вказана задача вирішується тим, що, фармацевтична композиція, яка містить сіль срібла, гексаметилентетрамін, тіосульфат натрію і воду як основу, додатково містить альфа-аспарагінову кислоту або аспарагін і нікотинову кислоту при наступному співвідношенні компонентів, мас.%: азотнокисле срібло 0,016-1,6; гексаметилентетрамін 0,03-1,4; тіосульфат натрію 0,02-5,0; альфа-аспарагінова кислота або аспарагін 0,07-0,70; нікотинова кислота 0,07-0,70; вода решта до 100. Іншим варіантом рішення поставленої задачі є додаткове введення в композицію імідазолвмісних сполук платини цис-[Рt(NH3)2Im2]Cl2 або цис 90965 4 [PtNH2(OH)2lm2]Cl2 при наступному кількісному вмісті, мас.%: азотнокисле срібло 0,016-1,6; гексаметилентетрамін або імідазол 0,03-1,4; цис-[Рt(NH3)2Im2]Cl2 або цис[PtNH2(OH)2lm2]Cl2 0,056-5,6; альфа-аспарагінова кислота або аспарагін 0,07-0,70; нікотинова кислота 0,07-0,70; вода решта до 100 Виконання композиції, що заявляється, на основі сполук платини здорожує вартість препарату, але при цьому досягається підвищення протипухлинної активності препарату при одночасному зниженні токсичності, що робить композицію більш переважною при медичному застосуванні. У групі винаходів, що заявляється, збільшення вмісту основного протипухлинного і бактерицидного компоненту, азотнокислого срібла в межах 0,016-1,6 не призводить до збільшення спільної токсичної дії композиції за рахунок включення в неї гексаметилентетраміну альфа-аспарагінової кислоти або аспарагіну і нікотинової кислоти в заявлених межах. Перелічені компоненти за механізмом дії на живі організми проявляють себе як синергетичні сполуки, що знижують токсичну дію азотнокислого срібла. У першому варіанті групи винаходів, що заявляється, так само проявляє себе тіосульфат натрію, а в другому варіанті гексаметилентетрамін або імідазол. Наявність сполук платини в другому варіанті групи винаходів також підвищує його протипухлинну активність при одночасному зниженні токсичності, що робить композицію більш переважною при медичному застосуванні. Перший варіант композиції переважний при застосуванні у ветеринарії оскільки він є дешевшим препаратом. Аналіз рівня лікарських препаратів, проведений заявником, дозволив встановити, що в доступних патентних і медичних джерелах відсутні аналоги, які характеризуються сукупністю ознак, тотожних всім ознакам речовини, що заявляється. Отже винахід, що заявляється, відповідає умові патентоспроможності «новизна». В результаті пошуку відомих рішень в даній та суміжних галузях з метою виявлення ознак, співпадаючих з відмітними ознаками прототипу, не виявлені рішення, які мають ознаки, повністю співпадаючі з відмітними ознаками винаходу. Відомість та очевидність впливу заявлених відмітних ознак на досягнення вказаного технічного результату не підтверджена. Це дозволяє говорити про відповідність заявленого рішення умові патентоспроможності «винахідницький рівень». На Фіг.1 представлені діаграми, які ілюструють залежність проліферативної активності злоякісних клітин композиції, що заявляється, в мінімальних кількісних межах компонентів в порівнянні з прототипом. На Фіг.2 представлені діаграми, які ілюструють залежність проліферативної активності злоякісних клітин композиції, що заявляється, в оптимальних кількісних межах компонентів в порівнянні з прототипом. 5 На Фіг.3 представлені діаграми, що ілюструють залежність проліферативної активності злоякісних клітин композиції, що заявляється, в максимальних кількісних межах компонентів в порівнянні з прототипом. При виконанні прикладів використовувався водний розчин композиції, який включає відомі і нові компоненти, при їх різних кількісних поєднаннях. У таблиці 1 відображені дані з впливу композиції, що заявляється, на загибель злоякісних клітин, які доказують її протипухлинну активність. У таблиці 2 наведені дані з протипухлинної активності композиції, що заявляється, на живих організмах. У таблиці З відображені дані з антибактеріальної активності композиції, що заявляється. У таблиці 4 наведені дані токсикологічних випробувань за першим і другим варіантами композицій, що заявляються, порівняно з відомим онкологічним засобом на основі платини - цисплатином. У таблиці 5 наведені порівняльні дані антивірусної активності заявленої композиції за другим варіантом. У таблиці 6 наведені дані за оцінкою протипухлинної активності композиції, що заявляється, за другим варіантом. Приклад 1. 0,016г азотнокислого срібла змішують з 0,03г гексаметилентетраміну та 0,02г тіосульфату натрію, додають 0,07г альфа-аспарагінової кислоти та 0,07 г нікотинової кислоти, розчинених у необхідній кількості води. Зазначається каламутність одержаного розчину. Композицію досліджують на протипухлинну, антибактеріальну та антивірусну активність. Приклад 2. Змішують 1г азотнокислого срібла, 0,8г гексаметилентетраміну та 3г тіосульфату натрію. Додають 0,4г нікотинової кислоти та 0,4г альфааспарагінової кислоти або аспарагіну, розчинених у необхідній кількості води. Одержують розчин, який досліджують на протипухлинну антибактеріальну та антивірусну активність. Приклад 3. 1,6г азотнокислого срібла змішують з 1,4г гексаметилентетраміну та 5г тіосульфату натрію, додають 0,7г аспарагіну та 0,7г нікотинової кислоти, розчинених у необхідній кількості води. Частина реагентів випадає в осад. Композицію досліджують на протипухлинну антибактеріальну та антивірусну активність. Проведено порівняння цитостатичної протипухлинної активності композиції, що заявляється, за другим варіантом (склад, що включає імідазолвмісні сполуки платини) на пухлинні клітини за включенням 3н-тимідину через 24 години інкубації (кількість імпульсів в хвилину). Вимірювання радіоактивності проведене на бета-лічильнику Mark-III. Оцінка цитостатичної активності композиції, що заявляється, проводили на культурі клітин еритролейкозу людини лінії К-562 та HUT-102 культивованих в середовищі RPMI-1640 (Serva) з 10% ембріональною телячою сироваткою (2 10 клітин/мл) і короткостроковій культурі клітин лейкозу Раушера і карциноми Ерліха за включенням Зн-тимідину в пухлинні клітини і забарвленням 90965 6 трипановим синім через 24 години і 48 годин інкубації. Приклад 4. 0,016г азотнокислого срібла змішують з 0,03г гексаметилентетраміну, додають 0,056г цис[Рt(NH3)2Im2]Cl2, додають 0,07г альфааспарагінової кислоти або аспарагіну та 0,07г нікотинової кислоти, розчинених у необхідній кількості води. Композицію досліджують на протипухлинну антибактеріальну і противірусну активність. Приклад 5. 0,016г азотнокислого срібла змішують з 0,03г імідазолу, додають 0,056 цис-[Pt(NH3)2lm2]Cl2, 0,07г альфа-аспарагінової кислоти або аспарагіну та 0,07г нікотинової кислоти (мінімальний кількісний вміст компонентів), розчинених у необхідній кількості води. Композицію досліджують на протипухлинну, антибактеріальну та антивірусну активність. Приклад 6. 0,016г азотнокислого срібла змішують з 0,07г гексаметилентетраміну, додають 0,0056г цис[PtNH2(OH)2lm2]Cl2, 0,07г альфа-аспарагінової кислоти або аспарагіну та 0,07г нікотинової кислоти, розчинених у необхідній кількості води. Композицію досліджують на протипухлинну антибактеріальну та антивірусну активність. Приклад 7. 1,6г азотнокислого срібла змішують з 0,7г імідазолу, додають 5,6г цис-[PtNH2(OH)2lm2]Cl2 або цис-[Рt(NH3)2Im2]Cl2, 0,07г альфа-аспарагінової кислоти або аспарагіну та 0,07г нікотинової кислоти (максимальний кількісний вміст компонентів), розчинених у необхідній кількості води. Зазначається поява осаду і нестабільність розчину. Композицію досліджують на протипухлинну, антибактеріальну та антивірусну активність. Приклад 8. Змішують 1г азотнокислого срібла, 0,8г гексаметилентетраміну та 4г цис-[Pt(NH2OH)2lm2]Cl2 або цис-[Рt(NH3)2Im2]Cl2, додають 0,4г нікотинової кислоти та 0,4г альфа-аспарагінової кислоти або аспарагіну (оптимальний кількісний вміст компонентів) розчинених у необхідній кількості води. При оптимальному співвідношенні компонентів, яке лежить в рамках заявленого діапазону, одержують стійкий прозорий розчин, який досліджують на протипухлинну та антибактеріальну активність. Приклад 9. У композиції за прототипом 0,0085г азотнокислого срібла змішують з 0,007г гексаметилентетраміну (уротропіну), додають 0,0284г гідрат тіосульфату натрію. Одержують прозорий розчин, який досліджують на цитостатичну та антивірусну активність. Приклад 10. У композиції за прототипом 0,085г азотнокислого срібла, змішують з 0,07г гексаметилентетраміну, додають 0,284г гідрату тіосульфату натрію, розчиненого у воді. Одержують прозору рідину, яку досліджують на цитостатичну та антивірусну активність. Приклад 11. У композиції за прототипом 0,85г азотнокислого срібла змішують з 0,7г гексаметилентетраміну, додають 2,84 г розчиненого у воді гідрату тіосульфату натрію. Одержують 7 прозору рідину, яку досліджують на цитостатичну та антивірусну активність. Експериментальні матеріали, які підтверджують суттєвість заявлених ознак для вирішення поставленої технічної задачі, наведені в таблицях і на діаграмах Фіг.1, Фіг.2, Фіг.3. У таблиці 1 представлені результати дослідів з впливу композиції, що заявляється, на пухлинні клітини, з яких видно, що найбільш виражену протипухлинну дію надала композиція за прикладом 2 (практично повне приглушення злоякісних клітин). Як випливає з порівняльних даних таблиці 1 при нижній межі кількісного співвідношення компонентів композиція за прототипом надає дуже малу дію на тестові клітини К-562 та HUT-102. Детальніше порівняння композиції, що заявляється, з композицією-прототипом, що враховує різну протипухлинну дію при різному кількісному співвідношенні компонентів, підтверджує досягнення технічного результату при розробці заявленої композиції у всьому заявленому інтервалі кількісного вмісту компонентів. У таблиці 2 представлені дані з вивчення протипухлинної активності композиції, що заявляється, на мишах СВА з карциномою Ерліха (при трикратному внутрішньочеревинному введенні в дозі 30мг/кг). Лікування починали через 24 години після перевивання 7 106 пухлинних клітин/миша. Використання запропонованої композиції сприяє збільшенню тривалості життя мишей в 2 рази порівняно з контролем (за відсутності лікування). Таблиця 2 характеризує протипухлинну активність композиції in vivo, що заявляється, для складу композиції, що заявляється, за першим варіантом. Як випливає з даних таблиці 2, тривалість життя мишей з карциномою Ерліха в контролі склала 19,7 днів, при лікуванні заявленою композицією за варіантом 1, для складу за прикладом 2 53,7 дня. При цьому відомо (патент RU №2094048), що використання композиціїпрототипу збільшує тривалість життя дослідних тварин з 18,6 днів (контроль) до 41,3 днів (лікування). Отже, композиція-прототип збільшує тривалість життя дослідних тварин в 2,22 рази, тоді як використання заявленої композиції в проведених за аналогічних умов дослідах збільшує тривалість життя дослідних тварин в 2,73 рази. Таким чином, використання запропонованої композиції сприяє збільшенню тривалості життя мишей більш ніж в 2 рази порівняно з контролем (за відсутності лікування) і значно підвищує протипухлинну активність в порівнянні з прототипом. Антибактеріальна та антивірусна активність: Антибактеріальна активність композиції, що заявляється, визначалася методом серійних розведень препаратів в бактеріальних культурах в концентрації 1мг/мл, 10мг/мл. Препарати цис[Рt(NH3)2Im2]Cl2 або цис-[Pt(NH2OH)2lm2]Cl2 надають аналогічну за спрямованістю дію в рамках поставленої технічної задачі. При доказуванні антивірусної дії заявленої композиції використовувався як цис цис-[Рt(NH3)2Im2]Cl2, так і цис[Pt(NH2OH)2lm2]Cl2. Результати дослідів після 24 годин зростання мікроорганізмів при 37°С представлені в таблиці 3. З даних таблиці виходить, що 90965 8 композиція, яка заявляється, надає виражену цитотоксичну дію на бактеріальні клітини викликаючи 100%-у їх загибель при вивчених концентраціях (на межі діапазону при оптимальному складі 90%, при інших складах - 50-70%). Обробка композицією вірусу лейкозу Раушера в концентрації 1мг/мл та 10мг/мл протягом 4 годин з подальшим внутрішньочеревинним введенням вірусного інокулуму мишам BALB/c надало 100% захисний ефект від летальної дії вірусу, не викликаючи загибелі тварин. Дослідження гострої токсичності оптимального складу композиції (приклади 2 та 8) проведені на мишах лінії BALB/c при внутрішньочеревинному введенні водного розчину в інтервалі від 15мг/кг до 120мг/кг (таблиця 4). Спостереження за тваринами здійснювалося протягом 30 днів. Для порівняння вибраний клінічний препарат цисплатин. Токсичність композиції, що заявляється, помітно нижче, ніж токсичність цього відомого препарату. , Застосування заявленої композиції інгібувало розвиток вірусного гемобластозу у піддослідних тварин: відсоток загибелі піддослідних тварин склав всього 8,5 відсотків (3 з 35), на відміну від контрольної групи не лікованих тварин (35 мишей), де спостерігався 100% летальний ефект. У таблиці 5 наведені порівняльні дані антивірусної активності заявленої композиції за другим варіантом на прикладі інгібування вірусного гемобластозу для композиції, що заявляється, за складами з мінімальним (приклад 5), оптимальним (приклад 8) і максимальним (приклад 7) кількісним вмістом компонентів в заявлених інтервалах. Як випливає з даних таблиці 5, при оптимальному кількісному складі компонентів в композиції, що заявляється, відсоток загибелі тварин є мінімальним при цьому композиція проявляє антивірусну активність у всьому заявленому інтервалі. У таблиці 6 представлені дані з вивчення протипухлинної активності композиції, що заявляється, на мишах СВА з мастоцитомою Р-815 (при трикратному внутрішньочеревинному введенні композиції в дозі 30мг/кг). Як видно з таблиці використання запропонованої композиції викликає 3-х кратне збільшення тривалості життя піддослідних тварин порівняно з контролем (без лікування). Протипухлинна цитостатична дія платиновмісної композиції з прикладів 5, 8 та 7 для мінімального, оптимального та максимального кількісного вмісту компонентів ілюструється на Фіг.1, 2, 3 відповідно. Використані концентрації 0,02 та 0,2мг/мл для композиції, що заявляється, і проведене порівняння з дією прототипу при тих самих концентраціях. На діаграмах показана дія композиції, що заявляється, на клітини лейкозу Раушера за включенням Н-тимідину через 24 години інкубації порівняно з контролем (імп/хв). Контроль, тобто культивування злоякісних клітин в тих самих умовах без дії платиновмісною композицією становить 18750імп/хв. З діаграм видно, що у всьому заявленому діапазоні композиція (світлі стовпці діаграм), що заявляється, має більш виражений інгібуючий ефект в порівнянні з композицією-прототипом (темніші стовпці), що дозволяє майже повністю приглушити проліферацію злоякісних клітин. Для всіх 9 90965 складів, що наводяться, вказаних в прикладах 5, 7, 8, встановлений дозозалежний ефект приглушення проліферації злоякісних клітин. Як випливає з діаграм на Фіг.1, при використанні композиції (з компонентами в межах, вказаних в прикладі 5), що заявляється, і композиції за прототипом (з компонентами за прикладом 9) цитостатична дія (у імп/хв) становить: при концентрації 0,2мг/мл для композиції, що заявляється, 930, для прототипу - 2700; при концентрації 0,02мг/мл для композиції, що заявляється, - 8700, для прототипу - 13100. З діаграм Фіг.2, в яких наведені порівняльні величини цитостатичної активності композиції (приклад 8), що заявляється, з оптимальним вмістом компонентів і композиції за прототипом в межах компонентів (приклад 10) при концентрації 0,2мг/мл, для композиції, що заявляється, цитостатична дія (імп/хв.) становить 310, для прототипу - 1000; при концентрації 0,02мг/мл для композиції, що заявляється, - 1770, для прототипу - 3480. З діаграм Фіг.3, в яких наведені порівняльні величини цитостатичної активності композиції (приклад 7), що заявляється, з максимальним вмістом компонентів і композиції за прототипом (приклад 11) при концентрації 0,2мг/мл, для композиції, 10 що заявляється, цитостатична дія (імп/хв.) при концентрації 0,2мг/мл становить 460(імп/хв.), для прототипу - 1150; при концентрації 0,02мг/мл для композиції, що заявляється, - 3600, для прототипу - 9000. Крім того, проведена спеціальна серія дослідів з курсового трикратного введення платиновмісної композиції (внутрішньочеревинно в дозі 30мг/кг) 35 мишам з лейкозом Раушера через 24 години після перевивання вірусного інокулуму. Застосування заявленої платиновмісної композиції інгібувало розвиток гемобластозу у піддослідних тварин, відсоток виживання склав 90, на відміну від контрольної групи нелікованих тварин (35 мишей), де спостерігався 100% летальний ефект. Композиція (її варіанти), що заявляється, показала свою високу протипухлинну ефективність, а також здатність здійснювати комплексну дію на експериментальних тварин і культури клітин. При цьому токсична дія фармацевтичної композиції (її варіантів) є менш вираженою в порівнянні з відомими засобами. Композиція (її варіанти), що заявляється, може бути використана у фармацевтиці при виробництві препаратів медичного та ветеринарного призначення. Таблиця 1 Протипухлинна цитотоксична активність композиції, що заявляється, in vitro. Загиблі клітини, % Вид клітин К-562 HUT-102 Заявлена композиція і, мг/мл за прикл. 1 за прикл. 2 за прикл. 3 1 0,1 1 0,1 1 0,1 65 30 100 100 100 70 50 25 100 95 100 60 за прикл. 9 1 0,1 29 15 24 14 Прототип, мг/мл Контроль за прикл. 10 за прикл. 11 1 од 1 од 90 65 85 60 8 80 55 70 50 7 Таблиця 2 Тривалість життя мишей з карциномою Ерліха (днів) Склад, що (варіант 1, заявляється приклад 2) 53,7±4,9 Прототип 44,2+3,1 Контроль (миші без лікування) 19,7±1,8 Таблиця 3 Антибактеріальна активність композиції, що заявляється Композиція, що заявляється за прикладом 1 за прикладом 2 за прикладом 3 мг/мл 1 10 1 10 1 10 стафілококкі 60 100 100 100 90 100 % приглушення росту бактерій кишкова пали- Мікобактерії туберстрептококкі чка кульозу 60 70 50 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 70 100 100 100 11 90965 12 Таблиця 4 Токсичність композиції, що заявляється Доза мг/кг 15 30 60 90 120 Кількість дослідних тварин Кількість загиблих тварин, в % Заявлений Заявлений склад за Заявлений Заявлений склад за склад за п.1 п.2 (з додаванням цисплатин склад за п.1 п.2 (з додаванням цисплатин (без платини) комплексу платини) (без платини) комплексу платини) 5 5 5 0 0 4/80% 5 5 5 0 0 5/100% 5 5 5 0 0 5/100% 5 5 5 2/40% 0 5/100% 5 5 5 5/100% 1/20% 5/100% Таблиця 5 Антивірусна активність заявленої композиції (варіант 2) на прикладі інгібування вірусного гемобластозу. Відсоток загибелі піддослідних тварин Склад, що заявляється, за прикладом 5 20 Склад, що заявляється, за прикладом 8 8,5 Склад, що заявляється, за прикладом 7 17,1 Контроль (без лікування) 100 Таблиця 6 Протипухлинна активність платиновмісної композиції, що заявляється Вид пухлини Мастоцитома р-815 Склад, що заявляється 63,3+4,4 Джерела інформації з рівня техніки: 1. Пат. RU №2181050, МПК7 А61К33/18, А61К33/38, 2002р. Протипухлинна та антибактеріальна композиція. 2. Патент RU №2074861, 1997.03.10., МПК6 C07F15/00, Платинові фармацевтичні засоби. Контроль (миші без лікування) 17,0+1,3 3. Пат. RU №2114858, МПК6 C07F15/00, А61К31/295, 1998р. Похідні дихлориду цисдіамміндіїмідазоліл платини, що проявляють антіпроліферативну активність, і спосіб ї: одержання. 4. Пат. RU № 2094048, МПК 6 А61К 33/38, опубл. 27.10.97 р. Цитостатичний та антивірусний склад. Прототип. 13 Комп’ютерна верстка Н. Лиcенко 90965 Підписне 14 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601