Застосування йота-карагенану для профілактики або терапевтичного лікування риновірусної інфекції

1. Застосування йота-карагенану в антивірусній ефективній кількості як активного антивірусного інгредієнта для виготовлення фармацевтичної композиції для профілактики або терапевтичного лікування риновірусної інфекції. 2. Застосування за п. 1, де вказана риновірусна інфекція є гострою або хронічною риновірусною інфекцією. 3. Застосування за п. 1 або 2, де композиція придатна для місцевого застосування або нанесення на слизову оболонку, переважно для використання у вигляді спрею для носа, порошку, включаючи порошок для інгаляції, гелю, мазі, піни або рідкого розчину, зокрема лосьйону, розчину для полоскання рота або горла, або крапель. 4. Застосування за будь-яким з пп. 1-3, де композиція додатково містить щонайменше один фармацевтично прийнятний носій або добавку. 5. Застосування за будь-яким з пп. 1-4, де композиція придатна для місцевого застосування і містить йота-карагенан в кількості від 0,01 до 20 %, переважно від 0,1 до 10 %, найбільш переважно від 0,5 до 5 % (мас./об.) препарату. 2 (19) 1 3 94781 4 Даний винахід належить до галузі імунології і Сульфатовані полісахариди, включаючи карапротивірусних засобів, а саме до фармацевтичної генани, відомі в даній галузі техніки своєю антивікомпозиції, що містить карагенан як активний анрусною ефективністю. У самому цікавому огляді, тивірусний інгредієнт, і до її використання для поGonzalez М.Е. et аl. (1987, Antimicrob. Agents передження або терапії риновірусних інфекцій. Chemother. 31, 1388-1393) повідомляють про анПікорнавіруси - це дуже велике сімейство вірутивірусну ефективність різних сульфатованих посів, що складається з дрібних вірусів, що містять лісахаридів, включаючи йота-карагенан, проти рибонуклеїнову кислоту і що викликають багато які деяких вірусів тварин. Йота-карагенан продемонссерйозні захворювання людини і тварин. Пікорнатрував антивірусну активність проти вірусів, що віруси діляться на чотири основних групи: ентеромають зовнішню оболонку - HSV-1, HSV-2, вірусу віруси, риновіруси, кардіовіруси і афтовіруси. лісу Семліки (SFV), вірусу осповакцини і африканРиновіруси людини діляться щонайменше на ського вірусу лихоманки свиней (ASF); а також 100 серотипів і є основними збудниками простуди. проти позбавленого такої оболонки вірусу енцеЧерез велику кількість серотипів створення вакцифаломіокардиту (ЕМС). Йота-карагенан не вплини ускладнене; тому противірусні засоби можуть вав ніяким чином на покриті оболонкою вірус везипредставляти кращий спосіб лікування. Риновіруси кулярного стоматиту (VSV) і вірус кору, а також на містять капсид, який складається з чотирьох віруспозбавлені оболонки вірус поліомієліту типу 1 і них білків VP1, VP2, VP3 і VP4. Білки VP1, VP2 і аденовірус типу 5. VP3 організовані в 60 повторюваних протамерних У патенті США 2003/181415 А розкрита антивіікосаедричних одиниць. Вважається, що ці білки є русна активність сульфатованих полісахаридів, причиною різноманітності антигенів риновірусів. таких як сульфат целюлози, проти різних вірусів, Риновірусні інфекції викликають простуду з тащо мають оболонку, зокрема, проти вірусу простокими симптомами, як лихоманка, кашель і заклаго герпеса (HSV), вірусу папіломи і ВІЛ. деність носа. Риновіруси - другі по частоті збудниУ WO 2005/004882 А розкрита терапія вірусних ки пневмонії і бронхіоліту у дітей молодшого віку, а інфекцій, виключаючи риновірусну інфекцію, сутакож часта причина загострення захворювання льфатованими полісахаридами, такими як карагедихальних шляхів у хворих бронхіальною астмою, нани. хронічними обструктивними захворюваннями леУ патенті США 2005/171053 A1 розкрите загенів або муковісцидозом. У залежності від віку стосування лямбда-карагенану для придушення риновірусна інфекція викликає від третини до попоширення інфекції, що передається статевим ловини загострень бронхіальної астми, крім того, шляхом, включаючи BIЛ-1-інфекцію. риновірусна інфекція пов'язана з госпіталізацією з Yamada et аl. (1997, Carbohydrate Polymers, приводу астми дорослих і дітей. Appl. Scien. Publishers 32, 51-55) розкрили активСучасні підходи до лікування включають ввеність проти BІЛ-1 активність лямбда-, каппа- і йодення специфічної по відношенню до риновірусів та-карагенану, а також їх сульфатованих похідних. РНК, як розкрито в DE 19825395, що зв'язується з S.F.Tischer et аІ. (2006, Carbohydrate Polymers, капсидом вірусу в області поглиблення («каньйоAppl. Scien. Publishers 63, 459-465) розкрили актину»), яке необхідне для зв'язування з рецептором вність карагенану, виділеного від Meristiella хазяїна (наприклад, ICAM-1 - міжклітинна молекуgelidium, проти вірусів лихоманки денге і простого ла адгезії 1) і зараження клітини. герпесу. Інший спосіб передбачає введення розчинних Carlucci et аІ. (2004, Antiviral Research, Elsevier білків ICAM-1 або похідних Science BV. 64, 137-141) розкрили захисний вплив ICAM-1, як розкрито в патентах США 6326004 і лямбда-карагенану при генітальній інфекції, ви6096862 (tICAM-1 - укорочена ICAM-1), щоб нейткликаній вірусом простого герпесу у мишей. ралізувати вірусні частинки (віриони). Pujol et аІ. (2006, Planta Medica 72, 121-125) Хімічні сполуки з антивірусною активністю розкрили антивірусну активність карагенану, видіпроти риновірусів розкриті в EP 0523803. леного від Gigartina skottsbergii, проти інтрапериСимптоми риновірусної інфекції викликаються тонеальної інфекції, викликаної вірусом простого надмірною або неспецифічною реакцією імунної герпесу у мишей. системи. Тому звичайні форми лікування риновіТермін «карагенан» часто використовується як русної інфекції включають введення анальгезуюзбірний для тих, що витягуються з морських водочих засобів, таких як аспірин або ацетаміноростей (rhodophyceae) лінійних сульфатованих фен/парацетамол, а локалізовані форми полісахаридів, побудованих із залишків галактози. лікування, спрямовані на глотку (часто в формі Карагенан використовується, головним чином, як пастилок), включають назальні протинабрякові загусник, желатинуючий засіб, стабілізатор або засоби, які ослабляють запалення в порожнині емульгатор в фармацевтичних і продовольчих носа за рахунок звуження місцевих кровоносних продуктах. Існує більше 10 різних карагенанів в судин, протикашлеві засоби (які придушують казалежності від роду морської водорості, з якого їх шельний рефлекс головного мозку або розріджувитягують. Три основних типи - йота-, каппа- і ляють слиз в легенях) і антигістамінні препарати мбда-карагенан, які мало відрізняються по будові і першого покоління, наприклад, бромфенірамін, мірі сульфатування. Йота-карагенан - це створююхлорфенірамін і клемастин (які ослабляють секречий м'який гель сульфатований галактан, який цію слизових залоз і тим самим протидіють заклапереважно витягують з червоної морської водороденості/рідким виділенням з носа, але також мості Gigartina stellata і Chondrus crispus. Каппажуть викликати у користувача сонливість). карагенан утворює тверді, жорсткі гелі; його переважно отримують з Kappaphycus cottonii. Лямбда 5 94781 6 карагенан - найбільш поширена форма, її часто ппа-карагенану або йота-, каппа- і лямбда карагевикористовують для загущення молочних продукнану, якщо явно не вказано іншого або якщо інше тів. значення не може бути виведене з суті розкриття. Незважаючи на давно відому антивірусну акГомополімер карагенану являє собою молекутивність деяких карагенанів проти вірусів, наприлярно чисту сполуку карагенану, що складається з клад, ВІЛ або HSV, механізм антивірусної активнокарагенану одного типу: йота-, каппа- або лямбда. сті карагенанів все ще потребує пояснення. Гетерополімер карагенану містить субодиниці щоУ світлі вищезазначеного даний винахід стосунайменше двох різних типів карагенану, переважється антивірусної композиції на основі карагенано вибраних з групи, що складається з субодиниць ну, придатної для профілактики або терапії ринойота-, каппа- і лямбда-карагенану. вірусної інфекції (риніту). Термін «суміш» карагенанів, що згадується Експерименти, що привели до даного винахонадалі, може також стосуватися композиції, що ду, несподівано продемонстрували, що незважаюмістить як активний антивірусний інгредієнт щочи на можливе резервування в даній галузі технінайменше один вид гетерополімера карагенану, ки, вибрані карагенани виявляють антивірусну таким чином «суміш» переважно буде сумішшю активність проти риновірусних інфекцій (риніту), різних субодиниць карагенану, як частини згаданопричому кращі результати дає йота-карагенан. го щонайменше одного гетерополімерного карагеПерший варіант здійснення даного винаходу нану, присутнього в композиції. стосується застосування карагенану як активного Наступний варіант здійснення винаходу стосуантивірусного інгредієнта при виготовленні фарється такої антириновірусної композиції для промацевтичної композиції для профілактики або тефілактичного або терапевтичного застосування, рапії риновірусної інфекції. де вказана риновірусна інфекція є гострою або Термін «активний антивірусний інгредієнт», що хронічною риновірусною інфекцією. використовується в даному документі, стосується Дана композиція на основі карагенану придатсполуки карагенану, яка при введенні в ефективній на для місцевого застосування з метою терапії дозі або кількості втручається прямо або непрямо запалення шкіри або слизової. Однак можливе і або і прямо, і непрямо, в цикл риновірусної інфексистемне, наприклад, парентеральне або перорації в еукаріотичній клітині, конкретніше втручається льне, введення, особливо композиції, що переващонайменше в одну частину циклу риновірусної жно містить низькомолекулярні фракції карагенаінфекції, вибраної з групи, що складається з прону. У карагенана, застосовного за даним никнення вірусу в еукаріотичну клітину, реплікації винаходом, середня молекулярна маса дорівнює вірусу в еукаріотичній клітині, збирання вірусу і приблизно 15000-5000000 Да. Низькомолекулярна вивільнення вірусу з інфікованої еукаріотичної фракція містить карагенан зі середньою молекуклітини. Сюди також включений будь-який ефект лярною масою від приблизно 15000 до приблизно по неспецифічному інгібуванню підвищення титру 50000 Дак, середньомолекулярна фракція - із севірусу або неспецифічному зниженню титру вірусу редньою молекулярною масою від приблизно в еукаріотичній системі хазяїна або системі хазяї50000 до приблизно 500000 Да, а високомолекуна-ссавця. Крім того, цей термін стосується сполулярна фракція - від приблизно 500000 до приблизки з профілактичною ефективністю, яка захищає но 5000000 Да. щонайменше в деякій мірі або знижує імовірність У переважному варіанті здійснення фармацевзахворіти вірусною інфекцією. тична композиція придатна для місцевого викориТаким чином, дана фармацевтична композиція стання або нанесення на слизові оболонки. Відпоможе вводитися до або після початку вірусної інвідними формами готових до вживання галенових фекції. Термін «профілактика» або «профілактичпрепаратів є креми, гелі, мазі, порошки (включаюне лікування», який використовується в даному чи порошки для інгаляції), аерозолі, піни або рідкі документі, стосується введення даної фармацеврозчини, наприклад, лосьйони для шкіри, розчини тичної композиції, щоб захистити, щонайменше до для полоскання або краплі в ніс. Інші відповідні деякої міри, або ослабити ризик захворювання форми галенового препарату будуть очевидні для вірусною інфекцією. середнього фахівця в даній галузі техніки, вклюТермін «лікування» або «терапевтичне лікучаючи, наприклад, назальні системи для введення вання», який використовується в даному докуменпрепарату, розкриті в патенті США 6391452. ті, стосується введення даної фармацевтичної Крім активних антивірусних інгредієнтів, дана композиції людині, інфікованій вірусом, щоб полекомпозиція типово містить щонайменше один фагшити патологічний вплив інфекції, включаючи рмацевтично прийнятний носій і необов'язково зниження тяжкості і/або частоти симптомів, що додаткові добавки або інгредієнти. з'являються, або усунення таких симптомів, виВідповідний носій може бути розріджувачем, правлення можливих пошкоджень, викликаних або наприклад, водою або фізіологічним розчином, пов'язаних з такою вірусною інфекцією, включаючи наповнювачем або іншим носієм, придатним і заінгібування або профілактику повторних вірусних, стосовним для введення активних інгредієнтів. бактерійних, грибкових або будь-яких інших видів Необов'язкові добавки можуть бути вибрані з грумікробної інфекції. пи, що складається з SiO2, TiO2, зв'язуючого, такоЗбірний термін «карагенан», який використого як мікрокристалічна целюлоза, полівінілпіролівується надалі, стосується суміші щонайменше дон, камедь трагаканта, желатин, крохмаль, двох гомо- або гетерополімерів йота-, каппа- або лактоза, моногідрат лактози, альгінова кислота лямбда-карагенану, тобто суміші гомо- або гетеабо кукурудзяний крохмаль; змащувальної або рополімерів йота- і лямбда-карагенану, йота- і каповерхнево-активної речовини, такої як стеарат 7 94781 8 магнію або лаурилсульфат натрію; ковзної речорної рукавички, тканини або паперів, особливо вини, такої як колоїдний діоксид кремнію; підсолотканини або паперу для носа, за допомогою або джувача, такого як сахароза або сахарин. Додатнанесення покриття, або просочення. кові добавки в препараті можуть бути, але не Застосовні за даним винаходом йота-, каппа- і обмежені, буферами або засобами, регулюючими лямбда-карагенани є в продажу, але також можуть рН, наприклад, вибраними з лимонної кислоти, бути одержані витяганням з морських водоростей оцтової кислоти, фумарової кислоти, хлористововідповідно до процедур екстракції, відомих в даній дневої кислоти, яблучної кислоти, азотної кислоти, галузі техніки. фосфорної кислоти, пропіонової кислоти, сірчаної Переважний варіант здійснення винаходу стокислоти, винної кислоти або їх комбінації. сується застосування щонайменше однієї речовиМожуть бути присутнім додаткові інгредієнти, ни, вибраної з групи, що складається з гомо- і гевключаючи лікарські засоби, відмінні від карагенатерополімерів йота-, каппа- і лямбда-карагенану. ну, або фармацевтично активні речовини. У конкретному варіанті здійснення антивірусна Карагенан може використовуватися в формі фармацевтична композиція за даним винаходом будь-якої фармацевтично прийнятної солі, наприпо суті вільна від форм карагенану, відмінних від клад, можуть використовуватися натрієві солі кайота-, каппа- і лямбда-карагенану, хоча слідові рагенану. Інші фармацевтично прийнятні солі кількості таких інших карагенанів можуть бути привключають, серед іншого, калійні, літієві і амонієві сутніми. Для різних застосувань йота-карагенан солі карагенану. може бути по суті єдиним видом карагенану, приВ іншому варіанті здійснення винаходу компосутнього в композиції. зиція призначена для місцевого застосування і Інший варіант здійснення винаходу стосується містить карагенан в кількості від 0,01 до 20%, пезастосування карагенану в одержанні антивірусної реважно від 0,1 до 10%, найбільш переважно від композиції, де композиція містить або тільки йота-, 0,5 до 5 мас. % (мас/мас.) препарату. каппа- або лямбда-карагенан, або суміш щонайЗвичайно композиція буде являти собою апіменше двох з вказаних карагенанів, в кількості рогенний, стерильний препарат. У випадку рідкого 80% і більше, 90% і більше, 95% і більше або напрепарату стерильність може забезпечуватися, віть 99% і більше від всіх карагенанів, присутніх в наприклад, шляхом фільтрації через відповідний композиції. Процентні вмісти наведені в процентах мембранний фільтр. Способи виготовлення степо масі (мас/мас. %) відносно сухої маси згаданих рильних або асептичних фармацевтичних компокарагенанів. зицій відомі в даній галузі техніки і не є частиною Інший варіант здійснення винаходу стосується даного винаходу. такого застосування, де композиція містить не меФармацевтична композиція за даним винахонше 50%, не менше 70%, не менше 80% і перевадом також може бути нанесена у вигляді покриття жно не менше 95% (мас/мас.) з розрахунку на суху на тверді поверхні предметів гігієни або санітарії, масу йота-карагенану по відношенню до загальної наприклад, предметів для гігієни або санітарії ососухої маси всіх карагенанів, присутніх в композиції. би, які типово використовуються в ділянці рота або Вищезазначені значення концентрації карагеноса, такого як тканина або папір для носа і носонану аналогічним чином застосовні до гомо- і гетевички. Конкретніше, фармацевтична композиція рополімерних карагенанів. може бути нанесена, наприклад, розпилена подібВиявлено, що карагенан нетоксичний після но дезинфікуючим засобам на рукавички, гігієнічні перорального або підшкірного введення, або після тканини або папір, включаючи тканини для носа, інгаляції навіть в надзвичайно великих дозах, тому щоб виявити вірусоцидний ефект щонайменше до Food and Drug Administration (FDA) віднесла його деякої міри, тим самим сприяючи зниженню подо категорії речовин «загалом визнаних безпечвторного аутоінфікування людини забрудненими ними». кінчиками пальців, а також ослабити поширення Інший варіант здійснення винаходу стосується вірусу між різними людьми, які знаходяться в тісзастосування карагенанів у виготовленні антивіруному контакті, наприклад, контакті рук, один з одсної композиції, яка містить щонайменше одну ним. У залежності від природи предмета санітарії додаткову фармацевтично активну речовину, анабо гігієни, предмет може бути покритий, зволожетивірусну сполуку, переважно сульфат целюлози. ний або іншим способом просочений фармацевтиІнший варіант здійснення даного винаходу чною композицією. стосується застосування карагенану, переважно Такі оброблені карагенаном предмети також йота-карагенану, у виготовленні фармацевтичної можуть включати, але не обмежуватися ватяними композиції для профілактики або терапевтичного тампонами, протипиловими масками або лицьолікування фізичного стану, вибраного з групи, що вими масками. Навіть помада може містити антискладається з мікробної інфекції, запального завірусну ефективну кількість карагенану. Ці предхворювання, алергії і пошкодженої або пригніченої мети гігієни або санітарії можуть імунної системи, де карагенан присутній в комбівикористовуватися профілактично або нарівні з нації щонайменше з однією іншою фармацевтично терапевтичним лікуванням проти вірусної інфекції і активною сполукою або лікарським засобом. У можуть допомогти в профілактиці або зниженні такій композиції карагенан може виявити ад'юванризику інфекції. тну антириновірусну функцію. Згадана щонайменВідповідно, один варіант здійснення винахід ше одна інша фармацевтично активна сполука або стосується такого застосування, де антивірусна лікарський засіб можуть бути вибрані з групи, що композиція нанесена на тверду поверхню продукту складається з стероїду, наприклад, кортизону, і гігієни або санітарії, зокрема, гігієнічної або санітаантигистамінного засобу. 9 94781 10 Інший варіант здійснення стосується антивичену по зниженню цитопатичного ефекту. Ординарусного фармацевтичного препарату для лікуванта - зниження цитопатичного ефекту, %; абсциса ня або профілактики у людини, яка особливо концентрація йота-карагенану, нг/мл; HRV2P0 сприйнятлива до риновірусної інфекції або має оригінальний штам риновірусу (без циклів реплікапідвищений ризик її розвитку, і який вибраний з ції); HRV2P10 - штам риновірусу HRV2P0 після 10 групи, що складається з хворого бронхіальною циклів реплікації в клітинах HeLa. астмою, людини з алергією і людини, що має заНаступні приклади наведені для кращого ропальне захворювання. зуміння винаходу, описаного в даному документі. Фіг. 1 показує результати визначення інгібуПриклади призначені тільки для ілюстративних вання клітинної смерті, індукованої HRV (ХТТ). цілей і не повинні розглядатися як такі, що обмеОрдината - оптична густина (OD), виміряна жують даний винахід в будь-якому відношенні. при 492 нм; абсциса - різні тестові проби; 1 - неінКрім того, мається на увазі, що даний винахід пофіковані клітини; 2 - необроблені, інфіковані клітивинен також включати варіації явно розкритих вани; 3 - інфіковані клітини, оброблені йотаріантів здійснення до міри, яка буде зрозуміла секарагенаном; 4 - інфіковані клітини, оброблені капредньому фахівцеві в даній галузі техніки. па-карагенаном; 5 - інфіковані клітини, оброблені Приклад 1: Вплив різних типів карагенанів на лямбда-карагенаном; Фіг. 1A - клітини, інфіковані риновіруси людину типу 2 (HRV-2) і типу 14 (HRVHRV-2; Фіг. 1B - клітини, інфіковані HRV-14. 14) Фіг. 2 показує визначення пікових титрів в суСубзлиті клітини HeLa інкубували з вірусною пернатанті від клітин, що інфікували HeIa з допосуспензією, яку перед цим інкубували протягом 5 могою TCID50. хв. з 125 мкг/мл полімерів, як вказано в Ордината - титр TCID50; абсциса - концентраФігура 1. Через 48 год. життєздатність клітин ція йота-карагенану в мкг/мл; U - необроблені клівизначили методом ТОХ2 XTT (Sigma). тини; T (лікування) - клітини були інфіковані протяЯк показано на Фіг. 1, найбільш ефективним гом однієї години, і через одну годину після полімером був йота-карагенан (стовпчик 3), який обробки була додана вказана концентрація йотабув ефективний проти обох типів риновірусу, в той карагенану; P (профілактика) - суспензію вірусу час як лямбда- (стовпчик 5) і каппа-карагенани інкубували з вказаною концентрацією йота(стовпчик 4) продемонстрували ефективність прокарагенану протягом години перед інфекцією. Доти HRV-2, але не HRV-14. «Вусами» на графіку даткова обробка ідентична Т: клітини інфікували показане стандартне відхилення між шістьма непри MOI 0,01. Пікові титри HRV-2 спостерігали на залежними ямками. 3-й день (Фіг. 2А), HRV-14 - на 4-й день (Фіг. 2В). Приклад 2 Фіг. 3 показує ефективність йота-карагенану в Полімери, вказані в таблиці 1, досліджували за інгібуванні реплікації риновірусу в інфікованих клідопомогою тесту на інгібування індукованої HRV-2 тинах носового епітелію людини, визначену метоі HRV-14 клітинної смерті (XTT) при концентрації дом TCID50. 100 мкг/мл. Ордината - log титру TCID50; абсциса - конценЯк показано в таблиці 1, йота-карагенан затрація йота-карагенану в мкг/мл; MOCK - необроббезпечив захист проти обох типів риновірусу («+» лені контрольні клітини; Фіг. 3А - клітини, інфіковавказує на щонайменше 95%-ий захист в порівнянні ні HRV-1A; Фіг. 3В - клітини, інфіковані HRV-2; Фіг. з неінфікованими контрольними клітинами). Каппа3С - клітини, інфіковані HRV-8; Фіг. 3D - клітини, карагенан і лямбда-карагенан були активні проти інфіковані HRV-16; Фіг. 3Е - клітини, інфіковані HRV-2, але не HRV-14. Полімери хітозану, карбокHRV-39; Фіг. 3F - клітини, інфіковані HRV-83. симетилцелюлоза і карбоксиметилхітозан не проФіг. 4 показує ефективність йота-карагенану демонстрували інгібуючого ефекту взагалі. проти риновірусу при повторному лікуванні, визнаТаблиця 1 Антивірусна активність декількох досліджених полімерів Полімер Йота-карагенан Каппа-карагенан Лямбда-карагенан Хітозан Карбоксиметилцелюлоза Карбоксиметилхітозан Приклад 3 Йота-карагенан був ефективний проти HRV-2 і HRV-14 в лікуванні і профілактиці на вірусній моделі реплікації. Статистично значуще зниження пікового титру вірусу спостерігалося при концентраціях, які дорівнювали 6,25 пг/мл і більше. Найбільш ефективним на моделі профілактики проти HRV-2 був йота-карагенан, який приводив до зни HRV-2 + + + HRV-14 + ження пікового титру вірусу більш ніж на 99,9%. Приклад 4: Ефект йота-карагенану проти вибраних підтипів риновірусу людини Субзлиті клітини HeLa на 96-ямкових планшетах інкубували з вірусною суспензією з MOI (multiplicity of infection), що дорівнювала 0,5. Через 20 хвилин після зараження вірусною суспензією додали поживне середовище, що містить 11 94781 12 3-кратне розведення полімеру. Через 48-72 год. ТОХ2 XTT (Sigma). ЕС50 обчислили з допомогою життєздатність клітин визначили з допомогою Excel-Fit. Таблиця 2 Вірус ЕС50 HRV-1 0,7 мкг/мл HRV-2 21 мкг/мл HRV-8