Застосування антагоніста фактора тканини fvіі або fvііa для одержання лікарського засобу для терапевтичного лікування патологічних станів, які пов’язані з міграцєю клітин або хемотаксисом

1. Застосування агоніста фактора тканини, що індукує трансдукцію сигналу шляхом прямого зв'я C2 1 3 75865 4 зинового фосфорилування активується сукупність птора урокінази у клітинах пухлин. Каталітично активованих мітогеном (Ser/Thr) кіназ (МАРK). Ці неактивний FVIIa (FVIlai) не здатен викликати бакінази розташовані в кількох паралельних сигнагато з сигнальних реакцій, від осциляції Са2+ до льних шляхах. Ретельні дослідження потенційної активації МАР-кінази та відновлення генів, і, очездатності FVIIa до внутрішньоклітинного сигналізувидно, каталітична активність FVIIa може бути невання показали, що він викликає мобілізацію внутобхідною хоча б для якоїсь опосередкованої TFрішньоклітинного вільного кальцію (Са2+) в лінії FVIIa трансдукції сигналу. Нині ще мало відомо клітин карциноми сечового міхура людини, J82, про сигнальний(і) шлях(и), які викликаються прояка визначальним чином експресує TF, та в ендотеолітично активним FVIIa, та про те, яким чином теліальних клітинах пупкової вени, які було попесигнали, викликані FVIIa, можуть брати участь в редньо оброблено інтерлейкіном-1 для експресії ангіогенезі та метастазі пухлин. TF, але не виявляє ніякої цитокіноподібної активаДля вивчення тимчасової програми транскриції внутрішньоклітинних тирозинкіназ. Було зробпції, яка лежить в основі викликаної FVIIa реакції, у лено висновок, що FVIIa, залежно від TF, викликає даному дослідженні автори розглянули реакцію мобілізацію внутрішньоклітинного Са2+ через актифібробластів людини на FVIIa, використавши міквацію фосфоліпази С. Механізм, за допомогою ромножину кДНК. Дані показали, що клітинна ексякого FVIIa активує фосфоліпазу С, є невідомим, пресія кількох генів у фібробластах помітно змінюале активація тирозинкінази однозначно виключавалася під дією FVIIa. Одним з таких генів є Суr61, ється. проміжний ранній ген, який викликається фактоОстанні повідомлення з багатьох лабораторій ром росту, продукт якого сприяє адгезії клітин, свідчать, що TF може впливати на кілька важливих посилює викликаний фактором росту синтез ДНК біологічних функцій, крім коагуляції, таких як ангіота стимулює міграцію клітин у фібробластах та генез, васкуляризація ембріонів та метастаз пухендотеліальних клітинах. лин. Однак нині залишається нез'ясованою роль Даний винахід стосується застосування FVII TF у цих біологічних процесах. Позаклітинний дота/або FVIIa та/або іншого агоніста TF та/або FVIlai мен TF складається з двох модулів на зразок фібта/або іншого антагоніста TF у терапевтичному ронектину III типу, як у типовому позаклітинному лікуванні патологічних станів, які можуть бути подомені цитокінового рецептора II класу, завдяки в'язані з міграцією клітин або які можна лікувати чому існує ймовірність того, що TF може відіграваспецифічним регулюванням міграції клітин або ти роль у трансдукції сигналу, первинній функції хемотаксису. цитокінового рецептора. Однак TF має дуже короВ іншому аспекті винахід стосується застосуткий цитоплазматичний домен (довжиною лише в вання FVII та/або FVII та/або іншого агоніста TF 21 амінокислотний залишок) і не має наближених та/або FVIlai та/або іншого антагоніста TF у терадо мембрани мотивів, які опосередковують зв'язупевтичному лікуванні патологічних станів, які мовання нерецепторних Янус-кіназ (Jaks) які є важжуть бути пов'язані з регулюванням експресії приливими для сигналу цитокінового рецептора. Ненаймні одного гена у клітині, наприклад, Суr61зважаючи на це, кілька біохімічних відкриттів гена. вказують на функцію трансдукції сигналу для TF. В іншому аспекті винахід стосується способу Аналіз білкової послідовності TF людини вказує на викликання або посилення міграції клітин, який можливий сайт фосфорилування в цитоплазмативключає етап контактування вищезгаданих клітин чному домені, який зберігається в TF мишей, щуз агоністом фактора тканини. рів та кролів. Характерні серинові залишки у цитоВ одному з варіантів втілення агоністом факплазматичному хвості TF фосфорилуються в тора тканини є FVII або FVIIa. клітинах після стимуляції активатором протеїнкінаВ іншому аспекті винахід стосується способу зи С. Цитоплазматичний хвіст TF людини фосфозниження або інгібування міграції клітин, який рилується in vitro в кількох місцях при інкубуванні з включає етап контактування клітини з антагоністом лізатами U87-MG-клітин. На можливу роль цитофактора тканини. плазматичного домену TF у трансдукції сигналу В одному з варіантів втілення антагоніст фактакож вказують результати досліджень, які покатора тканини є модифікований FVII. зали, що прометастатична функція TF критично В одному з варіантів втілення клітина є клітизалежить від цитоплазматичного домену TF. Крім ною людини, що експресує фактор тканини, вклютого, показано, що цитоплазматичний домен TF чаючи фібробласти, клітини гладенького м'яза, взаємодіє з актинозв'язувальним білком 280 (АВРклітини пухлин, кровотворні клітини та епітеліальні 280) та підтримує зв'язування та міграції клітин клітини. через залучення АВР-280 до TF-опосередкованих В одному з варіантів втілення модифікований адгезійних контактів. фактор VII вибирають з-поміж фактора VII, модиОднак було також виявлено, що TF бере фікованого дансил-Рhе-Рrо-Аrgучасть у певних типах сигналу в клітинах як кофакхлорметилкетоном, дансил-Glu-СІу-Аrgтор для фізіологічного ліганда FVIIa у позаклітинхлорметилкетоном, дансил-Рhе-Рhе-Аrgному сигналі через протеолітичний механізм. Нахлорметилкетоном, Phe-Phe-Argприклад, виявлено, що зв'язування FVIIa з хлорметилкетоном, дансил-D-Рhе-Рrо-Аrgповерхнею клітин TF викликає внутрішньоклітинну хлорметилкетоном, дансил-D-GІu-GІу-АrgСа2+ осциляцію в багатьох клітинах, які експресухлорметилкетоном, дансил-D-Phe-Phe-Argють TF, короткочасне фосфорилування тирозину в хлорметилкетоном та D-Phe-Phe-Argмоноцитах, активацію МАР-кінази, зміни експресії хлорметилкетоном. гена у фібробластах та посилення експресії рецеВ іншому аспекті винахід стосується способу 5 75865 6 викликання або прискорення загоєння ран у пацієміграції клітин in vitro, наприклад, ріст тканини. нта, який включає введення вищезгаданому пацієОПИС ФІГУР (fra 6011) нтові ефективної кількості фармацевтичної компоФіг.1А та 1Б: Проточний цитометричний аналіз зиції, яка включає фактор Vila або фактор VII або експресії TF у фібробластах (1А). Клітини забарвінший агоніст фактора тканини чи їх комбінацію. лювали або спряженим з моноклональним флуоВ іншому аспекті винахід стосується способу ресцеїнізотіоціанатом миші чи щура (FITC) антитіінгібування або зниження міграції клітин, інвазії, лом миші проти IgG (незаповнена ділянка), яке викликаної міграцією проліферації клітин або ангізастосовували як негативний контроль, або спряогенезу у пацієнта, який має захворювання, пов'яженим з моноклональним FITC антитілом проти зане з небажаною міграцією клітин, інвазією, вифактора тканини (TF) (заповнена ділянка). На кликаною міграцією проліферації клітин або Фіг.1Б показано прокоагулянтну активність фіброангіогенезом, який включає введення вищезгадабластів. Фібробласти з експресією TF викликали ному пацієнтові ефективної кількості фармацевти10-разове збільшення РСА порівняно з моноцитачної композиції, яка включає антагоніст фактора ми без експресії TF. тканини. Фіг.2А: Вплив FVIIa та FFR-FVIIa на викликаВ одному з варіантів втілення хвороба або ний PDGF-BB хемотаксис у фібробластах людини. стан є розвитком первинної пухлини, інвазією пух показує хемотаксичну реакцію фібробластів на лини або метастазом. різні концентрації PDGF-BB. Фібробласти, інкубоВ іншому аспекті винахід стосується застосувані з 100нΜ FVIIa (●) або 100нМ FFR-FVIIa (❍ ), вання агоніста фактора тканини для одержання мігрували до іншої концентрації PDGF-BB. Резульмедикаменту для викликання або посилення мігтати є середніми значеннями та SEM трьох окрерації клітин. мих експериментів. Р-значення, менші за 0,05,* В іншому аспекті винахід стосується застосувважали статистично значущими (тест Ст'юдента). вання антагоніста фактора тканини для одержання Фіг.3 А-Г: Вплив різних концентрацій FVIIa або медикаменту для зниження або інгібування міграFFR-FVIIa на викликаний PDGF-BB хемотаксис у ції клітин. фібробластах. показує міграцію фібробластів до В іншому аспекті винахід стосується способу інших концентрацій PDGF-BB. Клітини інкубували з регулювання експресії принаймні одного гена у 12,5(А), 25(Б), 50(В) та 100(Г)нМ FVIIa (●) або FFRклітині, який включає етап або контактування виFVIIa (❍ і піддавали аналізові у камері Бойдена з ) щезгаданої клітини з агоністом фактора тканини, різними концентраціями PDGF-BB. Результати є або контактування вищезгаданої клітини з антагосередніми значеннями та SEM трьох різних експеністом фактора тканини. риментів. *=р