Виділене моноклональне антитіло, яке зв’язується з hgm-csf, і композиція медичного призначення, що його містить

Реферат: Винахід належить до моноклонального антитіла проти hGM-CSF і антигензв'язуючих фрагментів такого антитіла, що мають поліпшену здатність нейтралізувати активність hGMCSF. Також даний винахід належить до фармацевтичних композицій, набору, виділеної нуклеїнової кислоти, вектора, клітини-хазяїна, що містять зазначене антитіло або його антигензв'язуючий фрагмент. Винахід застосовують для лікування різних захворювань, асоційованих з аномальною експресією hGM-CSF. UA 102085 C2 (12) UA 102085 C2 UA 102085 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Область техніки, до якої відноситься винахід Даний винахід відноситься до моноклональних антитіл, які зв'язуються з людським колонієстимулювальним фактором гранулоцитів-макрофагів (позначений також як «hGM-CSF») і нейтралізують активність hGM-CSF, до композицій, які містять одне або декілька зазначених моноклональних антитіл, і способам застосування зазначених моноклональних антитіл і композицій. Передумови створення винаходу Встановлено, що колонієстимулювальний фактор гранулоцитів-макрофагів (GM-CSF) являє собою гуморальний фактор, який прискорює проліферацію клітин-попередників гранулоцитів і макрофагів, що перебувають у кістковому мозку, і прискорює формування колоній гранулоцитів і макрофагів in vitro. У цей час відомо, що GM-CSF являє собою стимулюючий фактор у широкій розмаїтості типів клітин. Він індукує дифференціювання й проліферацію ліній гранулоцитів-макрофагів клітин крові, підсилює функції антигенпрезентуючих клітин, підтримує функції деяких типів епітеліальних клітин та індукує функції альвеолярних макрофагів (наприклад, підвищує катаболізм сурфактанта, бактерицидну функцію й експресію Fc-рецептора) (The Cytokine Handbook, 4-е вид., під ред. Thomson A. і ін., вид-в Academic Press, 2003). Відомо, що GM-CSF викликає різні хвороби, включаючи: 1) алергійні захворювання, такі як астма, атопія й поліноз, 2) відторгнення трансплантата й реакцію «трансплантат-проти-хазяїна» (GVHD) і 3) аутоімунні захворювання, такі як ревматоїдний артрит. Наприклад, для людського GM-CSF (hGM-CSF) характерна надекспресія у легенях страждаючих алергією індивідуумів і у суглобах страждаючих ревматоїдним артритом пацієнтів; надекспресія мРНК hGM-CSF виявлена у шкірі страждаючих алергією індивідуумів. Описано також, що виживаність моноцитів, що представляють собою індукуюче запалення клітини при атопічному дерматиті, підвищується у результаті виробництва GM-CSF (Bratton D.L. і ін., Granulocyte macrophage colony-stimulating factor contributes to enhanced monocyte survival in chronic atopic dermatitis. J. Clin. Invest., 95, 1995, сс. 211-218). Крім того, встановлено, що GM-CSF стимулює проліферацію лейкозних клітин. Таким чином, вважається, що GM-CSF є фактором, що викликає лейкоз. Існує необхідність у розробці шляхів лікування захворювань і станів, обумовлених людським GM-CSF. Одним зі шляхів терапії зазначених захворювань і станів є зв'язування hGM-CSF та інгібування його біологічної активності. Для цієї мети можна застосовувати, наприклад, моноклональні антитіла до hGM-CSF, які мають підвищену аффінність й достатню нейтралізуючу активність у відношенні hGM-CSF, але не індукують імунологічну реакцію. Однак описані до теперішнього часу інгібуючі антитіла до hGM-CSF не мають достатню нейтралізуючу активність у відношенні hGM-CSF. Крім того, дуже імовірно, що доступні у цей час моноклональні антитіла до hGM-CSF можуть індукувати небажану імунну відповідь у реципієнтів. Поліклональне антитіло й моноклональне антитіло, як правило, одержують з експериментальних тварин, таких як миші, кролики й козли. Однак отримані таким шляхом антитіла мають послідовність, характерну для типу тварин, що використовуються для їхнього одержання. Якщо їх уводять людям, то імунна система людини може розпізнавати антитіла як чужорідні й це може приводити до людської гуморальної імунної відповіді на антитіло тваринного походження (тобто таке антитіло викликає продукування власних антитіл організму). Крім того, для лікування таких хвороб необхідно тривале застосування й у результаті можуть виникати проблеми, пов'язані з безпекою, які можуть бути обумовлені невеликою кількістю домішок лікарських засобів, що вводяться. Антитіла з більше високою нейтралізуючою активністю, чим доступні у цей час, можуть бути більше коштовними як терапевтичні засоби з позицій ефективності, безпеки й витрат на медичне обслуговування. Короткий виклад сутності винаходу Даний винахід відноситься щонайменше частково до розроблених при створенні винаходу конкретних моноклональних антитіл до людського GM-CSF, які відрізняються їх дуже високою нейтралізуючою активністю у відношенні hGM-CSF. При створенні винаходу зненацька було встановлено, що нейтралізуюча активність зазначених антитіл вища, ніж можна було б очікувати на основі їх аффінності до зв'язування з hGM-CSF. Два із зазначених моноклональних антитіл до hGM-CSF позначені у даному описі як EV1018 і EV1019. Одним з об'єктів винаходу є антитіла до hGM-CSF і їхні фрагменти, що зв'язують і нейтралізують hGM-CSF. Одним з варіантів здійснення винаходу є виділене моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуючий фрагмент, де моноклональне антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент розпізнає ELYK (SEQ ID NO: 2) і TMMASHYKQH (SEQ ID NO: 3) у hGM-CSF, 1 UA 102085 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 амінокислотна послідовність якого представлена у SEQ ID NO: 1. В одному з варіантів здійснення винаходу антитіло містить: (а) важкий ланцюг, що включає консенсусну VH-CDR1-утримуючу послідовність, консенсусну VH-CDR2-утримуючу послідовність і консенсусну VH-CDR3-утримуючу послідовність, в яких: (I) консенсусна VH-CDR1-утримуюча послідовність являє собою FTFSX 1X2MH (SEQ ID NO: 314), в якій X1 означає Y або H і X2 означає G або A, (II) консенсусна VH-CDR2-утримуюча послідовність являє собою X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G (SEQ ID NO: 315), в якій Xn кожний незалежно один від одного означає будь-яку амінокислоту, що зустрічається у природних умовах, X 3 означає L або V, X4 означає T або I, X5 означає Y або W, X6 означає R або K, X7 означає F або Y і X8 означає R або K, і (III) консенсусна VH-CDR3-утримуюча послідовність являє собою EX nX9GX10XnXnDXn (SEQ ID NO: 316), в якій Xn кожний незалежно один від одного означає будь-яку амінокислоту, що зустрічається у природних умовах, X9 означає M або V і X10 означає A або G; і (б) легкий ланцюг, що включає консенсусну V L-CDR1-утримуючу послідовність, консенсусну VL-CDR2-утримуючу послідовність і консенсусну VL-CDR3-утримуючу послідовність, в яких: (I) консенсусна VL-CDR1-утримуюча послідовність являє собою X nGNXnXnNIGSX11AVG (SEQ ID NO: 317), в якій Xn кожний незалежно один від одного означає будь-яку амінокислоту, що зустрічається у природних умовах, і X11 означає H або Y, (II) консенсусна VL-CDR2-утримуюча послідовність являє собою GX 12SPX13SG (SEQ ID NO: 318), в якій X12 означає R або K і X13 означає A або P, і (III) консенсусна VL-CDR3-утримуюча послідовність являє собою STWDSX 14LSAVX15 (SEQ ID NO: 319), в якій X14 означає R або S і X15 означає V або L; і антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент специфічно зв'язується з hGM-CSF. Відповідно до одного з варіантів здійснення винаходу антитіло містить: (a) важкий ланцюг, що включає VH-CDR1, VH-CDR2 і VH-CDR3, в яких: (I) VH-CDR1 має амінокислотну послідовність, вибрану з SYGMH (SEQ ID NO: 10) і SHAMH (SEQ ID NO: 333), (II) VH-CDR2 має амінокислотну послідовність, вибрану з LTYHHGNRKFYADSVRG (SEQ ID NO: 5) і VIWHDGSKKYYADSVKG (SEQ ID NO: 334), і (III) VH-CDR3 має амінокислотну послідовність, вибрану з ESMGAINDN (SEQ ID NO: 6) і EWVGGTCDS (SEQ ID NO: 335); і (б) легкий ланцюг, що включає VL-CDR1, VL-CDR2 і VL-CDR3, в яких: (I) VL-CDR1 має амінокислотну послідовність, вибрану з IGNNNNIGSHAVG (SEQ ID NO: 7) і SGNSSNIGSYAVG (SEQ ID NO: 330), (II) VL-CDR2 має амінокислотну послідовність, вибрану з GRSPPS (SEQ ID NO: 8) і GKSPAS (SEQ ID NO: 331), і (III) VL-CDR3 має амінокислотну послідовність, вибрану з STWDSSLSAVV (SEQ ID NO: 9) і STWDSRLSAVL (SEQ ID NO: 332), і антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент специфічно зв'язується з hGM-CSF. Наприклад, зв'язування описаного вище антитіла або його антигензв’язуючого фрагмента з людським GM-CSF характеризується значенням KD, що становить менше 400пМ, більше переважно значенням KD, що становить менше 160пМ. Антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, представлене/представлений у даному описі, нейтралізує активність hGM-CSF, при цьому значення IC50 для антитіла або його антигензв’язуючого фрагмента становить менше 100пМ (наприклад, менше 30пМ, менше 20пМ) при визначенні за допомогою аналізу проліферації TF-1-клітин при концентрації, що відповідає ED80, відповідно до методу, представленому у даному описі. В одному з варіантів здійснення винаходу антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент може містити важкий ланцюг, що представляє собою ланцюг типу гамма 1 (γ 1), гамма 2 (γ2), гамма 3 (γ3) або гамма 4 (γ4). Важкий ланцюг можна вибирати з послідовностей, представлених у SEQ ID NO: 10-33, 38-80 і 160-183 і 222-245. В одному з варіантів здійснення винаходу антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент може містити легкий ланцюг, що представляє собою легкий лямбда-ланцюг. У деяких варіантах здійснення винаходу легкий лямбда-ланцюг може містити одну або обидві з наступних амінокислотних замін: R100G і A153G, які позначені щодо послідовності дикого типу. В одному з варіантів здійснення винаходу легкий ланцюг можна вибирати з послідовностей, представлених у SEQ ID NO: 34-37 і 202-221. Легкий ланцюг може являти собою легкий лямбда-ланцюг або легкий каппа-ланцюг. У деяких варіантах здійснення винаходу важкий ланцюг являє собою важкий ланцюг типу гамма 1 (γ1), гамма 2 (γ2), гамма 3 (γ3) або гамма 4 (γ4), а легкий ланцюг 2 UA 102085 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 являє собою легкий лямбда-ланцюг. У кожному з варіантів здійснення винаходу важкий ланцюг може містити одну або декілька амінокислотних замін, вибраних із групи, що включає: Q3E, T97A, T97V, N95D, N95E, N95K, N95Q, N93Q/N95T, K144R, L164 і L165A, щодо послідовності дикого типу. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент містить важкий ланцюг, що несе одну або декілька амінокислотних замін, вибраних із групи, що включає: Q3E, T97A, T97V, N95D, N95E, N95K, N95Q, N93Q/N95T, K144R, L164A і L165A, а легкий ланцюг несе одну або обидві наступні амінокислотні заміни: R100G і A153G. Антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, представлене/представлений у даному описі, може включати VH-CDR1, що має амінокислотну послідовність SYGMH (SEQ ID NO: 4) або SHAMH (SEQ ID NO: 333). Антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, представлене/представлений у даному описі, може включати VH-CDR2, що має амінокислотну послідовність LTYHHGNRKFYADSVRG (SEQ ID NO: 5) або VIWHDGSKKYYADSVKG (SEQ ID NO: 334). Антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, представлене/представлений у даному описі, може включати VH-CDR3, що має амінокислотну послідовність ESMGAINDN (SEQ ID NO: 6) або EWVGGTCDS (SEQ ID NO: 335). Антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, представлене/представлений у даному описі, може включати VL-CDR1, що має амінокислотну послідовність IGNNNNIGSHAVG (SEQ ID NO: 7) або SGNSSNIGSYAVG (SEQ ID NO: 330). Антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, представлене/представлений у даному описі, може включати VL-CDR2, що має амінокислотну послідовність GRSPPS (SEQ ID NO: 8) або GKSPAS (SEQ ID NO: 331). Антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, представлене/представлений у даному описі, може включати VL-CDR3, що має амінокислотну послідовність STWDSSLSAVV (SEQ ID NO: 9) або STWDSRLSAVL (SEQ ID NO: 332). У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, що/який специфічно зв'язується з hGM-CSF, містить 6 різних CDR, послідовності яких представлені у SEQ ID NO: 4-9. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, що/який специфічно зв'язується з hGM-CSF, містить 6 різних CDR, послідовності яких представлені у SEQ ID NO: 330-335. У кожному з варіантів здійснення винаходу антитіло може включати важкий ланцюг, що представляє собою ланцюг типу гамма 1 (γ 1), гамма 2 (γ2), гамма 3 (γ3) або гамма 4 (γ4), і легкий ланцюг, що представляє собою каппа- або лямбда-ланцюг. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, представлене/представлений у даному описі, може включати додатково сигнальну послідовність, наприклад, представлену у SEQ ID NO: 324, 325 і 326. Під обсяг винаходу підпадають послідовності дикого типу, а також їхні варіанти. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або його фрагмент містить важкий ланцюг, послідовність якої представлена у SEQ ID NO: 10, або її варіант, вибраний з SEQ ID NO: 11-33, 38-80, і містить також легкий ланцюг, послідовність якої представлена у SEQ ID NO: 34, або її варіант, вибраний з SEQ ID NO: 35-37. У деяких варіантах здійснення важкий ланцюг має послідовність, що представлена у SEQ ID NO: 160, або її варіант, вибраний з SEQ ID NO: 161245, а легкий ланцюг має послідовність, що представлений у SEQ ID NO: 202, або її варіант, вибраний з SEQ ID NO: 203-221. У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент містить варіабельну область важкого ланцюга, де варіабельна область важкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у SEQ ID NO: 152, або її варіант, вибраний з групи, що включає SEQ ID NO: 153-158 і 159, і варіабельна область легкого ланцюга, де варіабельна область легкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у SEQ ID NO: 184, або її варіант, вибраний з групи, що включає SEQ ID NO: 185-200 і 201. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність варіабельної області важкого ланцюга представлена у SEQ ID NO: 152. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність варіабельної області легкого ланцюга представлена у SEQ ID NO: 184. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність варіабельної області важкого ланцюга представлена у SEQ ID NO: 152 і амінокислотна послідовність варіабельної області легкого ланцюга представлена у SEQ ID NO: 184. В одному з варіантів здійснення винаходу антитіло належить до класу (підкласу) IgG 1(λ). У деяких варіантах здійснення винаходу антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент містить варіабельну область важкого ланцюга, де варіабельна область важкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у SEQ ID NO: 348, або її варіант, вибраний з групи, що включає SEQ ID NO: 349-362 і 363, і варіабельна область легкого ланцюга, де варіабельна 3 UA 102085 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 область легкого ланцюга має амінокислотну послідовність, представлену у SEQ ID NO: 364 або SEQ ID NO: 365. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність варіабельної області важкого ланцюга представлена у SEQ ID NO: 348. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність варіабельної області легкого ланцюга представлена у SEQ ID NO: 364. В одному з варіантів здійснення винаходу амінокислотна послідовність варіабельної області легкого ланцюга представлена у SEQ ID NO: 365. В одному з варіантів здійснення винаходу антитіло належить до класу (підкласу) IgG 1(λ). В одному з варіантів здійснення винаходу моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка, що/яка має здатність зв'язуватися з hGM-CSF (hGM-CSF) і нейтралізувати біологічну активність hGM-CSF, як представлено у даному описі, відрізняється тим, що містить гіперваріабельну ділянку (CDR), що має одну або декілька амінокислотних послідовностей, вибраних із групи, що включає SEQ ID NO: 4-9 і SEQ ID NO: 330-335. У деяких варіантах здійснення винаходу можна у CDR заміняти, вилучати шляхом делеції, вбудовувати або додавати одну або декілька амінокислот. Моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка, представлене/представлена у даному описі, може відрізнятися тим, що моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка інгібує проліферацію клітин лінії TF-1 приблизно на 50% при використанні у концентрації приблизно 14пМ, коли проліферацію клітин лінії TF-1 індукують за допомогою hGM-CSF. У деяких варіантах здійснення винаходу моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка інгібує проліферацію дендритних клітин периферичної крові. В одному з варіантів здійснення винаходу моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка, представлене/представлена у даному описі, має аффінність до -10 зв'язування з hGM-CSF, для якої характерне значення KD 4×10 M або нижче. У деяких варіантах здійснення винаходу моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка, представлене/представлена у даному описі, належить до класу (підкласу) IgG1(λ). У деяких варіантах здійснення винаходу моноклональне антитіло до hGMCSF, запропоноване у даному винаході, являє собою людське моноклональне антитіло. Винахід відноситься також до нуклеїнових кислот і векторів, що містять їх. Одним з варіантів здійснення винаходу є виділена нуклеїнова кислота, що кодує моноклональне антитіло до hGMCSF або його антигензв’язуючий фрагмент, представлене/представлений у даному описі. В одному з варіантів здійснення винаходу нуклеїнова кислота являє собою ДНК. Одним з варіантів здійснення винаходу є вектор, що містить ДНК, яка кодує моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуючу ділянку, представлене/представлену у даному описі. Винахід відноситься також до клітини-хазяїна, що містить експресійний вектор, який містить ДНК-вектор, запропонований у винаході. Винахід відноситься також до набору, що містить: (а) антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, запропоноване/запропонований у винаході; і (б) один або декілька контейнерів, що містять антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент. Одним з варіантів здійснення винаходу є моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуючий фрагмент, запропоноване/запропонований у винаході, призначений/призначене для застосування у медицині. У винаході запропоновані композиції, що містять антитіло до hGM-CSF або його фрагмент, що/який зв'язується й нейтралізує hGM-CSF. Зазначена композиція може являти собою фармацевтичну композицію (наприклад, лікарський засіб), що містить антитіло до hGM-CSF і/або його фрагмент (або їхню комбінацію) і фармацевтично прийнятний носій. Під обсяг винаходу підпадає антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, зазначене/зазначений вище у кожному з варіантів здійснення винаходу. Відповідно до інших варіантів здійснення винаходу композиція містить більше одного виду антитіл до GM-CSF, їхніх фрагментів або комбінацій, які всі представлені у даному описі. Наприклад, композиція може включати також друге виділене антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, що/який зв'язується з hGM-CSF, у результаті композиція містить більше одного (декілька) виду/типу антитіл, їх антигензв’язуючих фрагментів або їхніх комбінацій, які всі зв'язуються з GM-CSF. У деяких варіантах здійснення щонайменше одне з декількох антитіл, їх антигензв’язуючих фрагментів або їхніх комбінацій, що зв'язуються з hGMCSF, являє собою поліпептид, вибраний з групи, що включає: SEQ ID NO: 10-80, 152-245, 320323 і 348-365. Винахід відноситься також до композиції медичного призначення, придатної для застосування з метою лікування захворювання, що викликається hGM-CSF, що містить: моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуючу ділянку, зазначене/зазначену у 4 UA 102085 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 будь-якому варіанті здійснення винаходу, і фармацевтично прийнятний носій. Прикладами хвороб, що викликаються надлишковим виробництвом hGM-CSF, є: а) алергійні захворювання, такі як астма, атопія й поліноз (алергійний риніт; сінна лихоманка); б) відторгнення трансплантата й реакція «трансплантат-проти-хазяїна» (GVHD), і в) аутоімунні захворювання, такі як ревматоїдний артрит. Зазначені композиції або ветеринарна лікарська композиція може містити цілий ряд видів моноклональних антитіл до hGM-CSF або їх антигензв’язуючих ділянок, специфічних для одного конкретного антигену, і фармацевтично прийнятний носій. У деяких варіантах здійснення композиція медичного призначення або ветеринарна лікарська композиція відрізняється тим, що декілька видів моноклональних антитіл, що входять до її складу, до hGM-CSF або їх антигензв’язуючих ділянок містять два або більшу кількість типів антитіл або їх антигензв’язуючих ділянок, можна вибирати із представлених нижче у підпунктах (а) і (б): (а) моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка, що/яка містить CDR, що має амінокислотну послідовність, яка представлена у SEQ ID NO: 4-9, SEQ ID NO: 330335, SEQ ID NO: 336-341 або SEQ ID NO: 342-347, і має специфічність у відношенні hGM-CSF, (б) моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка, зазначене/зазначена у підпункті (а), що має амінокислотну послідовність, в якій одна або декілька амінокислот замінена(і), вилучена(і) у результаті делеції, вбудована(і) або приєднана(і), і яке/яка має специфічність у відношенні hGM-CSF. Така композиція медичного призначення або ветеринарна лікарська композиція може інгібувати проліферацію клітин лінії TF-1 на 80% або більше при застосуванні кожної з них у концентрації приблизно 55пМ, коли проліферацію клітин лінії TF-1 індукують за допомогою hGM-CSF. Одним з об'єктів винаходу є також набір, що містить кожну з композицій, представлених у даному описі, і один або декілька контейнерів. У деяких варіантах здійснення винаходу набір включає також інструкцію. У деяких варіантах здійснення винаходу набір включає також етикетку, інструкцію або включає й етикетку, і інструкцію. Винахід відноситься також до застосування антитіла або його антигензв’язуючого фрагмента, представленого у даному описі, або композиції, що містить зазначене антитіло або фрагмент. Будь-яке представлене у даному описі антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуючий фрагмент або композицію можна застосовувати для виробництва або одержання лікарського засобу, призначеного для лікування захворювання або порушення, асоційованого зі надекспресією hGM-CSF в індивідуума, при цьому антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент зв'язується з hGM-CSF і має здатність нейтралізувати активність hGM-CSF. У деяких варіантах здійснення винаходу захворювання або порушення вибирають з групи, що включає: хронічне обструктивне захворювання легенів (ХОЗЛ), астму, муковісцидоз, інтерстиціальне легеневе захворювання, риніт, артрит і родинні артропатії, псоріаз, мієлоїдний лейкоз, розсіяний склероз. Для застосування відповідно до зазначених показань антитіло або антигензв’язуючий фрагмент вводять індивідуумові у дозі, що не перевищує максимальну стерпну дозу, де максимальна стерпна доза становить приблизно 500 мг на дозу. Одним із об'єктів винаходу є застосування антитіла або його антигензв’язуючого фрагмента або композиції, представлених у кожному із зазначених вище варіантів здійснення винаходу, для лікування захворювання або порушення, асоційованого зі надекспресією hGM-CSF в індивідуума, при цьому антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент зв'язується з hGM-CSF і має здатність нейтралізувати активність hGM-CSF. Наприклад, захворювання або порушення може являти собою хронічне обструктивне захворювання легенів (ХОЗЛ), астму, муковісцидоз, інтерстиціальне легеневе захворювання, риніт, артрит і родинні артропатії, псоріаз, мієлоїдний лейкоз або розсіяний склероз. Зазначене застосування передбачає введення антитіла або його антигензв’язуючого фрагмента або композиції, що його містить, запропонованих у винаході, індивідуумові, у дозі, що не перевищує максимальну стерпну дозу, де максимальна стерпна доза становить приблизно 500 мг на дозу. Винахід відноситься також до способів лікування індивідуума, що страждає захворюванням або порушенням, яке асоційоване з аномальною експресією hGM-CSF, за допомогою антитіла до hGM-CSF або його фрагмента. Спосіб полягає у тому, що вводять індивідуумові, в якого діагностовано або котрий має ризик розвитку захворювання або порушення, асоційованого з аномальною експресією (наприклад, надекспресією) hGM-CSF, композицію, що містить антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуючий фрагмент, що нейтралізує активність hGM-CSF in vivo, у кількості, достатній для досягнення щонайменше однієї терапевтичної дії на індивідуума. 5 UA 102085 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Винахід відноситься також до способу підвищення опосередковуваної антитілом до hGMCSF нейтралізуючої активності у відношенні hGM-CSF, який відрізняється тим, що вводять одночасно декілька видів моноклональних антитіл до hGM-CSF або їх антигензв’язуючих ділянок, специфічних у відношенні того самого конкретного антигену. У деяких варіантах здійснення винаходу два або більша кількість антитіла або їх антигензв’язуючих ділянок вибирають зі зазначених у підпунктах (а) і (б): (a) моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка, що/яка містить CDR, що має амінокислотну послідовність, яка представлена у SEQ ID NO: 4-9, SEQ ID NO: 330335, SEQ ID NO: 336-341 або SEQ ID NO: 342-347, і має специфічність у відношенні hGM-CSF, (б) моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуюча ділянка, зазначене/зазначена у підпункті (а), що має амінокислотну послідовність, в якій одна або декілька амінокислот замінена(і), вилучена(і) у результаті делеції, вбудована(і) або приєднана(і), і яке/яка має специфічність у відношенні hGM-CSF. Об'єктами винаходу є способи підвищення активності, які відрізняються тим, що два або декілька типів антитіл або їх антигензв’язуючих ділянок інгібують проліферацію клітин лінії TF-1 на 80% або більше при використанні кожного з них у концентрації приблизно 55пМ, коли проліферацію клітин лінії TF-1 індукують за допомогою hGM-CSF. Винахід відноситься також до епітопу hGM-CSF, що розпізнається антитілами і їх антигензв’язуючими фрагментами, представленими у даному описі. Епітоп hGM-CSF являє собою поліпептиди, послідовності яких представлені у SEQ ID NO: 2 і 3, де епітоп розпізнається антитілом або його антигензв’язуючим фрагментом, представленим у даному описі, і де поліпептидні послідовності являють собою переривчастий сегмент hGM-CSF (представлений у SEQ ID NO: 1). Епітоп являє собою переривчастий сегмент людського GM-CSF, в якому епітоп містить всі або частину амінокислотних залишків 77-80 людського GM-CSF (SEQ ID NO: 1) і амінокислотні залишки 95-104 людського GM-CSF (SEQ ID NO: 1), і розпізнається моноклональним антитілом до hGM-CSF або його антигензв’язуючим фрагментом, містить 6 різних CDR, послідовності яких представлені у SEQ ID NO: 4-9 або SEQ ID NO: 330-335. Винахід відноситься також до застосування епітопу, запропонованого у винаході. Винахід відноситься також до способів скринінгу й/або ідентифікації молекули, що специфічно зв'язується з епітопом, представленим у даному описі, що розпізнається антитілами й антигензв’язуючими фрагментами, представленими у даному описі. Деякими варіантами здійснення винаходу є способи ідентифікації молекули, що зв'язується з епітопом, представленим у даному описі, які полягають у тому, що (I) здійснюють скринінг біологічного зразка або пептидної бібліотеки за допомогою зонда, що містить епітоп; (II) виділяють молекулу, що специфічно зв'язується з зондом; і (III) ідентифікують молекулу. Молекула, що зв'язується з епітопом, може являти собою, наприклад, моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуючий фрагмент. Деякими варіантами здійснення винаходу є зонд, що включає маркер, який виявляється також. У деяких варіантах здійснення винаходу спосіб полягає у тому, що зонд є іммобілізованим. Винахід відноситься також до способів і процесів одержання антитіл до hGM-CSF і їх антигензв’язуючих фрагментів. Винахід відноситься також до способів одержання у клітиніхазяїні моноклонального антитіла до hGM-CSF або його антигензв’язуючого фрагмента, що/який зв'язується з hGM-CSF, в яких антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент включає щонайменше консенсусну VH-CDR1-утримуючу послідовність, консенсусну VH-CDR2-утримуючу послідовність, консенсусну VH-CDR3-утримуючу послідовність, консенсусну VL-CDR1-утримуючу послідовність, консенсусну VL-CDR2-утримуючу послідовність і консенсусну VL-CDR3-утримуючу послідовність. Спосіб полягає у тому, що здійснюють стадії, на яких: (I) одержують клітину-хазяїна, що містить щонайменше одну послідовність ДНК, яка кодує щонайменше консенсусну VH-CDR1-утримуючу послідовність, консенсусну VH-CDR2-утримуючу послідовність, консенсусну VH-CDR3-утримуючу послідовність, консенсусну VL-CDR1-утримуючу послідовність, консенсусну VL-CDR2-утримуючу послідовність і консенсусну VL-CDR3-утримуючу послідовність, де: (a) консенсусна VH-CDR1-утримуюча послідовність являє собою FTFSX 1X2MH (SEQ ID NO: 314), в якій X1 означає Y або H і X2 означає G або A, (б) консенсусна VH-CDR2-утримуюча послідовність являє собою X3X4X5HXnGXnX6KX7YADSVX8G (SEQ ID NO: 315), в якій Xn кожний незалежно один від одного означає будь-яку амінокислоту, що зустрічається у природних умовах, X3 означає L або V, X4 означає T або I, X5 означає Y або W, X6 означає R або K, X7 означає F або Y і X8 означає R або K, і 6 UA 102085 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 (в) консенсусна VH-CDR3-утримуюча послідовність являє собою EX nX9GX10XnXnDXn (SEQ ID NO: 316), в якій Xn кожний незалежно один від одного означає будь-яку амінокислоту, що зустрічається у природних умовах, X9 означає M або V і X10 означає A або G, (г) консенсусна VL-CDR1-утримуюча послідовність являє собою X nGNXnXnNIGSX11AVG (SEQ ID NO: 317), в якій Xn кожний незалежно один від одного означає будь-яку амінокислоту, що зустрічається у природних умовах, і X11 означає H або Y, (д) консенсусна VL-CDR2-утримуюча послідовність являє собою GX 12SPX13SG (SEQ ID NO: 318), в якій X12 означає R або K і X13 означає A або P, і (е) консенсусна VL-CDR3-утримуюча послідовність являє собою STWDSX 14LSAVX15 (SEQ ID NO: 319), в якій X14 означає R або S і X15 означає V або L; (II) експресують ДНК у клітині-хазяїні; і (III) культивують клітину-хазяїна в умовах, придатних для експресії ДНК і виробництва антитіла або його антигензв’язуючого фрагмента. У деяких варіантах здійснення винаходу щонайменше одна ДНК кодує важкий ланцюг або його ділянку й легкий ланцюг або його ділянку, де важкий ланцюг або його ділянку вибирають з групи, що включає: SEQ ID NO: 10-33, 38-80, 152-183, 222-245, 348-362 і 363, і легкий ланцюг або його ділянку вибирають з групи, що включає: SEQ ID NO: 34-37, 184-221, 364 і 365. Зазначений вище процес може включати також виділення антитіла або його антигензв’язуючого фрагмента. Зазначений вище процес може включати також одержання композиції, що містить антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент і фармацевтично прийнятний носій. Винахід відноситься також до векторів, що містять ДНК, яка кодує щонайменше ділянку антитіл або їх антигензв’язуючих фрагментів, представлених у даному описі. Під обсяг винаходу підпадають також клітини-хазяїни, що експресують вектор. У деяких варіантах здійснення винаходу вектор містить ДНК, яка кодує V H-CDR1, VH-CDR2 і VH-CDR3, де: VH-CDR1 являє собою SYGMH (SEQ ID NO: 4) або SHAMH (SEQ ID NO: 333), VH-CDR2 являє собою LTYHHGNRKFYADSVRG (SEQ ID NO: 5) або VIWHDGSKKYYADSVKG (SEQ ID NO: 334) і VH-CDR3 являє собою ESMGAINDN (SEQ ID NO: 6) або EWVGGTCDS (SEQ ID NO: 335). У деяких варіантах здійснення винаходу вектор містить ДНК, яка кодує VL-CDR1, VL-CDR2 і VL-CDR3, де VL-CDR1 являє собою IGNNNNIGSHAVG (SEQ ID NO: 7) або SGNSSNIGSYAVG (SEQ ID NO: 330), VL-CDR2 являє собою GRSPPSG (SEQ ID NO: 8) або GKSPASG (SEQ ID NO: 331) і VL-CDR3 являє собою STWDSSLSAVV (SEQ ID NO: 9) або STWDSRLSAVL (SEQ ID NO: 332). У деяких варіантах здійснення винаходу виділена ДНК кодує моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуючу ділянку, що має здатність зв'язуватися з hGM-CSF і нейтралізувати біологічну активність hGM-CSF, при цьому виділена ДНК кодує амінокислотну послідовність, таку як щонайменше одну послідовність, вибрану із групи, що включає SEQ ID NO: 4-9. У деяких варіантах здійснення винаходу виділена ДНК кодує моноклональне антитіло до hGM-CSF або його антигензв’язуючу ділянку, що має здатність зв'язуватися з hGM-CSF і нейтралізувати біологічну активність hGM-CSF, при цьому виділена ДНК кодує амінокислотну послідовність, таку як щонайменше одну послідовність, вибрану із групи, що включає SEQ ID NO: 330-335. Виділена ДНК може мати здатність гібридизуватися у суворих умовах із ДНК, описаної вище. Ще одним об'єктом винаходу є вектори, що включають будь-яку зазначену ДНК, а також клітини-хазяїни, які експресують рекомбінантний(і) вектор(и). Короткий опис креслень На кресленнях показано: на фіг. 1 - блок-схема виділення продукуючих антитіла клонів клітин; на фіг. 2 - схема аналізу аффінності моноклональних антитіл до GM-CSF; на фіг. 3 - результати оцінки інгібуючої дії моноклональних антитіл до GM-CSF на проліферацію дендритних клітин периферичної крові у присутності GM-CSF; на фіг. 4 - результати оцінки інгібуючої дії моноклональних антитіл до GM-CSF на проліферацію клітин лінії TF-1 у присутності дріжджового hGM-CSF (лейкін); на фіг. 5 - результати оцінки інгібуючої дії моноклональних антитіл до GM-CSF на проліферацію клітин лінії TF-1 у присутності hGM-CSF з E. coli (фірма Peprotech); 7 UA 102085 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 на фіг. 6 - результати оцінки інгібуючої дії при спільному застосуванні двох моноклональних антитіл до GM-CSF на проліферацію клітин лінії TF-1 у присутності дріжджового hGM-CSF (лейкін); на фіг. 7 - результати оцінки інгібуючої дії при спільному застосуванні двох моноклональних антитіл до GM-CSF на проліферацію клітин лінії TF-1 у присутності hGM-CSF з E. coli (фірма Peprotech); на фіг. 8 - два графіки, що демонструють інгібування залежно від дози у присутності: людського GM-CSF (8А) і GM-CSF макака-резус (8Б); на фіг. 9А - стовпчикова діаграма, що демонструє активність мієлопероксидази (MPO), вимірювану у дебрисі бронхоальвеолярної лаважної рідини (БАЛР) з організму мишей, підданих впливу сигаретного диму, - CS: мишей обробляли наповнювачем (300 мкл наповнювача i.p. у день 1 і 3 без впливу сигаретного диму. +CS, ізотип АТ: мишей обробляли i.p. 300 мкл антитіла відповідного ізотипу у день 1 і 3, піддавали впливу сигаретного диму. +CS, антитіло до GM-CSF: мишей обробляли i.p. 300 мкл антитіла до GM-CSF у день 1 і 3, піддавали впливу сигаретного диму. n = 10 на групу, середнє значення ± СКО, *p