2-((5-((3′-метилксантин-7′-іл)метил)-4-метил-4н-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-n’-(3-нітробензиліден)ацетогідразид, що проявляє протитуберкульозну активність

Реферат: Винахід належить до фармацевтичної хімії і може бути застосований в ветеринарній медицині. 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3 UA 115949 C2 (12) UA 115949 C2 нітробензиліден)ацетогідразид містить при N4-атомі ядра 1,2,4-триазолу метильний замісник, в положенні 5 ядра 1,2,4-триазолу метиленовий радикал, поєднаний з 3-метилксантином, двовалентний атом сульфуру, синтон 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду. Забезпечується доступність реактивів для синтезу, нескладна методика отримання, низька гостра токсичність, а також здатність проявляти більш високу протитуберкульозну активність. UA 115949 C2 5 10 15 20 25 30 35 Незважаючи на значні успіхи, досягнуті у вивченні збудника туберкульозу, шляхів занесення його у господарства, які сприяють поширенню захворювання, багато аспектів цієї складної проблеми вивчені недостатньо і туберкульоз великої рогатої худоби в Україні не ліквідовано. Існують осередки інфекції, котрі створюють постійну загрозу занесення збудника у благополучні господарства і становлять велику загрозу зараженню людей. Нерідко трапляються випадки захворювання на туберкульоз тварин навіть в областях, котрі вважалися вільними від даної інфекції, а нові економічні відносини в перехідний період створили додаткові проблеми в ліквідації туберкульозу великої рогатої худоби в Україні (Ткаченко О.А., Зажарський В.В., 2013). Цьому сприяють штучно створені унікальні можливості: взаємодія в замкнутому середовищі мікро- та макроорганізму за багаточисельних пасажів різного ступеня вірулентності збудника протягом років через організм тварини з високою чи низькою природною резистентністю, нестерильним спонтанно набутим імунітетом. Це, безперечно, може призвести до виникнення нових рас мікобактерій з іншими властивостями (Ткаченко О.А., Зажарський В.В., Давиденко П.О., 2013-2015). Підтримка епізоотичного процесу туберкульозу відбувається за циркуляції М. bovis як повільно-, так і швидкорослих штамів, які змінюють структуру інфікованого поголів'я та характер прояву інтенсивності алергічних реакцій на ППД-туберкулін для ссавців. Значна мінливість мікобактерій безперечно впливає на розвиток епізоотичного, інфекційного процесів та ефективність діагностики. До цього часу остаточно не з'ясовано, які фактори суттєво впливають на М. bovis. Існуючі експериментальні дані свідчать, що мінливість збудника туберкульозу відмічається за впливу антибіотиків, туберкулостатичних препаратів. Дотепер не з'ясовані морфологічні аспекти конверсії мікобактерій (Kazuhiro Matsuo and Yasuhiro Yasutomi, 2011; Дорошкова И.Р., 2012). Дослідження впливу туберкулостатичних препаратів та морфологічних аспектів конверсії мікобактерій є пріоритетним напрямом у ветеринарній медицині. Задачею винаходу є дослідження впливу концентрації 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду і рН середовища на культивування патогенних штамів М. bovis за температур 37 °C. Поставлена задача вирішується тим, що проводять культивування патогенних штамів М. bovis за температури 37 °C на середовищі із рН 6,5 та 7,1, що додатково містить 2-((5-((3'метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3нітробензиліден)ацетогідразид у масових концентраціях 0,1; 0,5; 1 %. 2-((5-((3'-Метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4Н-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3нітробензиліден)ацетогідразид містить при N4-aтомi ядра 1,2,4-триазолу метильний замісник, в положенні 5 ядра 1,2,4-триазолу метиленовий радикал, поєднаний з 3-метилксантином, двовалентний атом Сульфуру, синтон 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду, і має формулу: O N HN O N N N CH2 N O N S NH CH3 H3C 40 45 50 H CH2 C N C NO2 Сполуку, що заявляється, отримують шляхом взаємодії 2-(5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетогідразиду з 3-нітробензальдегідом у середовищі пропан1-олу. Приклад 1 У круглодонну колбу, обладнану змішувачем, холодильником та термометром, завантажують 498 г (1 моль) (2-(5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3ілтіо)ацетогідразиду, 1500 мл пропан-1-олу та 151 г (1 моль) 3-нітробензальдегіду. Суміш нагрівають до 70 °C протягом 2 годин. Розчинник відганяють. Продукт реакції промивають водою та гексаном. Сушать. Вихід 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 77 % в розрахунку на (2-(5-((3'метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетогідразид. Жовта кристалічна речовина з температурою плавлення 188-190 °C (кристалізовано з етанолу), розчинна у ДМФА та 1,4-діоксані, малорозчинна в діетиловому ефірі та хлороформі, практично нерозчинна у воді. 1 UA 115949 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Елементний аналіз. Знайдено, %: С 45,67, Н 3,65, N 28,12, S 6,44. Вирахувано, %: С 45,78, Н 3,64, N 28,10, S 6,43. В ІЧ-спектрі 2-((5-((теофілін-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3нітробензиліден)ацетогідразиду присутні характеристичні полоси поглинання валентних -1 -1 коливань NH-групи середньої інтенсивності при 3410 см , карбонілу NНС=O-групи при 1690 см -1 -1 та при 1655 см , С=N-зв'язку у циклі при 1640-1605 см . 1 В Н ЯМР-спектрі сигнали метильних груп проявляються у вигляді синглетів при 3,50-4,33 м. ч., сигнали метиленових груп - у вигляді синглетів при 3,95 та при 5,65 м. ч. Протони фенільного фрагменту 3-нітробензиліденового синтону спостерігаються у вигляді двох дублетів при 7,58 та 7,68 м.ч. і двох триплетів при 7,23 м. ч. та 7,51 м. ч. Сигнал NH проявляється при 8,10 м. ч. у вигляді синглету. Синглет при 8,35 м. ч. належить протонам азометинової групи. 1 3' 4 Спектр ЯМР Н, δ, м.ч.: 3,50 (3Н, с, N CH3), 4,33 (3Н, с, N CH3), 3,95 (2Н, с, СН2), 5,65 (2Н, с, СН2), 7,23 (2Н, т, С6Н4), 7,51 (2Н, т, С6Н4), 7,58 (2Н, д, С6Н4), 7,68 (2Н, д, С6Н4), 8,10 (1Н, с, NH), 8,35 (1H, с, N=CH). Культивування та накопичення біомаси досліджуваних штамів М. bovis проводили на яєчному живильному середовищі, яке за складом було ідентичним стандартному, виготовленому ДП "Ветеринарна медицина" (м. Харків, Україна). До середовища додавали 2((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3нітробензиліден)ацетогідразид для отримання концентрацій 0,1 %; 0,5 %; 1 %. Дослідження проводили зі встановленням двох рівнів рН: 6,5 та 7,1. Відмірювання необхідної кількості препарату проводили згідно з ГОСТ 27025-86. Розчини готували згідно методик, описаних у ГОСТ 4212-76 та ГОСТ 4517-87. У виділених та накопичених мікобактерій вивчали тинкторіальні властивості, морфологічні ознаки, а також строки появи первинного росту, його інтенсивність і характер субкультури. Аналіз та оцінку колоній проводили за кількістю, величиною, формою, поверхнею, консистенцією, пігментоутворенням, прозорістю, блиском та емульгованістю у фізіологічному розчині (Манченко В.М., Троценко З.Р., Павленко М.С. та ін., 1994; Ткаченко О.А., Білан М.В., Зажарський В.В., Ковальова Л.О., 2010). Тинкторіальні властивості мікобактерій визначали, готуючи мазки із колоній (культур), зафарбованих за методом Ціля-Нільсена, та досліджуючи їх під імерсією мікроскопа SUNNY серії XS із цифровим мікроскопічним комплексом "Микмед-21600" (Санкт-Петербург, Росія). Морфологію мікобактерій визначали за: довжиною, товщиною, формою, характером кінців клітин, зернистістю та розташуванням. Гравіметричні вимірювання виконували на лабораторних електронних аналітичних вагах моделі ESJ-200-4 (США). Приклад 2 На початку досліду виявляли вплив концентрації препарату та рН середовища на інтенсивність росту культури за температур 37 °C. Для цього відбирали М. bovis 100 пасажу, який культивували за температури 37 °C на середовищі з 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4метил-4Н-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразидом у зазначених концентраціях у термостаті протягом трьох місяців на середовищі з рН 6,5 (в кількості десять пробірок із кожною концентрацією препарату) та рН 7,1 (в кількості десять пробірок із кожною концентрацією препарату). В якості контролю використовували М. bovis 100 пасажу без додавання до середовища 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду. Після закінчення цих термінів так само, як і після культивування за температури 37 °C, проводили облік й характеризували ріст колоній мікобактерій (культур). (Манченко В.М., Троценко З.Р., Павленко М.С. та ін., 1994). У підсумку були одержані дані впливу концентрацій 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4метил-4Н-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду на культивування М. bovis за температур 37 °C на середовищі з різним рН на інтенсивність росту культури. У таблиці 1 систематизовано дані про культуральні властивості М. bovis 100 пасажу, який культивували на середовищі з рН 7,1, що додатково містить 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразид у трьох концентраціях. До 7 доби досліду ріст культури 100 пасажу М. bovis в контрольній групі на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C не відмічався. Результати, наведені в табл. 1, засвідчили відсутність росту культури М. bovis 100 пасажу за усіх (0,1, 0,5 та 1 %) концентрацій 2-((5-((3'-метилксантин-7'-iл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду впродовж усього періоду спостереження (90 діб), що свідчить про туберкулостатичну дію препарату. 60 2 UA 115949 C2 Таблиця 1 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C Контроль Шорсткий наліт Контроль 7-а доба досліду Концентрація 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 0,1 % 0,5 % 1% Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній 14-а доба досліду Концентрація 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 0,1 % 0,5 % 1% Шорсткий наліт та поодинокі білі колонії Ріст відсутній за лінією посіву ріст. дрібні Без змін білуватого ріст. дрібні Ріст відсутній білуватого Контроль Суцільний ріст 5 Без змін Без змін 60-а доба досліду Концентрація препарату 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 0,1 % 0,5 % 1% Контроль Суцільний Гладенькі, колонії кольору Ріст відсутній 30-а доба досліду Концентрація 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 0,1 % 0,5 % 1% Контроль Суцільний Гладенькі, колонії кольору Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній 90-а доба досліду Концентрація 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл) метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 0,1 % 0,5 % 1% Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній У таблиці 2 систематизовано дані щодо культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, який культивували на середовищі з рН 6,5, яке додатково містило 2-((5-((3'-метилксантин-7'іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразид у трьох концентраціях. До 7-ї доби досліду ріст культури 100 пасажу М. bovis на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C не відмічався. Таблиця 2 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C Контроль 7-а доба досліду Концентрація 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі колонії за Ріст відсутній лінією посіву Контроль Ріст відсутній Ріст відсутній 14-а доба досліду Концентрація 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 3 UA 115949 C2 0,1 % Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, Ріст відсутній гладенькі Контроль 0,5 % Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній 10 15 20 25 Ріст відсутній 90-а доба досліду Концентрація препарату 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, Ріст відсутній гладенькі 5 Ріст відсутній 60-а доба досліду Концентрація препарату 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, Ріст відсутній гладенькі Контроль Ріст відсутній 30-а доба досліду Концентрація 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4триазол-3-іл)тіо)-N'-(3-нітробензиліден)ацетогідразиду 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, Ріст відсутній гладенькі Контроль 1% Ріст відсутній Ріст відсутній За результатами досліду видно, що дія препарату за різних концентрацій на середовищі з рН 6,5 не відрізняється від рН 7,1. За всіма дослідними (0,1, 0,5 та 1,0 %) концентраціями 2-((5((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3нітробензиліден)ацетогідразиду нами відмічена відсутність росту патогенного штаму М. bovis 100 пасажу протягом всього періоду спостереження (90 діб). Таким чином, можна зробити висновок, що 0,1, 0,5 % та 1,0 % концентрації 2-((5-((3'метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3нітробензиліден)ацетогідразиду активно впливають на культуральні властивості патогенного штаму М. bovis, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C, стримуючи ріст і розвиток, володіючи туберкулостатичною дією. Приклад 3 Використовувався класичний туберкулостатичний препарат ізоніазид за різних концентрацій, рН середовища та температури 37 °C. Ізоніазид, згідно класифікації протитуберкульозних препаратів міжнародної спілки боротьби із туберкульозом, відноситься до І групи - препарати високої ефективності. В якості контролю використовували М. bovis 100 пасажу без додавання до середовища препарату ізоніазид. Для цього відбирали М. bovis 100 пасажу, який культивували за температури 37 °C на середовищі з препаратом ізоніазид у зазначених концентраціях у термостаті протягом трьох місяців на середовищі з рН 6,5 та рН 7,1 (в кількості десять пробірок із кожною концентрацією препарату). У виділених мікобактерій вивчали строки появи первинного росту, його інтенсивність і характер субкультури. У таблиці 3 систематизовано дані про культуральні властивості М. bovis 100 пасажу, який культивували на середовищі з рН 7,1, що додатково містить препарат ізоніазид у трьох концентраціях. До 7-ї доби досліду ріст культури 100 пасажу М. bovis на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C не відмічався. 4 UA 115949 C2 Таблиця 3 Характеристика культуральних властивостей 100 пасажу М. bovis, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C 7-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Слизовий наліт Слизовий наліт Слизовий наліт Ріст відсутній жовтуватого кольору 14-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі гладенькі Без змін Без змін Ріст відсутній колонії 30-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Численні колонії білого Поодинокі колонії Дрібні колонії білого Ріст відсутній кольору білуватого кольору кольору 60-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст. Дещо збільшилася Гладенькі, дрібні Дрібні колонії білого кількість поодиноких Ріст відсутній колонії білуватого кольору дрібних колоній кольору 90-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Дещо збільшилася Суцільний ріст Суцільний ріст кількість поодиноких Ріст відсутній дрібних колоній 5 10 15 Характеризуючи отримані дані, що наведені в таблиці 4 нами визначена відсутність росту культури М. bovis 100 пасажу за 1 % концентрації препарату ізоніазид. На сьому добу досліду за 0,1 % концентрації виявлений слизовий наліт жовтуватого кольору, на 30-у добу з'являються поодинокі дрібні білуватого кольору, на 60-добу їх кількість збільшується і на 90-у добу визначаємо суцільний ріст, як і в контролі. За використання 0,5 % концентрації препарату ізоніазид на 7-у добу виявлений слизовий наліт, на 14 добу досліду з'являються поодинокі гладенькі колонії, на 30 та 60 добу - дрібні колонії білого кольору. На 90 добу збільшилася кількість поодиноких дрібних колоній. Аналізуючи 1 % концентрацію препарату ізоніазид нами визначено відсутність росту патогенного штаму М. bovis 100 пасажу протягом усього періоду досліду (90 діб), що свідчить про туберкулостатичну дію препарату. Культуральні властивості М. bovis 100 пасажу, накопиченого та культивованого на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C з препаратом ізоніазид у трьох концентраціях представлений в таблиці 4. До 14 доби досліду ріст культури 100 пасажу М. bovis на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C не відмічався. Таблиця 4 Характеристика культуральних властивостей 100 пасажу М. bovis, культивованих на середовищі з рН 6,5 з препаратом ізоніазид за температури 37 °C Контроль Слизовий наліт 7-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % Поодинокі колонії Шорсткий наліт білуватого кольору 5 1% Ріст відсутній UA 115949 C2 Контроль Поодинокі колонії білуватого кольору Контроль Численні колонії білого кольору Контроль Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, гладенькі Контроль Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, гладенькі 5 10 15 14-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % Поодинокі гладенькі Без змін колонії 30-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % Поодинокі колонії Дрібні колонії білого білуватого кольору кольору 60-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % Ріст білуватих, Ріст білуватих, поодиноких гладеньких поодиноких гладеньких колоній колоній 90-а доба досліду Концентрація препарату ізоніазид 0,1 % 0,5 % Збільшилася кількість Збільшилася кількість поодиноких дрібних поодиноких дрібних колоній колоній 1% Ріст відсутній 1% Поодинокі дрібні колонії за лінією посіву 1% Без змін 1% Збільшилася поодиноких колоній кількість дрібних Аналізуючи результати досліду, що наведено в табл. 4, нами визначені відмінності дії 1 % концентрації препарату ізоніазид на середовищі з рН 6,5, ніж за рН 7,1. Якщо на середовищі з рН 7,1 ріст культури М. bovis 100 пасажу протягом 90 діб культивування не спостерігався, то на середовищі з рН 6,5 з 30 доби з'являються поодинокі дрібні колонії, кількість яких на 90 добу збільшувалась. 0,1 % концентрація препарату ізоніазид незначно впливає на ріст М. bovis - вже на 7 добу виявлені поодинокі колонії білуватого кольору, кількість яких поступово збільшується з терміном спостереження. За 0,5 % концентрації препарату ізоніазид ріст колоній відмічається на 14 добу - колонії дрібні, гладенькі, білого кольору, кількість яких має тенденцію до збільшення протягом терміну спостереження. Отже, проведені дослідження засвідчили, що препарат ізоніазид за 1 % концентрації пригнічує ріст і розвиток патогенного штаму М. bovis, культивованого на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C, що свідчить про туберкулостатичну його дію. Низька концентрація (0,1 та 0,5 %) препарату ізоніазид на середовищі з рН 6,5 та 7,1 за температури 37 °C ріст патогенного штаму М. bovis 100-го пасажу не стримує. Таким чином, 2-((5-((3'-метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3нітробензиліден)ацетогідразид у порівнянні з найближчим аналогом більш виражено пригнічує ріст і розвиток патогенного штаму М. bovis. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 20 2-((5-((3'-Метилксантин-7'-іл)метил)-4-метил-4H-1,2,4-триазол-3-іл)тіо)-N'-(3нітробензиліден)ацетогідразид формули: O N HN O N N N CH2 N O N S H CH2 C CH3 NH H3C N C NO2 25 який проявляє протитуберкульозну активність. 6 , UA 115949 C2 Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 7