N’-(2-(5-((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4н-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетил)ізонікотиногідразид, що проявляє протитуберкульозну активність

Реферат: N'-(2-(5-((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетил)-ізонікотиногідразид формули: O H3C O N N N N N CH2 N N O S O C CH2 C C2H5 CH3 який проявляє протитуберкульозну активність. N NH N H , UA 99119 U (12) UA 99119 U UA 99119 U 5 10 Корисна модель належить до фармацевтичної хімії та медицини, і може бути використана у створенні нових біологічно активних сполук, а також оригінальних лікарських засобів у ряду похідних 1,2,4-триазолу і застосована для фармакокорекції туберкульозу. На сьогодні третина населення земної кулі інфікована мікобактеріями туберкульозу. Щорічно в світі на туберкульоз захворюють 7-10 млн. чоловік. Загальна кількість хворих у світі досягає 50-60 млн. Один хворий на туберкульоз може інфікувати в середньому 10-15 здорових осіб, а якщо він буде знаходитись в навчальному закладі чи в громадському транспорті, то ще більше. Це сприяє значному поширенню туберкульозу. Протитуберкульозна терапія, яка зараз застосовується в медицині, потребує удосконалення. Перед усім, за рахунок нових лікарських засобів. Прототипом речовини, що заявляється, є препарат "Ізоніазид", формули: H N O NH2 N 15 20 25 , що використовується як протитуберкульозний засіб (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - X.: Торсинг, 2002. - Т. 2. - 608 с. (С. 306-307)). Суттєві ознаки прототипу і корисної моделі, що збігаються, є такі: - в структурі прототипу і корисної моделі присутні групи C-N, C-N. Корисна модель у порівнянні з прототипом дещо активніше проявляє протитуберкульозну активність відносно Mycobacterium bovis. В основу корисної моделі поставлено задачу створення нових біологічно активних сполук, які можуть застосовуватись як оригінальні лікарські засоби у ряду 1,2,4-триазолу і проявляють протитуберкульозну активність. Поставлена задача вирішується тим, що створено N'-(2-(5-((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетил)ізонікотиногідразид, який проявляє протитуберкульозну дію. N'-(2-(5-((Теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетил)-ізонікотиногідразид містить при N4-атомі ядра 1,2,4-триазолу етиловий замісник, в положенні 5 ядра 1,2,4-триазолу метиленовий радикал, поєднаний з теофіліном, двовалентний атом Сульфуру, синтон гідразиду ізонікотинової кислоти, і має формулу: 30 O H3C O N N N N N CH2 N O S N C2H5 CH3 35 40 45 O C CH2 C N NH N H . Сполуку, що заявляється, отримують шляхом взаємодії метилового естеру (2-(5-((теофілін7-іл)метил)-4-етил-4H-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетатної кислоти з гідразидом кислоти ізонікотинової у середовищі пропан-1-олу. Приклад. У круглодонну колбу, обладнану змішувачем, холодильником та термометром, завантажують 395 г (1 моль) метилового естеру (2-(5-((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H-1,2,4триазол-3-ілтіо)ацетатної кислоти, 1500 мл етанолу та 137 г (1 моль) гідразиду ізонікотинової кислоти. Суміш при постійному перемішуванні кип'ятять 8 год. Розчинник відганяють. Продукт реакції промивають водою та гексаном. Сушать. Вихід N'-(2-(5-((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетил)ізонікотиногідразиду 78 % в розрахунку на метиловий естер (2-(5((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетатної кислоти. Біла кристалічна речовина з температурою плавлення 103-105 °C (кристалізовано з етанолу), розчинна у ДМФА та 1,4-діоксані, малорозчинна в діетиловому ефірі та хлороформі, нерозчинна у воді. 1 UA 99119 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Елементний аналіз Знайдено, %: С 48,19, Н 4,45, N 28,10, S 6,43. Вирахувано, %: С 48,08, Н 4,46, N 28,15, S 6,42. В ІЧ-спектрі N'-(2-(5-((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H-1,2,4-триазол-3ілтіо)ацетил)ізонікотиногідразиду присутні характеристичні полоси поглинання валентних -1 -1 коливань NH-групи середньої інтенсивності при 3410 см , карбонілу NHC=O-групи при 1690 см -1 -1 та при 1655 см , С=N-зв'язку у циклі при 1640-1610 см та С-С і C-N-зв'язків піридинового кільця -1 - при 1540-1435 см . 1 В Н ЯМР-спектрі сигнали метильних груп проявляються у вигляді синглетів при 3,15-3,35 м.ч., сигнали метиленових груп - у вигляді синглетів при 3,85 та при 5,75 м.ч., протони піридинового кільця у вигляді двох дублетів при 7,50-8,65 м.ч. з КССВ Jорто = 5,85, Jмета = 1,2 Гц. Сигнал NH проявляється у межах 9,20-9,65 м.ч. у вигляді синглету. 1 Спектр ЯМР Н, δ, м.ч.: 3,15-3,35 (3Н, с, СН3), 3,85 (2Н, с, СН2), 5,75 (2Н, с, СН2), 7,83-8,70 (4Н, м, С6Н5), 8,32 (1Н, с, СН), 9,20-9,65 (1Н, с, NH), 7,50-8,65 (4Н, дд, піридин). Культивування та накопичення біомаси досліджуваних штамів М. bovis проводили на яєчному живильному середовищі, яке за складом було ідентичним стандартному, виготовленому ДП "Ветеринарна медицина" (м. Харків, Україна). До середовища додавали N'(2-(5-((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетил)ізонікотиногідразид для отримання концентрацій 0,1 %; 0,5 %; 1 %. Дослідження проводили зі встановленням двох рівнів рН: 6,5 та 7,1. Відмірювання необхідної кількості препарату проводили згідно з ГОСТ 27025-86. Розчини готували згідно з методиками, описаними у ГОСТ 4212-76 та ГОСТ 4517-87. Висів мікобактерій, накопичених за температури культивування 3 °C, у кількості двох бактеріологічних петель проводили на скошене живильне середовище в 10 пробірок з наступною інкубацією в термостаті (ТС-1/80 СПУ та ТСО-1/80 СПУ, Росія) впродовж трьох місяців за різних температур (3 та 37 °C), зі щоденним спостереженням. У виділених та накопичених мікобактерій вивчали тинкторіальні властивості, морфологічні ознаки, а також строки появи первинного росту, його інтенсивність і характер субкультури. Аналіз та оцінку колоній проводили за кількістю, величиною, формою, поверхнею, консистенцією, пігментоутворенням, прозорістю, блиском та емульгованістю у фізіологічному розчині (В.М. Манченко, З.Р. Троценко, М.С Павленко та ін., 1994; О.А. Ткаченко, М.В. Білан, В.В. Зажарський, Л.О. Ковальова, 2010). Тинкторіальні властивості мікобактерій визначали, готуючи мазки із колоній (культур), зафарбованих за методом Ціля-Нільсена та досліджуючи їх під імерсією мікроскопа "SUNNY" серії XS із цифровим мікроскопічним комплексом "Микмед-2-1600" (Санкт-Петербург, Росія). Морфологію мікобактерій визначали за: довжиною, товщиною, формою, характером країв клітин, зернистістю та розташуванням. Гравіметричні вимірювання виконували на лабораторних електронних аналітичних вагах моделі ESJ-200-4 (США). Результати наведені в таблицях 1-4. Таблиця 1 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C Контроль Шорсткий наліт Контроль Слизовий наліт Контроль Шорсткий наліт та поодинокі білі колонії за лінією посіву 7-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Ріст відсутній Ріст відсутній Ріст відсутній Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Слизовий наліт Слизовий наліт Ріст відсутній жовтуватого кольору 14-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Ріст відсутній Ріст відсутній 2 Ріст відсутній UA 99119 U Продовження таблиці 1 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 37 °C Контроль Без змін Контроль Суцільний ріст. Гладенькі, дрібні колонії білуватого кольору Контроль Численні колонії білого кольору Контроль Суцільний ріст. Гладенькі, дрібні колонії білуватого кольору Контроль Суцільний ріст. Гладенькі, дрібні колонії білуватого кольору Контроль Суцільний ріст Контроль Суцільний ріст Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,5 % 1% Поодинокі гладенькі Без змін Ріст відсутній колонії 30-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% 0,1 % Шорсткий наліт Шорсткий наліт Без змін Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі колонії Дрібні колонії білого Ріст відсутній білуватого кольору кольору 60-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Шорсткий наліт Шорсткий наліт Ріст відсутній Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Дещо збільшилася Дрібні колонії білого кількість поодиноких Ріст відсутній кольору дрібних колоній 90-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Шорсткий наліт Шорсткий наліт Ріст відсутній Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Дещо збільшилася Суцільний ріст кількість поодиноких Ріст відсутній дрібних колоній Таблиця 2 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C Контроль Поодинокі колонії за лінією посіву Контроль Слизовий наліт 7-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Ріст відсутній. За лінією Ріст відсутній Ріст відсутній посіву шорсткий наліт Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі колонії Шорсткий наліт Ріст відсутній білуватого кольору 3 UA 99119 U Продовження таблиці 2 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 100 пасажу, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 37 °C Контроль Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, гладенькі Контроль Поодинокі колонії білуватого кольору Контроль Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, гладенькі Контроль Численні колонії білого кольору Контроль Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, гладенькі Контроль Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, гладенькі Контроль Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, гладенькі Контроль Суцільний ріст. Колонії дрібні, білі, гладенькі 14-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі дрібні колонії Ріст відсутній Ріст відсутній за лінією посіву Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі гладенькі Без змін Ріст відсутній колонії 30-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Ріст росинчатих білоРіст відсутній Ріст відсутній жовтих колоній Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Поодинокі колонії Дрібні колонії білого Поодинокі дрібні колонії білуватого кольору кольору за лінією посіву 60-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Збільшилася кількість поодиноких дрібних Ріст відсутній Ріст відсутній колоній Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Ріст білуватих, Ріст білуватих, поодиноких гладеньких поодиноких гладеньких Без змін колоній колоній 90-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Ріст крупних шорсткуватих R-форм, які потім Ріст відсутній Ріст відсутній перетворюються в білуваті гладенькі колонії S-форми Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Збільшилася кількість Збільшилася кількість Збільшилася кількість поодиноких дрібних поодиноких дрібних поодиноких дрібних колоній колоній колоній 4 UA 99119 U Таблиця 3 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 117 а варіанта, культивованих на середовищі з рН 7,1 за температури 3 °C Контроль Слизовий наліт сіруватого кольору Контроль Слизовий наліт сіруватого кольору Контроль Слизовий наліт сірувато-жовтого кольору Контроль Слизовий наліт сірувато-жовтого кольору Контроль Суцільний ріст колоній помаранчевого кольору Контроль Суцільний ріст колоній помаранчевого кольору Контроль Суцільний ріст колоній помаранчевого кольору Контроль Суцільний ріст колоній помаранчевого кольору 3-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % Ріст відсутній Ріст відсутній 1% Ріст відсутній Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% Слизовий наліт Ріст слабкий. Поодинокі Слизовий наліт сіруватого кольору за колонії помаранчевого сіруватого кольору за лінією посіву кольору лінією посіву 7-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Слизовий наліт сіруватого кольору Ріст відсутній. За лінією посіву шорсткий наліт Ріст відсутній Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% За лінією посіву Ріст слабкий. Поодинокі Слизовий наліт декілька дрібних колонії сіруватосіруватого кольору за колоній блідопомаранчевого кольору лінією посіву помаранчевого кольору 14-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Шорсткий наліт за лінією Шорсткий наліт за Слизовий наліт посіву ярко вираженого лінією посіву сірого сіруватого кольору помаранчевого кольору Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% За лінією посіву За лінією посіву збільшилась кількість Слизовий наліт декілька дрібних дрібних колоній сіруватого кольору за колоній блідосірувато-помаранчевого лінією посіву помаранчевого кольору кольору 30-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% За лінією посіву декілька Шорсткий наліт за Суцільний ріст колоній дрібних колоній лінією посіву сірого помаранчевого кольору помаранчевого кольору кольору Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% За лінією посіву збільшилась кількість Ріст слабкий. Поодинокі Суцільний ріст колоній дрібних колоній колонії блідопомаранчевого кольору сірувато-помаранчевого помаранчевого кольору кольору 5 UA 99119 U Таблиця 4 Характеристика культуральних властивостей М. bovis 117 а варіанта, культивованих на середовищі з рН 6,5 за температури 3 °C 3-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % Контроль Слизовий наліт сіруватого кольору Ріст відсутній Контроль Слизовий наліт, поодинокі колонії сірувато-гірчичного кольору Контроль Слизовий наліт сірувато-жовтого кольору Контроль Слизовий наліт, поодинокі колонії сірувато-гірчичного кольору 0,1 % Ріст відсутній Ріст відсутній Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,5 % Слизовий наліт сіруватого кольору Слизовий наліт сіруватого кольору 1% 1% Слизовий наліт сіруватого кольору 7-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки 0,1 % 0,5 % 1% Ріст відсутній. За Ріст відсутній. За лінією лінією посіву шорсткий Ріст відсутній посіву шорсткий наліт наліт Концентрація препарату "Ізоніазид" 0,1 % 0,5 % 1% За лінією посіву колонії помаранчевого кольору Слизовий наліт сіруватого кольору Слизовий наліт сіруватого кольору 14-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки Контроль 0,1 % 0,5 % 1% За лінією посіву Суцільний ріст колоній декілька дрібних Шорсткий наліт за лінією Ріст відсутній. За лінією помаранчевого кольору колоній блідопосіву сірого кольору посіву шорсткий наліт рожевого кольору Концентрація препарату "Ізоніазид" Контроль 0,1 % 0,5 % 1% За лінією посіву Суцільний ріст колоній Слизовий наліт Слизовий наліт колонії помаранчевого гірчичного кольору сіруватого кольору сіруватого кольору кольору 30-а доба досліджень Концентрація досліджуваної сполуки Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст колоній Шорсткий наліт за Суцільний ріст колоній Шорсткий наліт за лінією помаранчевого лінією посіву сірого помаранчевого кольору посіву сірого кольору кольору кольору Концентрація препарату "Ізоніазид" Контроль 0,1 % 0,5 % 1% Суцільний ріст колоній Суцільний ріст колоній Слизовий наліт Суцільний ріст колоній помаранчевого сірувато-помаранчевого сірувато-помаранчевого помаранчевого кольору кольору кольору кольору 5 Таким чином, ілтіо)ацетил)ізонікотиногідразид протитуберкульозну активність. у N'-(2-(5-((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H-1,2,4-триазол-3порівнянні з прототипом дещо активніше проявляє 6 UA 99119 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 N'-(2-(5-((теофілін-7-іл)метил)-4-етил-4H-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетил)-ізонікотиногідразид формули: O H3C O N N N N N CH2 N O S N O C CH2 C C2H5 N NH N H CH3 , який проявляє протитуберкульозну активність. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 7