Спосіб одержання речовини з протизапальною, антимікробною, седативною та антиоксидантною активністю

Изобретение относится к фармацевти ческой промышленности и касается способа получе ния лекарственных средств расти тельного происхождения. Известен противовоспалительный препарат калефлон и способ его получе ния из цветков ноготков лекарственных, который включает следующие ста дии: экстракцию органическим растворителем, очистку от сопутствующих ве ществ путем смены растворителей, отгонку растворителей, сушку, измельчение, таблетирование. Конечный продукт представляет собой сухой фи тоэкстракт от све тло-коричневого до коричневого цвета, со сла бым, специфическим запахом, практически не растворимый в воде и спирте. Признаками аналога, совпадающими с признаками заявляемого изобретения, являются: - противовоспалительное действие; - растительное сырье; - экстракция; - сушка; - измельчение. Однако, действие указанного препарата монофункционально, при его получении используются токсические вещества, что не исключает присутствия их сле дов в препарате. Известен также препарат растительного происхождения ротокан, обладающий противовоспалительной активностью, и способ его получения из цветков ромашки аптечной, цветков календулы лекарственной и травы тысячелистника в соотношении 2:1:1 (МКИ: А61К 35/78. А. с. № 1670850. Способ получения преперата ротокан, обладающего противовоспалительным действием /Рыбалко К.С., Соколов С.Я., Коновалова О.А. и др. Заявка № 4759110/14 от 06.10.89). Сырье тщательно перемешивают, загружают в батарею из 6 перколяторов и заливают шестикратным количеством 40%-ного спирта, оставляют на 24 ч, после чего медленно спускают первое извлечение, вытесняя его порцией 40%-ного спирта, и оставляют на 24 часа для получения 2 извлечения. В перколятор 2 загружают 100 г смеси сырья, заливают первым извлечением из перколятора 1 и оставляют на 24 ч. По такой же схеме загружают остальные перколяторы. Сырье экстрагируется 6 раз, экстракт выдерживают 5 дней в холодильнике для осаждения балластных веществ, после чего фильтруют. Выход конечного продукта не превышает 6% от массы исходного сырья. Признаками прототипа, совпадающими с существенными признаками заявляемого изобретения, являются: - противовоспалительное действие; - растительное сырье; - экстракция; - фильтрация; - промежуточная дозированная расфа совка. Однако недостатками этого способа являются: несовершенство получаемой лекарственной формы, приготавливаемой из растений непосредственно под заказ, ограниченный спектр действия, получение ротокана многоступенчато, требует использования огнеопасных токсических растворителей, препарат неоднократно подвергают воздействию высоких температур, кроме того, процесс длителен, ресурсо- и энергоемок и не обеспечивает достаточно высокого выхода конечного продукта. В основу изобретения поставлена задача создания способа получе ния вещества с противо воспалительной, анти микробной, седативной и антиоксидантной активностью путем водной экстракции из растительного сырья с целью исключения в конечном продукте сле дов токсических растворителей и обеспечения выхода конечного продукта не ниже 20% от массы исходного сырья. Поставленная задача решается тем, что в способе получе ния из растительного сырья вещества, обладающего противовоспалительной активностью, включающем экстракцию, фильтрацию и промежуточную дозированную расфасовку, согласно изобретению шрот зфиромасличного производства соцветий лаванды настоящей - La vandula vera L., сем. Lemiaceae - экстрагируют в го рячей воде (температура 80-100оС) при соотношении сырье-экстрагент 1:10 в течение не менее 3-х часов при одновременном измельчении сырья в среде экстрагента до размера 2-5 мм, экстракт фильтруют, жидкую фракцию дозированно разливают во фла коны объемом 10 мл с высотой столба жидкости 5,0+0,5 см и подвергают лиофили зации (сублимации) в интервале температур от -25оС до +45оС при давлении 1 атм. Целевой продукт представляет собой мультидисперсный порошок со степенью измельчения 5-50 мк, желто-коричневого цве та с характерным запахом лаванды. Исходным сырьем служит вторичный продукт получе ния эфирного масла лаванды методом гидродистилляции. Стандарт на исходное сырье: ОСТ 10-40-87 Госагропром СССР. Причинно-следственная связь между перечисленными существенными признаками и заявленным техническим результатом поясняется следующим. Влияние соотношения сырье-экстрагент на выход целевого продук та представлено в табл. 1. Влияние температуры и времени экстракции на выход целевого продук та представлено в табл.2. Таблица 1 Влияние соотношения сырье-экстрагент на выход целевого продук та из шрота лаванды настоящей Экстрагент, вес.ч. Сырье, вес. ч. Выход, % 5 1 10.3 10 1 21.0 12 1 21.0 15 1 21.0 Таблица 2 Влияние температуры и времени экстракции на выход целевого продук та из шрота лаванды настоящей Температура, оС Время, ч Выход, % 70 2 18.3 80 2 18.9 90 2 19.4 100 2 19.9 70 3 20.0 80 3 21.0 90 3 21.0 100 3 21.0 100 4 21.0 Вещество по заявляемому способу - сублимат водного извлечения иэ шрота лаванды настоящей является однокомпонентным и довольно сложным по химическому соста ву. Иденти фикация проводилась методом хро матографи ческого анализа и качествен ными реакциями, определивши ми в соста ве заявляемого вещества: фла воноиды, дубильные вещества, три терпеноиды (олеановая и урсуловая кислоты), фе нолокислоты, полисахари ды. В ре зультате оп ределен аминокислотный и элементный состав фракций лаванды настоящей . Для выбора оптимального ва рианта препарата проводилась избирательная экстракция нативного расте ния и промышленного шрота во дой и 40% этанолом, в результате чего были получе ны 3 препарата: 1) сублимат водного извлечения из нативного растения лаванды настоящей; 2) сублимат водного извлечения из шрота лаванды настоящей (ве щество по заявляемому способу); 3) сублимат 40% этанольного извлечения из шрота лаванды настоящей. В результате фи зико-химических и биологических испытаний было установлено, что вещество по заявляемому способу при прочих равных условиях обеспечивает экологически чистую те хнологию производства и низкую себестоимость целевого продукта. Аминокислотный и элементный состав фракций лаванды настоящей представлен в табл. 3,4. Таблица 3 Свободные аминокислоты в исследуемых образцах ла ванды настоящей Состав аминокислотной фракции Лаванда настоящая, сублимат, промиле вещество по заявляемому водное извлечение из нативного 40% этанольное извлечение из шрота способу растения 1. Аспаргиновая к-та 22.70 12.74 12.80 2. Треонин 15.90 49.42 6.42 11.70 5.48 73.80 5. Пролий 45.03 6. Глицин 7.22 19.95 6.17 7. Аланин 0.68 8. Валин 8. 88 9.04 1.76 9. Ме тионин 1.43 1.45 3.74 10. Изолейцин 1.19 0.57 0.28 11. Лейцин 1.04 1.03 1.11 12. Тирозин 7.22 35.20 0.97 20.16 40.50 6.70 3.96 5.51 2.94 22.50 30.52 17.00 4.53 9.34 0.54 3. Серин 4. Глютаминовая к-та 13. Фенилаланин 14. Гистидин 15. Лизин 16. Ар гинин Изучение биологической активности проводилось с использованием общепринятых информативных тестов. Обозначения, использованные в таблицах: n - количество опытов; М - среднее значение; m - ошибка среднего значения; Р - досто верность отличия. Таблица 4 Элементный состав фракций лаванды настоящей Элемент Массэлементное содерж ание, промиле вещество по заявляемому способу водное извлечение из нативного растения 40% этанольное извлечение из шрота Mg 7.013 4.204 2.943 Аl 0.591 0.645 0.000 Si 0.210 1.175 0.261 Продолжение табл. 4 Элемент Массэлементное содерж ание, промиле вещество по заявляемому способу водное извлечение из нативного растения 40% этанольное извлечение из шрота Р 4.650 4.852 4.089 S 4.624 4.504 5.911 Сl 6.428 8.634 5.722 K 67.018 58.764 46.460 Са 9.476 16.501 34.615 Fe 0.000 0.726 0.000 Противовоспалительную активность предлагаемого средства оценивали на моделях формалинового и каррагенинового воспаления у белых мышей обоего пола массой 16-18 г в дозе 100 мг/кг в сравнении с широко применяемыми в медицине антифлогистиками - амидопирином, ортофеном (вольтареном), преднизолоном и препаратом-прототипом калефлоном. Исследуемые препaраты лаванды растворяли в фи зиологическом растворе и вводили внутрибрюшинно за 1 час до введения формалина или каррагенина. Прирост объема воспаленной стопы оценивали онкометрически до и через 4 часа после введения агента. О противовоспалительном действии судили по приросту объема стопы в процентах от исходного и торможению развития отека по сравнению с контролем. Контролем служило введение физиологического раствора. Результаты приведены в табл. 5. Таблица 5 Противовоспалительная активность сублимата из шрота лаванды настоящей (n=6) Препарат Доза, мг/кг Увеличение объема воспаленной стопы в % к интактной при введении формалина М P m каррагенина P М m Вещество по заявляемому способу 100 30.3 2.2 < 0.005 46.1 2.3