Спосіб лікування мігрені

1 Спосіб лікування мігрені, який включає введення ссавцю, який потребує такого лікування, ефективної КІЛЬКОСТІ оланзапіну О 00 го 448 1 44838 зі включено до цього опису як посилання На подив та у ВІДПОВІДНОСТІ до цього винаходу, заявники відкрили, що оланзапін може бути придатним для лікування мігрені Оланзапін може задовольнити потребу, яка відчувалась здавна, у безпечному та ефективному способі лікування мігрені Цей винахід надає спосіб лікування мігрені, який включає введення ефективної КІЛЬКОСТІ оланзапіну або його фармацевтичне прийнятної солі пацієнту, який потребує такого лікування Оланзапін має наведену далі формулу СНз або застосовують його сіль, одержану доданням кислоти Особлива перевага надається оланзапшу, який представляє собою поліморфну модифікацію Форми II і має типову порошкову рентгенограму, яку представлено наступними міжплощинними відстанями d 10,2689 8,577 7,4721 7,125 6,1459 6,071 5,4849 5,2181 5,1251 4,9874 4,7665 4,7158 4,4787 4,3307 4,2294 4,141 3,9873 3,7206 3,5645 3,5366 3,3828 3,2516 3,134 3,0848 3,0638 3,0111 2,8739 2,8102 2,7217 2,6432 2,6007 Типовий приклад порошкової рентгенограми для Форми II наведено далі, де d означає міжплощинну відстань, l/h -типову відносну інтенсивність рентгенівського випромінювання d l/h 10,2689 100,00 8,577 7,96 7,4721 1,41 7,125 6,50 6,1459 6,071 5,4849 5,2181 5,1251 4,9874 4,7665 4,7158 4,4787 4,3307 4,2294 4,141 3,9873 3,7206 3,5645 3,5366 3,3828 3,2516 3,134 3,0848 3,0638 3,0111 2,8739 2,8102 2,7217 2,6432 2,6007 3,12 5,12 0,52 6,86 2,47 7,41 4,03 6,80 14,72 1,48 23,19 11,28 9,01 14,04 2,27 4,85 3,47 1,25 0,81 0,45 1,34 3,51 0,79 1,47 0,20 1,26 0,77 Наведені у цьому описі порошкові рентгенограми було одержано за допомогою рентгенівського дифрактометру Siemens D5000, який має мідне К а джерело випромінювання з довжиною хвилі А = 1,541 А Перевага, додатково, надається тому, щоб поліморфна модифікація оланзапшу Форми II вводилась у вигляді, по суті, чистої поліморфної модифікації оланзапшу Форми II Термін "по суті, чистої", який використано у цьому описі, означає Форму II, пов'язану, приблизно, з менше ніж 5% Форми І, у переважному випадку, приблизно, з менше ніж 2% Форми І, і, у більш переважному випадку, приблизно, з менше ніж 1% Форми І Додатково, до складу "по суті, чистої" Форми II буде входити, приблизно, менше ніж 0,5% споріднених речовин, де термін "споріднені речовини" означає небажані ХІМІЧНІ ДОМІШКИ або залишкові КІЛЬКОСТІ розчиннику або води Зокрема, до складу "по суті, чистої" Форми II повинно входити, приблизно, менше ніж 0,05% ацетонітрилу, у більш переважному варіанті, приблизно, менше ніж 0,005% ацетонітрилу Додатково, у переважному варіанті, до складу згаданої Форми II повинно входити менше ніж 0,5% пов'язаної води Поліморфна модифікація, яку можна одержати за допомогою способу, опис якого наведено у патенті '382, позначається, як Форма І, і має, по суті, типову порошкову рентгенограму, яку наведено далі, одержану за допомогою рентгенівського дифрактометру Siemens D5000, де d означає міжплощинну відстань d 9,9463 8,5579 8,2445 6,8862 6,3787 6,2439 44838 5,5895 5,3055 4,9815 4,8333 4,7255 4,6286 4,533 4,4624 4,2915 4,2346 4,0855 3,8254 3,7489 3,6983 3,5817 3,5064 3,3392 3,2806 3,2138 3,1118 3,0507 2,948 2,8172 2,7589 2,6597 2,6336 2,5956 Типовий приклад порошкової рентгенограми для Форми І наведено далі, де d означає міжплощинну відстань, l/h -типову відносну інтенсивність рентгенівського випромінювання d l/h 9,9463 100,00 8,5579 15,18 8,2445 1,96 6,8862 14,73 6,3787 4,25 6,2439 5,21 5,5895 1,10 5,3055 0,95 4,9815 6,14 4,8333 68,37 4,7255 21,88 4,6286 3,82 4,533 17,83 4,4624 5,02 4,2915 9,19 4,2346 18,88 4,0855 17,29 3,8254 6,49 3,7489 10,64 3,6983 14,65 3,5817 3,04 3,5064 9,23 3,3392 4,67 3,2806 1,96 3,2138 2,52 3,1118 4,81 3,0507 1,96 2,948 2,40 2,8172 2,89 2,7589 2,27 2,6597 1,86 2,6336 1,10 2,5956 1,73 Наведені порошкові рентгенограми було оде ржано за допомогою мідного К а джерела випромінювання з довжиною хвилі А = 1,541 А Міжплощинну відстань у колонці з позначкою "d" надано у Ангстремах Типову відносну інтенсивність рентгенівського випромінювання наведено у колонці з позначкою "І/ІГ Термін "ссавець", який використано у цьому описі, означає клас ссавців вищих хребетних До обсягу терміну "ссавець" входить (але їм не обмежується) поняття людина Термін "лікування", який використано у цьому описі, означає профілактику пацієнту, сприйнятливого до вищезгаданого стану, поліпшення або ліквідування стану після його появи Оланзапін є ефективним у широкому діапазоні дозувань, бажано, однак, вводити якнайменшу дозу Наприклад, денна доза оланзапшу, за нормальними умовами, буде складати, приблизно, від 1мг до ЗОмг/день Слід розуміти, однак, що КІЛЬКІСТЬ фактично введеної сполуки буде вирішуватись лікарем у СВІТЛІ ВІДПОВІДНИХ обставин, у тому числі, з урахуванням типу гострого болю, який піддається лікуванню, віку, маси та реакції індивідуального пацієнту, тяжкості симптомів пацієнту та вибраного шляху введення, і, таким чином, вищезазначені діапазони дозувань не призначені для будь - якого обмеження обсягу цього винаходу У той час, як наведені сполуки, у переважному варіанті, вводяться перорально людям, які є сприйнятливими до або страждають на мігрень, їх можна також вводити найрізноманітнішими іншими шляхами, наприклад, черезшкірно, парентерально, підшкірне, інтраназально, внутрішньом'язово та внутрішньовенне Такі лікарські форми, за допомогою способів одержання лікарських форм, відомих у цій галузі, можуть розроблятись таким чином, щоб забезпечувати уповільнене або контрольоване виділення Термін "лікування", який використано у цьому описі, означає профілактику мігрені у пацієнта, який має схильність до розвитку такого болю, та поліпшення або ліквідування мігрені, яка виникла, відразу ж після її виникнення, або полегшення характеристичних симптомів згаданої мігрені Термін "мігрень", який використано у цьому описі, має значення, яке надається згаданому станові фахівцем Результати фармакологічних досліджень показують, що оланзапін має мускаринову активність відносно холшерпчних рецепторів Згадана сполука є активною відносно рецепторів допаміну D-1 та D-2, що засвідчується ІС50, меншою ніж 1мкМ у випадку проб на зв'язування 3H-SCH233390 (Білард (Billard) та ІНШІ, Life Sciences 35 1885 (1984)) та ЗН спіперону (Сімен (Seeman) та ІНШІ, Nature 216 717 (1976)), ВІДПОВІДНО Додатково, оланзапін є активним на рецепторі 5-НТ-2 та рецепторі 5НТ1С Комплексний фармакологічний профіль згаданої сполуки забезпечує медикамент, який може бути придатним при лікуванні мігрені Введена доза буде, звичайно, змінюватись у залежності від відомих факторів, наприклад, фармакодинамічних характеристик конкретного агенту, способу та шляху його введення, віку, стану здоров'я та маси реципієнта, природи та обсягу симптомів, виду одночасного лікування, частоти лікува льних сеансів та необхідного ефекту Денна доза, звичайно, може бути такою, щоб доля активного інгредієнту у и складі дорівнювала, приблизно, від 1мг до 25мг оланзапшу Бажаними можуть бути дози, до складу яких входить, приблизно, від 1мг до 50мг оланзапшу До складу композицій, придатних для внутрішнього введення, може входити, приблизно, від половини (0,5) міліграму до, приблизно, 500 міліграмів активного інгредієнту на одиницю У цих фармацевтичних композиціях КІЛЬКІСТЬ активного інгредієнту, звичайно, буде складати, приблизно, від 0,5% (мас) до, приблизно, 95% (мас), у перерахуванні на загальну масу згаданої композиції До складу типових композицій входить оланзапін або його фармацевтично прийнятна сіль, одержана доданням кислоти, пов'язані з фармацевтично прийнятним наповнювачем, який може бути носієм або розріджувачем, або розведені носієм, або розміщені у носи, який може мати вигляд капсули, саше або поємника, виготовленого з паперу або іншого матеріалу При виготовленні згаданих композицій, можна використовувати традиційні способи одержання фармацевтичних композицій Наприклад, активна сполука буде, звичайно, змішуватись з носієм, розводитись носієм або розміщуватись у носи, який може мати форму ампули, капсули, саше або поємника, виготовленого з паперу або іншого матеріалу Коли носій використовують, як розріджувач, він може бути твердим, напівтвердим або рідким матеріалом, який діє як носій, наповнювач або середовище для активної сполуки Згадана активна сполука може бути адсорбованою на гранульованому твердому поємнику, наприклад, у саше Як деякі приклади придатних носив можна навести воду, розчини солей, спирти, поліетиленгліколі, поліпдроксиетоксильовану рицинову олію, желатину, лактозу, амілозу, стеарат магнію, тальк, кремнієву кислоту, моногліцериди та дигліцериди жирних кислот, пентаеритритолові ефіри жирних кислот, пдроксиметилцелюлозу та полівінілпіролідон До складу згаданих лікарських форм можуть також входити зволожуючі речовини, емульгуючі та суспендуючі речовини, консервуючі речовини, підсолоджуючі речовини або коригенти Лікарські форми за цим винаходом можна виготовляти таким чином, щоб забезпечити швидке, повільне або пролонговане виділення активного інгредієнту після введення пацієнту за допомогою способів, добре відомих у цій галузі техніки Фармацевтичні лікарські форми можуть бути стерилізованими або змішаними, у разі необхідності, з додатковими речовинами, емульгаторами, сіллю для здійснення впливу на осмотичний тиск, буферними розчинами та/або фарбувальними речовинами і т ш , які не вступають до шкідливої реакції з активними сполуками Для парентерального введення особливо придатними є розчини або суспензії до впорскування, у переважному варіанті, водні розчини з активною сполукою, розчиненою у поліпдроксильованій рициновій олії Для перорального введення особливо придатними є таблетки, драже або капсули, до складу яких входить тальк та/або вуглеводневий носій 44838 8 або в'яжуча речовина і т ш До переважних носив для таблеток, драже або капсул належить лактоза, кукурудзяний крохмаль та/або картопляний крохмаль Сироп або еліксир можуть бути використаними у тих випадках, коли може бути застосованим підсолоджувальний носій Оланзапін, взагалі, відпускається у стандартній дозованій формі, до складу якої входить, приблизно, від 1мг до 30мг у фармацевтично прийнятному носи на стандартну дозовану одиницю У найпереважнішому варіанті, тверда пероральна лікарська форма знаходиться у пакувальних матеріалах, які захищають згадану лікарську форму від вологи та світла Наприклад, до придатних пакувальних матеріалів належать пляшки бурштинового кольору з поліетилену високої густини, скляні пляшки бурштинового кольору та ІНШІ судини, виготовлені з матеріалу, який затримує проникнення світла У найпереважнішому варіанті, до складу пакунку входить пакет з десикантом Поємник може герметично закриватись за допомогою витяжної алюмінієвої фольги для забезпечення необхідного захисту та підтримання стабільності продукту Композиції за цим винаходом можуть бути придатними для введення тваринам До таких тварин можуть належати як СВІЙСЬКІ тварини, наприклад, велика рогата худоба, так і лабораторні тварини, кімнатні тварини та несвійські тварини, наприклад, дикі звірі У більш переважному варіанті, згаданою твариною є хребетна тварина У найпереважнішому варіанті, сполука за цим винаходом буде вводитись ссавцеві У особливо переважному варіанті, цією твариною є свійський ссавець або людина Найпереважнішим ссавцем є людина 3 цією метою, сполука за цим винаходом може бути введена, як кормовий додаток Способи перевірки придатності Неочікувана анальгетична активність оланзапшу відносно мігрені засвідчується випробуваннями, початкове проведеними на мишах Мишамсамцям не давали корму впродовж 1 - 2 годин, після чого зважували Мишей, маса яких під час випробувань дорівнювала, приблизно, 18 - 22 грамам, використовували для наступних досліджень Усім мишам послідовно перорально вводили суспензії традиційних анальгетичних засобів та/або оланзапіну Дози кодувались за допомогою коду, невідомого спостерігачеві Концентровану суспензію оланзапіну було одержано шляхом розчинення оланзапіну у 10% молочній кислоті та доведенням розчину до потрібного кінцевого об'єму доданням дистильованої води Суміш може піддаватись обробці ультразвуком впродовж, приблизно, 1 0 - 1 5 секунд за допомогою ультразвукової системи Усі дозовані суспензії було одержано шляхом розбавлення концентрованої суспензії дистильованою водою Усі суспензії використовують впродовж двох годин від моменту одержання Випробування з індукуванням судом у мишей Прийнятою стандартною процедурою для виявлення та порівняння анальгетичної активності анальгетичних лікарських засобів різних класів, щодо яких існує добра кореляція з анальгетичною активністю у людей, є запобігання судом, шдуко 44838 ваних феніл-р-бензохшоном у мишей [Г Бламберг (Н Blumberg) та ІНШІ, РГОС SOC Exp Biol Med ,118, 763-766(1965)] Мишам, яких було піддано обробці різними дозами оланзапшу або носію, внутрішньоочеревинно впорскували стандартну експериментальну дозу феніл-р-бензохшону за 5 хвилин до призначеного періоду спостереження Феніл-р-бензохшон готують у вигляді, приблизно, 0,1мг/мл розчину у, приблизно, 5% (у об'ємному відношенні) розчині етанолу у воді Доза, яка викликає судоми, дорівнює 1,25мг/кг її впорскували у об'ємі, приблизно, 0,25мл/10г 3 метою оцінки "судома" розглядається, як витягування усього тіла або скорочення животу під час періоду спостереження з започаткуванням, приблизно, через 5 хвилин після впорскування дози феніл-р-бензохшону Усі значення ED50 (ефективної дози) та їх 95% довірчі межі визначаються за допомогою прийнятих числових способів Див , наприклад, В Ф Томпсон (W F Thompson), Bacteriological Rev, 11, 115 -145(1947) Прийнятою моделлю для оцінки аналгезування мігрені є модель перев'язування сідничного нерву, яка застосовується наступним чином Судоми, індуковані оцтовою кислотою Іншою стандартною процедурою для виявлення та порівняння анальгетичної активності анальгетичних лікарських засобів різних класів, щодо яких існує добра кореляція з анальгетичною активністю у людей, є запобігання судом, індукованих оцтовою кислотою у мишей Мишам, перед випробуванням, перорально вводять різні дози оланзапшу або плацебо, після чого, за 5 хвилин до призначеного періоду спостереження, внутрішньоочеревинно впорскують оцтову кислоту (0,5% розчин, 10мл/кг) 3 метою оцінки "судома" розглядається, як витягування усього тіла або скорочення животу під час періоду спостереження з започаткуванням через 5 хвилин після впорскування оцтової кислоти Пригнічення судоминної поведінки свідчить про анальгетичну активність Див , Хобріч Д Р (Haubnch D R), Уорд С Дж (Ward S J), Бейцман Е (Baizman Е), Белл М Р (Bell M R ) , Бредфорд Дж (Bradford J ), Феррарі Р (Ferrari R), Міллер М (Miller M), Перрон М (Perrone М), Пірсон А К (Pierson А К), Селене Дж К (Saelens J К) та Люттінжер Д (Luttinger D ) "Pharmacology of pravadolme a new analgesic agent" The Jounal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 255 (1990) 511 - 522 Гадають, що нейрогенна менінгеальна транссудація викликає мігрень, таким чином, спочатку, за допомогою стандартних способів, вимірюється зв'язувальна спорідненість оланзапшу до рецепторів серотоніну, які пов'язані з цим станом Наприклад, здатність сполуки до зв'язування з підтипом рецептору 5-HTIF реалізується, по суті, як описано у Н Адама (N Adham) та інших, Proceedings of the National Academy of Sciences (USA), 90, 408 - 412 (1993) 3 метою порівняння, зв'язувальна спорідненість оланзапшу до інших рецепторів серотоніну визначається, по суті, як описано далі, за виключенням того, що замість застосованого тут клону рецептору 5-HTIF використовують ІНШІ клоновані рецептори 10 Одержання мембран Мембрани одержували з трансфектованих клітин Ltk, які вирощували до 100% злиття Клітини ДВІЧІ промивають фізрозчином, забуференим фосфатом, зішкрібають з культуральних планшетів до 5мл фізрозчину, забуференого фосфатом, який має температуру таяння льоду, та центрифугують при 200хд впродовж 5 хвилин при 4°С Осад ресуспендують у 2,5мл Трис-буферу, який має температуру таяння льоду (20мМ Трис-НСІ-буфер, рН = 7,4 при 23°С, 5мМ етилендіамштетраоцтової кислоти) та гомогенізують за допомогою гомогенізатору компанії Wheaton Лізат піддають центрифугуванню при 200хд впродовж 5 хвилин при 4°С для осадження фрагментів великого розміру, які видаляють Супернатант збирають та центрифугують при 40000хд впродовж 20 хвилин при 4°С Осад, одержаний внаслідок згаданого центрифугування, промивають за допомогою Трис-буферу, який має температуру таяння льоду, та ресуспендують у кінцевому буфері, до складу якого входить 50мМ Трис-НСІ-буферу та 0,5мМ етилендіамштетраоцтової кислоти, рН = 7,4 при 23°С Мембранні препарати зберігають на льоду та використовують впродовж двох годин для постановки проб на зв'язування ліганду, міченого радіоактивним ізотопом Концентрації білку визначають за методом Бредфорда (Bradford) (Anal Biochem , 72, 248 - 254 (1976)) Зв'язування ліганду, міченого радіоактивним ізотопом Зв'язування [3Н 5-НТ] здійснюють з використанням дещо змінених умов проби з 5-HT-ID, про яку було повідомлено Геррік-Девісом (HernckDavis) та Тітелером (Titeler) (J Neurochem , 50, 1624 - 1631 (1988)), за виключенням маскувальних лігандів Дослідження зв'язування ліганду, міченого радіоактивним ізотопом, здійснюють при 37°С у загальному об'ємі буферу, який дорівнює 250мл (50мМ Трис-буферу, ЮмМ МдСІ2, 0,2мМ етилендіамштетраоцтової кислоти, ЮмМ парплшу, 0,1% аскорбату, рН = 7,4 при 37°С), у 96-лункових мікротитрувальних планшетах Дослідження насичення здійснюють з використанням 12 різних концентрацій [3Н] 5-НТ у межах від 0,5нМ до ЮОнМ Дослідження заміщення здійснюють з використанням 4,5 - 5,5нМ [3Н] 5-НТ Криву зв'язування лікарських засобів у конкуренційних експериментах одержують з використанням 1 0 - 1 2 концентрацій сполуки Час інкубування складає ЗО хвилин як у разі досліджень насичення, так і у разі досліджень заміщення, виходячи з результатів початкових досліджень, під час проведення яких було визначено умови рівноважного зв'язування Неспецифічне зв'язування визначають у присутності ЮмМ 5НТ Зв'язування ІНІЦІЮЮТЬ ШЛЯХОМ додання 50мл мембранних гомогенатів (10 - 20мг) Згадану реакцію завершують шляхом прискореного фільтрування через попередньо просочені (0,5% поліетиленіміну) фільтри з застосуванням клітинного харвестеру 48R Brandel (Гейтерсбург, Меріленд) Після ЦЬОГО фільтри промивають впродовж 5 секунд буфером, який має температуру таяння льоду (50мМ Трис-НСІ-буферу, рН = 7,4 при 4°С), висушують та вміщують до пробірок, у яких знаходиться 2,5мл реактиву Readi-Safe (компанія 11 44838 12 Beckman, Фулертон, Каліфорнія) і вимірюють ріПацюків лінії Sprague-Dawley (225 - 325г) від вень радіоактивності за допомогою рідинного сцикомпанії Напап або морських свинок (225 - 325г) нтиляційного лічильника Beckman LS 5000TA від компанії Charles River Laboratories анестезують 3 Ефективність підрахунку [ Н] 5-НТ складає, у сепентобарбіталом натрію внутрішньоочеревинно редньому, 45 - 50% Дані по зв'язуванню аналізу(65мг/кг або 45мг/кг, ВІДПОВІДНО) та вміщують до ють за допомогою комп'ютеризованого нелінійного стереотаксичної рамки (компанія David Kopf регресивного аналізу (Accufit and Accucomp, комInstruments) з різаком, який встановлено на -3,5мм панія Lunden Software, Чагрін Фоллз, Огайо) Знадля пацюків та -4,0мм для морських свинок Після чення ІС50 перетворюють на значення К, за допонадрізування волосистої частини шкіри голови по могою рівняння Ченга-Прусофа (Cheng-Prusoff) середній лінії у сагітальній площині, у черепі ви(Biochem Pharmacol , 22, 3099 - 3108 (1973)) свердлюють дві пари білатеральних отворів (6мм дозаду, 2,0 та 4,0мм вбік у пацюків, 4мм дозаду, Як повідомлялось Р Л Вайншенком (R L 3,2 та 5,2мм вбік у морських свинок, усі координаWemshank) та іншими, W093/14201, рецептор 5ти зорієнтовано відносно брегми) Через згадані НТю є функціонально пов'язаним з білком G, що отвори до обох півкуль на глибину 9мм (пацюки) було визначено вимірами здатності серотоніну та або 10,5мм (морські свинки) від твердої мозкової серотонерпчних лікувальних засобів до пригніченоболонки вводили пари ізольованих (за виключення стимульованого форсколіном продукування ням КІНЦІВ) стимулювальних електродів з нержавіцАМФ клітинами NIH3T3, трансфектованими реючої сталі (компанія Rhodes Medical Systems, Inc) цептором 5-HTIF Активність аденілатциклази визначають за допомогою стандартних методів МаОголюють стегнову вену і внутрішньовенно ксимальний ефект досягається серотоніном Е т а х впорскують дозу оланзапшу (1мл/кг) Приблизно визначають шляхом поділу пригнічення оланзапшу через 7 хвилин впорскують (також внутрішньовенна максимальний ефект з наступним визначенням но) дозу (50мг/кг) флуоресцентного барвника відсоткового рівня пригнічування (Н Адам та ІНШІ, "Еванс синій" Згаданий барвник утворює комплекс див перед тим, РЛ Вайншенкта ІНШІ, Proceedings з білками крові і функціонує як маркер транссудаof the National Academy of Sciences (USA), 89, 3630 ції білків Точно через 10 хвилин після впорскуван- 3634 (1992)) та довідкова література, яку навеня експериментальної сполуки, лівий ганглій трійдено у цьому описі частого нерву впродовж 3 хвилин піддають стимулюванню електричним струмом силою 1,0мА Визначення утворення цАМФ (5Гц, тривалість 4мсек) за допомогою стабілізатоТрансфектовані клітини NIH3T3 (визначений ру напруги/гальваностату Моделі 273 (компанія В т а х з однофакторних конкурентних досліджень = EG&G Princeton Applied Research) 488 молярних коефіцієнтів активності/мг білку) шкубують у модифікованому за способом ДульбеЧерез п'ятнадцять хвилин після стимулювання кко середовищі Ігла (DMEM), 5мМ теофіліну, ЮмМ тварин забивають та знекровлюють 20мл фізрозГЕПЕС-буферу (4-[2-пдроксиетил]-1чину Верхню частину черепу видаляють для полегшення збору мембран твердої мозкової оболонки піперазинетансульфокислота) та ЮмМ парпліну Зразки мембран видаляють з обох півкуль, промивпродовж 20 хвилин при 37°С, 5% СОг Після цьовають водою і розкладають на предметному склі го визначають криві залежності ефекту від конценмікроскопу Після висушування тканину накриватрації лікувального засобу шляхом додавання 6 ють покривним склом з 70% розчином гліцерирізних кінцевих концентрацій лікувального засобу з ну/води безпосереднім додаванням після цього форсколіну (ЮмМ) Далі, клітини додатково шкубують Для КІЛЬКІСНОГО визначення вмісту барвнику впродовж 10 хвилин при 37°С, 5% СОг Середо"Еванс синій" у кожному зразку застосовують флувище відсмоктують і реакцію зупиняють шляхом оресцентний мікроскоп (компанія Zeiss), спорядодання ЮОмМ НСІ Для демонстрування конкуджений дифракційним монохроматором та спектрентного антагонізму, паралельно визначають рофотометром Застосовується збуджувальна криву залежності між реакцією та концентрацією хвиля довжиною 535нм, інтенсивність випромінюдля 5-НТ з застосуванням фіксованої дози метювання визначається на бООнм Згаданий мікроскоп тепіну (0,32мМ) Планшети зберігають при 4°С споряджено столиком з приводом від електродвивпродовж 15 хвилин, після чого центрифугують гуну та поєднано з персональним комп'ютером Це впродовж 5 хвилин при 500хд з метою осадження полегшує 25-пунктове зміщення (500мм крок) кеклітинного дебрісу, супернатант поділяють на алірованого комп'ютером столику під час вимірюванквотні проби і зберігають при -20°С перед визнаня флуоресценції кожного зразку твердої мозкової ченням утворення цАМФ за допомогою радюімуноболонки Середні та стандартні квадратичні відноі проби (набір для постановки радюімунної хилення вимірів визначаються комп'ютером проби на цАМФ, компанія Advanced Magnetics, Транссудація, індукована електричним стимуКембрідж, Меріленд) Кількісне визначення рівня люванням ганглію трійчастого нерву, має іпеїлатерадіоактивності здійснюють за допомогою автомаральний характер (тобто відбувається тільки на тій тичного лічильника гамма-випромінювання COBRA стороні твердої мозкової оболонки, на якій стимукомпанії Packard, спорядженого програмою скорольовано ганглій трійчастого нерву) Завдяки цьому чення обсягу даних Наведене далі випробування друга половина (нестимульована) твердої мозкоздійснюють для визначення здатності набору спової оболонки може використовуватись, як контлук до пригнічення транссудації білку, яке предроль Вираховували співвідношення КІЛЬКОСТІ ставляє собою функціональну пробу нейронного транссудату у твердій мозковій оболонці на стимумеханізму мігрені льованій стороні у порівнянні до нестимульованої сторони За допомогою контрольних визначень з Проба на транссудацію білку 13 44838 14 фізрозчином одержали співвідношення, яке дорівчення підшкірної вени (ЕС50) та максимальне сконювало, приблизно, 2,0 у пацюків та 1,8 у морсьрочення, як % максимальної реакції на КСІ Скороких свинок У протилежність цьому, сполука, яка чення підшкірної вени (ЕС50) є показником дози, ефективно запобігала транссудації у твердій мознеобхідної для скорочення тканини на 50% від ковій оболонці зі стимульованої сторони, мала максимальної реакції, яку здатна опосередкувати співвідношення, яке дорівнювало, приблизно, 1,0 специфічна сполука Максимальна реакція, яку Визначали дозозалежну криву та здійснювали спроможна продемонструвати підшкірна вена, виприблизне визначення дози, яка забезпечувала мірюється після введення високої концентрації 50% пригнічування транссудації (Dso) (67мМ) КСІ % максимального скорочення на КСІ є відношення максимальної реакції, яку здатна опоДля визначення існування взаємозв'язку між середкувати специфічна сполука, поділеної на зв'язувальною спорідненістю до кожного з рецепмаксимальну реакцію, яку може видати згадана торів 5-НТюа, 5-НТіоь, 5-НТІЕ та 5-HT-IF, та нейтканина ронною транссудацією білку, викреслювали криву залежності між зв'язувальною спорідненістю до Показником цієї специфічності є відношення кожного підтипу рецептору та їх IDso на моделі вазоконстрікцм до ефективності пригнічення нейтранссудації білку Кожну серію даних піддавали ронної транссудації білку Це відношення називалінійному регресивному аналізу з наступним вирають Індексом Специфічності, де хуванням коефіцієнту кореляції R2 , _ . Відкориговане ЕС50 вазоконстрікци (М) Індекс Специфічно сті = —-— г -, \ і Наведена далі проба забезпечує можливість ID транссудації (ммоль/кг) визначення здатності оланзапшу до опосередко*Дпя коригування значень ECso скорочення вування вазоконстрікцм підшкірної вени лапи кропідшкірної вени таким чином, щоб до уваги прилів ймалось максимальне скорочення, яке викликаСкорочення підшкірної вени лапи кролів ється кожною окремою сполукою відносно скороКролів-самців породи новозеландська біла (3 чення, викликаного КСІ, значення IDso 6 фунтів, 1,361 - 2,722кг) (компанія Hazleton, Kaвазоконстрікцм ділиться на % максимального сколамазо, Мічиган) забивали летальною дозою пенрочення, викликаного КСІ, для одержання "відкотобарбіталу натрію (325мг), яку впорскували до ригованого ЕС50 вазоконстрікцм (М)" вушної вени Тканини відокремлювали від сполучДля способу за цим винаходом придатною є ної тканини, канюлювали in situ поліетиленовою сполука або композиція з Індексом Специфічності, трубкою (РЕ50, ЗОВНІШНІЙ діаметр = 0,97мм) і вноякий перевищує 1, але перевага надається більсили до чашок Петрі, які вміщували бікарбонатний шим значенням Індексу Специфічності Більший буфер Кребса (опис якого було наведено перед Індекс Специфічності свідчить про більш високу 50 тим) КІНЦІ ДВОХ ГОЛОК № ЗО з нержавіючої сталі для підшкірних ІН'ЄКЦІЙ, ЯКИМ було надано Lподібної форми, вводили до поліетиленової трубки Судини за допомогою голок обережно виштовхують з канюлі Після ЦЬОГО ГОЛКИ роз'єднують таким чином, що нижня з них виявляється прив'язаною ниткою до нерухомого скляного стрижня, у той час, як верхня за допомогою нитки з'єднується з датчиком Тканини вносять до препарувальних ванночок, які вміщують Юмл модифікованого розчину Кребса наступного складу 118,2ммоль NaCI, 4,6ммоль КСІ, 1,6ммоль СаСІ2-Н2О, 1,2ммоль КН2РО4, 1,2ммоль MgSO4, Ю.Оммоль декстрози та 24,8ммоль МаНСОз Температуру розчинів препарувальних ванночок підтримували на рівні 37°С та аерували 95% О2 та 5% СО2 До підшкірної вени ноги прикладали початкову оптимальну силу спокою, яка дорівнювала 1г Ізометричні скорочення реєстрували, як зміни у грамах сили на динографі компанії Beckman з датчиками UC-3 компанії Statham та допоміжним обладнанням з мікрошкалою Тканини, перед підданням впливу лікарських засобів, урівноважувались впродовж 1 - 2 годин За допомогою тканин визначали інтегральні криві залежності між реакцією та концентрацією агоністу Кожний зразок тканини було використано для одержання не більше, ніж двох кривих залежності між реакцією та концентрацією агоністу Усі результати виражають, як середнє ECso, максимальну реакцію виражають, як відсоток реакції на 67мМ КСІ, початкове введеного до кожної тканини За допомогою згаданої вазоконстрікційної проби визначають два важливі параметри скоро специфічність щодо ефективності пригнічення нейронної транссудації білку у порівнянні до вазоконстрікцм Як узагальнення, придатність сполуки або композиції для використання у способі лікування болю або пов'язаних порушень без суттєвих побічних ефектів, викликаних вазоконстрікцією, визначається м Індексом Специфічності Індексом Специфічності є відношенням рівня вазоконстрікцм до рівня ефективності щодо пригнічення нейронної транссудації білку Показником здатності сполуки або композиції до пригнічення нейронної транссудації білку є функціональна проба на фізіологічні явища, наслідком яких є мігрень Подиву гідне, але результати таких експериментів дозволяють зробити припущення про те, що оланзапін може забезпечити суттєвий анальгетичний ефект відносно мігрені КЛІНІЧНІ спостереження Було проведено подвійне багато центрове клінічне випробування для оцінки безпечності та ефективності оланзапіну Пацієнти довільно розподіляються на групи до введення оланзапіну або плацебо Пацієнти постійно контролюються на сприйняття болю за допомогою стандартних методів Результати такого КЛІНІЧНОГО випробування дозволяють зробити припущення про те, що оланзапін може бути відносно безпечною сполукою для лікування мігрені Матеріали для цього винаходу можуть бути закупленими або одержаними різними способами, добре відомими пересічним фахівцям у цій галузі Оланзапін може бути одержаним, як описано Чак 15 44838 16 рабарті (Chakrabarti) у патенті США № 5229382 Поліморфна модифікація оланзапшу Форми II ('382), який у повному обсязі включено до цього 270г зразок 2-метил-4-(4-метил-1-піперазиніл)опису як посилання Додатково, наведені далі 10Н-тієно-[2,3-Ь][1,5]-бенздіазепшу технічної чиспроцедури одержання препаратів ілюструють спототи суспендували у безводному етилацетаті сіб одержання особливо переважної поліморфної (2,7л) Згадану суміш нагрівали до 76°С і її темпемодифікації оланзапшу Форми II ратуру підтримували на рівні 76°С впродовж ЗО хвилин Суміш витримували до охолодження до До способів визначення характеристик згада25°С Утворений продукт виділяли за допомогою ної сполуки належать, наприклад, аналіз порошковакуумного фільтрування Згаданий продукт, за вої рентгенограми, термогравіметричний аналіз допомогою порошкового рентгенографічного ана(TGA), диференційна сканувальна калориметрія лізу, було визначено, як Форму II Вихід 1 9 7 Г (DSC), титрометричний аналіз на вміст води та аналіз даних ядерного магнітного резонансу (Н1Спосіб одержання Форми II, опис якого навеNMR) на вміст розчиннику дено перед тим, забезпечує одержання фармацевтичне прийнятного продукту, який має вміст актиНаступні приклади наведено з ілюстративною вної речовини £97%, загальний вміст споріднених метою і вони не повинні розглядатись як такі, що речовин 73% обмежують обсяг заявленого винаходу Препарат 1 Приклад 1 Оланзапін технічної чистоти Частину пдроксипропілцелюлози розчиняли у дистильованій воді для утворення розчину для гранулювання Залишок пдроксипропілцелюлози (у цілому, 4,0% (мас) у переліку на кінцеву масу таблетки), яка мала надмілкий гранулометричний склад, змішували з оланзапіном (1,18% (мас)), лактозою (79,32% (мас)) та частиною кросповідону (5% (мас)) у грануляторі з високим зсувним зусиллям Усі інгредієнти, з додержанням заходів безпеки, просіювали перед доданням та змішуваПроміжна речовина 1 ли у грануляторі у сухому стані Після цього згадаДо придатної тригорлої колби додавали нану суміш гранулювали з розчином пдроксипропілступне целюлози у грануляторі з високим зсувним Диметилсульфоксид (аналітична чистота) 6 зусиллям Гранулят розсівався по розміру у волооб'ємів гому стані за допомогою стандартних способів Проміжна речовина 1 75г Після ЦЬОГО ВОЛОГИЙ гранулят висушували у сушаN-метилпіперазин (реактив) 6 еквівалентів рці з псевдозрідженим шаром і розсівали по розміПроміжну речовину 1 можна одержати за дору Згаданий матеріал засипали до бункерної міпомогою способів, відомих досвідченому фахівцю шалки Одержання Проміжної речовини 1 розкривається, До розсіяного по розміру грануляту додавали наприклад, у патенті '382 плинні порошки, до складу яких входила мікрокриДля видалення аміаку, який утворюється під сталічна целюлоза (гранулят) (10% (мас)), стеачас реакції, було додано підповерхневий азотний рат магнію (0,5% (мас)) та залишок кросповідону барботажний трубопровід Реакційну суміш нагріСуміш перемішували та пресували за допомогою вали до 120°С і цю температуру підтримували ВІДПОВІДНОГО спорядження на таблетковій машині впродовж проходження згаданої реакції ПрохоНанесення підпокривного шару дження реакції контролювали засобами високоГідроксипропілметилцелюлозу (10% (мас)) ефективної рідинної хроматографії, доки непрорезмішували з дистильованою водою до утворення агованим залишилось ^5% проміжної речовини 1 розчину Таблетки, призначені для нанесення підПісля завершення реакції суміш повільно охолопокривного шару, розподіляли на приблизно рівні джували до 20°С (приблизно, впродовж 2 годин) долі і набризком покривали розчином пдроксипроПісля ЦЬОГО реакційну суміш переносили до відпопілметилцелюлози Згадану операцію здійснювали відної тригорлої колби з круглим дном, яку ставили у перфорованому покривному ПІДДОНІ на водяну баню До цього розчину з перемішуванНанесення основного покриття на таблетки ням додавали 10 об'ємів метанолу аналітичної Барвну суміш білого кольору (пдроксипропілчистоти і реакційну суміш перемішували при 20°С метилцелюлоза, поліетиленгліколь, полісорбат 80 впродовж ЗО хвилин Впродовж ЗО хвилин повільта дюксид титану) змішували з дистильованою но додавали три об'єми води Реакційну суспензію водою до утворення покривної суспензії Таблетки охолоджували до 0 - 5°С і перемішували впродовж з нанесеним підпокривним шаром розподіляли на ЗО хвилин Утворений продукт фільтрували і волоприблизно рівні долі і набризком покривали покригий фільтр пресний корж промивали охолодженим вною суспензією, опис якої наведено перед тим метанолом Вологий фільтр пресний коржик сушиЗгадану операцію здійснювали у перфорованому ли in vacua при 45°С впродовж ночі Згаданий пропокривному ПІДДОНІ дукт було визначено, як оланзапін технічної чистоти Вихід 76,7%, вміст активної речовини Таблетки з нанесеним покриттям злегка при98,1% порошували карнаубським воском і відтискували ВІДПОВІДНІ ідентифікаційні написи Препарат 2 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90