Лікувальний засіб для запобігання або лікування мігрені та інгібування нейронної менінгеальної транссудації, який містить агоніст 5-нт1f

1 Применение агониста 5-HT1F, проявляющего минимальные вазоконстриісгорньїе свойства, в качестве ингредиента лекарственного средства для предотвращения или лечения мигрени 2 Применение по п 1, где указанный агонист 5HTIF имеет индекс специфичности в диапазоне 510000 3 Применение по п 1, где указанный агонист 5HTIF имеет индекс специфичности, по меньшей мере равный 10 4 Применение по п 1, где указанный агонист 5 Разнообразие форм физической активности, проявляемых нейромедиаторным серотонином (5НТ), опосредуется по меньшей мере семью классами рецепторов 5-НТі 5-НЇ2, 5-НТз, 5-НТ4, 5НТб, 5-НТб и 5-НТ7 Наиболее гетерогенным из этих классов, похоже, является класс 5-НТі подразделяемый на подклассы 5-НТ1А, 5-НТ1В, 5НТ-іс, 5-НТю (Хеймон (Hamon) и др Нейропсихофармакология, 3(5/6), 349 - 360, 1990г) и 5-HTIF (Ленхарт (Leonhardt) и др Нейрохимия, 53(2), 465 471, 1989г) Человеческий ген, несущий экспрессию HTIF имеет индекс специфичности, по меньшей мере равный 100 5 Применение по п 1, где указанный агонист 5HTIF имеет индекс специфичности, по меньшей мере равный 1000 6 Применение по п 1, где указанный агонист 5HTIF имеет индекс специфичности, по меньшей мере равный 10000 7 Применение агониста 5-HT1F, проявляющего минимальные вазоконстрикторные свойства, в качестве ингредиента лекарственного средства для ингибирования нейронной менингеальной транссудации 8 Применение по п 7, где указанный агонист 5HTIF имеет индекс специфичности в диапазоне 510000 9 Применение по п 7, где указанный агонист 5HTIF имеет индекс специфичности, по меньшей мере равный 10 10 Применение по п 7, где указанный агонист 5HTIF имеет индекс специфичности, по меньшей мере равный 100 11 Применение по п 7, где указанный агонист 5HTIF имеет индекс специфичности, по меньшей мере равный 1000 12 Применение по п 7, где указанный агонист 5HTIF имеет индекс специфичности, по меньшей мере равный 10000 дополнительного 5-НТі подкласса, подкласса 5HTIF, был выделен Као (Као) с сотрудниками (Труды Национальной Академии наук США, 90, 408 - 412, 1993г) Этот рецептор 5-HT1F, как выяснилось, проявляет фармакологические свойства, отличающие его от любого описанного на сегодняшний день серотонергического рецептора Над теоретическими исследованиями, относящимися к патофизиологии мигрени, с 1938года доминирует работа Грэхема и Вольфа (Graham, Wolff) (Архив некрологической О 00 44284 психопатрии, 39, 737 - 63, 1938г) Они предложили идею, что причиной мигрени является вазодилатация внечерепных сосудов Эта точка зрения находит подтверждение в известности того фактора, что алкалоиды спорыньи и суматриптан сокращают гладкую мышцу краниальных сосудов и являются эффективными средствами в лечении мигрени Суматриптан является гидрофильным агонистом у 5-НТі-подобных рецепторов и не пересекает гематоэнцефалический барьер (Хамфри (Humphrey) и др , ученые записки НьюЙоркской академии наук, 600, 587 - 600, 1990г) За последнее время несколько новых групп соединений, полезных, по некоторым сведениям, для лечения мигрени, были описаны в патентных заявках №№ WO94/03446, WO93/11106, W092/13856, ЕР0438230, и\Л/091/18897 Каждая из этих групп соединений была разработана с целью оптимизации опосредованной 5-НТгподобными рецепторами вазоконстрикторной активности суматриптана Противопоказания по суматриптану, такие как ангиоспазм коронарных сосудов, гипертензия и стенокардия, однако, также являются следствием его вазоконстрикторной активности (Maclntyre, P D) и др, Британский журнал клинической фармакологии, 34, 541 - 546, 1922г, Честер (Chester, A H) и др, сердечно-сосудистые исследования, R4, 932 - 937, 1990г, Коннер (Conner, J Е) и др Европейский фармакологический журнал, 161, 91 - 94, 1990г) Несмотря на то, что эта точка зрения на васкулярную природу мигрени получила широкое признание, все же нет полного и абсолютного согласия относительно ее достоверности Московитц (Moskowitz) показал, например, что частота возникновения обусловленных мигренью головных болей не зависит от изменений диаметра сосудов (Цефалгия, 1_2, 5 - 7, 1992г) Кроме того, Московитц предположил, что неизвестные до сих пор пусковые механизмы стимул ируютг англий тройничного нерва, иннервируя таким образом сосудистую сеть тканей черепа и приводя к высвобождению вазоактивных нейропептидов из аксонов сосудистой сети Эти высвобождающиеся нейропептиды затем инициируют последовательную цепь событий, приводящих к нейрогенному воспалению, следствием которого является боль Это нейрогенное воспаление блокируется суматрипаном и алкалоидами спорыньи при дозировке, сходной с дозировкой, требуемой для лечения острой мигрени у человека Хотя и считается, что это блокирование нейрогенной транссудации белка опосредствуется рецептором 5-НТю, однако эффективные дозы 5НТю-избирательных соединений не коррелируют с полученными in vitro показателями связывания на связующем сайте 5-НТю Отсутствие корреляции позволяет предположить, что действие суматриптана может опосредствоваться рецептором иного подкласса, нежели 5-НТю (Неврология, 43, (доп 3), S16 - S20, 1993г) В дополнение отмечалось, что рецепторы а, Нз, иопиоида и соматостатина также могут располагаться в тригеминоваскулярных волокнах и могут блокировать нейрогенную транссудацию плазмы (Мацубара (Matsubara) и др , Европейский фармакологический журнал, 224, 145 - 150, 1992г) Вайншанк (Wemshank) и др отмечали, что суматриптан и несколько алкалоидов спорыньи имеют высокий аффинитет по отношению к рецептору 5-HTIF, предполагая роль рецептора 5HTIF втечение мигрени (W093/14201) Настоящее изобретение предлагает способ лечения мигрени и соотносящихся с ней расстройств умлекопитающих, предусматривающий введение эффективного количества 5-НТір-агониста, или композиции, обладающей активностью 5-НТ1Р-агониста, которая также проявляет минимальное вазоконстрикторное действие Настоящее изобретение предлагает способ лечения мигрени и ассоциируемых с ней расстройств, который основывается на новом механизме действия При медикаментозном воздействии на страдающего от мигрени пациента соединением или составом, являющимся агонистом на рецепторе 5-HTIF, избирательным по отношению к другим рецепторам серотонина, которые дают нежелательные эффекты, такие, например, как вазоконстрикция, нейрогенная менингеальная транссудация, которая приводит к болям, обусловленным мигренью, ингибируется, и удается избежать физиологической предрасположенности к проявлению вазоконстрикторной активности соединений, и других побочных эффектов Этот механизм работает у млекопитающих, и предпочтительным из млекопитающих является человек Еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения предусматривается введение состава, проявляющую избирательную по отношению к 5-HTiF-aroHHcry активностью Этот состав может быть образован одним или несколькими действующими началами, которые, взятые порознь или вместе, являются агонистами рецепторов 5-HTIF, избирательными по отношению к другим рецепторам серотонина, которые дают нежелательные эффекты, такие, например, как вазоконстрикция Термин "б-НТю-агонист", используемый в описании настоящего изобретения, подразумевается как обозначающий полный или частичный агонист Соединение, являющееся частичным агонистом по рецептору 5-HTIF, должно проявлять достаточную агонистическую активность для ингибирования нейрогенной менингеальной транссудации при приемлемой дозировке Хотя в способе по настоящему изобретению может оказаться полезным частичный агонист с любой естественно присущей активностью, предпочтительными являются частичные агонисты с показателем агонистической эффективности по меньшей мере около 50% (Енакс), а частичные агонисты с показателем агонистической эффективности по МеНЬШеЙ М е р е ОКОЛО 8 0 % (ЕНакс) ЯВЛЯЮТСЯ ЄЩЄ более предпочтительными Наиболее предпочтительны агонисты по рецептору 5-HTIF Ингибирование транссудации нейронного белка само по себе является необходимым, но не 44284 достаточным условием для способа по настоящему изобретению Способ по настоящему изобретению кроме этого обусловливает наличие лишь минимальной вазоконстрикции при дозировке, обеспечивающей эффективное ингибирование транссудации нейронного белка Отношение показателя вазоконстриции ECso в подкожной вене ноги кролика к показателю ингибирования транссудации нейронного белка Ю У морской свинки определяется как Индекс й Юбо Индекс специфичности, специфичности по результатам таких рассчитанный анализов, обеспечивает количественных индентифицирование соединений или составов, которые способны провести грань различия между этими физиологическими явлениями (событиями) Набор соединений, использованных для подтверждения сущности настоящего изобретения, а также фармакологические анализы, требуемые для определения Индекса специфичности, описаны ниже Соединение I 3-[2-(диметиламино)этил]-1Чметил-1Н-индол-5метансульфонамид бутан-1,4-диоат (1 1) (Сукцинат суматриптана) НО 8 С СО 2 Н Сукцинат суматриптана выпускается как Imitrex™, либо может быть получен по методу, изложенному в патенте США №5037845, выданному 06 08 91 Соединение II 5-фторо-3-1Н-индол гидрохлорид F ИСІ Соединение II получают следующим способом 2-П-метил-3-пиразоло)-1-этанол В смесь из 200г (2,85моль) 2,3-дигидрофурана и 800мл (4,81 моль) триэтилортоформиата по каплям добавляли 0,8мл (6,5моль) диэтилэтерата трифторида бора После начальной экэотермичсокой реакции смесь выдерживали на перемешивании в течение четырех дней Затем в реакционную смесь добавляли 4,0г карбоната калия и реакционную смесь дистиллировали под давлением в 6,0мм р ст Фракции, отходившие при температурах между 60°С и 130°С, собирали, получая 261,64 (42,1%) светло-желтого масла Масспектрометрия (ср квадр ) 219 (М+) В раствор 87,2г (0,40моль) предварительно полученного желтого масла в 787мл IN NaCI добавляли 21,3мл (0,40моль) метилгидразина и реакционную смесь перемешивали в режиме дефлегмации в течение четырех часов Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды, и летучие фракции удаляли при пониженном давлении Остаток - масла обрабатывали 2N NaOH до получения щелочной реакции, и водную фракцию хорошо экстрагировали дихлорметаном Объединенные органические экстракты высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая 32,15г (64,5%) заглавного соединения в виде коричневого масла Масе-спектрометрия [МС] (ср квадр [с/кв] 126 (М+) ТН-ЯМР (ДМСО-de) 5 7,45 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 4,65 (t, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,55 (m, 2H), 2,55 (t, 2H) 1-метил-4-(2-мстасульфонилоксиэтил) пиразол В раствор 16,0г (127ммоль) 2-(1 -метил-3пиразоло)-1 -этанола и 27мл (1 ЭЗммоль) триэтиламина в 550мл тетрагидрофурана добавляли 10,8мл (140ммоль) метансульфохлорида с охлаждением на ледяной бане По завершении добавления реагента реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов Летучие фракции затем удаляли при пониженном давлении, и остаток разделяли между водой и дихлорметаном Органическую фазу промывали водой и затем насыщенным водным раствором хлорида натрия, и остающиеся органические компоненты высушивали над сульфатом натрия Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая в качестве сырого продукта 28,4г заглавного соединения в виде коричневого масла Продукт использовали без дальнейшей очистки 5-фторо-3-[1,2,5,6-тетрагидро-4-пиридил]-1 Ниндол В раствор 74г гидроокиси калия в 673мл метанола добавляли 10,Ог (74ммоль) 5фтороиндола и 23,Зг (151ммоль) 4-пиперидона НСІНгО Реакционную смесь перемешивали в режиме дефлегмации в течение 18 часов Реакционную смесь разбавляли 1,3л воды и результирующий осадок извлекали фильтрованием и высушивали при пониженном давлении, получая 10,75г (67,2%) 5-фторо-З[1,2,5,6-тетрагидро-4-пиридил]-1 Н-индола в виде желтого твердого вещества 5-фторо-3-(4-пиперидинил)-1Н-индол В раствор 10,75г (50ммоль) 5-фторо-3-[1 2,5,6тетрагидро-4-пиридил]-1 Н-индола в 500мл этанола добавляли 2,0г 5%-ного палладия на углероде и реакционную смесь гидрогенизировали при температуре окружающей среды в течение 18 часов при исходном давлении водорода в 60фунтов/кв дюйм (4,22кг/см2) Реакционную смесь потом фильтровали через подушку (слой) целита, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая беловатый твердый остаток, полученный остаток 44284 8 рекристаллизовали из метанола, получая 8,31 г [1,2,5,6-тетрагидро-4-пиридил]-1 Н-индола в 50мл (76,2%) заглавного соединения в виде смеси тетрагидрофуран этанол (1 1) добавляли обесцвеченного твердого вещества с точкой 0,Зг 5%-ного палладия на углероде и реакционную плавления 229° - 230°С смесь гидрогенизировали при комнатной температуре в течение 18 часов при исходном МС(с/кв) 218 (М+) давлении водорода в 4,22 кг/см2 Реакционную Подсчет по C13H15N2F расчет С, 71,53, Н, смесь затем фильтровали через слой целита и 6,93, N, 12,83, выявлено С, 71,81, Н, 7,02, N, фильтрат концентрировали при пониженном 12,80 давлении Остаток преобразовывали в Алкилирование оксалатную соль, получая 0,98г (80,0%) В раствор 2,0г (9,2ммоль) 5-фторо-3-(4соединения III в виде коричневой пены Точки яиперидинил)-1Н-индола и 2,4г (23ммоль) плавления 67°С карбоната натрия в 50мл диметилформамида добавляли 1,87г (9,2ммоль) 1-метил-4-(2МС(с/кв) 216 (М+) метаисулъфонилокснэтил) пиразола - в 5мл Подсчет по C13H16N2OC2H2O4 расчет С, 58,81, диметилформамида Реакционную смесь Н, 5,92, N, 9,14, выявлено С, 58,70, Н, 5,95, N, перемешивали при 100°С в течение 18 часов 9,39 Реакционную смесь охлаждали до комнатной Соединение IV температуры и растворитель удаляли при 8-хлоро-2-диэтиламино-1,2,3,4пониженном давлении Остаток разделяли между тетрагидронафталин гидрохлорид дихлорметаном и водой и фазы разделяли а Органическую фазу хорошо промывали водой и затем насыщенным водным раствором хлорида натрия Остающуюся органическую фазу высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении Остающееся масло подвергали силикагельСоединение IV получают следующим хроматографии, выполняя элюирование смесью способом дихлорэтан метанол (20 1) Фракции, в которых 8-хлоро-2-тетралон определялось содержании нужного соединения, Смесь 30,0г (0,176моль) о-хлорфенилобъединяли и концентрировали при пониженном уксусной кислоты и 40,0мл тионилхлорида давлении, получая желтое масло Масло перемешивали при температуре окружающей преобразовывали в хлористоводородную соль и среды в течение 18 часов Летучие фракции затем кристаллизовали из этил ацетата/метанола 1,61 г удаляли в вакууме, получая 32,76г (99%) о(51,1%) соединения II получали в виде бесцветных хлорфенилацетилхлорида в виде прозрачной кристаллов с точкой плавления в 239°С бледно-желтой маловязкой жидкости ЯМР (CDCI3) 7,5 - 7,1 (m, 4H), 4,2 (s, 2H) МС (с/кв) 326 (М+) В суспензию 46,5г (0,348моль) АІСІ3 в 400мл Подсчет по C19H23N4FHCI расчет С, 62,89, Н, дихлорметана при -78°С добавляли раствор 6,67, N, 15,44, выявлено С, 62,80, Н, 6,85, N, 32,76г (0,174моль) предварительно 15,40 подготовленного хлорида о-хлорфенилацетила в Соединение III 100мл дихлорметана, добавление осуществляли 5-гидрокси -(4-пиперидинил)-1Н-индол оксалат по каплям в продолжении 1 часа Затем баню со ОН смесью сухого льда с ацетоном заменяли на баню со смесью льда и воды, и через реакционную смесь барботировали этилен в течение временного интервала, за который температура смеси поднималась до 15°С Введение этилена НО прекращали по завершению экзотермической реакции, и реакционную смесь перемешивали при температуре около 5°С в течение 4 часов Затем в о реакционную смесь добавляли лед с целью Соединение III получают следующим разрушения комплексных соединений алюминия способом По прекращению экзотермической реакции 5-бензилокси-3-[1,2,5,6-тетрагидро-4реакционную смесь разбавляли 500мл воды и пиридинил]-1 Н-индол интенсивно перемешивали до растворения всех Используя в качестве исходным реактивов 5г твердых фракций Фазы разделяли, и (22ммоль) 5-бензилоксиндола и 6,88г (45ммоль) 4органическую фазу промывали трижды 400мл IN пиперидона НСІНгО получали 6,53г (97,6%) 5хлористоводородной кислоты и дважды 400мл бензилокси-3-[1,2,5,6-тетрагидро-4-пиридил]-1 Ннасыщенного водного раствора бикарбоната индола в виде желтого твердого вещества, по натрия Остающуюся органическую фазу методике, изложенной для синтеза 5-фторо-Звысушивали над сульфатом натрия и [1,2,5,6-тетрагидро-4-пиридил]-1 Н-индола (см концентрировали под вакуумом, получая бледновыше) Полученный материал использовали на оранжевый остаток Полученный остаток последующей стадии без дополнительной растворяли в смеси гексан диэтиловый эфир (1 1) очистки и выливали на испарительную колонку с Гидрогенизация/гидрогенолиз диоксидом кремния с последующим В раствор 1,23г (4ммоль) 5-бензилокси-З V 44284 элюированием смесью гексан диэтиловый эфир (11), получая светло-желтый остаток, который кристаллизовали из смеси гексан диэтиловый эфир (4 1), получая 10,55г заглавного соединения ЯМР (CDCI3) 7,5 - 7,2 (m, ЗН), 3,7 (s, 2H), 3,3 3,0 (t, J=7 Hz, 2H), 2,8 - 2,4 (t, J=7 Hz, 2H) MC 180(60), 165(9), 138(100), 117(52), 115(50), 103(48), 89(20), 76(25), 74(18), 63(30), 57(9), 52(28), 51(20), 42(6), 39(32) Нерастворимый остаток (перкаль [nujol mull]) 1 1 1 2950см , 2 9 2 7 C M , 1 7 0 8 C M , 1464CM \ 1450см \ 1169см \ 1141см 1 Восстановительное аминирование В раствор 0,5г (2,78ммоль) 8-хлоро-2тетралона в 25мл циклогексана добавляли 1,4мл (13,9ммоль) диэтиламина с последующим добавлением 0,1 г моногидрата ртолуолсульфокислоты Реакционную смесь затем нагревали в режиме дефлегмации с постоянным удалением воды (ловушка Дина-Старка) в течение 18 часов Реакционную смесь затем охлаждали до температуры окружающей среды, и летучие фракции удаляли при пониженном давлении Остаток затем растворяли в 15мл метанола, куда затем добавляли 1,5мл уксусной кислоты, и затем порционно добавляли 0,5г борогидрита натрия Реакционную смесь затем перевешивали в течение 1 часа при температуре окружающей среды Затем реакционную смесь разбавляли 20мл 10%-ной НСІ, и перемешивали еще в течение 1 часа Смесь затем экстрагировали диэтиловым эфиром, а остающуюся водную фазу выливали на лед, доводили до основной реакции с помощью гидрооксида аммония, и тщательно экстрагировали дихлорметаном Полученные экстракты объединяли, высушивали над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении Остаток вновь растворяли в дихлорметане и подвергали хроматографии на основной окиси алюминия, выполняя элюирование дихлорметаном Фракции, в которых определялось содержание продукта, объединяли и концентрировали при пониженном давлении Остаточное масло растворяли в диэтиловом эфире и раствор насыщали хлороводородом Вязкий остаток выкристаллизовывали из ацетона/диэтилового эфира, получая 0,20г (23,2%) соединения IV в виде бесцветных кристаллов Точка плавления 158°-159°С МС (с/кв) 273 Подсчет по C14H21NCIHCI расчет С,61,32, Н, 7,72, N, 5,11, выявлено С, 61,62, Н, 7,94, N, 5,03 Соединение V б-гидрокси-З-диметиламино-1,2,3,4тетрагидрокарбазол Соединение способом V получают следующим 10 4 4-диметиламино-1 -циклогексаном этиденкеталь В раствор 5,0г (32ммоль) 1,4циклогександиона моноэтиленкеталя и 10,80г (240ммоль) диметиламина добавляли 2,0мл уксусной кислоты, и смесь перемешивали при 0°С в течение 1,5 часов В этот раствор затем добавляли 3,62г (58ммоль) цианоборгидрида натрия и реакционную смесь перемешивали еще в течение часа при комнатной температуре Величину рН реакционной смеси доводили до примерно 7, используя 16мл уксусной кислоты и перемешивая реакционную смесь в течение 18 часов при комнатной температуре Летучие фракции удаляли при пониженном давлении, и остаток растворяли в холодном 5%-ном растворе винной кислоты, после чего водную фазу доводили до основной реакции с помощью 5 N гидрооксида натрия Эту водную фазу тщательно экстрагировали дихлорметаном Полученные органические экстракты объединяли и концентрировали при пониженном давлении, получая 5,04г (85%) заглавного соединения в виде масла 4-диметиламино-1-циклогексанон 4,96г (26,8ммоль) 4-диметиламино-1циклогексанон этиленкеталя растворяли в 50мл муравьиной кислоты, и раствор перемешивали в режиме дефлегмации в течение 18 часов Реакционную смесь затем охлаждали до температуры окружающей среды, и летучие фракции удаляли при пониженном давлении, получая 3,78г (100%) заглавного соединения 6-бензилокси-3-диметиламино-1,2,3,4тетрагидрокарбозол В раствор 3,78г (26,8ммоль) 4-диметиламииоІ-циклогексанона и 6,69г (26,8ммоль)гидрохлорида 4-бензилоксифенил гидразина в 50мл этанола добавляли 2,17мл (26,8ммоль) пиридина В этот раствор добавляли 5 х 10мл порций воды, и реакционную смесь выдерживали при 0°С в течение 18 часов Реакционную смесь затем разбавляли дополнительными 50мл воды, и смесь тщательно экстрагировали дихлорметаном Объединенные органические экстракты высушивали над сульфатов натрия, и летучие фракции удаляли при пониженном давлении Остаточное масло подвергали хроматографии на силикагели, выполняя элюирование смесью хлороформ метанол (91) Фракции, в которых определялось содержание нужного продукта, объединяли и концентрировали при пониженном давлении, получая 2,14г (24,9%) заглавного соединения Гидрогенолиз В раствор 2,14г (6,7ммоль) 6-бензилокси-Здеметиламино-1,2,3,4-тетрагидрокарбазола в 50мл этанола добавляли 0,20г 10%-ного палладия на углероде, и реакционную смесь гидрогенизировали при комнатной температуре при исходном давлении водорода в 40фунтов/кв дюйм (2,81 кг/см2) После 5 часов в реакционную смесь дополнительно вводили 0,20г 10%-ного палладия на углероде и смесь вновь помещали под водород с давлением в 2,81 кг/см2 на 4 часа Затем реакционную смесь фильтровали 11 44284 12 через подушку из целита, и фильтрат биохимия, 72, 248 - 254, 1976г) концентрировали при пониженном давлении Связывание радиолиганда 3 Остаток подвергали хроматографии на флорисиле Связывание [ Н]5-НТ выполняли с (Flonsil), выполняя элюирование смесью использованием слегка модифицированных хлороформ метанол (91) Фракции, в которых условий анализа 5-НТю, описанных Херрикомопределялось содержание, нужного соединения, Дейвисом и Тайтлером (Hernck-Davis, Titeler) объединяли и концентрировали при пониженном (Нейрохимический журнал, 50, 1624 - 1632, давлении Остаток вновь подвергали 1988г), без задействования маскировочных лигандов Исследования связывания хроматографии на флорисиле, элюируя градиентом, содержащим из хлороформа, радиолиганда выполняли при 37°С в общем содержащего 2 - 10% метанола Фракции, в объеме в 250 цл буфера (50ммоль Tns, Юммоль которых определялось содержание продукта, МдСЬ, 0,2ммоль ЭДТК, 10 цмоль паргилина, 0 , 1 % объединяли и концентрировали при пониженном аскорбоната, рН=7,4 при 37°С) в 96-луночных давлении, получая Соединение V в виде твердых планшетах для микротитрования Исследования кристаллов насыщения проводили с использованием [ Н]5-НТ при различных концентрациях в диапазонеот МС (с/кв) 230 (М+) 0,5нмоль до ЮОнмоль Исследования замещения Подсчет по Ci 4 Hi 8 N 2 O расчет С, 73,01, Н, выполнялись с использованием 4,5 - 5,5нмоль 7,88, N, 12,16, выявлено С, 72,75, Н, 7,83, N, [ 3 Н]5-НТ Кривую связывания молекулярных 11,97 средств в конкурентных (сравнительных) Чтобы определить роль рецепторного подтипа экспериментах получали в результате 5-HTIF как посреднического фактора в развитии использования 1 0 - 1 2 концентраций соединения нейрогенной менингеальной транссудации, Временные циклы инкубации составляли 30 минут приводящей к болевым симптомам мигрени, как для исследований насыщения, таки для вначале с использованием стандартных методов исследований замещения, исходя из измеряли аффинитет связывания соединений из предварительных исследований, в которых было перечня по отношениям к рецепторам определено равенство условий связывания серотонина Например, способность соединения Неспецифическое связывание определялось в связываться с рецепторным подтипом 5-HTIF присутствии 10 цмоль 5-НТ Связывание проявлялась в существенной степени так, как это инициировали введением 50 цл мембранных описано в работе Н Эдхема (N Adham) и др , гомогенатов 10 - 20 цг) Реакцию заканчивали Труды Национальной академии наук США, 90, 408 быстрой фильтрацией через предварительно — 412, 1993г Для целей сравнения показателей промоченные (5%-ный полиэтиленимин) фильтры, аффинитета связывания соединений по используя харвестер клеток Brandel 48R отношению к другим рецепторам серотонина (Гейтерсберг, Мериленд) Далее фильтры определялось в существенной степени так, как промывали в течение 5 секунд ледяным буфером изложено ниже, за исключением того, что взамен (50ммоль Tns HCI, pH=7,4 при 4°С), сушили и используемого клона рецепторов 5-HTIF помещали во флаконы, содержащие 2,5мл использовались различные клонированные состава Readi-Safe (Beckman, Фуллертон, рецепторы Калифорния), и радиоактивность измеряли с Подготовка мембран помощью жидкого сцинтиляционного счетчика Мембраны подготавливали из Beckman LS 5000 ТА Эффективный подсчет [ 3 Н]5трансфецированных Ltk-клеток, которые НТ в среднем давал величину в 45 - 50% Данные выращивались до 100%-ного слияния Клетки по связыванию анализировали на компьютере с дважды промывали физиологическим раствором с применением нелинейного регрессионного фосфатным буфером (ЗФР), счищали с чашек для анализа (Accufit and Accucomp, Lunden Software, культивирования в 5мл охлажденного на льду Чагрин Фолз, Огайо) Значение ICso ЗФР, и центрифугировали при 200хд в течение 5 преобразовывали в значения Ki, используя минут при 4°С Дебрис ресуспендировали в 2,5мл уравнение Ченга-Прусофа (Cheng-Prusoff) охлажденного на льду Tns-буфера (20ммоль Tns (Биохимическая фармакология, 22, 3099 - 3108, HCI, рН=7,4 при 23°С, 5ммоль ЭДТК) и 1973г) Все эксперименты выполнялись гомогенизировали на измельчителе ткани троекратно Результаты изложенных Wheaton Лизат затем центрифугировали при 200хд в течение 5 минут при 4°С с целью вывода в исследований связывания сведены Таблице 1 осадок более крупных фрагментов, которые удалялись Супернатант собирали и Таблица 1 центрифугировали при 40000хд в течение 20 Связывание по серотонергическим подтипам минут при 4°С Полученный в результате этого рецепторов (5-НТі) (Кі, нмоль) центрифугирования дебрис однократно Соединение 5-НТюа 5-HT1D@ 5-НТ 1 Е 5-HT 1F промывали в ледяном промывочном Tns-буфере и I 4,8 9,6 2520,0 25,7 ресуспендировали в конечном буфере, содержащем 50ммоль Tns HCI и 0,5ммоль ЭДТК 21,7 53,6 50,3 2,5 II рН=7,4 при 23°С Препараты мембран сохраняли III 163,2 196,5 3,9 22,0 на льду и использовали в течение двух часов для выполнения анализа на связывание IV 13,5 145,3 813,0 129,2 радиолиганда Концентрацию белка определяли V 791,0 1683,0 73,6 10,0 по методу Брэдфорда (Bradford) (Аналитическая 44284 14 соответственно) и помещали в раму для стереотаксиса (David Kopf Instruments), Как сообщалось Р Л Вайншанком и др устанавливая нож на -3,5мм для крыс или -4,0мм (W093/14201), 5-HTIF функционально связан с Gдля морских свинок После выполнения белком, что определялось по способности сагиттамного разреза скальпа по средней линии в серотонина и серотонергических препаратов черепе выполняли две пары билатеральных ингибировать стимулированное форсколином сквозных отверстий (6мм назад, 2,0 и 4,0мм (forskolm) продуцирование цАМФ в клетках латеральне у крыс, 4мм назад, 3,2 и 5,2мм NIH3T3, трансфецированных рецептором 5-HTIF латерально у морских свинок, все координаты Активность аденилатциклазы определяли, даны относительно брегмы) Пары электродовиспользуя стандартные методики Максимальный стимуляторов, выполненных из нержавеющей эффект достигается, серотонином Величина Е т а х стали и изолированных по длине, за исключением определяется делением данных ингибирования рабочих концов (Rhodes Medical Systems, Inc), испытуемого соединения на максимальную вводили через указанные отверстия в оба величину эффективности с определением полушария наглубину Эмм (крысы) или 10,5мм процентного показателя ингибирования (Н (морские свинки) от пахименикса Эндхем и др, см выше, РЛ Вайшанк и др, Труды Национальной академии наук США, 89, Бедренную вену открывали, и дозу тест3630 - 3634, 1992г, и цитируемые здесь ссылки соединения вводили внутривенно (1 мл/кг) 13 Измерение формирования цАМФ Трансфецированные клетки NIH3T3 (оценочное значение В т а х от конкурентного анализа по одной точке = 488фмоль/мг белка) инкубировали в среде DMEM, 5ммоль теофиллина, 10ммоль среды HEPES (4-[2гидроксиэтил]-1-пиперазинэтансульфоновая кислота), и 10 имоль паргилина в течение 20 минут при 37°С, 5% СО2 Кривые "концентрацияэффективность" строили затем введением 6 различных конечных концентраций препарата с последующим незамедлительным введением форсколина (10 имоль) После этого клетки инкубировали еще 10 минут при 37°С, 5% ССЬ Среду подвергали аспирации, и реакцию останавливали, вводя ЮОммоль HCI Для демонстрации конкурентного антагонизма осуществляли параллельные измерения на кривой "концентрация-реакция" для 5-НТ, используя фиксированную дозу метиотепина (0,32 имоль) Планшеты выдерживали при 4°С в течение 15 минут, и затем центрифугировали в течение 15 минут при 500хд для получения клеточного дебриса, а супернатант разделяли на аликвоты и хранили при -20°С перед выполнением оценки формирования цАМФ с использованием радиоиммуноанализа (набор для цАМФрадиоиммуноанализа, Advanced Magnetics, Кембридж, Массачусетс) Радиоактивность определяли (количественно), используягаммасчетчик Packard COBRA Auto Gamma, оборудованный программным обеспечением для предварительной обработки данных Все тестированные соединения были определены как антагонисты по 5-НТір-рецептору в ходе цАМФанализа Нижеприводимый тест выполнялся с целью определения способности соединений приведенного набора ингибировать транссудацию белка, что представляет собой функциональный анализ нейронного механизма мигрени Результаты этого анализа сведены в Таблице II Анализ белковой транссудации Крыс линии Harlan Sprague Dawley (225 - 325г) или морских свинок линии Charles River Laboratories (225 - 325г) анестезировали интраперитонеальным введением пентобарбитала натрия (65мг/кг, или 45мг/кг, Примерно через 7 минут внутривенно также вводили 50мг/кг - дозу флюоресцентного красителя Evans Blue Краситель Evans Blue, образуя комплексы с белками в крови, функционировал в качестве маркера для транссудации белка Точно через 10 минут после иньецирования тест-соединения ганглий тройничного нерва стимулировали в течение 3 минут при интенсивности тока в 1,0мА (5гц, длительность 4мсек) с помощью потенциостата/гальваностата модели 273 (EG&G Princeton Applied Research) Через 15 минут после стимуляции животных умерщвляли и обескровливали с помощью 20мл физиологического раствора Верхнюю часть черепной коробки удаляли для облегчения сбора дуральных мембран Пробы мембран снимали с обоих полушарий, промывали водой и, разравнивая, размещали на предметных стеклах После высыхания ткани покрывали прозрачным слоем из 70%-ного раствора глицерина в воде Для количественной оценки содержания красителя Evans Blue в каждой пробе использовали флюоресцентный микроскоп (Цейс), оборудованный дифракционным монохроматором и спектрофотометром Использовалась длина волны возбуждения примерно в 535нм, и интенсивность эмиссии определялась в бООнм Микроскоп был оборудован платформой с механическим приводом и подсоединен через интерфейс к персональному компьютеру Это позволило осуществить управляемое компьютером перемещение платформы с выполнением замеров флюоресценции в 25 точках (шаг перемещения в 500 им) на каждой из проб пахименикса Среднее и стандартное отклонение в ходе измерений определялось компьютером Транссудация, вызванная электрической стимуляцией ганглия тройничного нерва, носила ипсилатеральный эффект (т е имело место только на той стороне пахименикса, где выполнялась стимуляция ганглия тройничного нерва) Это позволяло использовать другую (нестимул ированную) половину пахименикса в качестве контроля Отношение объема транссудации в пахимениксе на стороне, подвергшейся стимуляции, к этому же показателю 15 44284 по нестимулированной стороне, просчитывалось Полученные с физиологическим раствором пробы от контроля давали величины отношения примерно в 2,0 у крыс и 1,8 у морских свинок В то же время эффективное предотвращение Транссудации в пахимениксе стимулированной стороны с помощью описываемого соединения позволяло получить величину указанного отношения приблизительно в 1,0 Была построена кривая "доза-реакция", и была аппроксимирована доза, ингибирующая транссудацию на 50% (Dso) 16 нейронного белка, вызванной стимуляцией ганглия тройничного нерва Как определялось выше, частичные агонисты рецептора 5-HTIF могут быть также полезны в способе по настоящему изобретению Например, в практической терапии мигрени известно использование дигидроэрготалина, имеющего следующую структуру Таблица II Ингибирование транссудации белка (Юбо ммоль/кг) Соединение в/в Юбо (ммоль/кг) I 2,6хЮ8 II 8,0хЮ10 III 8,9хЮ9 IV 1,2хЮ7 V 8,7хЮ9 Чтобы определить, существует ли взаимосвязь между аффинитетом связывания по каждому из рецепторов 5-НТюа, 5-НТюр, 5-HTIE И 5-HTIF и транссудацией нейронного белка, в модели транссудации белка аффинитет связывания для каждого подтипа рецептора представляли в функциональной зависисмости от соответствующих значений IDso Для каждого набора данных выполняли линейный регрессионный анализ, после чего рассчитывали коэффициент корреляции R Результаты этого анализа сведены в Таблице III Таблица Коэффициент корреляции (R ) для аффинитета связывания по специфическому подтипу 5-НТі относительно ингибирования транссудации белка Подтип 5-НТі Коэффициент корреляции (R2) 5-НТюа 0,07 5-HT1D@ 0,001 5-НТ 1 Е 0,31 5-HT 1F 0,94 Идеально линейная взаимосвязь дала бы величину коэффициента корреляции, равную 1,0, что указывало бы на причинно-следственную связь между двумя переменными Экспериментально установленный коэффициент корреляции между ингибированием транссудации нейронного белка и аффинитетом связывания 5H T I F равен 0,94 Такая близкая к идеальной зависимость IDso в модели транссудации белка от аффинитета связывания по рецептору 5 - H T I F наглядно демонстрирует, что рецептор 5 - H T I F опосредует ингибирование транссудации СН, Дигидроэрготамин, в ходе его тестирования в вышеизложенных анализах, показал связывание по рецептору 5 - H T I F (Ki = 276нмоль), но в цАМФанализе был, однако, определен как частичный агонист по рецептору 5-HTIF (E m a x " 49,9%) При испытаниях в анализе на транссудацию нейронного белка дигидроэрготамин показал себя полностью эффективным ингибитором транссудации нейронного белка (Dso - 2,43 х 10 8 ммоль/кг), достигая величины соотношения в 1,0 при сравнивании разных сторон пахименикса Дигидроэрготамин известен как мощный вазоконстриктор (Гудман и Гилман (Goodman, Gilman), Фармакологические основы терапевтики, 8-е издание,943 - 947, Pergamon Press, Нью-Йорк, 1990г), и по этой причине не может быть соединением, полезным для целей настоящего изобретения Притом, что соединение должно обладать агонистическим действием по отношению к рецептору 5-HT-IF, чтобы быть применимым в способе по настоящему изобретению, очень важно, чтобы оно не проявляло сколько-нибудь существенного вазоконстрикционного действия Списочные соединения I, II, IV и V затем тестировали в нижеприводимом анализе для определения их способности опосредствовать вазоконстрикцию в кожной вене ноги кролика Данные этого анализа сведены в Таблице IV Контрактура подкожной вены ноги кролика Самцов кролика (Новозеландский белый, 1,32 2,64кг) (Hazleton, Каламазу, Мичиган) умерщвляли летальной дозой пентобарбитала натрия (325 мг), вводимой в ушную вену Ткани отсекали от соединительной ткани, катетеризовали in situ полиэтиленовыми трубками (РЕ50, наружный диаметр 0,97мм), и помещали в чашки Петри, содержащие бикарбонатный буфер 17 44284 18 Кребса (Krebs) (описывается ниже) Концы двух нагружали исходным оптимальным усилием выполненных из нержавеющей стали игл для нагрузки покоя в 1гм Изометрические сокращения подкожных инъекций (р-р 30), изогнутые в форме регистрировались как изменения в граммах L, вводили в полиэтиленовые трубки Сосуды усилия на приборе Beckman Dynograph с помощью затем осторожно перемещали с катетеров на датчиков Statham UC-3 и вспомогательных иглы Иглы затем разделяли таким образом, приставных элементов микромасштабирования чтобы нижняя была закреплена нитью на Перед воздействием лекарственными средствами стационарном стеклянном стержне, а верхнюю с ткани выдерживали в течение 1 - 2 часов для помощью нити привязывали к датчику приведения их в равновесное состояние Кривые "нарастающая концентрация агониста—эффект" Ткани помешали в тест-ванны, содержавшие строили для испытуемых проб тканей, и ни одну 10мл модифицированного раствора Кребса со пробу ткани не использовали для построения следующим составом 118,2ммоль NaCI, 4,6ммоль более чем двух кривых "концентрация агониста— КСІ, 1,6ммоль СаСІН2О, 1,2ммоль КН2Р04, эффект" Все результаты выражались как среднее 1,2ммоль MgSO4, Ю.Оммоль декстрозы и ЕС50, а максимальный эффект выражался как 24,8ммоль ЫаНСОз Температуру тканевых ванн процент от реакции на 67ммоль KCI, вводимую в поддерживали на 37°С, выполняя аэрацию с каждую тканевую пробу помощью 95% О и 5% СОг Подкожную вену ноги 2 Таблица IV Контрактура подкожной вены ноги кролика Соединение Контрактура подкожной вены ЕС50, (моль) Контрактура подкожной вены (% макс KCI)* I 6,6хЮ 7 64,20 II 1,0хЮ6 13,72 IV 1,0хЮ У 6 > 1,0хЮ 67,16 4 * Определялся либо максимум реакции, либо реакция при 10 4моль, если не достигалось максимальное сокращение В этом вазоконстрикционном анализе замеряются два важных параметра контрактура подкожной вены ноги (ЕС50) и максимальное сокращение как процентный показатель максимальной реакции на КС1 Контрактура подкожной вены (ЕС50) является мерой дозы, необходимой для сокращения ткани на 50% максимальной реакции, которую может опосредовать конкретное соединение Максимальная реакция, которую может продемонстрировать подкожная вена, измеряется после введения высокой концентрации (67ммоль) KCI Процентный показатель максимального сокращения по KCI представляет собой отношение величины максимальной реакции, которую способно опосредствовать конкретное соединение, к величине максимальной реакции, 12,44 которую может продемонстрировать ткань Представленные в таблицах II и IV данные четко показывают, что списочные соединения существенно отличаются друг от друга по их способности ингибировать транссудацию нейронного белка и опосредствовать вазоконстрикцию Специфичность обуславливается способом по настоящему изобретению, определяется как ограничение способности опосредствовать вазоконстрикцию от опосредствованного 5-HT1F ингибирования транссудации нейронного белка Мерой этой специфичности является отношение величины вазоконстрикции к эффективности ингибирования транссудации нейронного белка Это отношение, определяемое как индекс специфичности, представлено в таблице V для списочных соединений, где Индекс специфичности = Скорректированная вазоконстрикция ЕС50(мол^Транссудация Юбо(ммоль/кг) Таблица V Индекс специфичности Отношение вазоконстрикции к опосредствованному 5-HTIF ингибирования транссудации нейронного белка Соединение А I 2,6хЮ8 В Скорректированная вазоконстрикция ЕС50 (M)* 1,03хЮ8 II 8,0хЮ10 7,29 х 10 8 Транссудация Юбо(ммоль/кг) IV V 1,2хЮ 7 8,7хЮ 9 91,12 1,49хЮ9 >8,03хЮ Индекс специфичности (отношение В/А) 0,40 0,01 6 > 923,00 19 44284 Для коррелирования значений ECso для сокращений подкожной вены ноги таким образом, чтобы в расчет можно было принимать максимальное значение сокращения по отношению к KCI для каждого из соединений, значение Юбо вазоконстрикции делится на процентный показатель максимума сокращений по KCI, что дает "скорректированную вазоконстрикцию ЕС50 (M)" Соединения II и V являются примерами специфичности, типичной для соединений, приемлемых для осуществления способа по настоящему изобретению, имея индексы специфичности в 91,12 и > 923, соответственно В качестве сравнения, соединения I и IV, проявляя значительную активность по компоненту 5-HT-IF, В тоже время не проявляют никакого уровня требуемой специфичности Суматриптан (соединение I), известное в практике средство от мигрени, дает едва различимую разницу показателей активности в обеих функциях, обнаруживая большую эффективность в плане вазоконстрикции Соединение IV в гораздо большей степени стимулирует вазоконстрикцию, чем ингибирует транссудацию нейронного белка Пригодность соединения или состава для использования в способе по настоящему изобретению определяется поэтому следующим образом 1 Определение аффинитета к рецептору 5HTIF с использованием методики связывания радиолиганда, описанной выше, 2 После установления аффинитета к рецептору 5-HTIF определение, является ли соединение агонистом, частичным агонистом или антагонистом, с использованием измерений в описанном выше цАМФ-анализе, 3 Если соединение или состав определяются как агонист или частичный агонист с величиной Emax по меньшей мере около 50%, они подвергаются тестированию с целью измерения их эффективности в ингибировании транссудации белка и в сокращении подкожной вены, с использованием вышеописанных методик анализа, и 4 Расчет Индекса специфичности, как изложено выше Хотя для использования в способе по настоящему изобретению применимы соединения и составы с Индексом специфичности больше 1, предпочтительны более высокие значения Индекса специфичности Более высокий Индекс специфичности свидетельствует о большей специфичности в эффективности ингибирования транссудации нейронного белка по отношению к вазоконстрикции Нижеприводимые диапазоны значений Индекса представляют показатели специфичности соединений или составов, пригодных для использования в настоящем изобретении, и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения в каком бы то ни было плане Индекс специфичности больше 1 Индекс специфичности, по меньшей мере, равный 5 20 Индекс специфичности в диапазоне 5 -10000 Индекс специфичности в диапазоне 5 -1000 Индекс специфичности в диапазоне 5-100 Индекс специфичности в диапазоне 5-10 Индекс специфичности, по меньшей мере, равный 10 Индекс специфичности в диапазоне 10 10000 Индекс специфичности в диапазоне 10-1000 Индекс специфичности в диапазоне 10-100 Индекс специфичности, по меньшей мере, равный 100 Индекс специфичности в диапазоне 100 10000 Индекс специфичности в диапазоне 100 1000 Индекс специфичности, по меньшей мере, равный 1000 Индекс специфичности в диапазоне 1000 10000 Индекс специфичности в диапазоне 2000 10000 Индекс специфичности в диапазоне 2000 5000 Индекс специфичности в диапазоне 4000 10000 Индекс специфичности в диапазоне 6000 10000 Индекс специфичности в диапазоне 8000 10000 Индекс специфичности, по меньшей мере, равный 10000 Подытоживая сказанное, полезность соединения или состава в способе терапевтического воздействия на боль, вызванную мигренью, и связанные с ней расстройства без возникновения ощутимых побочных явлений, обусловленных вазоконстрикцией, определяется их Индексом специфичности Индекс специфичности представляет собой величину отношения вазоконстрикции к эффективности ингибирования транссудации нейронного белка Мерой способности соединения или состава ингибировать транссудацию нейронного белка служит функциональный анализ физиологических явлений, ведущих к мигрени Транссудация нейронного белка, как было показано, ингибируется агонистами рецептора 5-HTIF Хотя используемое в способе по настоящему изобретению соединение можно вводить непосредственно, без каких-либо дополняющих компонентов, эти соединения обычно вводятся в форме фармацевтических составов, содержащих фармацевтически приемлемый наполнитель и, по меньшей мере, один активный ингредиент Эти составы могут вводиться разнообразными способами, включая пероральное, трансбуккальное, перректальное, трансдермалыюе, подкожное, внутривенное, внутримышечное и трансназальное введение Многие из соединений, используемых в способах по настоящему изобретению, эффективны как в форме инъецируемых составов, так и в форме составов для перорального введения Такие составы 44284 22 21 подготавливаются хорошо известными в активного соединения, рассчитанное для фармацевтической практике методами и содержат получения желаемого терапевтического эффекта, по меньшей мере одно активное соединение См , совместно с фармацевтически приемлемым например, Remington's Pharmaceutical Sciences наполнителем Активные соединения в целом (16-е издание, 1980г) эффективны в пределах широкого диапазона При подготовке составов, используемых в дозировок Однако должно быть очевидным, что настоящем изобретении, активный ингредиент количество соединения, реально вводимое обычно смешивается с наполнителем, пациенту, должно определяться лечащим врачом разбавляется наполнителем, либо заключается в с учетом конкретных обстоятельств, включая такой носитель, который может иметь форму характер подлежащего терапевтическому капсулы, саше, бумажного или иного контейнера воздействию болезненного состояния, выбранный Когда наполнитель служит в качестве путь введения препарата, реально вводимое разбавителя, он может представлять собой соединение или соединения, возраст, вес и твердый, полутвердый или жидкий материал, реакцию конкретного пациента, и остроту который функционирует как наполнитель, симптомов у пациента носитель или среда для активного ингредиента Нижеприводимые дозировки даются только в Таким образом, составы могут иметь форму порядке примеров и не могут рассматриваться, таблеток, пилюль, порошков, лепешек, саше, как ограничивающие существо настоящего облаток, эликсиров, суспензий, растворов, изобретения в какой бы то ни было степени В эмульсий, сиропов, аэрозолей (твердого вещества некоторых случаях уровни дозировки, имеющие или в жидкой среде), мазей с содержанием, значения значительно ниже приводимых в например, до 10% весовых активного соединения, примерах, могут быть более чем достаточными в твердых и мягких желатиновых капсул, то же время в других случаях даже более высокие суппозиториев, стерильных растворов для дозы могут быть использованы без формирования инъекций, и стерильных пакетиков с порошком вредных побочных эффектов, при условии, что такие увеличенные дозы вначале делятся на При подготовке композиции может быть несколько доз меньшего объема для их введения необходимым осуществлять помол активного в течение суток соединения, чтобы обеспечить соответствующий гранулометрический состав перед смешиванием Пример композиции 1 его с другими ингредиентами Если активное Подготовка капсул из твердого желатина с соединение является в существенной степени содержанием следующих ингредиентов нерастворимым, его обычно размалывают до гранулометрии менее чем 200меш Если активное Ингредиент Количество (мг/капсулу) соединение является в существенной степени Соединение II 30,0 водорастворимым, гранулометрию в ходе помола Крахмал 305,0 подбирают такой, чтобы она обеспечила Стеарат магния 5,0 равномерное распределение соединения в композиции, например, приблизительно в 40меш Вышеперечисленные ингредиенты К примерам приемлемых наполнителей смешивают и заполняют смесью капсулы из относятся лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, твердого желатина с количеством содержимого в маннит, крахмалы, аравийская камедь, фосфат 340мг кальция, альгинаты, трагант, желатин, силикат Пример композиции 2 кальция, микрокристаллическая целлюлоза, Таблетки с содержанием следующих поливнилпирролидон, целлюлоза, вода, сироп, и ингредиентов метил целлюлоза Терапевтические композиции могут дополнительно включать в себя Количество Ингредиент замасливатели, такие как тальк, стеарат магния, и (мг^аблетку) минеральное масло, смачивающие вещества, Соединение V 25,0 эмульсификаторы и суспендирующие вещества, Целлюлоза консерванты, такие как метили микрокристаллическая 200,0 пропил гид робензоаты, подслащивающие Коллоидная двуокись вещества, и вкусовые ингредиенты Составы по кремния 10,0 настоящему изобретению могут подготавливаться Стеариновая кислота 5,0 таким образом, чтобы обеспечивать быстрое, замедленное или задержанное высвобождение Компоненты смешивают и прессуют в активного ингредиента после введения препарата таблетки, по 240 мг каждая пациенту с использованием известных в практике Пример композиции 3 методов Сухой порошок для ингаляции, содержащий Составы предпочтительно подготавливаются следующие компоненты в форме единичных раздельных доз Термин "единичная доза" подразумевает физически Ингредиент Вес, % раздельные единицы дозировки, пригодные для Соединение II 5 использования в качестве разовых единичных Лактоза 95 дозировок для человека и иных млекопитающих, при этом каждая единичная доза содержит Активную смесь смешивают с лактозой и предварительно определенное количество 23 готовую смесь помещают вдыхания сухих порошков Пример композиции 4 44284 в Ингредиент Соединение V Крахмал Микрокристаллическая целлюлоза Полихлорвинилпирролидон (10%-ный раствор в воде) Крахмал с карбоксиметилом натрия Стеарат магния Тальк Всего ингалятор для Количество (мг^аблетку) 30,0 45,0 35,0 4,0 4,5 0,5 1,0 120 мг Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу просеивают через сито №20меш (США) и тщательно смешивают Раствор поливинилпирролидона смешивают с полученным порошком и смесь затем пропускают через сито №16меш (США) Затем к гранулам добавляют крахмал с карбоксиметилом натрия, стеарат магния и тальк, предварительно пропущенные через сито №30меш (США), и, после смешивания их с гранулами, смесь прессуют на таблетировочной машине, получая таблетки по 120мг каждая Пример композиции 5 Капсулы с содержанием 40мг лекарственного препарата Ингредиент Соединение II Крахмал Стеарат магния Всего Количество (мг^аблетку) 40,0 109,0 1,0 150,0мг Активный ингредиент, крахмал и стеарат магния смешивают, пропускают через сито №20меш (США), и заполняют смесью капсулы из твердого желатина по 150мг в каждую Пример композиции 6 Суппозитории с содержанием 25мг активного ингредиента Ингредиент Соединение V Глицериды насыщенных жирных кислот, до Количество 25мг 2000мг Активный ингредиент пропускают через сито №60меш (США) и суспендируют в глицеридах насыщенных жирных кислот, предварительно расплавленных с минимальной температурой нагрева Смесь затем заливают в формы для суппозиториев с номинальной емкостью в 2,0г и охлаждают Пример композиции 7 Суспензии с содержанием лекарственного препарата в 50мг на дозу в 5,0мл Ингредиент Количеств Таблетки ингредиента с 24 содержанием Соединение II Ксантановая камедь Натрийкарбоксиметил целлюлоза (11%) Микрокристаллическая целлюлоза (89%) Сахароза Бензоат натрия Вкусовые и красящие добавки Очищенная вода, до 30мг активного о 50,0мг 4,0мг 50,0мг 1,75г 10,0мг п/у 5,0мл Лекарственный препарат, сахарозу и ксантановую камедь смешивают, пропускают через сито №10меш (США), и затем смешивают с предварительно приготовленным раствором микрокристаллической целлюлозы и натрийкарбоксиметилцеллюлозы в воде Бензоат натрия, вкусовые добавки и красители разбавляют некоторым количеством воды и вмешивают в основную часть смеси Затем в смесь добавляют воду в количестве, достаточном для получения нужного объема Пример композиции 8 Капсулы с содержанием 15мг лекарственного вещества Ингредиент Соединение V Крахмал Стеарат магния Всего Количество (мг/капсулу) 15,0 407,0 3,0 425,0 Активный ингредиент, крахмал и стеарат магния смешивают, пропускают через сито №20меш (США), и заполняют смесью капсулы из твердого желатина по 425мг в каждую Пример композиции 9 Композиция для внутривенных инъекций Ингредиент Соединение II Изотонический физраствор Количество 250,0мг 1000мл Пример композиции 10 Композиция для местного применения Ингредиент Соединение V Парафин-эмульсификатор Жидкий парафин Белый мягкий парафин Количество 1 -Юг ЗОг 20г до ЮОг Белый мягкий парафин нагревают до расплавления Жидкий парафин и парафинэмульсификатор вмешивают до полного растворения Активный ингредиент вмешивают до полного диспергирования Пример композиции 11 Таблетки под язык или за щеку с содержанием 10мг активного ингредиента 25 Ингредиент Соединение II Глицерин Вода Цитрат натрия Поливиниловый спирт Поливинилпирролидон Всего 44284 Количество на таблетку 10,0мг 210,5мг 143,0мг 4,5мг 26,5мг 15 5мг 410,0мг Глицерин, воду, цитрат натрия, поливиниловый спирт и поливинилпирролидон смешивают, непрерывно перемешивая и поддерживая температуру около 90°С После перехода полимеров в раствор полученный раствор охлаждают до 50° - 55°С и медленно вмешивают в него лекарственный препарат Гомогенную смесь выливают в формы, выполненные из инертного материала, получая содержащую лекарство диффузионную матричную лепешку с толщиной примерно в 2 4мм Полученную лепешку затем разрезают на индивидуальные таблетки подходящего размера Еще одним предпочтительным вариантом реализации композиции в способе по настоящему изобретению является использование средств транссдермальной доставки лекарства ("накладок") Такие трансдермальные накладки могут использоваться для обеспечения непрерывного или периодического введения соединений по настоящему изобретению в регулируемых количествах Выполнение и методика использования трансдермальных накладок для доставки фармацевтических средств хорошо известны в практике См , например, патент США №5023252 от 110691, здесь использованный в качестве ссылочного материала Такие накладки могут выполняться с расчетом на непрерывную, пульсирующую или регулируемую ("по требованию") доставку фармацевтических средств 26 Нередко бывает желательно или необходимо ввести фармацевтический состав в мозг, либо напрямую, либо опосредствовано Методики прямого введения обычно предусматривают помещение катетера подачи лекарств внутрь вентрикулярной системы для обхода гематоэнцефалического барьера Одна из таких имплантируемых систем доставки, используемых для транспортировки биологических средств к конкретным анатомическим участкам тела, описана в патенте США №5011472 от 30 04 91, используемого здесь в качестве ссылочного материала Непрямые методики, в целом являющиеся предпочтительными, обычно подразумевают подготовку композиций, обеспечивающих "маскирование" лекарственного средства путем преобразования гидрофильных средств в липидорастворимые лекарственные средства или пролекарства Такое "маскирование" обычно достигается путем блокирования гидрокси-групп, карбонильных, сульфатных и первичных аминовых групп, присутствующих в лекарственном средстве, с целью преобразования этих средств в липидорастворимую форму и придания им большей транспортабельности через гематоэнцефалический барьер В качестве альтернативы, доставка гидрофильных лекарственных средств может быть облегчена за счет внутриартериального вливания гипертонических растворов, которые способны временно открывать гематоэнцефалический барьер Тип формы лекарственного препарата, используемый для введения соединений, задействуемых в способе по настоящему изобретению, может определяться типом конкретно используемых соединений, типом фармакокинетической характеристики, требуемой для пути введения конкретного соединения (соединений), и состоянием пациента ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90