Спосіб діагностики бактеріального вагінозу

Реферат: Спосіб діагностики бактеріального вагінозу включає відбір піхвового вмісту, його лабораторну підготовку, обробку, цифрову обробку даних та їх оцінку. Додатково як піхвовий вміст відбирають епітеліальні клітки з задньо-бічного зведення піхви шляхом зіскрібання за допомогою одноразового стерильного інструмента "Cytobrush". При лабораторній обробці біопроби виділяють ДНК і піддають її ампліфікації. Проводять полімеразну ланцюгову реакцію, реєструють продукти реакції в режимі реального часу за допомогою детектора, визначаючи кількість загальної бактеріальної маси, нормофлори, мікоплазми і уреаплазми та мікрофлори, наявність аеробних мікроорганізмів, анаеробної умовно-патогенної мікрофлори. Під час цифрової обробки даних обліковують показники індикаторного циклу в абсолютних або відносних значеннях за допомогою програмного забезпечення детектора, а при оцінці стану біоценозу визначають нормоценоз. UA 75271 U (12) UA 75271 U UA 75271 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до дослідження або аналізу біологічних матеріалів особливими методами шляхом визначення хімічних властивостей, до способов виділення та одержання ДНК і може бути використана в гінекологічній практиці, як засіб ідентифікації умовно-патогенних мікроорганізмів на ранніх етапах розвитку інфекційного процесу піхви у вагітних. Основним діагностичним засобом бактеріального вагінозу (БВ) за клінічним протоколом МЗ України № 582 від 28.12.2002 року є критерій Р. Амсела: клініко-лабораторні ознаки, наприклад, гомогенні виділення з піхви за відсутністю ознак запалення, наявність "ключових клітин" при мікроскопії нативних мазків з піхви, рН вагінального відокремлюваного >4,5 і позитивний амінний тест піхвових виділень на появу неприємного "рибного запаху" після додавання 10 % розчину KОН. Проте, невисока чутливість критеріїв Р.Амсела до мікроорганізмів, неможливість проведення етіологічної діагностики, з урахуванням виду, запліднення піхвового біотопу мікробним спектром, наявність безсимптомних форм БВ, змушує шукати інші діагностичні засоби. Істотним недоліком базового напряму є неможливість видової ідентифікації мікроорганізмів. В діагностиці неспецифічних інфекційних захворювань піхви відомий спосіб диференціальної діагностики бактеріального вагінозу та неспецифічного вагініту, що також заснований на дослідженні клініко-лабораторних даних [1|, якому теж бракує інформативності. Найближчим до корисної моделі серед об'єктів аналогічного призначення за більшою кількістю суттєвих ознак є спосіб диференціальної діагностики бактеріального вагінозу, що включає відбір піхвового вмісту у пробірку Еппендорфа, його лабораторну підготовку й обробку, цифрову обробку даних та їх оцінку, у відповідності з котрим, під час лабораторної підготовки піхвовий вміст піддають центрифугуванню у заданому режимі, наносять 0,004 мол супернатанту на предметне скло, під час обробки - одержують кристалограми у стандартних умовах, фотографують їх, з використанням бінокулярної насадки, адаптованої для цифрової фотозйомки, а після цифрової обробки зображень фацій піхвового вмісту, оцінюють за допомогою комп'ютерної програми виразність центральної, проміжної і периферичної ділянок кристалізації, тип кристалів при розширенні периферичної зони, та визначають бактеріальний вагіноз, якщо виявляють папоротевоподібні форми кристалів, або неспецифічний вагініт, якщо спостерігають відсутність чіткої зональності, наявність сферолітних кристалів, розподілених дифузним чином і сконцентрованих у центральній зоні. Даний об'єкт є більш інформативним, об'єктивізує облік і оцінку результатів, завдяки мікрофотозйомці ділянок кристалізації: центральних, проміжних і периферичної, а також визначенню типів кристалів, що утворюються. Це зумовлене тим, що форми утворюваних кристалічних структур визначаються градієнтом між кристалоутворюючими елементами та навколишнім середовищем. При різних патологіях відбувається зміна якості, кількості органічних і неорганічних молекул, що призводить до формування специфічних типів кристалів [2]. Але, відсутність засобів етіологічної оцінки мікробного спектру піхвових біотопів, неможливість видової ідентифікації мікроорганізмів, непрямий характер їх дослідження, вплив "людського фактора" на оцінку локалізації кристалів, залишає цей спосіб в діагностиці безсимптомних форм БВ не досить інформативним та об'єктивним. В основу корисної моделі поставлена задача винайти спосіб діагностики бактеріального вагінозу, застосування котрого сприяло б підвищенню об'єктивності та інформативності шляхом посилення чутливості до урогенітальної біоти за рахунок проведення полімеразно-ланцюгової реакції, з'ясування типу піхвового дисбалансу, його кількісної оцінки та виявлення етіологічної структури умовно-патогенних мікроорганізмів. Поставлена задача вирішується тим, що при використанні у відомому способі діагностики бактеріального вагінозу, що включає відбір піхвового вмісту у пробірку Еппендорфа, його лабораторну підготовку, обробку, цифрову обробку даних та їх оцінку, згідно з корисною моделлю, додатково як піхвовий вміст відбирають епітеліальні клітки з задньо-бічного зведення піхви шляхом зіскрібання за допомогою одноразового стерильного інструмента "Cytobrush", при лабораторній обробці біопроби виділяють ДНК і піддають її ампліфікації, проводять полімеразну ланцюгову реакцію, реєструють продукти реакції в режимі реального часу за допомогою детектора, визначаючи кількість загальної бактеріальної маси, нормофлори Lactobacillus spp, мікоплазми Mycoplasma (hominis+genitalium) і уреаплазми Ureaplasma (urealyticum+parvum) та мікрофлори Candida spp, наявність аеробних мікроорганізмів Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Porphyromonas spp. Atopobinm vaginae, Hubacterium spp, Sneathia spp, Leptotrihia spp, Fusobacterium spp, Megasphera spp. Veilonella spp, Dialister spp, Lachnobacterium spp. Clostridium spp, Mobiluncus spp, Corynebacterium spp, Peptostreptococciis spp, анаеробної умовно-патогенної мікрофлори Enterobacteraceae, Streptococcus spp і Staphylococcns spp, під час цифрової обробки даних обліковують показники індикаторного циклу в абсолютних або відносних 1 UA 75271 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 значеннях за допомогою програмного забезпечення детектора, а при оцінці стану біоценозу 6 визначають нормоценоз, якщо кількість загальної бактеріальної маси сягає >10 ГЕ, або 68 кількість нормофлори Lactobacillus spp дорівнює 10 10 ГЕ за абсолютним значенням, а за відносним - 80-100 %, або кількість аеробної та анаеробної умовно-патогенної мікрофлори 4 дорівнює 10 за абсолютним значенням, або концентрація Candida spp сягає >10 ' ГЕ за абсолютним значенням, або встановлюють виражений дисбаланс біоти, якщо кількість 6 6 6 загальної бактеріальної маси становить 10 , або кількість нормофлори Lactobacillus spp сягає 10 ГЕ за абсолютним значенням, а за відносним – 0,01-100,0 %. або вміст мікоплазми Mycoplasma 4 (hominis+genitalium) і уреаплазми Ureaplasma (urealyticum+parvum) відсутній або становить >10 3 за абсолютним значенням, або концентрація Candida spp відсутня або сягає >10 ГЕ за абсолютним значенням, і визначають етіологічні структури анаеробного дисбалансу, якщо дисбаланс викликаний наявністю будь-якого з мікроорганізмів Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Porphyromonas spp, Atopo bium vaginae, Eubacterium spp, Sneathia spp, Leptotrihia spp, Fusobacterium spp, Megasphera spp, Veilonella spp, Dialister spp, Lachnobacterium spp, Clostridium spp, Mobiluncus spp, Corynebacterium spp або Peptostreptococcus spp, або встановлюють аеробну структуру дисбалансу, якщо дисбаланс, викликаний наявністю будь-якої мікрофлори Hnterobacteraceae, Streptococcus spp або Staphylococcus spp, або констатують змішаний дисбаланс, якщо він викликаний наявністю будь-яких анаеробних мікроорганізмів, аеробної мікрофлори або Candida spp у будь-якому сполученні; за умов, що для ампліфікації залучають ДНК-зонди з флуоресцентними позначками та поглиначами флуоресценції; під час комп'ютерної обробки даних враховують показник ампліфікації геномної ДНК людини. Причинно-наслідковий зв'язок відмітних ознак заявленої корисної моделі з підвищенням об'єктивності та інформативності полягає в наступному. Новизна способу поширюється на опрацювання відбору піхвового вмісту, лабораторної пробопідготовки останнього, а також засобів цифрової обробки поточних параметрів та оцінки вихідних даних. Залучення епітеліальних кліток як піхвового вмісту, а також їх зіскрібання саме з задньобічного зведення піхви дозволяє у короткий термін оцінити якісно-кількісний вміст піхвового біоценозу, провести етіологічну діагностику захворювань урогенітального тракту, у т.ч. у вагітних, контролювати якість біопроби, моніторувати ефективність терапії у реальному часі, а також оптимізовувати та індивідуалізовувати останню. Миттєвий характер взяття проби піхвового вмісту є достатнім для виявлення повної етіологічної структури захворювання, що забезпечує призначення спрямованої етіотропної терапії. Для вдалого проведення аналізу важливо правильно зібрати матеріал у пацієнта й правильно провести пробопідготовку. Відомо, що в лабораторній діагностиці ~70 % помилок відбувається саме на етапі пробопідготовки. Тому застосування саме одноразового стерильного інструмента "Cytobrush" з однієї сторони мінімально травмує пацієнта, а з іншого боку - сприяє забору піхвового вмісту без його контакту ні з персоналом, ні з навколишнім середовищем. Це дозволяє уникнути контамінацію (забруднення) аналізату, а відтак відтворити ПЛР без впливу непередбачених випадкових помилок і здійснити більш об'єктивний аналіз його вмісту. Ампліфікація виділеної ДНК на етапі лабораторної обробки біопроби передбачає утворення додаткових копій ділянок хромосомної ДНК, що містить певні гени чи сегменти структурного гетерохроматину, з метою реєстрації відповіді кліток аналізату на ПЛР, внаслідок посилення, збільшення нагромаджень копій певних нуклеотидної послідовності під час ПЛР, що сприяє збільшенню об'єктивності та інформативності. В основу підвищення об'єктивності та інформативності дійсного рішення задачі покладене посилення чутливості до урогенітальної біоти за рахунок проведення ПЛР. з можливістю виявлення повної етіологічної структури умовно-патогенних мікроорганізмів, з'ясування типу піхвового дисбалансу, його кількісної оцінки, виявлення дисбалансу біоценозу, ступені його виразності та визначення етіологічної ролі конкретних умовно-патогенних мікроорганізмів його 2 UA 75271 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 розвитку у реальному часі. Це зумовлене тим, що ПЛР заснована на багаторазовому подвоєнні певної ділянки ДНК, з можливістю реалізації оптимальні кількості ДНК, достатньої для апаратної детекції, з більш високою чутливістю та прийнятною специфічністю. ПЛР дозволяє визначити наявність збудника захворювання, навіть якщо в пробі присутня всього кілька молекул ДНК збудника, дозволяє діагностувати наявність довгозростаючих збудників, без застосування трудомістких мікробіологічних методик, у реальному часі. Завдяки відтворенню ПЛР чутливість запропонованого способу значно перевершує властивості вищенаведених імунохімічних і мікробіологічних методик, що дозволяє діагностувати наявність інфекцій зі значною антигенною мінливістю. Специфічність ПЛР при використанні сягає 100 %. ПЛР дозволяє виявити навіть одиничні клітки бактерій або вірусів, наявність збудників інфекційних захворювань у тих випадках, коли іншими методами (імунологічними, бактеріологічними, мікроскопічними) це зробити неможливо. ПЛР є здатною до ідентифікації мікроорганізмів, які важко культивуються, некультивуються або існують у прихованих формах і часто присутні у латентних і хронічних інфекціях. Реєстрація продуктів реакції в режимі реального часу за допомогою детектора об'єктивізує діагностичний висновок. Визначення кількості загальної бактеріальної маси, нормофлори, мікоплазми, уреаплазми, мікрофлори (див.Табл. 1 "Тини дисбалансу бактеріального вагінозу"). наявність аеробних мікроорганізмів, анаеробної умовно-патогенної мікрофлори (див. Табл. 2 "Етіологічна структура дисбалансів бактеріального вагінозу"), як "біологічних предикторів" БВ, розширює межі диференціювання та інтерпретації вихідних даних, що істотно збільшує об'єктивність та інформативність процесу. Посилення чутливості до урогенітальної біоти досягається за рахунок ПЛР, що допускає виявлення повної етіологічної структури умовно-патогенних мікроорганізмів, з'ясування типу піхвового дисбалансу та його кількісної оцінки, з можливістю виявлення дисбалансу біоценозу, ступені його виразності та визначення етіологічної структури конкретних умовно-патогенних мікроорганізмів. Облік показників індикаторного циклу в абсолютних або відносних значеннях за допомогою програмного забезпечення детектора сприяє визначенню нормоценозу, помірного або вираженого дисбалансів, у т.ч. і анаеробну, аеробну або змішану етіологічні структури дисбалансу, що збільшує об'єктивність та інформативність також. Кількісну оцінку виділеної ДНК шуканих мікроорганізмів здійснюють як в абсолютних значеннях (у генах-еквівалентах (ГЕ), так і у відносних (%, до загальної бактеріальної маси), які розраховуються використовуваним програмно-апаратним забезпеченням ПЛР. Відносні показники точніші та об'єктивніші за абсолютні, що гарантує реалізацію максимального технічного результату. Використання ДНК-зондів з флуоресцентними позначками та поглиначами флуоресценції під час ампліфікації посилює чутливість до ДНК шуканих мікроорганізмів. Застосування показника ампліфікації геномної ДПК людини під час комп'ютерної обробки даних виключає вплив помилково-негативних результатів. Додатково, використання запропонованого способу у порівнянні з прототипом (де витрачається час на центрифугування біопроби, нанесення супернатанту на предметне скло, вирощування кристалів, мікрофотозйомку ділянок кристалізації) сприяє підвищенню оперативності, завдяки технологічному спрощенню процесу, зайвих витрат часу і діагностуванню в режимі реального часу, при використанні експрес-властивостей набору реагентів "Фемофлор 16" "ДНК-Технологія" (Росія) під час ампліфікації виділеної ДНК, на етапі лабораторної обробки біопроби. Це прискорює виявлення дисбалансу мікрофлори піхви, розвитку інфекційного процесу вже на ранніх етапах патогенезу, що оптимізує вибір адекватної тактики лікування, знижує розвиток ускладнень і мінімізує матеріальні витрати на дорогі лабораторні дослідження та лікарські препарати. Сутність. Для діагностики БВ за умов запропонованого способу залучають набор реагентів "Фемофлор 16" для ампліфікації виділеної ДНК, ДНК-зонди, детектор ДТ-96 і програмне забезпечення для обліку показників індикаторного циклу НПО "ДНК-Технологія" (Росія) [3], а також інструмент "Cytobrush" для зіскрібання епітеліальних кліток виробництва "Jiangsu Suyum Medical Materials Co Ltd" (Китай). Спосіб діагностики БВ характеризується забором епітеліальних кліток на задньо-бічному зведенні піхви шляхом зіскрібання за допомогою одноразового стерильного інструмента "Cytobrush" та розміщенням біопроби у пробірці Еппендорфа. Виділенням з неї ДНК, її наступною ампліфікацією, на етапах лабораторної пробо-підготовки, проведенням ПЛР, реєстрацією продукти реакції в режимі реального часу за допомогою детектора, визначенням 3 UA 75271 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 кількості загальної бактеріальної маси, нормо-флори Lactobacillus spp, мікоплазми Mycoplasma (hominis-tgenitalium), \реап:іазми Ureaplasma (urealyticum+parvum), мікрофлори Candida spp, наявності аеробних мікроорганізмів Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Porp-hyromonas spp, Atopobium vaginae, Eubacterium spp, Sneathia spp, Leptotrihia spp, Fusobacterium spp, Megasphera spp, Veilonella spp, Dialister spp, Lachnobacterium spp, Clostridium spp, Mobiluncus spp, Co-rynebacterium spp, Peptostreptococcus spp, анаеробної умовно-патогенної мікрофлори Enterobacteraceae, Streptococcus spp і Staphylococcus spp, обліком показників індикаторного циклу, в абсолютних або відносних значеннях, шляхом цифрової обробки даних за допомогою програмного забезпечення детектора, та визначенням нормоценозу, або помірного дисбалансу, або вираженого дисбалансу біоти, у т.ч. кваліфікацією етіологічних структур анаеробного, або аеробного, або змішаного дисбалансу, під час оцінки стану біоценозу (див. Табл. 1, 2). ДНК виділяють за інструкцією НПО "ДНК-Технологія" [3]. Для ампліфікації виділеної ДНК в режимі реального часу застосовують набори реагентів "Фемофлор 16", що придатні для дослідження біоценозу урогенітального тракту у жінок за ПЛР. Набір "Фемофлор 16" включає: суміш для ПЛР-ампліфікації та суміші, які специфічні для загальної бактеріальної маси, лактобактерій (Lactobacillus spp) і умовно-патогенних мікроорганізмів. Після ампліфікації виділеної ДНК у пробірку Еппендорфа занурюють ДНК-зонди, кожний з яких містить флуоресцентну мітку з поглиначем флуоресценції, адже на разі утворення специфічного продукту ДНК-зонд руйнується, що призводить до зростання рівня флуоресценції. Проведення ПЛР супроводжується проявом повторюваних циклів: температурної денатурації ДНК, випалюванням праймерів з комплементарними послідовностями і наступним добудуванням полінуклеотидних ланцюгів за допомогою Taq-полімерази. Реєстрацією продуктів реакції здійснюють у реальному часі з використанням детектора ДТ-96, що зв'язується з комп'ютером. Під час цифрової обробки даних, передбачений облік результатів за допомогою програми НПО "ДНК-Технологія" [3], де за показниками індикаторного циклу визначають кількість загальної бактеріальної маси, нормофлори Lactobacillus spp, мікоплазми Mycoplasma (hominis+genitalium), уреаплазми Ureaplasma (urealyticum+parvum), мікрофлори Candida spp, наявність аеробних мікроорганізмів Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Porphyromonas spp, Atopobium vaginae, Eubacterium spp, Sne-athia spp, Leptotrihia spp, Fusobacterium spp, Megasphera spp, Veilonella spp, Dialister spp, Lachnobacterium spp, Clostridium spp, Mobiluncus spp, Corynebacterium spp, Pepto-streptococcus spp, анаеробної умовно-патогенної мікрофлори Enterobacteraceae, Streptococcus spp і Staphylococcus spp. Для виключення впливу помилковонегативних результатів застосовується показник ампліфікації геномної ДНК людини. Показники індикаторного циклу обліковуються як в абсолютних (ГЕ), так і у відносних значеннях (%). Тож, ідентифікація збудників умовно-патогенного ряду у жінок, що страждають вульвовагінітами, у запропонованому діагностичному процесі компенсує відсутність чітких діагностичних критеріїв і розбіжностей (у розумінні етіології та патогенезу неспецифічних інфекційно-запальних процесів піхви), зумовлених умовно-патогенними мікроорганізмами, які утрудняють вироблення диференціальної діагностики захворювань цієї групи. Використання ПЛР дозволило одержати у реальному часі якісну та кількісну оцінку піхвового мікробіоценозу, з можливістю проведення адекватної етіотропної терапії дисбіозу. Комплексна оцінка біоти, на підставі порівняльного аналізу конкретних представників нормо- та умовно-патогенної флори. Запропонований спосіб апробували в клінічних умовах. Вагітних з діагнозом на НВ обстежували за схемою: опитування, клінічне обстеження, мікроскопія епітелію задньо-бічного зводу піхви. У реальному часі визначали основні групи умовно-патогенних мікроорганізмів піхви після проведення ПЛР відокремленої ДНК кількісно-якісним чином. Зіставляли вихідні дані із загальною кількістю мікроорганізмів, інтерпретували, диференціювали їх, діагностували дисбаланс, ступінь виразності біоценозу та визначали етіологічний характер активності конкретних умовно-патогенних мікроорганізмів. За даними проведених досліджень дійшли висновків про те, що в діагностування БВ за умов запропонованого ПЛР зумовила підвищення чутливості (97,1 %) і високу специфічність (97,4 %) до урогенітальної біоти, що, у порівнянні із прототипом, зумовило підвищення об'єктивності та інформативності висновків у десятки разів і високі гарантії, щодо своєчасного виявлення захворювань у вагітних, які позбавлені виражених клінічних симптомів інфекцій вульви й піхви. Це зумовлене тим, що молекулярно-генетичний механізм діагностування, реалізований на основі відтворення ПЛР і виділення хромосомної ДНК дозволив ідентифікувати до 25 важкокультивованих мікроорганізмів одночасно і визначати їх кількісний вміст у біопробі. Приклади можливих діагностичних висновків, щодо встановлення типу та етіологічної структури дисбалансу БВ надані у Табл. 1, 2. 4 UA 75271 U Таблиця 1 Типи дисбалансу бактеріального вагінозу Оцінні критерії Загальна бактеріальна Маса, ГЕ Нормоценоз Помірний дисбаланс 6 6 Виражений дисбаланс 6 6 6 >10 10 (Lactobacillus spp) абс. 68 Нормофлора, ГЕ, % показник 10 10 відносний 80-100 % (Lactobacillus spp) абс. 68 показник 10 10 відносний 20-80 % (Lactobacillus spp) 10 4 4 4 абс. показник >10 відносний - 0,01-100 % Mycoplasma (hominis+genitalium) і Ureaplasma (urealyticum bparvum) відсутні або 4 абс. показник >10 3 абс. показник >10 відносний - відсутній Таблиця 2 Етіологічна структура дисбалансів бактеріального вагінозу Етіологічні різновиди і чинники дисбалансів бактеріального вагінозу Анаеробний Аеробний Змішаний за наявністю будь-якого з чинників Gardnerella vaginalis Enterobacteraceae Gardnerella vaginalis Prevotella bivia Streptococcus spp Prevotella bivia Porphyromonas spp Staphylococcus spp Porphyromonas spp Atopo bium vaginae Atopo bium vaginae Eubacterium spp Eubacterium spp Sneathia spp Sneathia spp Leptotrihia spp Leptotrihia spp Fusobacterium spp Fusobacterium spp Megasphera spp Megasphera spp Veilonella spp Veilonella spp Dialister spp Dialister spp Lachnobacterium spp Lachnobacterium spp Clostridium spp Clostridium spp Mobiluncus spp Mobiluncus spp Corynebacterium spp Corynebacterium spp Peptostreptococcus spp Peptostreptococcus spp Enterobacteraceae Streptococcus spp Staphylococcus spp Candida spp 5 Джерела інформації: 1. Саидова Р.А. Бактериальный вагинит или бактериальный вагипоз?// Рус. мед. жури.-2001. - Т.9 - С. 843-847. 5 UA 75271 U 5 2. Способ дифференциальной диагностики бактериального вагиноза и неспецифического вагинита: Пат. 2351931 России, МПК G01N 33/487/ Карпунина Т.Н. Чемурзиева И.В., Олина А.А. (Россия); - № 2008113940/15; заявл. 09.04.2008; опубл. 10.04.2009. 3. Болдырева М.Н. "Фемофлор"-исследования биоциноза урогенитального тракта у женщин репродуктивного возраста методом ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени: Методическое пособие для врачей.-2010,-14 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1. Спосіб діагностики бактеріального вагінозу, що включає відбір піхвового вмісту у пробірку Еппендорфа, його лабораторну підготовку, обробку, цифрову обробку даних та їх оцінку, який відрізняється тим, що додатково як піхвовий вміст відбирають епітеліальні клітки з задньобічного зведення піхви шляхом зіскрібання за допомогою одноразового стерильного інструмента "Cytobrush", при лабораторній обробці біопроби виділяють ДНК і піддають її ампліфікації, проводять полімеразну ланцюгову реакцію, реєструють продукти реакції в режимі реального часу за допомогою детектора, визначаючи кількість загальної бактеріальної маси, нормофлори Lactobacillus spp, мікоплазми Mycoplasma (hominis+genitali-um) і уреаплазми Ureaplasma (urealyticum+parvum) та мікрофлори Candida spp, наявність аеробних мікроорганізмів Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Porphyromo-nas spp, Atopobium vaginae, Eubacterium spp, Sneathia spp, Leptotrihia spp, Fusobac-terium spp, Megasphera spp, Veilonella spp, Dialister spp, Lachnobacterium spp, Clostri-dium spp, Mobiluncus spp, Corynebacterium spp, Peptostreptococcus spp, анаеробної умовно-патогенної мікрофлори Enterobacteraceae, Streptococcus spp і Staphylococcus spp, під час цифрової обробки даних обліковують показники індикаторного циклу в абсолютних або відносних значеннях за допомогою програмного забезпечення детектора, а при оцінці стану біоценозу визначають нормоценоз, якщо кількість 6 загальної бактеріальної маси сягає >10 ГЕ, або кількість нормофлори Lactobacillus spp 68 дорівнює 10 10 ГЕ за абсолютним значенням, а за відносним - 80-100 %, або кількість аеробної та анаеробної умовно-патогенної мікрофлори дорівнює 10 за 3 абсолютним значенням, або концентрація Candida spp сягає >10 ГЕ за абсолютним значенням, або встановлюють виражений дисбаланс біоти, якщо кількість загальної бактеріальної маси 6 6 6 становить 10 , або кількість нормофлори Lactobacillus spp сягає 10 ГЕ за абсолютним значенням, а за відносним 0,01-100,0 %, або вміст мікоплазми Mycoplasma (hominis+genitalium) і уреаплазми Ureaplasma 4 (urealyticum+parvum) відсутній або становить >10 за абсолютним значенням, або концентрація 3 Candida spp відсутня або сягає >10 ГE за абсолютним значенням, і визначають етіологічні структури анаеробного дисбалансу, якщо дисбаланс викликаний наявністю будь-якого з мікроорганізмів Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Porphyro-mo nas spp, Atopo bium vaginae. Eubactcrium spp, Sneathia spp. Leptotrihia spp, Fuso-bacterium spp, Mcgasphera spp, Veilonclla spp, Dialister spp, Lachnobacterium spp, Clostridium spp, Mobiluncus spp, Corynebacterium spp або Peptostreptococcus spp, або встановлюють аеробну структуру дисбалансу, якщо дисбаланс, викликаний наявністю будь-якої мікрофлори Enterobacteraceae, Streptococcus spp або Staphylococcus spp, або констатують змішаний дисбаланс, якщо він викликаний наявністю будьяких анаеробних мікроорганізмів, аеробної мікрофлори або Candida spp у будь-якому сполученні. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що для ампліфікації залучають ДНК-зонди з флуоресцентними позначками та поглиначами флуоресценції. 3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що під час комп'ютерної обробки даних враховують показник ампліфікації геномної ДНК людини. 6 UA 75271 U Комп’ютерна верстка М. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 7