Засіб для корекції імунного статусу у дітей

Засіб для корекції імунного статусу у дітей на основі лікарської рослинної сировини, який відріз 3 Існує лікувально-профілактичний засіб, що містить водний екстракт кореневищ з коренями ехінацеї пурпурової, кислоту лимонну, цукор, спирт етиловий, воду. Патент України №33075, кл. А61К36/28; А61К9/08. Опубл. офіц. бюл. «Промислова власність», №11, 10.06.2008. Відома синергічна антибактеріальна композиція, що містить екстракти подорожника, звіробою, ехінацеї і прополісу, коричну олію. Засіб застосовується для лікування і профілактики захворювань ротової порожнини, бактеріальних Інфекцій шкірних І слизуватих покривів. Патент США №6027716, кл. А61К007/26; А61К035/78. Опубл. офіц. бюл. "Official Gazette", 22.02.2000. Існує композиція для полоскання ротової порожнини, що містить настойки червоного стручкового перцю, календули, ехінацеї, жовтокорня канадського, прополісу - 23-33ч., оцет і вода - решта. Патент США №5376374, кл. А61К035/78; А61К007/26; С070305/12; С010009/02. Опубл. офіц. бюл. "Official Gazette", 27.12.1994. Відомий водяний розчин, що містить настойку ехінацеї, жовтокорня канадського, сангуінарії канадської, екстракт кісточок грейпфрута, сік алое вера, настойку календули, воду, гліцерин, м'ятну олію. Засіб призначений для лікування І профілактики запальних захворювань ротової порожнини. Патент США №5378465, кл. А61К035/78; А61К007/16; А61К007/42. Опубл. офіц. бюл. "Official Gazette", 03.01.1994. Відомий спосіб, що попереджає утворення осаду у свіжевичавленому сокі ехінацеї. Спосіб здійснюють шляхом охолодження свіже вичавленого соку, наступною фільтрацією і стабілізацією 0,01-5% полівалентною карбоновою кислотою, переважно лимонною. Патент США №6019977, кл. А01М065/00. Опубл. офіц. бюл. "Official Gazette", 01.02.2000. Відомий лікарський засіб "Фіто-новосед" у формі рідкого екстракту, який отримують шляхом спиртової екстракції суміші трави кропиви собачої (100-150г), трави меліси лікарської (100-150г), плодів шипшини (100-150), трави ехінацеї пурпурової (50-75) і плодів глоду (50-75г), спирт етиловий (40%) до 1000мл. Препарат застосовують як седативний засіб у дорослих при різних невропатичних реакціях, що супроводжуються дратівливістю, безсонням, тривогою, страхом і т.д. Засіб впливає на працездатність, не викликає міорелаксацію, не виявляє снотворного ефекту. Патент Российской Федерации №2241486, кл. А61К35/78, А61Р7/00. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 10.12.2004. Відомий лікарський засіб, що містить сухий екстракт ехінацеї пурпурової 15-70%, пектин 20-80%, кислоту аскорбінову 1-10%. Препарат застосовують як адаптогенний засіб, що підвищує загальну опірність організму. Патент Российской Федерации №2129010, кл. А61К35/78. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 20.04.1998. Відомий спосіб одержання настойки ехінацеї пурпурової шляхом триразової екстракції сировини 92445 4 40%-ним етиловим спиртом методом мацерації у трьох екстракторах при співвідношенні сировина:екстрагент 1:8. Першу екстракцію здійснюють при кімнатній температурі і дві наступні при нагріванні до 70-80°С на протязі 30хв. Спосіб дозволяє підвищити вихід біологічно активних речовин. Патент Российской Федерации №2134584, кл. А61К35/78, А61К9/08, А61К35/78, А61К31/19, ф61К31/715. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 20.08.1999. Відомий спосіб одержання настойки ехінацеї пурпурової методом багаторазової перколяції при кімнатній температурі попередньо здрібненої і підігрітої перед екстрагуванням трави ехінацеї пурпурової з подальшим змішуванням отриманих на кожнім з етапів перколяції екстрактів і відстоюванням отриманої суміші екстрактів. Препарат використовують як засіб, що має загальнозміцнюючу, імуномодулюючу, імунокорегуючу, антиоксидантну, радіопротекторну, протипухлинну, антимікробну, протизапальну і противірусну дію. Патент Российской Федерации №2163138, кл. А61К35/78. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 20.02.2001. Відомі способи одержання настойок з ехінацеї пурпурової. Спосіб одержання настойки ехінацеї пурпурової шляхом екстракції сировини етиловим спиртом, у процесі екстрагування здійснюють періодично кількаразовий вплив ультразвуком визначеної частоти і потужності за певних умов, чергуючи його з настоюванням. Спосіб одержання настойки ехінацеї пурпурової шляхом екстракції сировини етиловим спиртом, причому сировину попередньо замочують 40% етиловим спиртом у визначеному співвідношенні й у процесі екстракції здійснюють кількаразовий періодичний вплив ультразвуком визначеної частоти і потужності за певних умов, періодично чергуючи його настоюванням. Способи дозволяють одержати настойку з високим вмістом оксикоричних кислот при мінімальному вмісті екстрактивних речовин і тим самим підвищити фармакологічну дію настойки. Патент Российской Федерации №2261103, кл. А61К35/78. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 27.09.2005. Відомий лікарський засіб імуностимулюючої дії "Естiфан" у формі таблеток. Препарат містить сухий екстракт трави ехінацеї пурпурової 25-60% і фізіологічне прийнятні наповнювачі - решта. "Естіфан" виявляє високий рівень терапевтичної дії у випадках недостатньої ефективності антибактеріальної і протизапальної терапії. Патент Российской Федерации №2137490, кл. А61К35/78. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 20.09.1999. Відомий лікарський засіб "Віларін" у формі таблеток, що містить суміш екстрактів великоголовника сафлоровидного, елеутерококу колючого, ехінацеї пурпурової, солодки голої, листів мучниці і плодів шипшини. Засіб підвищує фізичну працездатність, поліпшує координацію рухів, підвищує стійкість до гіпоксії й емоційного стресу. Патент Российской Федерации №2187326, кл. А61К35/78. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 20.08.2002. 5 Відомий лікарський засіб на основі густого рослинного екстракту, отриманого з трав ехінацеї пурпурової, череди и солянки холмової, листів кропиви, коренів солодки i сланей ламінарії. Засіб застосовують у формі гранул. Препарат виявляє виражену клінічну ефективність при невеликих аномаліях імунітету, які проявляються частими гострими респіраторними захворюваннями. Патент Российской Федерации №2203676, кл. А61К35/78. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 10.05.2003. Існує сироп, що містить деалкоголізований екстракт елеутерококу, у перерахуванні на суху речовину екстракту 0,60-1,20%, вітамін С 0,25-0,50%, лимонну кислоту 0,10-0,20%, цукор 50,00-65,00%, воду - решта. Засіб призначений для дітей двохтрьох років і більше, має адаптогенні і вітамінні властивості. Патент Российской Федерации №2143825, кл. А231.2/00, А231-2/385. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 10.01.2000. Відомий продукт для лікувального харчування, що містить плоди шипшини 7,24-7,46%, ягоди горобини 2,83-2,91%, цукор 68,7-70,8%, лимонну кислоту 0,073-0,075%, бета-каротин (10%-ний) 0,15-0,20%, полівітамінну добавку і мікроелементи 0,50-0,70%, воду - решта. Патент Российской Федерации №2156094, кл. А231.2/385. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 20.09.2000. Відомий імуностимулюючий і протизапальний засіб, що містить траву ехінацеї пурпурової 8-10%, корінь солодки 0,9-1,1%, траву чебрецю 0,9-1,1%, мед 4,5-5,0%, 30%-ний спирт етиловий 82,8-85,7%. Патент Российской Федерации №2180586, кл. А61К35/78. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 20.03.2002. Існує лікарський засіб у формі сиропу або гранул, що містить сухі екстракти ехінацеї пурпурової, звіробою, шипшини і солодкового кореня, кислоту лимонну харчову і цільові добавки. Засіб застосовують при застуді. Патент Российской Федерации №2187320, кл. А61К35/78. Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 20.08.2002. Відомий імуностимулюючий засіб "Стімунал" у формі сиропу, що містить водяний настій трави і/чи коренів ехінацеї пурпурової і свіжих плодів журавлини в співвідношенні (1-2):(0,5-1,0):10, мед натуральний, цукор, сорбінову кислоту. До недоліків способу одержання цього засобу слід віднести необхідність тривалого використання підвищеної температури (кип'ятіння 8-12 хвилин), при якій може істотно знижуватися фармакологічна активність препарату. Патент Российской Федерации №2191589, кл. А61К35/78, А61Р37/04, А61К31/19, А61К35/54. 92445 6 Опубл. офиц. бюл. "Изобретения, полезные модели" от 27.10.2002. Найбільш близьким до заявляемого є настойка ехінацеї виробництва ВАТ «Лубнифарм»". Засіб застосовують для підвищення неспецифічного імунітету при повторюваних застудах, попередження імунодефіциту при тривалій терапії антибіотиками [10]. До причин, що перешкоджають у прототипі та аналогах одержанню технічного результату, якого досягають в заявляемому засобі, слід віднести те, що якісний і кількісний склад їх компонентів обмежує застосування препаратів в дитячій практиці. Варто підкреслити, що відповідно до рекомендацій ВООЗ, препарати для застосування в педіатрії не можуть містити спирту етилового та мають викликати у дитини лише позитивні емоції. Мета винаходу - створення імуностимулюючого засобу з таким якісним і кількісним складом компонентів, який би забезпечив високий вміст діючих речовин у готовому продуктів та виключив негативні побічні ефекти, внаслідок чого препарат можна було б пропонувати для застосування в педіатричній практиці. Вищезазначеним критеріям в повній мірі відповідає така дитяча лікарська форма, як сироп, що являє собою концентровані розчини сахарози у воді (до 64%) і ягідних соках, а також суміші останніх з розчинами лікарських речовин, настоями, настойками та екстрактами. Звичайно це густі, прозорі рідини, що мають залежно від складу характерний приємний смак і запах. Поставлене завдання вирішується тим, що в імуностимулюючому засобі «Афлуфіт» в якості рослинної сировини використовують кореневища з коренями ехінацеї пурпурової, плоди горобини звичайної, шипшини собачої, а в якості фармацевтичне прийнятних носіїв застосовують кислоту лимонну, цукор, воду при такому співвідношенні компонентів, мас. %: водний екстракт кореневищ з коренями ехінацеї пурпурної, горобини звичайної, шипшини собачої (30:10:5) 45,0 кислота лимонна 0,2 цукор 54,8 вода решта. Заявляємий склад і співвідношення компонентів виявлені експериментальне і забезпечують терапевтичну ефективність лікарського засобу, стабільність при збереженні, відповідність вимогам діючої фармакопеї і оптимальні органолептичні властивості, необхідні для його застосування у педіатричній практиці. Введення лікарської рослинної сировини до складу препарату обумовлено фармакологічними ефектами на організм біологічно активних речовин останньої (див. табл.1) 7 92445 8 Таблиця Фармакотерапевтичний дизайн розробляє мого препарату Висока концентрація цукру поряд з функцією корегування смаку створює високий осмотичний тиск у сиропі, що запобігає росту й розвитку мікроорганізмів при зберіганні лікарського засобу. Лимонна кислота, що входить до складу сиропу виконує роль консерванта і стабілізатора, що забезпечує стабільність препарату. Гаряча вода є універсальним розчинником для витягу гідрофільно-ліпофільних речовин з лікарської рослинної сировини. Результати щодо вивчення залежності кількості екстрактивних речовин водою залежно від температурних режимів процесу та співвідношення сировина-готовий продукт представлені в таблицях 2, 3. Таблиця 2 Вихід екстрактивних речовин 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Співвідношення сировинаекстрагент* 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7 1:3 1:4 1:5 1:6 1:7 Температурa екстракції °С Об'єм отриманого витягу, мл 50±5 135 180 225 270 315 135 180 225 270 315 70±5 Екстрактивні речовини У перерахуванні на У витягу, г У витягу, % сировину, % 4,32 3,2 9,6 5,4 3 12,0 5,85 2,6 13,0 5,94 2,2 13,2 5,985 1,9 13,3 6,21 4,6 13,8 7,92 4,4 17,6 9 4 20,0 10,26 3,8 22,8 11,34 3,6 25,2 9 92445 10 Продовження таблиці 2 11. 12. 13. 14. 15. 1:3 1;4 1:5 1:6 1:7 90±5 135 180 225 270 315 8,1 10,44 11,7 11,88 12,285 6 5,8 5,2 4,4 3,9 18,0 23,2 26,0 26,4 27,3 * Примітки: 1. Екстрагент - вода очищена 2. Ступінь подрібнювання сировини: кореневище з коренями ехінацеї - 1-3мм плоди горобини - 3-7мм плоди шипшини - 3-5мм Аналізуючи отримані дані можна зробити висновок, що оптимальними умовами для екстракції водою є: температура екстракції (90±5)°С і співвідношення сировина : готовий продута 1:4-1:6. Таблиця 3 Вихід екстрактивних речовин 1. 2. 3. 4. 5. 6 7. 8. Обумовлені речовини Екстрактивні речовини у витягу Екстрактивні речовини у перерахуванні на сировину Білково-полісахаридний комплекс у витягу Білково-полісахаридний комплекс у перерахуванні на сировину Білково-полісахаридний комплекс у перерахуванні на екстрактивні речовини Гідроксикоричні кислоти у витягу Гідроксикоричні кислоти у перерахуванні на сировину Гідроксикоричні кислоти у перерахуванні на екстрактивні речовини Розробка рецептури готової лікарської форми дозволяє дійти висновку, що до складу лікарського засобу доцільно вводити 45г (39-41мл) витягу на 100г (75-90мл) препарату, що в перерахуванні на 1 дозу препарату (5г) складе 90-120мг екстрактивних речовин. Результати мікробіологічних досліджень вказують на прийнятний профіль чистоти сиропу у відношенні Candida albicans, Staphylococcus aureus, бактерій роду Enterobacteriaceae та Pseudomonas aemgmosa протягом 28 днів спостереження. Отримані дані дозволяють дійти висновку, що наявність сорбінової кислоти і сорбіту з горобини звичайної, а також фенольних сполук з ехінацеї пурпурної забезпечують відповідну мікробіологічну чистоту, а в окремих випадках навіть й повну відсутність росту мікроорганізмів у дитячій лікарській формі. У доклінічних дослідженнях заявляємого засобу було проведено вивчення спеціфічної фармакологічної активності, гострої токсичності, алергізуючої та імунотоксичної дії. Дослідження проведені у порівнянні з настойкою ехінацеї виробництва ВАТ «Лубнифарм»", що виявляє високу імуностимулюючу активність. Препарат вводили протягом двох тижнів внутрішньошлунково в дозах 0,75, 1,0, 1,5 І 3,0мл/кг. Препарат порівняння застосовували у дозах 1,0 і 2,0мл/кг маси тіла тварин [7]. Дослідження проводили згідно існуючих вимог в рамках правил "Європейської конвенції по захис Вміст, % 5,28-5,56 26,4-27,8 1,05-1,15 5,25-6,0 19,88-22,51 0,31-0,33 1,55-1,65 29,35-30,01 ту хребетних тварин, яких використовують для експериментальних та наукових цілей" на статевонезрілих нелінійних щурах віком 1 місяць, що відповідає віку людини 4-7 років [1, 2, 5, 6]. Для оцінки виразності фагоцитарної активності нейтрофілів розраховували наступні показники: відсоток нейтрофілів, які фагоцитували (Fi - фагоцитарний індекс), середню кількість часточок латексу, що поглинуто одним нейтрофілом (Fu - фагоцитарне число) та інтегральний показник - індекс фагоцитарної активності (IFA - добуток фагоцитарного індексу на фагоцитарне число) [4]. Характер впливу аналізованого сиропу на функціональну активність В-системи оцінювали за рівнем гемаглютинінів у сироватці крові щурят, додатково визначали клітинність селезінки. Щурят імунізували тимусзалежним антигеном еритроцитами барана (ЕБ) (3% розчин у дозі 0,2мл/20г маси щурят внутрішньоочеревинно, одноразово). На 5-у добу після імунізації визначали титри гемаглютинінів (ГА) у сироватці крові експериментальних тварин методом серійних розведень у полістиролових планшетах [1, 3]. Стан клітинного імунітету визначали за реакцією гіперчутливості повільного типу (ГПТ) за методом K.P.Kitamura [1, 10]. Тварин імунізували однократним внутрішньоочеревинним уведенням суспензії свіжовідмитих ЕБ в дозі 2·10 клітин в об'ємі 0,5мл фізіологічного розчину натрію хлориду на 20г маси тіла. На 5-у добу для виявлення імунізації щурам під апоневротичну пластинку од 11 92445 нієї з задніх кінцівок (дослідна лапа) вводили завершальну дозу антигену, що склала 108 еритроцитів барана, в об'ємі 0,02мл на тварину. У контрлатеральну лапу (контрольна лапа) вводили фізіологічний розчин у тім же об'ємі. Через 24 години тварин виводили з експерименту передозуванням ефірного наркозу, відрізали стопи задніх кінцівок тварин на рівні надступаковогомілкового суглобу, зважували їх на торсійних вагах. Виразність місцевої реакції оцінювали за співвідношенням величини маси стоп дослідної і контрольної лап у кожній групі тварин. Індекс реакції (IP) розраховували за формулою (1): Мд.лапи Мк.лапи IP 100 % (1) Мк.лапи де Мд.лапи - маса дослідної лапи; Мк.лапи - маса контрольної лапи. Критеріями фізіологічного стану щурят служили приріст маси тіла та масові коефіцієнти органів імуногенезу (селезінки, тимусу) і печінки. Як видно з таблиці 1, введення сиропу протягом 2 тижнів сприяло підвищенню фагоцитарного 12 індексу при застосуванні у дозі 1,5мл/кг на рівні препарату порівняння у дозах 1,0 і 2,0мл/кг. Але фагоцитарне число, тобто кількість поглинутих клітин, було достовірно меншим ніж у групі тварин, які отримували препарат порівняння у дозі 1,0мл/кг. Зі зниженням доз до 0,75 і 1,0мл/кг відбувається зниження активності засобів, за виключенням препарату у дозі 1,0мл/кг, в якій він достовірно, у порівнянні з групою негативного контролю та настойкою ехінацеї у дозі 2,0мл/кг, підвищує кількість клітин, поглинутих нейтрофілом (Fu) та фагоцитарний індекс. Таким чином, за результатами проведеного дослідження встановлені властивості сиропу активізувати фагоцитарну активність нейтрофілів крові статевонезрілих щурів у дозах 1,0 і 1,5 на рівні препарату порівняння. Дослідження впливу сиропу на гуморальну ланку імунітету статевонезрілих щурів свідчать про імуностимулюючі властивості сиропу (табл. 2). Найбільшу активність стимулювати утворення антитіл препарат реалізує в дозах 1,5 і 0,75мл/кг. Таблиця 1 Вплив сиропу на фагоцитарну активність нейтрофілів крові щурів (n=6) Групи тварин Інтактний контроль Референтна Дослідна Інтактний контроль Негативний контроль (вода) Референтна Дослідна Доза, мл/кг 1,0 2,0 1,5 3,0 1,0 1,0 2,0 Показники фагоцитарний індекс(Fi) фагоцитарне число (Fu) Median (Q25-Q75) 69,5 (63-73) 2,86 (2,61-3,38) 86,5 (70-91)т* 3,13 (2,88-3,43) 80,0 (79-83)* 2,84 (2,54-3,14) 85,5 (84-87)* 2,93 (2,88-2,95)* 76,0 (72-81) 3,20 (2,55-3,44) 65,0 (59,0-71,0) 2,82 (2,72-3,01) 67,0 (64,0-73,0) 2,54 (2,42-2,63)* 65,0 (62,0-78,0) 68,0(61,0-74,0) 2,72 (2,63-2.83)** 2,46 (2,35-2,48)* IFA Mean±St.er. 209,33±9,22 264,17±9,22* 229,33±9,41 245,50±7,31* 224,83±15,55 185,20±10,30 174,40±9,14 %А 26,2 9,5 17,3 10,0 200,33±28,31 160,78±9,66 15,0 Примітки: 1) * - відмінності достовірні щодо значень тварин з групи інтактного контролю, р