Імунізація коней модифікованим генно-інженерно дифтерійним токсоїдом для одержання протидифтерійної антитоксичної сироватки

Винахід належить до розділу біотехнології та медицини і може бути використаний для виробництва сироваточних лікувальних, профілактичних та діагностичних препаратів. Аналогом є спосіб імунізації коней дифтерійним анатоксином (нативний дифтерійний токсин оброблений 0,4% формаліном, за рахунок чого знешкоджуються його токсичні властивості при незмінності імуногенної активності). Імунізацію проводять підшкірним введенням анатоксину по схемі: 25, 50, 100, 150, 200, 300мл і т.д. до 600 700мл з інтервалом ін'єкцій не менше 4 - 5 днів. Тривалість першого циклу імунізації - 40 - 43 доби. Тривалість другого та послідуючих циклів залежить від кількості ін'єкцій антигену і визначається вимогами, які пред'являються до сироваток та фізичним станом коней-продуцентів, що контролюється оцінкою титрів сироватки в процесі імунізації (Руководство по сывороточному и вакцинному делу / Под ред. П.Н. Бургасова. - М.: Медгиз, 1978. - С.479). Прототипом є спосіб імунізації коней дифтерійним анатоксином з використанням подразнювача (топіока, хлористий калій, алюмокалійні квасці та інші) на стадії грундімунізації, що забезпечує підсилення імунологічної реактивності. Грундімунізацію проводять двох-трьох кратним підшкірним введенням дифтерійного анатоксину з подразнювачем в об'ємі від 5 до 30мл. На першому етапі гіперімунізації ін'єкції роблять по схемі: 20 50 - 100 - 250 - 350 - 400мл анатоксину концентрацією не менше 40Lf/мл (флокулюючі одиниці) з інтервалом між ін'єкціями 3 - 5 днів. Тривалість циклу - 35 - 45 днів. Другий та послідуючі цикли імунізації починаються після 15 20 добової перерви і включають 2 - 3 ін'єкції анатоксину без подразнювача по схемі: 25 - 100, 50 - 200, 100 - 300мл. Концентрація антигену вибирається в залежності від імунологічної реактивності коней-продуцентів (Карпов С.П., Прегер С.М., Синельников Т.Е., Федоров Ю.В. Гиперимунные сыворотки. - Томск: Изд-во Томского ун-та, 1976. - С.380). Завданням винаходу було розробити спосіб імунізації коней для одержання високотитражної протидифтерійної антитоксичної сироватки за умов зниження кількості антигену та скорочення строків циклічної гіперімунізації. Суть винаходу полягає в тому, що спосіб імунізації коней для одержання протидифтерійної антитоксичної сироватки, передбачаючий підшкірне введення дифтерійного антигену зростаючими дозами по циклічній схемі, відрізняється тим, що імунізацію проводять введенням модифікованого генно-інженерно дифтерійного токсоїду (Рішення про встановлення дати подання заявки від 8.08.96p., з наданням реєстраційного номеру 96083183) по циклічній схемі, яка включає грудімунізацію шляхом двократного підшкірного введення дифтерійного токсоїду в дозах 5 - 20мл з активністю не менше 60lf/мл з інтервалом 2 - 3 місяці, та гіперімунізацію зростаючими дозами дифтерійного токсоїду 5 100мл в першому циклі та 5 - 25мл - в послідуючих з інтервалами між ін'єкціями 5 - 7 діб та між циклами - 2 - 3 тижні, з відповідним лабораторним контролем кількості антитоксину. На першому етапі роблять дворазову грундімунізацію коней введенням 5 - 20мл модифікованого генно-інженерно дифтерійного (МГІД) токсоїду, продукованого у E.coli BL21 під контролем плазміди pTDT (Рішення про встановлення дати подання заявки від 8.08.96p., з наданням реєстраційного номеру 96083183). Модифікований токсоїд (субодиниця дифтерійного токсину з молекулярною, масою 46КД) не токсичний, але зберігає антигенні детермінанти проти яких виробляються захисні антитіла, що нейтралізують дифтерійний токсин. Концентрація антигену 60Lf/мл, інтервал введення - не менше 2 місяців. Перший цикл гіперімунізації проводять зростаючими дозами токсоїду (5 - 100мл) з інтервалом 5 - 7 діб при індивідуальному контролі сироваток коней-продуцентів на нарощення титрів протидифтерійних антитіл-антитоксинів. При досягненні титру сироватки 500 - 800МО/мл (міжнародні одиниці) через 7 - 10 діб після останнього введення МГІД-токсоїду проводять забір крові. Після останнього відбору крові тваринам надають 3-тижневий відпочинок, забезпечуючи збалансованими кормами. Послідуючі цикли імунізації проводять 3-кратним підшкірним введенням МГІ-токсоїду в дозах 5 25мл з інтервалом 5 - 7 діб контролюючи титр протидифтерійних антитоксинів. Цикли імунізації та забори крові повторюють протягом 3 - 5 років до появи симптомів зниження у тварин реактогенності на введення антигену, яка характеризується пониженням титру протидифтерійних антитоксинів. Запропонований спосіб імунізації коней модифікованим дифтерійним токсоїдом дає можливість одержувати більш авидну протидифтерійну сироватку з імунологічною активністю 500МО/мл і більше за умов зниження кількості антигену та скорочення строків циклічної гіперімунізації.