Спосіб одержання лістеріозної сироватки іеквм для реакції зв’язування комплементу

Корисна модель відноситься до ветеринарії, а саме до прижиттєвої діагностики лістеріозу сільськогосподарських тварин в реакції зв'язування комплементу (РЗК). Використання лістеріозної сироватки ІЕКВМ для реакції зв'язування комплементу (РЗК) дозволить підвищити ефективність індикації і диференціації культур лістерій. Лістеріозну сироватку ІЕКВМ для РЗК одержують від кролів масою 2-3кг, що імунізовані антигеном, який виготовлений з 4-х штамів бактерій, а саме використовують штами лістерій, що виділені від овець, великої рогатої худоби, кролів і свиней, які належать до 1-ої та 2-ої серогруп ["Буринь", "Тернопіль", "Кріль №17," "№1"]. Існують лістеріозні сироватки, що одержані від кролів імунізованих різними антигенами, що отримані із штамів лістерій 634 та 634/20 [SU №1238293, от 29.04.83, кл. А61К39/02 "Штамм бактерий Listeria Monocytogenes, используемый для изготовления антигена для диагностики листериоза"]. Недоліком цього рішення є те, що використовується російський штам. Існує спосіб виготовлення діагностичних сироваток для ідентифікації збудників вірусних хвороб тварин [SU №820017, от 18.10.78 кл. А61К39/42, "Способ получения диагностических сывороток"]. Це рішення може бути прототипом. За цим рішенням, як тварин-продуцентів, використовують собак, яким вводять збудників різних хвороб. Недоліком рішення є те, що його не можливо використовувати саме для отримання лістеріозної сироватки. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб одержання сироватки, що містить вирощування бактерійної маси на живильному середовищі, виготовлення антигену, гіперімунізацію продуцентів одержаним антигеном з послідуючим відбором крові та відокремленням цільного продукту шляхом використання як бактерійної маси штамів лістерій "Буринь", "Тернопіль", "Кріль №17", "№1," щоб забезпечити спосіб одержання лістеріозної сироватки ІЕКВМ для реакції зв'язування комплементу. Спосіб виконується таким чином. Вирощують бактерійну масу бульйонною культурою кожного з 4-х штамів лістерій, засівають колби об'ємом 1,5л з мартенівським агаром. Одержану суспензію мікробів фільтрують, встановлюють концентрацію мікробних клітин та доводять її за допомогою фізіологічного розчину до 2 млрд. м. к. Розмішують для знешкодження у термостат при t-37°C на 48 годин. Знешкоджену суспензію лістерій (антиген) перевіряють на стирильність. Антиген повинен бути стерильним. Після чого антиген застосовують для гіперімунізації кролів. Проводять пробне кровопускання для попереднього визначення титру сироватки. У кролів з вушної вени беруть кров. Відстояну сироватку титрують в РЗК з лістеріозним антигеном. Якщо титр сироватки імунізованого кроля відповідає її розведеню не менше 1:40, то в той же день кроля обезкровлюють. Кров обробляють для одержання сироватки. Після чого сироватку зливають і консервують. Готова лістеріозна сироватка представляє собою прозору рідину жовтувато-соломяного кольору. Сироватка використовується як позитивний контрольний препарат при тетрації лістеріозного антигену ІЕКВМ, а також при дослідженні на лістеріоз в РЗК усі х видів тварин. При наявності в сироватці плісняви, механічних забруднень вона вибраковується. Термін зберігання сироватки 2 роки при умові зберігання її при температурі 5+10°С в захищеному від світла приміщенні. Приклад 1. Перевірка на стерильність. Стерильність готової сироватки визначали висівом її з колби на МПА, МПБ, МППБ під вазелиновим маслом і агаром Сабуро в пробірках; доза посівного матеріалу в пробірку - 0,1-0,2мл; висіви витримували у термостаті при 37 °С (висів на агар Сабуро - при кімнатній температурі - 22-24°С) протягом 5 діб. Сироватка була стерильною. Приклад 2. Проведення випробовування активності (титру) і специфічності сироватки. Кожне розведення усіх сироваток розливали в два ряди пробірок в дозі 0,5мл. В кожну пробірку першого ряду додавали по 0,5мл лістеріозного антигену ІЕКВМ для РЗК в робочому титрі. В пробірки другого ряду замість антигену додавали по 0,5мл фізіологічного розчину. Обидві фази реакції(звязування комплементу і головний дослід) проводили у водяній бані при 37-38°С (кожна протягом 20 хвилин). Комплемент, гемолізин і еритроцити брали в робочих титрах. Титром лістеріозної сироватки вважали найбільше розведення сироватки, при якому відбувалась повна затримка гемолізу еритроцитів з лістеріозним антигеном, при наявності повного гемолізу в безантигенному ряді. В пробірках з нормальною сироваткою скрізь повинен бути гемоліз еритроцитів. В нашому прикладі титр лістеріозної сироватки 1:160. Основними споживачами лістеріозної сироватки є державні лабораторії ветеринарної медицини.