Процес довготермінового зберігання штамів дерматофітів

Корисна модель, що передбачається, відноситься до ветеринарної біотехнології, а саме до ветеринарної мікробіології і біотехнології, зокрема до способів збереження мікроорганізмів і може бути використаний в мікробіології і біотехнології для збереження штамів дерматофітів. Мета корисної моделі - забезпечити довготермінове зберігання виробничих штамів дерматофітів, які використовуються при виготовленні імунобіологічних препаратів проти дерматофітозів тварин, у високоактивному стані. Існують способи одержання сухих бактеріальних препаратів, що включає вирощування культури мікроорганізмів у присутності глинистих мінералів [Патент України на винахід № 14564, C12N1/02, Заявл. 26.09.1994; Опубл.25.04.1997, Бюл. №2], та спосіб одержання сухи х бактеріальних препаратів, який включає вирощування мікроорганізмів з подальшим внесенням до культуральної рідини суспензії природного глинистого мінералу палігорскіту, після чого вносять захисне середовище - сухе молоко і висушують (Способ получения сухи х бактериальных препаратов, [А.С. № 1616990, C12N1/02, опубл. 30.12.1992, Бюл. №48]. Дані способи є близькими за технічним рішенням до об'єкту, що заявляється. За допомогою вказаних способів можливо одержати препарати пробіотики у сухому вигляді. Недоліком цих способів є те, що їх допомогою неможливо зберегти стабільні біологічні властивості грибів-дерматофітів. На сьогодні рекомендується зберігати штами дерматофітів шляхом їх пересіву на твердих агарових середовищах. Залежно від біологічних особливостей штаму, його життєздатності і стійкості до плеоморфної і фавіформної дегенерації пересіви виконують один раз на 2-4 місяці [Кашкін П.Н. і співавт.,1979, Петрович С.В.,1989]. Такий спосіб є досить трудомістким. Крім того, після 4-5 пасажів штами знижують свою біологічну активність [Жигалова Е.Е.,1951, Лемещенко Г.П. і співав., 1996]. Її відновлення потребує пасажування через організм сприйнятливих тварин і додаткової селекційної роботи. В спеціальній літературі [Курасова В.В., Костин В.В., Малиновская Л.С. Методы исследования в ветеринарной микологии. - М.: Колос, 1971.- 312 с.] маються повідомлення про те, що можливо проводити зберігання колекційних культур грибів під мінеральним маслом, в ґрунті, піску, дерев'яній стружці, торфі, при заморожуванні та у ліофільному вигляді, причому рекомендується для зберігання готувати концентровану суспензію спор грибів, що суттєво утр уднює роботу персоналу, підвищує собівартість робіт, проте ефективність даних способів зберігання не висока (кількість життєздатних спор до кінця першого року зберігання зменшується на 60-70%). Прототипом об'єкту, що заявляється, може бути спосіб зберігання колекційних культур мікроорганізмів, який включає в себе зберігання суспензії мікроорганізмів у желатиновому середовищі, що містить желатин, гліцерин і пептонну воду, яку вміщують в о холоджене вазелінове масло у співвідношенні 1:3, що дозволяє подовжити термін зберігання неспорових бактерій і дріжджів з 1-2 до 4-5 років. Проте за допомогою даного способу не можливо підтримувати життєздатність та зберегти стабільні біологічні властивості грибів-дерматофітів. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити процес ощадливого для дерматофітів довготермінового збереження шляхом вирощування їх на напіврідких живильних середовищах, збирання всього урожаю міцелію, що вміщує різні види спор (макроконідії, мікроконідії, артроспори, хламідоспори, тощо), внесенні міцелію у захисне середовище СЖМ з подальшою ліофілізацією в захисному середовищі, що містить желатин, сахарозу та пептон з добавками солей макро- і мікроелементів. Спосіб виконують таким чином. Культуру дерматофітів вирощують в сусло-агаровому середовищі, яке містить 0,3-0,5% агар-агару, протягом 15-18 діб. Потім її знімають, розміщують в стерильний скляний флакон ємкістю 10-20 см 3, заливають захисним середовищем СЖМ і ліофільне висушують. Порівняльний аналіз з відомими технічними рішеннями в галузі ветеринарної мікробіології та біотехнології дозволяє зробити висновок, що в способі ощадливого для дерматофітів довготермінового збереження використовуються гіфи міцелію дерматофітів зі спорами, що відповідає критеріям „новизна" та „суттєві ознаки". Приклад 1. Вирощування штаму дерматофіту. Готують сусло-агарове середовище по загально прийнятій методиці з добавкою в нього 0,5±0,1% агар-агару. Готове середовище розливають в бактеріологічні пробірки по 7-10 мл і стерилізують. В кожну пробірку вносять по 0,3-0,5 змиву культури дерматофіту і інкубують при 27±1°С протягом 15-18 діб. Приклад 2. Підготовка культури до висушування. Вирощену таким способом культуру знімають із середовища мікологічною кочергою і переносять у стерильний флакон ємкістю 10-20см 3 До культури додають 1 мл стерильного середовища СЖМ, закривають гумовим корком і залишають на 18-20 годин при температурі 18-20ºС. Приклад 3. Ліофільне висушування культур дерматофітів. Флакони з підготовленими культурами розміщують в морозильній камері при мінус 40-60°С на 24 години. Через 24 години ліофільне висушують поступово піднімаючи температуру, укупорюють і обкатують алюмінієвими ковпачками. Висушений штам зберігають при температурі 4-8°С протягом 5 років. Приклад 4. Застосування ліофільне висушених штамів дерматофітів. Перед використанням флакон з ліофільне висушеною культурою асептичне відкривають, стерильною скляною паличкою гомогенізують висушен у масу, добавляють стерильне рідке середовище Сабуро або фізіологічний розчин і висівають на сусло-агар. Відновлену культур у штаму використовують для наукових досліджень чи у біотехнології.