Живильне середовище “гпп” для вирощування штамів амілолітичного молочнокислого стрептокока

Застосування висівок пшеничних як живильного середовища для вирощування штамів амілолітичного молочнокислого стрептокока Streptococcus lactis diastaticus Винахід відноситься до мікробіологічної промисловості, а саме, до трофічних сумішей і стосується складу для культивування молочнокислих бактерій, використовуваних для готування заквасок для силосування кормів ВІДОМІ способи готування молочнокислої закваски для консервування продуктів рослинного походження, що передбачають культивування молочнокислих стрептококів і паличок на рідкому живильному середовищі включаючому крейду, обрат і кукурудзяний екстракт Відомий також "Спосіб готування молочнокислої закваски для консервування продуктів рослинного походження" (а с СРСР № 492268, МПК А 23 К 3/00, БИ-43-75р ), у якому живильне середовище містить суху молочну сироватку (34 - Збг/л), сухий кормовий концентрат вітаміну Ві2 (5 - 7г/л) і крейду (4 - бг/л) Недоліком цих живильних середовищ є висока вартість їх, а також досить складна технологія готування молочнокислих заквасок Відомий "Спосіб культивування молочнокислих чи пропионовокислых бактерій" (а с СРСР № 1711788, МПК А 23 К 3/00, БИ-6-92р), у якому використана живильне середовище наступного складу, г/л рибне борошно (10,0), пептон (5,0), глюкоза (20,0), лактоза (20,0), (NH4)SO4 (2,0), крохмаль н/раств (10,0), СаСОз (5,0), NaCI (5,0), вода (до 1л) Недоліком цього живильного середовища є її висока вартість і складна технологія культивування бактерій з використанням цього середовища Відомий "Спосіб культивування молочнокислих і пропионовокислых бактерій" (а с СРСР № 1769837, МПК А 23 К 3/00, БИ-39-92р), у якому живильне містить середовище джерела вуглецю, азоту, мінеральні солі і ВІДХІД виробництва розеофунгина у виді гидролизата міцелію продуцента, далі по тексту - живильна суміш АМС (без гидролизата міцелію) і живильна суміш АМС-1 (з гидролизатом міцелію) Незважаючи на високий бактеріальний титр одержуваної закваски, спосіб і склад характеризуються складною технологією одержання і високою вартістю кінцевого продукту Відоме використання пшеничних висівок у складі різних сумішей, наприклад - "Премикс для гусаків при ВІДГОДІВЛІ І спосіб ВІДГОДІВЛІ", а с СРСР № 701630, МПК А 23 К 1/22, БИ-45-79р , - "Спосіб одержання сухого лизинсодержащего кормового концентрату", а с СРСР № 1579492, МПК А 23 К 1/00, БИ-27-90р , - "Наполнитель премиксов", а с СРСР № 1794437, МПКА23К1/16, БИ-6-93р , - "Корм для великої рогатої худоби", патент Російської Федерації № 2028791, МПК А23К1/16,БИ-5-95р Відомо також використання пшеничних висівок у якості одного з компонентів живильного середовища для одержання кормових добавок мікробіологічним шляхом, наприклад - "Спосіб одержання кормової білкової добавки", патент Російської Федерації № 2042331, МПК А 23 К 1/165, БИ-24-95р, - "Спосіб одержання кормової білкової добавки", патент Російської Федерації № 2054880, МПК А 23 К 1/165, БИ-24-95р, СО Ю 00 00 48853 - "Спосіб одержання кормової білкової добавки", патент Російської Федерації № 2054881, МПК А 23 К 1/165, БИ-24-95р Однак дотепер невідоме використання пшеничних висівок як живильного середовища для вирощування штамів амілолітичного молочнокислого стрептокока Streptococcus lactis diastaticus Задачею винаходу є розробка нового живильного середовища для вирощування штамів амілолітичного молочнокислого стрептокока Streptococcus lactis diastaticus і досягнення технічного результату - спрощення технології і здешевлення одержання кінцевого продукту - силосної бактеріальної закваски Це досягається застосуванням відомих пшеничних висівок як живильного середовища для вирощування штамів амілолітичного молочнокислого стрептокока Streptococcus lactis diastaticus Відрубай пшеничні є основним і єдиним компонентом живильного середовища для культивування стрептокока - джерелом білків, вуглеводів, амінокислот, вітамінів, мікро-1 макроелементів Будучи відходом борошномельної промисловості, пшеничні відрубані у багато разів дешевше сухого кукурудзяного екстракту, застосовуваного в даний час як основний компонент середовищ при виробництві силосних заквасок У таблиці № 1, а також у таблицях № 2, № 3 і № 4, приведені порівняльні характеристики живильної ЦІННОСТІ, амінокислотного складу, змісту вітамінів і мікроелементів у пшеничних висівках у порівнянні з пшеницею, ячменем і житом, що можуть бути використані як компоненти живильних середовищ для вирощування молочнокислих бактерій Зведення, приведені в таблицях №№ 1 - 4, дані по "Довіднику по кормах і кормових добавках", Київ, "Врожай", 1984р (якщо дані відсутні, те ставиться знак"-") Пшеничні висівки по змісту сирого протеїну, жиру і цукрів істотно перевершують пшеницю, ячмінь і жито (див табл 1) Пшеничні висівки і по змісту амінокислот у переважній більшості випадків перевершують пшеницю, ячмінь і жито (див табл 2) Явна перевага пшеничних висівок над пшеницею, ячменем і житом спостерігається і по змісту вітамінів (див табл 3) Аналогічна картина спостерігається і по змісту деяких макро- і мікроелементів у пшеничних висівок у порівнянні з пшеницею, ячменем і житом (див табл 4) Приведені в таблицях №№ 1 - 4 дані свідчать про перспективність і ДОЦІЛЬНІСТЬ використання пшеничних висівок як основний компонент для готування живильних для середовищ вирощування молочнокислого стрептоккока Трудозатраты по готуванню живильної суміші "ГПП" -1 робітничий день (зміна) на 250кг закваски Використовуване устаткування для готування живильної суміші "ГПП" - стерилізатор на 240кг і термокамера на 1,7тн - набагато простіше устаткування, використовуваного для готування закваски АМС (реактор, центрифуга, вакуумна сушарка) Крім того, при одержанні живильних середовищ АМС і АМС-1 використовується рідке середо вище, що знаходиться в реакторі, унаслідок чого важко одержати титр бактерій більш 1 1 0 , через що застосовується центрофугирование А живильна суміш "ГПП" є більш щільним середовищем (приблизно 50% вологості), тому бактеріальний титр досягає величини до (10 - 15) 1091 тому операції центрофугирования і вакуумного сушіння виключені з технологічного процесу готування закваски З огляду на високий бактеріальний титр і низьку собівартість готування живильної суміші "ГПП", виробник рекомендує вносити на Ітн зеленої маси до 50м (50 2 1010млрд, бактерій), тобто в 500 разів більше бактерій, чим у рекомендаціях із застосування закваски АМС (2гл'н), унаслідок чого надійність живильної суміші, що силосує, "ГПП" у багато разів вище, ніж закваски АМС Приклад 1 Живильне середовище "ГПП" для культивування силосної бактеріальної закваски готують у такий спосіб Для виготовлення 100кг суміші в стерилізатор наливають водопровідну воду в КІЛЬКОСТІ 50 - 58 літрів, у залежності від вологості пшеничних висівок Воду доводять до кипіння У киплячу воду засинають пшеничні висівки у КІЛЬКОСТІ 42 - 50кг (велика доза для більш вологих висівок) Суміш перемішують Суміш води і пшеничних висівок підігрівають до температури 100°С і при цій температурі витримують біля трьох годин Потім підігрів відключають Суміш залишають у закритому стерилізаторі для охолодження до ранку наступних доби Охолоджена до температури 36 + 1°С суміш інокулюють 3 літрами пересадочной культури Streptococcus lactis diastaticus, перемішують і переносять у термостат на 3 доби з постійною температурою 36 + 1 °С У процесі термостатирования стрептоккок розмножується в КІЛЬКОСТІ 1 10 10 - 2 10 10 живих кліток у 1 м инокулированной суміші Через 3 доби термостатирования отриманий концентрат силосної закваски "ГПП" готовий до використання при силосивании культур Витрата концентрату 50г на 1тн силосуемой зеленої маси Ця величина закваски обрана з метою підвищення надійності закваски, що силосує, хоча розрахунки показують, що цілком достатньо 2 - 5г отриманої закваски, але вона повинна бути ретельно і рівномірно розподілена по всьому обсязі силосуемой маси А тому що вартість силосуемой дози живильної суміші "ГПП" - 12,5грн/кг значно нижче вартості відомої силосної закваски АМС (188грн/кг), те економічно доцільніше збільшити дозу силосної закваски "ГПП", чим збільшувати трудозатраты на точний і дозований розподіл закваски по всьому обсязі силосуемой маси З огляду на усе вищевикладене, можна зробити висновок, що задача, поставлена у винаході розробка нового живильного для середовища вирощування штамів амілолітичного молочнокислого стрептокока Streptococcus lactis diastaticus - вирі 5 48853 6 шена з досягненням технічного результату - спрового продукту - силосної бактеріальної закваски щення технології і здешевлення одержання кінцеТаблиця 1 Поживність пшениці, ячменя, жита і пшеничних висівок (г/кг) Компоненти живильних сред Пшениця Ячмінь Жито Пшеничні висівки Сирий протеїн Сахара 58,8 38,1 Жир 11 28 21 42 115 116 120 158 75,5 Таблиця 2 Амінокислотний склад білків пшениці, ячменя, жита і пшеничні висівки (г/кг) Амінокислоти Метіонін Цистин Триптофан Аргінін Гистидин Лейцин Изолейцин Фенилаланин Тирозин Треонин Валин Гліцин Пшениця Ячмінь Жито Пшеничніїисгїаивід рубай 3,9 2,1 2,0 1,8 7,0 2,9 9,4 5,9 6,9 4,8 3,9 6,0 4,8 ЛІЗИН 4,4 1,8 1,8 1,6 5,2 2,4 7,7 4,8 5,9 4,0 3,7 5,9 4,4 4,4 1,7 1,8 5,7 1,9 22 1,9 9,6 3,9 9,5 6,5 5,5 4,0 4,3 7,7 7,5 1,1 5,8 2,7 7,4 5,2 5,8 3,0 3,8 6,1 2,8 Таблиця З Зміст вітамінів у пшениці, ячмені, житі й у пшеничних висівок (мг/кг) Компоненти живильних сред Пшениця Ячмінь Жито Пшеничні висівки Е 37 45 20 ЗО Уі 5 4 4 8 У2 1 1 1 3 РР 57 52 17 185 Уз 12 8 10 29 У4 725 1100 450 1300 Таблиця 4 Зміст макро-1 мікроелементів у пшениці, ячмені, житі й у пшеничних висівках Макро-1 мікроелементи Кальцій, г/кг Фосфор, г/кг Натрій, г/кг Залізо, мг/кг Цинк, мг/кг Марганець, мг/кг Мідь, МГ/КГ Кобальт, мг/кг Иод, мг/кг Пшениця Ячмінь Жито 40 470 110 97 38 19 4 ЗО 60 340 40 103 35 21 4 26 70 300 100 67 27 12 0,6 20 0,72 0,35 Пшеничні висівки 0,10 130 1110 130 232 93 149 15 150 2 Таблиця 5 Вирощування культури молочнокислого стрептокока нарізних живильних средах 0,5 1,0 1,0 Суміш АМС-1 2,0 0,7 "ел ел Кукурудзяний екстракт Крохмаль нерозчинний Автолизат дріжджів Крейда Гидролизат міцелію продуцента Суміш АМС "ел Компоненти середовища, мас % 2,0 Живильна суміш ТПП" 48853 Продовження табл 5 Компоненти середовища, мас % Суміш АМС Суміш АМС-1 інше Живильна суміш ТПП" інше Вода Відрубай пшеничні Вода 50,0 інше Титри бактерій, млрд/мол 1,5 60 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71 10