Споcіб виділення активатора протеїну с з отрути щитомордника для тестування рівня протеїну с в плазмі крові людини

1. Способ выделения активатора протеина С из яда щитомордника для тестирования уровня протеина С в плазме крови человека, включающий растворение яда, поэтапное хроматографическое выделение ак тиватора и лиофилизацию, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что раствор яда щитомордника хроматогрэфируют на голубой агарозе, несвязавшиеся белки разбавляют не менее, чем в 6 раз нейтральным буфером с ионной силой не ~олее 0,03 и разделяют на апионообменно*! носителе, элюируя активатор протеина С градиентом хлорида натрия и выделяя активатор при концентрации хлорида натрия 0,06-0,08 М. 2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве анионообменного носителя используют ионообмениик Q-сефарозу. ~ о Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ выделения активатора протеина С из яда щитомордника. Полученный активатор может использоваться в физиологии, гематологии, клинической практике для тестирования уровня протеина С в плазме крови человека, в биохимии для изучения активации протеина С. Протеин С - белок плазмы крови, играющий важную роль в процессе регуляции гемостаза. Он тормозит цепную реакцию активации факторов свертывания крови, задерживает развитие эндогенного внутрисосудистого свертывания и вызывает антитромботический эффект, запуская фибринолиз (Ена Я. М., Сушко Е. А., Платонова Т. Н., Соловьев Д . А., Биологическая роль и кяини ческое значение протеина С // Врачебное дело, 1992, № 6, с, 20~25). Таким образом, уровень протеина С в плазме крови является важным диагностическим показателем. Концентрацию протеина С в плазме крови определяют иммунологическими методами, коагуляционным методом (Loebermann H., Kolde H. J. et al. Determination of protein С In plasma // Behrfng Institut Mltteilungen 79, 1986, pp. 112-120) и методами с применением хромогенных субстратов. Последние базируются на использовании активаторов протеина С из ядов змей и сейчас широко используются в зарубежной клинической практике благодаря точности, быстроте и простоте анализа (Francis Jr RB, Steyfert U. Rapid Amfdolytic Assay for Protein С In WhoSe 17056 Plasma Using an Activator from the Venom of Agkistrodon contortrlx contortrlx // Am J.CIin. Pathol.. 1987, 87, p. 619-625). Известен ряд активаторов протеина С, выделенных из змеиных ядов Препарат Протак выделяют из яда Змеи Agkistrodon contortrix, растворяя яд в имидазольном буфере, диализуя раствор яда в течение 12 часов против буфера 0,02 М имидазол, рН 6,5 + 0,1 М NaCI и выделяя ферментный препарат хроматографией на сульфопропил-сефадексе (Janet D.Klein and Frederick Walker, Purification of a Protein С Activator from the Venom of the Southern Copperhead Snake / Agkistrodon c o n t o r t r i x c o n t o r t r i x / / / Biochemistry, 1986, 25, N15, p. 4176-4179) Протак является наиболее распространенным в зарубежной клинической практике активатором протеина С, который используют для тестирования уровня протеина С в плазме крови человека с помощью модификации теста АЧТВ (Martlnoli J. L, Stocker К, Fast Functional Protein C Assay Using Protac, a Novel Protein С Activator // Thromb.Res., 1986, 43 p. 253-264). Тест с Протаком прост в исполнении, малокомпонентен и позволяет в короткое время определить уровень протеина С в плазме крови. 5 10 15 20 25 Однако, процесс выделения Протака явг ляется длительным по времени, т. е. ззнима- 30 ет не менее суток, используемые при выделении сырье и материалы, такие как яд Agkistrodon contortrix, имидазол, сульфопропил-сефадекс, являются дефицитными. Наиболее близким по источнику сырья 35 является препарат активатора протеина С из яда Agkistrodon halys halys (щитомордник обыкновенный), который выделяют гельфильтрацией на сефадексе G-100, разбавлением активных фракций, установлением 40 определенного рН и ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе с элюацией активатора протеина С линейным градиентом раствора уксуснокислого аммония (А.А. Тара, А.А. Аавиксаар, А.Е.Коган и С.М.Стру- 45 кова. Способ получения экзогенного активатора протеина С // Ах, Isfe 1565889, кл. С 12 N9/50, Бюл,, 1990, Ns 19). Полученный таким образом препаратактивируеттолько крысиный протеина С в сложном многоступенча- 50 том тесте (С. М. Струкова, А. Е. Коган, А. А. Тара и А. А. Аавиксаар, Способ определения антикоагулянта протеина С в плазме крови животных // Авт. св. № 1659486, Бюл., 1991, Ff 24), включающем получение бариевого 55 s e осадка из плазмы крови, инкубацию элюата бариевого осадка с активатором протеина С, смешивание с тестирующей плазмой и определение времени свертывания смеси в каолин-кефалиновом тесте. Таким образом, выделение данного активатора протеина С является также длительным по времени в связи с введением этапа гель-фильтрации, а конечный продукт не активирует человеческий протеин С, в связи с чем его сложно использовать в клинической практике для тестирования уровня протеина С в плазме крови человека. Предложенный тест с использованием данного активатора протеина С является многоступенчатым, многокомпонентным, сложным методически, что значительно повышает возможность ошибки в определении уровня протеина С в плазме крови человека и делает его трудоемким и плохо воспроизводимым в повседневной клинической практике. Задачей настоящего изобретения является разработка простого и доступного способа выделения из яда щитомордника активатора протеина С, способного активировать человеческий протеин С для использования в тестировании уровня протеина С в плазме крови человека. Параллельной задачей является более полная утилизация яда щитомордника при получении ферментных препаратов. Для решения поставленной задачи растворенный в буфере яд щитомордника обыкновенного разделяют на афинном сорбенте голубой агарозе, элюируя связавшиеся фракции линейным градиентом хлорида натрия и получая тромбиноподобный фермент Анцистрон-Н (Соловьев Д. А., Угарова Т. П., Выделение и характеристика а-специфичных тромбиноподобных ферментов из ядов щитомордника обыкновенного (Agkistrodon halys halys) и щитомордника восточного (среднеазиатский подвид A g k i s t r o d o n halys blomhoffll) // Биохимия, 1993, т. 58, вып. 8, с. 1221-1232), а несвязавшиеся с аффинным носителем белки разбавляют и наносят на ионообменный носитель Q-сефарозу, элюируя активатор протеина С линейным градиентом хлорида натрия, стабилизируя его альбумином и лиофилизируя. Лиофилизированный активатор протеина С хранится не менее 2 лет и может использоваться как для изучения протеина С как объекта биохимических исследований, так и для определения уровня протеина С в плазме крови человека в условиях клиники. Результат достигается при разработке способа выделения активатора протеина С из яда щитомордника обыкновенного путем хроматографии на голубой агарозе, разбавлением несвязавшейся с носителем фракции белков не менее, чем в 6 раз нейтральным буфером с ионной силой не более 0,03 и разделения белков на ионообменном носителе типа Q-сефарозы с элюцией активатора 17056 человеческого протеина С линейным градиприводит к изменению выхода активатора ентом хлорида натрия и выделением его при протеина С, но увеличивает время, необхоконцентрации хлорида натрия 0,06-0,08 М. димое для хроматографии. Полученный активатор представлял соП р и м е р 3. 200 мг яда щитомордника бой фермент с молекулярной массой 30 кДа, 5 обыкновенного растворяют и разделяют, одноцепочечный, активирующий человечекак показано в примере 1, при этом белки, ский протеин С. не связавшиеся с носителем голубой агарозой, разделяют в колонке с QAE-сефадекВ связи с отсутствием общепринятых сом. Выход активатора 330 у.е. единиц активности для относительной характеристики препарата активатора протеи- 10 Известно, что уровень протеина С понина С использовали следующие условные жается при развитии ДВС-синдрома, при единицы активности. За одну условную едициррозе и токсическом поражении печени, ницу активности {у. е.) принимали такое конефритическом синдроме. На основе выделичество активатора протеина С, которое в ленного нового активатора протеина С предтесте АЧТВ затягивало время свертывания 15 ложен метод тестирования уровня протеина донорской плазмы на 100 сек. С в человеческой плазме, аналогичный широко используемому в зарубежной клиничеВозможность осуществления способа ской практике тесту с Протаком. Тест подтверждена примерами. выполняется следующим образом: в пробирку вносят0,1 мл исследуемой плазмы,0,1 П р и м е р 1. 200 мг яда щитомордника 20 мл реагента АЧТВ и 0,1 мл стандартного обыкновенного растворяют в 5 мл 0,05 М препарата активатора протеина С, смесь инТрис-НО. рН 7,4, содержащем 0,13 М NaCI кубируют 3 мин при 37°С, затем вносят 0,1 и 10 М азида натрия и, поспе центрифугиМ раствора кальция и засекают время сверрования для удаления нерэстворившихся частиц, наносят со скоростью 0,5 мл/мин на 25 тывани* плазмы. Уровень протеина С определяли Пі > калибровочной кривой (фиг. 2). На хроматогрэфическую колонку с голубой агарисунке видно, что калибровочные кривые розой ( 1 x 8 см), уравновешенную тем же для определения уровня протеина С в плазбуфером. С сорбентом связывается около ме крови человека с помощью Протака и 10-12% от нанесенного количества белков. нового активатора протеина С практически Из связавшихся с носителем белков выделя- 30 совпадают, т.е. отличия в содержании проют тромбиноподобный фермент Анцистронтеина С, определенном двумя методами, не Н. Белки, не связавшиеся с носителем, в превышают 5%. объеме 30 мл разбавляют в б раз буфером 0,05 Трис-НСІ, рН 8,2, и наносят на колонку Нами было исследовано более 50 образс Q-сефарозой ( 1 x 5 см), уравновешенную 35 цов плазмы пациентов с различными сердечно-сосудистыми заболеваниями и тем же буфером, со скоростью 1,5 мл/мин. гинекологическими патологиями. Уровень Несвязавшиеся с носителем белки отмывапротеина С в плазмах определялся паралют тремя объемами того же буфера и элюилельно с помощью нового активатора протеруют активатор протеина С линейным градиентом хлорида натрия 0-0,2 М (см. фиг. 40 ина С и фирменного фирменного препарата Протак (см. таблицу). 1). Оптическую плотность элюата регистрируют непрерывно с помощью увикорда. Статическую обработку проводили с использованием критерия Стьюдента. Было Фракции сорбируют по белковым пикам, оппоказано, что количество протеина С е плазределяя активность по увеличению времени ме, определенное с помощью Протака и высвертывания донорской плазмы в тесте 45 деленного нами активатора протеина С, АЧТВ. Активатор протеина С получают при практически совпадает (различия недостоконцентрации хлорида натрия 0,6-0,8 М. верны, Р » 0,05). Фракцию, содержащую активатор протеина Таким образом показано, что оба препаС, стабилизируют 2 % бычьим сывороточным альбумином, лиофилизируют и хранят при 50 рата дают практически одинаковые результаты. Тест на основе нового активатора +4°С. Выход активатора 350 у.е протеина С расширяет арсенал клинической П р и м е р 2. 200 мг яда щитомордника диагностики патологий гемостаза. Поскольобыкновенного растворяют и разделяют, ку препарат Протак малодоступен для накак показано в примере 1, при этом белки, не связавшиеся с носителем голубой агаро- 55 ших клиник, активатор протеина С из доступного сырья и выделяемый с использозой, разбавляют в 8 раз буфером перед наванием дешевых по себестоимости и доступнесением на колонку с Q-сефарозой. Выход ных реактивов и оборудования, может найти активатора 350 у.е. широкое применение в повседневной клиУвеличение степени разбавления белнической практике. ков перед нанесением иа G-сефарозу не 7 17056 В Уровень протеина С в плазме крови человека в норме и при патологии п/п % протеина (^.определенный в тесте с новым активатором % протеина С,определенный в тесте с Протаком Донорские плазмы 102 ±2,5 93±3(0 104 ±2,0 1 2 3 101±3,0 90±4,5 104 ±2.5 Плазмы больных гипертонической болезнью 55±3,5 82 ±2,0 96±2,0 4 5 6 55 ±2,5 78±3,0 103±4,0 Плазмы беременных с гестозами . 7 8 9 45±3,5 46±3,0 36±4,5 47±3,0 43 ±4,5 37 ±4,0 2 S о СО ці МЛ 100 Фиг. 1 Хроматографическое выделение активатора протеина С на Q-сефарозе. Градиент NaCI 0-0,2 М. I - пик активатора, 17056 160 20 АО 60 100 вП 120 Уриионь протемиа С, % Фиг. 2. Зависимость времени свертывания человеческой плазмы от уровня протеина С в плазме крови человека. ! кривая для теста с Протаком, II - кривая для теста с новым активатором протеина С. Упорядник Замовлення 4214 Техред М.Моргентал Коректор М.Керецман Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.ГагарІна, 101 УКРАЇНА иА пі) 17056 (із) С2 (51) 6 C12N9/50.A61K35/38 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ОПИС ДО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД (54) СПОСІБ ВИДІЛЕННЯ АКТИВАТОРА ПРОТЕЇНУ С З ОТРУТИ ЩИТОМОРДНИКА ДЛЯ ТЕСТУВАННЯ РІВНЯ ПРОТЕЇНУ С В ПЛАЗМІ КРОВІ ЛЮДИНИ (21)94076235 (22) 14 07 1994 (24) 15 09 2000 (46) 15 09 2000, Бюл №4 2000 р (72) Лукінова Ніна Іванівна, Платонова Тетяна Миколаївна, Сушко Олена Олександрівна, Соловйов Дмитро Олександрович (73) Інститут біохімії їм О В Палладіна НАН України (56) Биохимия 1993 т 58 выл 8 с 1221-1232 (57) 1 Способ выделения активатора протеина С из яда щитомордника для тестирования уровня протеина С в плазме крови человека, включаю щий растворение яда, поэтапное хроматографическое выделение активатора и лиофилизацию, о т л и ч а ю щ и й с я тем что раствор яда щитомордника хроматографируют на голубой агарозе, несвязавшиеся белки разбавляют не менее чем в 6 раз нейтральным буфером с ионной силой не более 0 03 и разделяют на анионообменном носителе элюируя активатор протеина С градиентом хлорида натрия и выделяя активатор при концентрации хлорида натрия 0 06-0 08 М 2 Способ поп 1 о т л и ч а ю щ и й с я тем что в качестве анионообменного носителя исполь зуют ионообменник Q сефарозу Изобретение относится к биотехнологии и in Whole Plasma Using an Activator from the Venom представляет собой способ выделения активатоof Agkistrodon contortnx contortrix // Am J Clin ра протеина С из яда щитомордника ПолученPathol 1987 87 pp 619-625) ный активатор может использоваться в физиолоИзвестен ряд активаторов протеина С, выгии, гематологии клинической практике для тесделенных из змеиных ядов Препарат Протак вытирования уровня протеина С в плазме крови чеделяют из яда змеи Agkistrodon contortnx растволовека, в биохимии для изучения активации проряя яд в имидазольном буфере, диализуя расттеина С вор яда в течение 12 часов против буфера 0,02 М имидазол, рН 6 5 + 0 1 М NaCI и выделяя ферПротеин С - белок плазмы крови, играюментный препарат хроматографией на сульфопщий важную роль в процессе регуляции гемостаропил-сефадексе (Janet D Klein and Frederick за Он тормозит цепную реакцию активации факWalker, Purification of a Protein С Activator from the торов свертывания крови, задерживает развитие Venom of the Southern Copperhead Snake эндогенного внутрисосудистого свертывания и (Agkistrodon contortnx contortnx/ // Biochemistry, 1986, вызывает антитромботический эффект, запуская 25 N15, pp 4176-4179) Протак является наиболее фибринолиз (Ена Я М , Сушко Е А , Платонова распространенным в зарубежной клинической пракТ Н , Соловьев Д А , Биологическая роль и клинитике активатором протеина С, который используют ческое значение протеина С // Врачебное дело, для тестирования уровня протеина С в плазме кро1992, № 6, с 20-25) Таким образом, уровень ви человека с помощью модификации теста АЧТВ протеина С в плазме крови является важным (Martinoli J L, Stocker К Fast Functional Protein С диагностическим показателем Концентрацию Assay Using Protac a Novel Protein С Activator // протеина С в плазме крови определяют иммуноThromb Res , 1986, 43, pp 253-264) Тест с Проталогическими методами, коагуляционным метоком прост в исполнении, малокомпонентен и позводом (Loebermann H , Kolde H J et al Determination ляет в короткое время определить уровень протеиof protein С in plasma // Behnng Institut Mitteilungen на С в плазме крови 79 1986 pp 112-120) и методами с применением хромогенных субстратов Последние базиОднако процесс выделения Протака явруются на использовании активаторов протеина ляется длительным по времени, т е занимает С из ядов змей и сейчас широко используются в не менее суток, используемые при выделении зарубежной клинической практике благодар#н?еч и моториалы, такие как яд Agkistrodon ности быстроте и простоте анализа (Fran Jr УКРПНЙВЛпх. имидазол, сульфопропил-сефадекс, RB, Steyfert U Rapid Amidolytic Assay for Ргфеїп (ВІДДІЛ ДвВЩИПЮ»-дефі}цитньіми інформаційного фонду експертизи № 1 1 " 20 г СМ О со ю 17056 Наиболее близким по источнику сырья является препарат активатора протеина С из яда Agkistrodon halys halys (Щитомордник обыкновенный), который выделяют гель-фильтрацией на сефадексе G-100, разбавлением активных фракций, установлением определенного рН и ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе с элюцией активатора протеина С линейным градиентом раствора уксуснокислого аммония (А А. Тара, А А Аавиксаар, А Е Коган и С М. Струкова, "Способ получения экзогенного активатора протеина С" //Ас № 1565889, С 12 N 9/50, БИ, 1990, № 19) Полученный таким образом препарат активирует только крысиный протеин С в сложном многоступенчатом тесте (С М Струкова, А.Е. Коган, А А Тара и А А. Аавиксаар, "Способ определения антикоагулянта протеина С в плазме крови животных" //Ас № 1659486, БИ, 1991, № 24), включающем получение бариевого осадка из плазмы крови, инкубацию элюата бариевого осадка с активатором протеина С, смешивание с тестирующей плазмой и определение времени свертывания смеси в каолин-кефалиновом тесте. Таким образом, выделение данного активатора протеина С является также длительным по времени в связи с введением этапа гель-фильтрации, а конечный продукт не активирует человеческий протеин С, в связи с чем его сложно использовать в клинической практике для тестирования уровня протеина С в плазме крови человека Предложенный тест с использованием данного активатора протеина С является многоступенчатым, многокомпонентным, сложным методически, что значительно повышает возможность ошибки в определении уровня протеина С в плазме крови человека и делает его трудоемким и плохо воспроизводимым в повседневной клинической практике Задачей настоящего изобретения является разработка простого и доступного способа выделения из яда щитомордника активатора протеина С, способного активировать человеческий протеин С для использования в тестировании уровня протеина С в плазме крови человека. Параллельной задачей является более полная утилизация яда щитомордника при получении ферментных препаратов Для решения поставленной задачи растворенный в буфере яд Щитомордника обыкновенного разделяют на афинном сорбенте голубой агарозе, элюируя связавшиеся фракции линейным градиентом хлорида натрия и получая тромбиноподобный фермент Анцистрон-Н (Соловьев Д А , Угарова Т П. Выделение и характеристика u-специфичных тромбиноподобных ферментов из ядов Щитомордника обыкновенного (Agkistrodon halys halys) и Щитомордника восточного (среднеазиатский подвид Agkistrodon halys blomhoffn) // Биохимия, 1993, т. 58, вып 8, с. 1221-1232), а несвязавшиеся с аффинным носителем белки разбавляют и наносят на ионообменный носитель Q-сефарозу, элюируя активатор протеина С линейным градиентом хлорида натрия, стабилизируя его альбумином и лиофилизируя Лиофилизированный активатор протеина С хранится не менее 2 лет и может использоваться как для изучения протеина С как объекта биохимических исследований, так и для определения уровня протеина С в плазме крови человека в условиях клиники. Результат достигается при разработке способа выделения активатора протеина С из яда Щитомордника обыкновенного путем хроматографии на голубой агарозе, разбавлением несвязавшейся с носителем фракции белков не менее, чем в 6 раз нейтральным буфером с ионной силой не более 0,03 и разделения белков на ионообменном носителе типа Q-сефарозы с элюцией активатора человеческого протеина С линейным градиентом хлорида натрия и выделением его при концентрации хлорида натрия 0,060,08 М. Полученный активатор представлял собой фермент с молекулярной массой 30 кДа, одноцепочечный, активирующий человеческий протеин С. В связи с отсутствием общепринятых единиц активности для относительной характеристики препарата активатора протеина С использовали следующие условные единицы активности. За одну условную единицу активности (у.е.) принимали такое количество активатора протеина С, которое в тесте АЧТВ затягивало время свертывания донорской плазмы на 100 сек. Возможность осуществления способа подтверждена примерами. П р и м е р 1. 200 мг яда Щитомордника обыкновенного растворяют в 5 мл 0,05 Трис-НСІ, рН 74, содержащем 0,13 М NaCI и 10~3 М азида • натрия и, после центрифугирования для удаления нерастворившихся частиц, наносят со скоростью 0,5 мл/мин на хроматографическую колонку с голубой агарозой (1x8 см), уравновешенную тем же буфером. С сорбентом связывается около 10-12% от нанесенного количества белков. Из связавшихся с носителем белков выделяют тромбиноподобный фермент Анцистрон-Н. Белки, не связавшиеся с носителем, в объеме 30 мл разбавляют в 6 раз буфером 0,05 М Трис-НСІ, рН 82, и наносят на колонку Q-сефарозой (1x5 см), уравновешенную тем же буфером, со скоростью 1,5 мл/мин. Несвязавшиеся с носителем > белки отмывают тремя объемами того же буфера и элюируют активатор протеина С линейным градиентом хлорида натрия 0-0,2 М (см. фиг. 1). Оптическую плотность элюата регистрируют непрерывно с помощью увикорда. Фракции собирают по белковым пикам, определяя активность по увеличению времени свертывания донорской плазмы в тесте АЧТВ. Активатор протеина С получают при концентрации хлорида натрия 0,6-0,8 М. Фракцию, содержащую активатор протеина С, стабилизируют 2% бычьим сывороточным альбумином, лиофилизируют и хранят при +4°С. Выход активатора 350 у.е. П р и м е р 2 200 мг яда Щитомордника обыкновенного растворяют и разделяют, как показано в примере 1, при этом белки, не связавшиеся с носителем голубой агарозой, разбавляют в 8 раз буфером перед нанесением на колонку с Q-сефарозой. Выход активатора 350 у.е Увеличение степени разбавления белков перед нанесением на Q-сефарозу не приводит к изменению выхода активатора протеина С, но 17056 увеличивает время, необходимое для хроматографии П р и м е р 3 200 мг яда Щитомордника обыкновенного растворяют и разделяют, как показано в примере 1, при этом белки, не связавшиеся с носителем голубой агарозой, разделяют на колонке с QAE-сефадексом Выход активатора 330 у е Известно, что уровень протеина С понижается при развитии ДВС-синдрома, при циррозе и токсическом поражении печени, нефротическом синдроме На основе выделенного нового активатора протеина С предложен метод тестирования уровня протеина С в человеческой плазме, аналогичный широко используемому в зарубежной клинической практике тесту с Протаком Тест выполняется следующим образом в пробирку вносят 0,1 мл исследуемой плазмы, 0,1 мл реагента АЧТВ и 0,1 мл стандартного препарата активатора протеина С, смесь инкубируют 3 мин при 37°С, затем вносят 0,1 М раствора кальция и засекают время свертывания плазмы Уровень протеина С определяли по калибровочной кривой (фиг 2) На рисунке видно, что калибровочные кривые для определения уровня протеина С в плазме крови человека с помощью Протака и нового активатора протеина С практически сов падают, т е отличия в содержании протеина С, определенном двумя методами не превышают 5% Нами было исследовано более 50 образцов плазмы пациентов с различными сердечнососудистыми заболеваниями и гинекологическими патологиями Уровень протеина С в плазмах определялся параллельно с помощью нового активатора протеина С и фирменного препарата Протак (см табл) Статистическую обработку проводили с использованием критерия Стьюдента Было показано, что количество протеина С в плазме, определенное с помощью Протака и выделенного нами активатора протеина С, практически совпадает (различия недостоверны, Р>0,05) Таким образом показано, что оба препарата дают практически одинаковые результаты Тест на основе нового активатора протеина С расширяет арсенал клинической диагностики патологий гемостаза Поскольку препарат Протак малодоступен для наших клиник, активатор протеина С из доступного сырья и выделяемый с использованием дешевых по себестоимости и доступных реактивов и оборудования, может найти широкое применение в повседневной клинической практике Уровень протеина С в плазме крови человека в норме и при патологии % протеина С, определенный в тесте с новым активатором % протеина С, определенный в тесте с Протаком Донорские плазмы 1 102±2,5 10113 0 2 93±3,0 90±4,5 3 104±2,0 104±2,5 Плазмы больных гипертонической болезнью 4 55+3,5 55±2,5 5 82±2,0 78±3,0 6 96±2,0 103±4,0 Плазмы беременных с гестозами 7 45±3,5 47±3,0 8 46±3,0 43±4,5 9 36±4,5 37±4,0 17056 о СО ui МЛ 0.0 100 Ф о 3 160 В • • 140 03 m D 120 X те ш Q. Ф Ш U К ф о. ш В • • О В 100 в 80 60 • в • Щ і • • і 20 ' • і • ' і 40 60 80 Уровень протеина С, % 100 Фиг. 2 Тираж 50 екз Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м Ужгород, вул Гагаріна, 101 {03122)3-72- 89 (03122)2-57-03 120