N-алкіл-2-заміщені аналоги аденозинтрифосфату, спосіб їх одержання, фармацевтична композиція

1 І\І-алкил-2-замещенньіе аналоги аденозинтрифосфата формулы І NHR1 Х-еЕ!НЛР(О)(0И) он он (!)_ где R1 и R2 независимо представляют собой водород или галоген, R3 и R4 независимо представляют собой фенил, или Сі 6-алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из OR5, Сі 6-алкилтио, NR6R7, фенила, COOR8, и галогена, R5, R6, R 7 H R8 независимо представляют собой водород или Сі 6-алкил, а X представляет собой кислотную часть, и его фармацевтически приемлемые соли 2 Соединение формулы І по п 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где X является Р(О)(ОН)2 3 Соединение формулы I по п 1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, где R4 представляет собой Сі 6-алкил, необязательно замещенный галогеном 4 Соединение формулы I по любому из предыдущих пунктов или его фармацевтически приемле1 2 мая соль, где R и R является CI 5 Соединение формулы I по любому из предыдущих пунктов или его фармацевтически приемлемая соль, где R3 представляет собой Сі 6-алкил, необязательно замещенный Сі 6-алкилтио 6 Соединение формулы І по п 1, которое представляет собой моноангидрид 1\1-этил-2-(пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид 1\1-этил-2-[(3,3,3трифторопропил)тио]-5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, и моноангидрид 1\1-[2-(метилтио)этил]-2-[(3,3,3трифторопропил)тио]-5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, или его фармацевтически приемлемая соль 7 Соединение формулы І по п 1, которое представляет собой моноангидрид г\І-бутил-2-(пропилтио)5'адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид І\І-пропил-2-(пропилтио)5'адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид 1\1-(1-метилэтил)-2-(пропилтио)-5'адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид 1\1-(2-метоксиэтил)-2-(пропилтио)-5'адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид г\І-циклопентил-2-(пропилтио)-5'адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид І\І-фенил-2-(пропилтио)-5'адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид 1\1-(2,2,2-трифтороэтил)-2(пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид І\І-(метоксикарбонилметил)-2(пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, о (О (О го ю 54366 моноангидрид 1\1-(2-метилтиоэтил)-2-(пропилтио)5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид г\1-[2-(г\1,г\1-диметиламино)этил]-2(пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид 2-(циклогексилтио)-1\1-этил-5'адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид 1\1-(2,2,2-трифтороэтил)-2-[(3,3,3трифторопропил)тио]-5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, моноангидрид М-(2-метоксиэтил)-2-[(3,3,3трифторопропил)тио-5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, или любая из его фармацевтически приемлемых солей 8 Фармацевтическая композиция, включающая эффективное количество соединения формулы I по любому из предыдущих пунктов или его фармацевтически приемлемую соль в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем 9 Соединение формулы I по любому из пп 1-7 или его фармацевтически приемлемая соль, полезные для изготовления фармацевтической композиции для лечения заболеваний, связанных с агрегацией тромбоцитов 10 Способ получения соединения формулы I по любому из пп 1-7 или его фармацевтически приемлемой соли, заключающийся втом, что а) соединение формулы II или его соль Настоящее изобретение относится к новым фармацевтическим соединениям, способам их получения, фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, и способам их использования Аденозинтрифосфат (АТФ) оказывает сильное фармакологическое действие на различные ткани Активность АТФ и других внеклеточных адениновых нуклеотидов, таких, как аденозиндифосфат (АДФ) и аденозинмонофосфат (АМФ), опосредуется Рг-пуриноцепторами Однако, действие АТФ в некоторых тканях, например, в мочевом пузыре, может быть снижено вследствие быстрого дефосфорилирования до АМФ паденозина под действием эк-тонуклеотидазы, присутствующей в этих тканях В последних работах, посвященных исследованию Рг-пуриноцепторов, присутствующих в различных тканях, были использованы в качестве биологических зондов АТФ-аналоги, которые являются резистентными к дефосфорилированию В работе Cusack и др (Br J Pharmacol, 1987, 90 791 - 795), проведенной с использованием мочевого пузыря и taenia coh морской свинки, описывается активность таких соединений, как мокоангидрид 2-метилтио-5'-адениловой кислоты с метиленбифосфоновой кислотой, моноангидрид 2-метилтио-5-адениловой кислоты с дихлороме где R и R определены выше, l_i представляет собой уходящую группу, а У представляет собой (і) ОН, или (м) уходящую группу l_2, подвергают реакции с соединением формулы III или его солью где R1, R2 и X определены выше, а затем в случае, когда У является l_2, подвергают гидролизу, в) из соответствующего защищенного соединения формулы І, в котором являются защищенными одна или несколько функциональных групп, удаляют защитную группу, а затем, если это необходимо, полученное соединение формулы I или его соль превращают в фармацевтически приемлемую соль или наоборот тиленбифосфоновой кислотой, и моноангидрид 2метилтио-5'-адениловой кислоты с дифторометиленбисфосфоновой кислотой В работе Stone u Cusack (Br J Pharm , 1989, 97, 631 - 635) описано использование inter aha, моноангидрида 2метилтио-5'-адениловой кислоты с дифторметиленбисфосфоновой кислотой в исследовании Ргпуриноцепторов в гиппокампе крысы Maguie u Satchell в своей работе "Physiological and Regulatory Function of Adenosme and Adenme Nucleotides" (Ed H P Baer & J I Drummond, Raven Press, NewYork, 1979, pp 33 - 43) раскрывают ингибирозание taenia coh морской свинки соединением моноангидрида 2-хлоро-5'-адениловой кислоты с метиленбисфосфоновой кислотой В работе Cusack u Hourani (Nucleosides & Nucleotides, 1991, 10(5), 1019 - 1028) также сообщается, что моноангидрид 2-метилтио-5'адениловой кислотное метиленбисфосфоновой кислотой ингибирует АДФ-а-Б-индуцированную агрегацию тромбоцитов В Международной патентной заявке WO 92/17488 (Jisons pis) раскрывается ряд 2замещенных АТФ-аналогов и их активность как ингибиторов агрегации тромбоцитов Авторами настоящей заявки была получена группа новых ^алкил-2-замещенных АТФаналогов, обладающих фармакологической актив 54366 ностью В соответствии со своим первым вариантом настоящее изобретение относится к соединению формулы I 3 NH8 trs l 2 X-CR B -P{O)(OH)-O-P(0)(OH) 1 но 2 он R и R независимо представляют собой водород или галоген, R и R4 независимо представляют собой фенил, или алкил, необязательно замещенный одним или несколькими заместителями, выбранными из OR5, Сі є - алкилтио, NR6R7, фенила, COOR8, и галогена R5, R6, R7 и R независимо представляют собой водород или Сі є -алкил, и X представляет собой кислотную часть, и к его фармацевтически приемлемым солям Соединения формулы I могут существовать в таутомерной, энантиомерной, и диастереомерной формах, которые также входят в объем настоящего изобретения Кроме того, настоящее изобретение относится к способу получения соединений формулы I и их солей, заключающемуся втом, что а) соединение формулы II или его соль I I L,-P(0)(Y) где R и R определены выше, l_i представляет собой уходящую группу, а У представляет собой (і) ОН или (м) уходящую группу l_2, подвергают реакции с соединением формулы III или его солью О • он их где R1, R2 и X определены выше, а затем, в случае, когда У является l_2, подвергают гидролизу, Ь) удаляют защищенную группу из соответствующего защищенного соединения формулы I, в котором являются защищенными одна или несколько функциональных групп, а затем, если это необходимо, полученное соединение формулы I или его соль превращают в фармацевтически приемлемую соль, или наоборот В стадии (а) (і), где У является ОН, уходящими группами 11 могут быть амины, например, диалки_ ламины, либо насыщенные или ненасыщенные циклоамины, а предпочтительно, если такими уходящими группами являются морфолинил, имидозолил или триазолил Указанную реакцию предпочтительно осуществляют в растворителе, предпочтительно, в полярном апротонном растворителе, таком, как пиридин, диметилформамид, ацетонитрил, гексаметилфосфоротриамид, г\І,г\Г-диметилпропиленмочевина, или 1метил-2-пирролидинон Эта реакция может быть проведена при температуре от - 20и до 100°С, например, при 10 - 30°С Соединения формулы II, в которых У представляет собой ОН, либо являются известными, либо они могут быть получены известными методами, например, методом, описанным в Международной патентной заявке WO 92/17499 (Jisons pis) Например, соединения формулы II, в которых l_i является морфолинилом, могут быть получены из соответствующих 5'-монофосфатов путем их обработки морфолином в присутствии конденсирующего агента, такого, как дициклогексилкарбодиимид, предпочтительно, в присутствии протонного растворителя или смеси растворителей, такой, как смесь т-бутанола и воды В стадии (а) (м), когда У является уходящей группой l_2, уходящие группы 11 и l_2 могут пред_ ставлять собой галоген, например, хлор l_i и l_2 могут быть одинаковыми или различными, но предпочтительно, одинаковыми Соединения формулы II, в которых У представляет собой l_2, могут быть получены из соответствующего нуклеозида посредством реакции этого нуклеозида с фосфорилирующим агентом, несущим три уходящие группы, т е РО L1L2L3, а в частности, РОСІз Полученное соединение формулы II не должно быть обязательно выделено, например, оно может быть подвергнуто реакции in situ с соединением формулы III с последующим гидролизом, например, осно'вным гидролизом с использованием Na2CO3 Нуклеозиды и нуклеозид-5'-монофосфаты, используемые для получения соединений формулы II, либо являются известными соединениями, либо они могут быть получены известными методами из известных соединений (см , например, "Chemistry of Nucleosides and Nucleotides" Vol 2, bd Leroy В Foun send, Plenum Press, 1991) Соединения формулы III либо являются известными соединениями, либо они могут быть получены известными методами, описанными, например, в Международной патентной заявке WO92/17488 (Jisons pis) В рассматриваемой реакции может оказаться необходимым, чтобы функциональные группы, например, гидрокси- или аминогруппы, присутствующие в исходных соединениях, были защищенными, а поэтому, в стадии (Ь) могут быть удалены одна или несколько защитных групп Подходящими защитными группами и методами их удаления являются группы и методы, описанные, например, в "Protective Yroups in Or 54366 8 очистки продукта, могут быть также использованы & Sons Jnc , 1991 Гидрокси-группы могут быть, и другие соли например, защищены арилметильными группами, Соединения формулы I могут обладать таутотакими, как фенилметил, дифенилметил или тримерией, например, имин-енаминовой таутомерией фенилметил, ацильными группами, такими, как в 6-положении аденина Указанные соединения ацетил, трихлорацетил или трифтороапетил, или могут также содержать одни или несколько асимтетрагидролираниловыми производными Подхометрических атомов углерода, а поэтому, они модящими аминозащитными группами являются гут существовать в виде оптических изомеров арилметильные группы, такие, как бензил, (R, S) и/или диастереоизомеров Диастереоизомеры а-фенилэтил, дифенилметил, или трифенилмемогут быть разделены с использованием стантил, и ацильные группы, такие, как ацетил, тридартной техники, например, хроматографии или хлорацетил или трифтороапетил Подходящими фракционной кристаллизации Различные оптичеметодами разблокирования являются гидрогеноские изомеры могут быть выделены с помощью лиз, кислотный или основный гидролиз, либо фостандартной методики, обычно используемой для толиз Арилметильные группы могут быть, наприразделения рацемических или других смесей данмер, удалены путем гидрогенолиза в присутствии ных соединений, например, такой, как фракционметаллического катализатора, например, палланая кристаллизация или ВЭЖХ Альтернативно, дированного угля Тетрагидропиранильные группы нужные оптические изомеры могут быть получены могут быть отщеплены путем гидролиза в кислотс помощью реакций соответствующих оптически ных условиях Ацильные группы могут быть удаактивных исходных материалов в условиях, не лены путем гидролиза с использованием основаблагоприятствующих рацемизации ния, такого, как гидроксид натрия или карбонат Алкильными группами, представленными R3 калия, а такая группа, как трихлорацетил, может R8, могут быть прямые, разветвленные или циклибыть удалена путем восстановления, например, с ческие, насыщенные или ненасыщенные алкильиспользованием цинковой и уксусной молоты ные группы Галогенами, представленными R1 и R2, являСоединения формулы I или их соли могут ются F, CI, Вг, или I При этом, предпочтительно, быть выделены из их реакционных смесей с исчтобы R1 и R2 были одинаковыми Особенно предпользованием стандартной техники почтительными являются соединения, в которых Описания вышеупомянутых работ вводятся в R1 и R2 представляют собой CI настоящее описание в качестве ссылок Предпочтительными являются соединения, в Соли соединений формулы I могут быть полукоторых R3 и R4 представляют собой Сі є -алкил, чены реакцией свободной кислоты или ее соли, необязательно замещенный одним или нескольлибо свободного основания или его соли, или кими заместителями, выбранными из OR5, Сі епроизводного, с одним или несколькими эквиваалкилтио, NR6R7, фенила, COOR8 и галогена лентами соответствующего основания или кислоты Эта реакция может быть осуществлена в расГалогены, которые представлены R3 и R4 и котворителе или среде, в которой данная соль торые могут быть замещены, являются CI, Вг и I, a является нерастворимой, либо в растворителе, в предпочтительно F котором данная соль является растворимой, наОсобенно предпочтительными являются сопример, таком, как эта-нол, тетрагидрофуран или единения, в которых R3 представляет собой Сі є диэтиловый эфир, который может быть затем алкил, необязательно замещенный Сі є -алкилтиоудален in vacuo, или путем осушки вымораживагруппой Примерами конкретных алкильных групп, 3 нием Данная реакция может также представлять представленных R , являются пробил, бутил, а собой метатетический процесс, либо она может особенно этил Предпочтительными замещенныбыть осуществлена на ионообменной смоле ми алкильными группами, представленными R3, является 2-(метилтио)этил Фармацевтически приемлемыми солями соОсобенно предпочтительными являются соединений формулы I являются соли щелочных единения, в которых R4 представляет собой Сі є металлов, например, соли натрия и калия, соли алкил, необязательно замещенный одним или щелочноземельных металлов, например, соли несколькими, например, тремя атомами галогена кальция и магния, соли элементов Группы III, наПредпочтительными R4 - группами являются пропример, алюминиевые и аммониевые соли Подпил и 3,3,3-триф-торпропил ходящими солями органических оснований являются соли, образованные с гидроксиламином, Кислотными группами, представленными X, низшими алкиламинами, например, метиламином являются кислоты Бренстеда-Лоури, т е , группы, или этиламином, замещенными низшими алкиладействующие, как доноры протона Указанные минами, например, гидрокси-замещенными алкикислотные группы могут быть одноосновными или ламинами, либо с моноциклическими азотными многоосновными В качестве конкретных примегетероциклическими соединениями, например, ров таких кислотных групп могут служить пиперидином или морфолином, а также соли, обР(О)(ОН)2, -SO3H, и -СО2Н разованные аминокислотами, например, такими, Предпочтительными соединениями формулы I как аргинин, лизин, и т п или их N-алкиловыми являются соединения, в которых X представляет производными, - или амино-сахарами, например, собой -Р(О)(ОН)2 такими, как N-метил-О-глюкамин или глюкозамин Соединения формулы I могут быть использоПри этом предпочтительными являются нетоксичваны для лечения млекопитающих, поскольку они ные физиологически приемлемые соли, хотя, в обладают фармакологической активностью В чанекоторых случаях, например, для выделения или game Synthesis", T Yrecn u P J M Wutts, John Wiley 54366 стности, они обладают аісгивностью, способствующей предупреждению агрегации тромбоцитов Эффективность соединений формулы I как ингибиторов агрегации тромбоцитов может быть оценена исходя из их способности действовать как антагонисты по отношению к Ргт-рецептору, см Пример X Указанные соединения могут быть использованы в любых условиях, где имеет место агрегация тромбоцитов Таким образом, эти соединения обладают антитромботическим действием, и могут быть использованы для лечения или профилактики неустойчивой стенокардии, тромбоэмболического шока, и заболеваний периферического кровообращения Кроме того, указанные соединения могут быть использованы для лечения или профилактики остаточных явлений тромботических осложнений, возникающих в результате пластических операций на сосудах, тромболиза, эндартерэктомии, операций по пересадке на сердце и сосудах, гемодиализа и искусственного кровообращения Другими показаниями к применению соединений настоящего изобретения является лечение или профилактика диссеминированного внутрисосудистого свертывания, тромбоза глубоких вен, преэклампсии/эклампсии, повреждения тканей после хирургических операций или травм, васкулитов, артериитов, тромбоцитемии, ишемии и мигрени В другом варианте своего осуществления настоящее изобретение относится к получению соединений формулы I, определенных выше, в виде фармацевтических средств Кроме того, настоящее изобретение относится к использованию соединений формулы I или их фармацевтически приемлемых солей для изготовления фармацевтических композиций, предназначенных для лечения состояний, связанных с агрегацией тромбоцитов р Дозы вводимых соединений могут широко варьироваться в зависимости от различных факторов, таких, как структура конкретного соединения формулы I, способ введения, физическое состояние пациента и тяжесть заболевания Однако, в основном, дневная доза для человека составляет от 0,1мг до 1000мг, и может быть введена в виде разделенных доз до 6 раз в день Если данное соединение вводится путем вливания, то типичная доза для человека составляет, например, 0,5 м кг/кг/мин Соединения настоящего изобретения вводятся, в основном, в виде фармацевтической композиции Так, например, в соответствии с первым вариантом настоящего изобретения фармацевтическая композиция, предпочтительно, включает в себя менее, чем 80% масс , а более предпочтительно, менее, чем 50% масс, например, от 0,1 до 20% соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, определенных выше, в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем Настоящее изобретение также относится к способу получения указанной фармацевтической композиции путем смешивания ее ингредиентов 10 Ниже приводятся примеры фармацевтических препаратов, которые могут быть использованы в целях настоящего изобретения, а также подходящих для этой цели разбавителей или носителей для внутривенных инъекций или вливаний очищенная вода или физиологический раствор, для ингаляций - необработанная лактоза, для таблеток, капсул и драке - микрокристаллическая целлюлоза, фосфат кальция, диатомовая земля, сахар, такой, как лактоза, декстроза или маннит, тальк, стеариновая кислота, крахмал, бикарбонат натрия и/или желатин, для суппозиториев - натуральные или отверженные масла или воски Если данное соединение предназначено для использования в водном растворе, например, для вливаний, то эта композиция может включать в себя и другие добавки Такими добавками могут быть, например, хелатообразующие агенты или секвестранты, антиоксиданты, добавки, корректирующие тоничность, рН-модифицирующие агенты, и буферные добавки Воли необходимо, то растворы, содержащие соединение формулы I, могут быть подвергнуты выпариванию, например, путем осушки вымораживанием или осушки распылением, с получением твердой композиции, которая может быть затем переведена в другую форму непосредственно перед использованием Если данная композиция не является раствором, то предпочтительно, чтобы она была изготовлена в форме, имеющей средний диаметр от 0,01 до Юмкм Указанные композиции могут также содержать соответствующе консерванты, стабилизирующие и смачивающие агенты, солюбилизаторы, например, водо-растворимый целлюлозный полимер, такой, как гид роксипропил метил целлюлоза, или водорастворимый гликоль, такой, как пропилекгликоль, подслащивающие добавки, красители, и ароматизирующие добавки Если необходимо, то композиции настоящего изобретения могут быть изготовлены в виде препаратов с пролонгированным высвобождением В еще одном своем варианте, настоящее изобретение относится к способу лечения заболеваний, связанных с агрегацией тромбоцитов, заключающемуся в том, что пациенту, страдающему указанным заболеванием, вводят терапевтически эффективное количество соединения формулы I, определенного выше Преимущество соединений настоящего изобретения заключается втом, что они продуцируют гораздо меньшее количество побочных эффектов, например, они обладают меньшей способностью к индуцированию гипотермии, как было установлено с помощью методики, описанной в Примере У, и, кроме того, они обладают большей продолжительностью действия, являются менее токсичными, более эффективными, более стабильными, более легко абсорбируются, более легко выводятся из организма, обнаруживают более широкий спектр активности, или имеют другие преимущественные фармакологические свойства по сравнению с известными соединениями Ниже приводятся Примеры, иллюстрирующие, 12 11 54366 но не ограничивающие настоящее изобретение В (30мл)) Осадок собирали путем центрифугироваданных Примерах, все температуры даны в градуния, промывали вышеуказанной суспензией в ацесах Цельсия, а названия соединений приводятся в тоне (4 х 40мл), и снова центрифугировали Обрасоответствии со стандартной химической номенкзовавшееся твердое вещество растворяли в воде латурой и лиофилирововали, в результате чего получали целевую соль в виде бесцветного порошка (0,25г) Пример I 31 Моноангидрид 1Ч-этил-2-(пропилтио)-5'Р-ЯМР5(0 2 О) 9,00 (д, J = 18,6Гц), 1,18 (дд, адениловой кислоты с дихлорметиленбисфосфоJ = 18,6Гц, J = 30,4Гц), - 9,3 5 (д, J = 30,4Гц) новой кислотой, тетранатриевая соль Пример 2 а) М-Этид-2-(пропилтио)аденозин Моноангидрид М-бутил-2-(пропилтио)-5э9-(2,3,5-Три-0-ацетил-р-О-рибофуранозил)-6адениловой кислоты с дихлорометиденбисфосхлоро-2-)-(пропилтио)пурин (1,3г) и этиламин фоновой кислотой, тетра натриевая соль (1,6мл) в диоксане (30мл) и воде (30мл) нагревали a) М-Бутил-2-(прорилтио)аденозин в герметично закрытом автоклаве в течение 20 Целевое соединение, а именно, г\І-бутил-2часов при температуре 110°С После охлаждения (пропилтио)-аденозин, получали способом, опидо комнатной температуры и выпаривания полусанным в Примере (1а) + чали остаток, который перекристаллизовывали из МС (FAB) 398 (М + Н , 100%) этилацетата В результате очистки с помощью b) Моноангидрид М-бутил-2-(пропилтио)-5'хроматографии на двуокиси кремния (элюент меадениловой кислоты с дихлорометиленбисфостанол / этилацетат, 1 15) было получено целевое фоновой кислотой, тетра натриевая соль соединение, а именно, 1Ч-этил-2К раствору продукта стадии а) (1,8г) в (проптилтио)аденозин (0,46г) МС (FAB) 370 (М + три этил фосфате (50мл), охлаждая льдом, по капN, 100%), 238(30%) ле добавляли оксихлорвд фосфора (1,39г) Полученный раствор перемешивали в течение 4 часов в) Моноаммониевая соль !Ч-этил-2ври комнатной температуре (пропилтио)-5-аденидовой кислоты К перемешанному раствору продукта стадии К перемешанной суспензии моа) (0,4г) в три этил фосфате (12мл) при 0°С добавно(трибутиламмониевой) соли дихлорометиленляли 0,66г оксихлорида фосфора Через 4,5 часа, бисфосфоновой кислоты (5,76г) в триэтилфосфареакционную смесь выливали в смесь льда/воды те (60мл) добавляли трибутиламин (2,16мл) (ЮОг), содержащую бикарбонат натрия (1,45г) После перемешивания в течение часа при комЧерез 45 минут, раствор промывали эфиром (2 х натной температуре, полученный раствор в тече100мл), и загружали на колонку с 50WX8(H+, форние 15 минут добавляли к раствору, описанному ма) Эту колонку промывали водой до тех пор, выше Затем полученную смесь перемешивали в пока рН элюата не становился равным 6, а затем течение 4 часов, после чего, реакционную смесь элюировали 2М гидроксидом аммония После выливали в 5% водный раствор бикарбоната налиофилизации получали целевое соединение, а трия (113мл), и перемешивали в течение 18 часов именно, моноаммониевую соль 1Ч-этил-2Полученный раствор промывали эфиром (4 х (пропилтио)-5'-адениловой кислоты (0,32г)/ 50мл), а затем осушали вымораживанием В ре31 зультате очистки (обращенно-фазовые CISРЯМР5(0 2 О) 2,03 (с) колонки с двуокисью кремния, элюент 4% солевой с) Моноангидрид 1Ч-этил-2-(пропилтио)-5'раствор, а затем вода) получали целевую соль в адениловой кислоты с дихдорометиленбисфосвиде бесцветного твердого вещества (0,69г) фоновой кислотой, тетра натриевая соль Целевой продукт стадии (Ь) (0,38г) и трибутиламин (0,15г) объединяли в небольшом объеме пиридина, и полученный раствор выпаривали досуха Затем этот раствор осушали путем азеотропной перегонки с пиридином (3 х 15мл), а после этого, с безводным N.N-диметилформамидом (ДМФ) (2 х 15мл), и образовавшийся остаток растворяли в 10мл безводного ДМФ После добавления карбонилдиимидазола (0,66г), реакционную смесь оставляли на 4 часа при комнатной температуре, а затем добавляли метанол (0,209г) Через 30 минут добавляли 2,09г моно(трибутиламмониевой) соли дихлорметиленбисфосфоновой кислоты в безводном ДМФ (30мл), и полученную смесь перемешивали в течение 18 часов при комнатной температуре После фильтрования и выпаривания получали остаток, который очищали с помощью хроматографии (ДАЕЕ-Сефадекс, элюент ОМ0,6М бикарбонат триэтиламмония) В результате лиофилизадии получали триэтиламмониевую соль, которую превращали в натриевую соль путем растворения в метаноле (2мл) и добавлена раствора иодида натрия (IM суспензия в ацетоне 31 Р ЯМР 5 (D2O) 9,7 (д, J = 18, 4Гц), 3,4 (дд, J = 18,4Гц, J = 30,5Гц), - 9,19 (д, J = 30,5Гц) Пример 3 В соответствии со способом, описанным в Примере 2, были получены следующие соединения а) Моноангидрид ІЧ-пропил-2-(пропилтио)-5'адениловой кислоты с дихдорометиденбисфосфоновом кислотой, тетраатриевая соль I) 1Ч-Пропил-2-(пропилтио)аденозин МС (FAB) 348 (М + Н+, 100%) II) Моноангидрид ІЧ-пропил-2-(пропилтио)-5'аденидовой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, тетра натриевая роль 31 Р-ЯМР 5 (D2O) 8,92 (д, J = 18,5Гц), 1,07 (дд, J = 18,7Гц, J = 29,0Гц), - 9,4 (д, J = 29,4Гц) в) Моноангидрид N-(1 -метилэтил)-2(пропиилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотой, диаммониевая соль I) М-Н-Метилэтил)-2-(пропилтио)аденозин МС (FAB) 384 (М + Н+, 100%), 252 II) Моноангидрид N-(1 -метилэтил)-2(пропилтио)-5'-аденидовой кислоты с дихлороме 14 13 54366 тиленбисфосфоновой кислотой, диаммониевая 2-(пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлормесоль тиленбисфосфоновой кислотой, тетра натриевая соль В результате очистки неочищенного продукта с помощью хроматографии (DEAE-Сефадекс, Неочищенный продукт очищали с помощью элюент ОМ - 0,6М раствор бикарбоната аммония) хроматографии (DEAE-Сефадекс, элюент ОМ получали целевую соль 0,6М раствор бикарбоната аммония), и получали 31 целевую соль Р-ЯМР 5 (D2O) 8,71 (д, J = 18,6Гц), 0,38 (дд, 31 Р-ЯМР 5 (D2O) 9,05 (д, J = 18,7Гц), 1,44 (дд, J = 19,1Гц, и = 28,7Гц), - 9,49 (д, J = 29,0Гц) J = 18,8Гц, J = 29,3Гц), - 9,40 (д, J = 29,5Гц)c) Моноангидрид N -{2- мето кс и эти л) -2(пропилтио)5'-адениловой кислоты с дихлорметиh) Моноангидрид 1Ч-Г2-(метилтио)этил-2ленбисфосфоновой кеслотой, тетра натриевая (пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлормесоль тиленбисфосфоновой кислотой, тетра натриевая I) М-(2-Метоксиэтил)-2-(пропилтио)аденозин соль + I) М-Г2-(Метилтио)этил1-2-(пропилтио)аденозин МС (FAB) 400 (М + Н , 100%), 268 + II) Моноангидрид N -{2- мето кс и эти л) -2МС (FAB) 416 (М + Н , 100%) (пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлоромеII) Моноангидрид N -\2- (мети лти о) эти л 1-2тиленбисфоифоновой кислоты, тетра натриевая (пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлормесоль тиленбисфосфоновой кислотой, триаммониевая соль ^Р-ЯМР 5 (D2O) 9,05 (д, J = 18,7Гц), 1,44 (дд, После очистки выделенного сырого продукта с J = 18,8Гц, J = 29,3Гц), - 9,40 (д, J = 29,5Гц) помощью хроматографии (DEAE-Сефадекс, элюd) Моноангидрид ІЧ-циклопентил-2ент ОМ - 0,6М раствор бикарбоната аммония) по(пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлормелучали целевую соль тиленбисфосфоновой кислотой, тетра натриевая 31 соль Р-ЯМР 5 (D2O) 8,68 (д, J = 18,6Гц), 0,33 (дд, J = 18,9Гц, J = 29,0Гц), - 9,53 (д, J = 29,0Гц) I) М-І4иклопентил-2-(пропилтио)аденозин МС (FAB) 410 (М + Н+), 278 (100%) j) Моноангидрид N-[2-(N,NII) Моноангидрид ІЧ-циклопентил-2диметиламино)этил!-2-(пропилтио)-5'-адениловой (пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлормекислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислотиленбисфосфоновой кислотой, тетра натриевая той, тринатриевая соль соль I) М-Г2-(М,М-Диметиламино)-этил1-2(пропилтио)аденозин I) Анализ для Ci9H26CI2N5Na4Oi2P3S 7HO Вычислено С 24,56, Н 4,30, N 7,53, S 3,44 (%) МС (FAB) 413 (М + Н+, 100%) Найдено С 24,43, Н 4,43, Nf 7,52, S 3,76 (%) II) Моноангидрид N-[2-(N.Ne) Моноангидрид 1Ч-фенил-2-(пропилтио)-5'диметиламино)этил!-2-(пропилтио)-5'-адениловой аденидовой кислоты с дихлорометиленбисфоскислоты с дихлорометиленбисфосфоновой кислофоновой кислотой, тетра натриевая соль той, тринатриевая соль I) 1Ч-Фенил-2-(пропилтио)аденозин МС (FAB) 789, 787, 785, (М + Н+), 93 (100%) МС (FAB) 418 (М + Н+, 100%, 278 Пример 4 II) Моноангидрид ІЧ-фенил-2-(пропилтио)-5'Моноангидрид 2-(циклолтио)-М-5'-этил-5'адениловой кислоты с дихлорметиленбисфосфоадениловой кислоты с дихлорметиленбисфосфоновой кислотой, тетра натриевая соль новой кислотой, тетра натриевая соль 31 Р-ЯМР 5 (D2O) 8,98 (д, J = 18,3Гц), 2,70 (дд, a) 9-(2,3,5-Три-0-ацетпл-Р-Р-рибофуранозил)J = 18,3 и 30,6Гц), - 9,89 (д, J = 30,6Гц) 6-хлоро-2-(циклогексилтио)пурин f) Моноангидрид 1Ч-(2,2,2-трифторэтил-2К раствору 2-амино-9-(2,3,5-три-0-ацетил-Р-О(пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлормерибофуранозил)-6-хлоропурина (10,0г) в эцетотиленбисфосфоновой кислотой, тетра натриевая нитрле (200мл) добавляли дициклогексилдисульсоль фид (51,5г) и изоамилнитрит (16,96г) I) 1\Н2,2,2-Трифторэтил)-2Полученный раствор дегазировали азотом, а (пропилтио)аденозин затем нагревали при температуре 60°С в течение МС (FAB) 424 (М + Н+), 292 (100%) 16 часов После концентрировали раствора, остаII) Моноангидрид 1Ч-(2,2,2-трифторэтил)-2ток очищали (двуокись кремния, элюент этилце(пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлорметат / петролейный эфир, 1 1), и получали целетиленбисфосфоновой кислотой, тетра натриевая вое соединение, а именно, 9-(2,3,5-Три-0-ацетилсоль Р-О-рибофуранозил)-6-хлоро-2-І\І(циклогексилтио)пурин (3,88г) в виде оранжевой МС (FAB) 822, 820, 818 (М + Н+), 115 (100%) смолы д) Моноангидрид N-Сметоксикарбонилметил)2-(пропилтио)-5'-адениловой кислоты с дихлормеМС (EI) 528, 526 (М+), 43 (10%) тиленбисфосфоновой кислотой, тетра натриевая b) 2-(1Диклогексилтио)-М-этил-аденозин соль С использованием продукта стадии (а), было I) ІЧ-(Метоксикарбонилметил)-2получено целевое соединение, а именно, 2(циклогексилтио)-1\1-этил-аденозин, в соответствии (пропилтио)аденозин с методикой, описанной в Примере (1а) Анализ для C16H23N5O6S Вычислено С 46,48, Н 5,61, N 16,94, S 7,76 МС (FAB) 410 (М + Н+), 100%) c) Моноангидрид 2-(циклогексилтио)-М-этил-5'(%) адениловой кислоты с дихлорметиленбисфосфоНайдено С 46,44, Н 5,43, N 16,80, S 7,67 (%) новой кислотой, тетра натриевая соль II) Моноангидрид N-Сметоксикарбонилметил) 16 15 54366 Целевое соединение было подучено спососуснои кислоты, и полученный раствор концентрибом, описанным в Примере 2Ь), за исключением ровали В результате очистки (двуокись кремния, того что использовали продукт стадии в) элюент дихлорметан / метанол, 95 5) получали 31 Р-ЯМР 5 (D2O) 9,85 (д, J = 18,5Гц), 3,85 (дд, целевое соединение (1\1-этил-2-[(3,3,3J = 18,5Гц, J = 30,4Гц), - 9,07 (д, J = 30,4Гц) трифторопропил)тио]аденозин) в виде бесцветного твердого вещества (2,73г) Пример 5 + МС (FAB) 424 (М + Н , 100%) Моноангидрид М-этил-2-Г(3,3,3е) Моноангидрид М-этил-2-Г(3,3,3трифторпропил)тио!-5'-адениловой кислоты с дитрифторопропил)тио!-5'-адениловой кислоты с хлорометиленбисфосфоновой кислотой, тринатдихлорметиленбисфосфоновой кислотой, тринатриевая соль риевая соль а) 2-[(3,3,3-Трифторопропил)тио1аденозин Целевую соль получали способом, описанным Суспензию, состоящую из гидрида натрия в Примере 2Ь), используя продукт стадии (d) (60%, 1,453г) и аденозин-2-тионмоногидрата 31 (5,35г) в ДМФ (80мл), перемешивали в течение Р-ЯМР 5 (D2O) 8,39 (д, J = 18,0Гц), 2,34 (дд, часа ври комнатной температуре, а затем добавJ = 18,0Гц, J = 30,0Гц), - 9,90 (д, J = 30,0Гц) ляли 3-хлоро-1,1,1-трифторопропан (6,6мл) ПоПример 6 сле перемешивания в течение 5 дней, раствор Ниже следующие соединения были получены концентрировали, а образовавшийся остаток расспособом, описанным в Примере 2 пределяли между этилацетатом (250мл) и водой а) Моноангидрид 1Ч-(2,2,2-трифторэтил)-2(150мл) Органическую фазу осушали, а затем Г(3,3,3-трифторопропил)тио1-5'-адениловой кислоконцентрировали В результате очистки (S1O2, ты с дихлорметиленбисфосфоновой кислотой, элюент дихлорметан / метанол, 9 1) получали триаммониевая соль целевое соединение, а именно, 2-[(3,3,3I М-Аиетил-1\1-(2,2,2-трифторэтил)-2-Г(3,3,3трифторопропил)тио]аденозин, в виде бесцветнотрифторопропил)тио!аденозин-2',3',5-триацетат го твердого вещества (5,55г) МС (FAB) 646 (М + Н+) + МС (FAB) 396 (М + Н , 100%) II М-(2,2,2-трифторэтил)-2-Г(3,3,3трифторопропил)тио!аденозин в) ІЧ-Аиетил-2-Г(3,3,3трифторопропил)тио!аденозин-2'-, 3'-, 5'-триацетат MC(FAB) 478 (М + Н+), 345 (100%) Полученный продукт стадии (а) (5,28г) и безIII Моноангидрид 1Ч-(2,2,2-трифторэтил)-2водный ацетат натрия (0,723г) в уксусном ангидГ(3,3,3-трифторопропил)тио1-5'-адениловой кислориде (42мл) перемешивали в течение 6,5 часа при ты с дихлорметиленбисфосфоновой кислотой, температуре 80°С Этот раствор разводили водой триаммониевая соль 31 (100мл), перемешивали при комнатной темпераР-ЯМР 5 (D2O) 8,82 (д, J = 18,5Гц), 0,63 (дд, туре в течение 18 часов, а затем экстрагировали J = 18,9Гц, J = 28,9Гц), - 9,43 (д, J = 29,0Гц) дихлорметаном (4 х 200мл) Объединенные оргав) Моноангидрид М-[2-(метилтио)этил1-2нические экстракты промывали насыщенным расГ(3,3,3-трифторопропил)тио1-5'-адениловой кислотвором бикарбоната натрия (200мл), а затем выты с дихлорметиленбисфосфоновой кислотой, паривали, и образовавшийся остаток триаммониевая соль хроматографировали на двуокиси кремния (элюI М-Аиетил-1\1-Г2-(метилтио)этил1-2-Г(3,3,3ент диэтиловый эфир метанол, 97 3), в результрифторопропил)тио!аденозин-2',3',5-триацетат тате чего получали целевое соединение (NМС (FAB) 638 (М + Н+), 139 (100%) ацетил-2-[(3,3,3-трифторопропил)тио]-аденозинII 1Ч-Г2-(Метилтио)этил1-2-Г(3,3,32',3',5'-триацетат) в виде бесцветной пены (5,35г) трифторопропил)тио!аденозин МС (FAB) 564(М + Н+), 139 (100%) Аналіз для C16H22F3N5O4S2, (%) c) 1\1-Аиетил-1\1-этил-2-Г(3,3,3Вычислено С 40,90 Н 4,72, N 14,92, S 13,70, трифторопропил)тио!аденозин-2',3', 5' -триацетат Найдено С 40,70, Н 4,82, N 4,79, S 13,60 Полученный продукт стадии (Ь) (5,12г) в ДМФ III Моноангидрид М-[2-(метилтио)этил1-2(100мл) в течение 3 часов добавляли к суспензии Г(3,3,3-трифторопропил)тио1-5'-адениловой кислогидрида натрия (60%, 0,443г) в ДМФ (100мл), соты с дихлорметиленбисфосфоновой кислотой, держащей этилиодид (2,2мл) После перемешиватриаммониевая соль ния в течение 2 дней, раствор выпаривали, а осНеочищенный продукт очищали с помощью таток растворяли в этилацетате (300мл), и хроматографии (DEAE-Сефадекс, элюент, ОМ промывали водой (3x100мл) Органическую фазу, 0,6М раствор бикарбоната аммония), и получали концентрировали, а затем, остаток очищали (двуцелевую соль 31 окись кремния, элюент этилацетат циклогексан, Р-ЯМР 5 (D2O) 8,77 (д, J = 18,7Гц), 0,38 (дд, 1 1) и получали целевое соединение (N-ацетилJ = 18,9Гц, J = 27,4Гц), - 9,43 (д, J = 28,8Гц) |\|-этил-2-[(3,3,3-тоифторопропил)тио]аденозинПример 7 2',3',5'-триацетат) в виде желтой смолы (4,54г) Моноангидрид М-(2-метоксиэтил)-2-Г(3,3,3+ МС (FAB) 592 (М + Н ), 139 (100%) трифторопропил)тио!-5'-адениловой кислоты с d) М-Этил-2-Г(3,3,3дихлорметиленбисфосфоновой кислотой, тринаттрифторопропил)тио1аденозин риевая соль Полученный продукт стадии (с) (4,54г) в раса) М-(2'Метоксиэтил)-2-Г(3,3,3творе гидроксида натрия (0,1 М в метаноле, трифторопропил)тио!аденозин 155мл) нагревали с обратным холодильником в Раствор, содержащий целевое соединение течение 30 минут После охлаждения до комнатПримера (5Ь) (4,8г), 2-бромоэтилметиловый эфир ной температуры добавляли 0,89мл ледяной ук(1,2мл), и карбонат калия (1,77г) в сухом ДМФ 18 17 54366 (190мл), перемешивали при комнатной темперабоцитов после их PGb - ингибирования, в целях туре в течение 3 дней После добавления 2исследования агрегации тромбоцитов, осуществбромоэтилметилового эфира (1,2мл) и карбоната ляли не ранее, чем через 2 часа после последнего калия (1,77г) полученную смесь перемешивали в ресуспендирования Во всех исследованиях течение 24 часов при температуре 40°С Реакци430мкл - аликвоты суспензии тромбоцитов добавонную смесь фильтровали, после чего фильтрат ляли в кремниевые кюветы для агрегации, содерконцентрировали с получением маслообразного жащее СаСЬ - раствор (10мкл 45мМ раствора, вещества, которое распределяли между этилацеконечная концентрация 1мМ), и размешивали при татом (200мл) и водой (200мл) Органическую фа900об/мин в агрегометре РАР4 (Biodata)/ Затем зу осушали, а затем концентрировали Получендобавляли фибриноген человека (sigma, F 4883) и ную смолу растворяли в 0,1 М растворе метоксида 8-сульфофенилтеофиллин (8-SPT, для блокиронатрия в метаноле (180мл), после чего нагревали вания любой Рі-агонистической активности сос обратным холодильником в течение 45 минут единений) до конечной концентрации 0,2мг/мл (10мкл 10мг/мл раствора свертываемого белка в Эту смесь нейтрализовали с использованием 4 физиологическом растворе) и 3 х 10 М (Юмкл уксусной кислоты и концентрировали, а остаток 5,6мг/мл раствора в 6% глюкозе), соответственно очищали (S1O2, элюент дихлорометан / метанол, После этого начинали наблюдение за агрегацией, 92 8), и получали целевое соединение (N-(2протокол метоксиэтил)-2-[(3,3,3трифторпропил)тио]аденозин) в виде бесцветного a) Выбор субмаксимальной концентрации АДФ твердого вещества (3,41 г) Концентрацию АДФ, продуцирующую непосредственно субмаксимальний ответ, выбирали МС (FAB) 454 (М + Н+, 100%) путем построения кривой концентрация / ответ в Ь) Моноангидрид М-(2-метоксиэтил)-2-Г(3,3,3диапазоне 10 - ЗООмкМв Для этого соответствуютрифторопропил)тио!-5'-адениловой кислоты с щий раствор АДФ добавляли в кювету в объеме дихлорметиленбисфосфоновой кислотой, тринатЮмкл через 20 минут после начала наблюдения риевая соль за агрегацией Ответную реакцию агрегации оцеЦелевую соль получали способом, описанным нивали исходя из максимальной скорости изменев Примере 2(Ь), используя соединение стадии (а) 31 ния прозрачности, измеряемой с помощью счетчиР-ЯМР 5 (D2O) 9,88 (д, J = 19,0Гц), 3,80 (дд, ка со скошенным слоем Субмаксимальную J = 19,0Гц, J = 31,0Гц), -9,12 (д, J = 31,0Гц) концентрацию АДФ, выбранную на этой стадии Пример X протокола, использовали для последующей оценКоличественная оценка агонистичеокой / антаки антагонистической активности соединений Все гониотичеокой активности по отношению к Р?тизмерения, проводимые для тромбоцитов от кажрецептору с использованием промытых тромбоцидого донора, осуществляли дважды тов человека b) Оценка агонистической / антагонистической Венозную кровь человека (100мл) разделяли активности на три равные части и помещали в 3 пробирки, Через 5 минут после начала наблюдения каждая из которых содержала 3,2% тринатрийцитза агрегацией, соответствующий раствор испырата (4мл) в качестве антикоагулянта Затем эти туемого соединения или физиологический раствор пробирки центрифугировали в течение 15 минут добавляли в кювету для агрегации в объеме при 240д в результате чего получали обогащенЗОмкл до получения конечной концентрации ную тромбоцитами плазму (PSP), к которой до0,10,100 или ЮООмкМ Агрегация на этой стадии бавляли ЗООнг/ мл 1 простациклина (PGb, Змкл указывала на агонистическую активность, и если мл 1 PRP с 1 / 10 -разведением в физиологичеока имела место, то ее оценку проводили путем ском растворе, полученным от маточного раствосравнения с контрольными АДФ-ответами, полура 1мг мл 1 в этаноле) для стабилизации тромбоченными в стадии (а) цитов в процессе промывки PRP - плазму, не содержащую эритроцитов, получали путем ценЕсли агрегация не наблюдалась, то через 15 трифугирования при 125д в течение 10 минут, с минут после испытуемого соединения добавляли последующим центрифугированием при 640д в предварительно выбранную субмаксимальную течение 15 минут Супернатант отбрасывали, а концентрацию АДФ в объеме Юмкл Антагонистиосадок тромбоцитов ресуспендировали в модическую активность оценивали как % ингибировафицированном, не содержащем кальция растворе ния контрольного ВДФ-ответа, в результате чего Тироде (CFT) [(10мл, состав 137мМ (8г/л) NaCI, получали приблизительные значения ICso Соеди11,9мМ (1г/л) NaHCO3, 0,38мМ (0,06г/л) NaH2PO4, нения, которые полностью ингибировали АДФ2,86мМ (1мл 20% раст/л) KCI, 1,05мМ (1мл 10% ответ при начальных концентрациях, испытывали раств/л) МдСЬ, 5,55мМ (1г/л) декстрозы], который снова, но уже при более низком диапазоне коннасыщали газом 95% Ог / 5% СОг, и поддерживацентраций Соединения с IC50 < 10 8 М также подли при 37°С После добавления еще 300нг/мл вергали повторному испытанию в отсутствии 8PGb, суспензию объединяли и центрифугировали SPT для подтверждения отсутствия какой-либо при 640д в течение 15 минут Затем супернатант агонистической активности по отношению к Pi, a отбрасывали, и тромбоциты ресуспендировали в также с 2-минутным (вместо 15-минутного) инку10мл CFT с последующим добавлением CFT до бированием для того, чтобы проверить зависит ли конечной концентрации тромбоцитов 2 х 105/мкл ингибирование от времени Полученную суспензию хранили в 60-мл шприце Результаты лри 3°С, с выпущенные воздухом Характерные результаты, полученные для соединений формулы I, представлены в Таблице 1 Восстановление нормальной функции тром 19 Таблица 1 Пример № 1 5 6а 20 54366 как отрицательные логарифмы антагонистической активности (pICso) р1С50 9,04 ± 0 , 1 5 8,68 ± 0,33 9,14 ± 0,11 Пример У Измерение гипотетической активности с использованием восприимчивых мышей Для эксперимента использовали мышей СР / СД-І (25 - 45г) Этих мышей взвешивали и измеряли температуру ректально с использованием терморезисторного зонда Затем каждое животное помещали в камеру, имеющую форму усеченного конуса, и хвостовую вену канюлировали с использованием иглы для подкожных инъекций (27G), соединенной с полиэтиленовой канюлей и закрепленной клейкой лентой в нужном положении Ж и вотных обрабатывали дозой испытуемого соединения, вводимой в виде 10-минутного внутривенного вливания со скоростью 0,5мл/кг/мин Ректальные измерения температуры проводили через 1 / 3, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6 и 24 часа после завершения вливания Затем строили график зависимости среднего максимального снижения ректальной температуры от дозы вводимого соединения, и определяли дозу, требуемую для понижения температуры на 5° Підписано до друку 03 04 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24