Спосіб знешкодження ракових клітин

Реферат: Спосіб знешкодження ракових клітин включає застосування парвовірусу, такого як аденоасоційований вірус типу 2 (AAV2), проведення знешкодження ракових клітин пацієнта шляхом вибіркового індукування апоптозу ракових клітин за рахунок безпосереднього введення раковим клітинам пацієнта аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) або вектора аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) одночасно з допоміжним вірусом одним з групи вірусів таких як аденовірус, вірус папіломи людини (ВПЛ), вірус герпесу та вірус коров'ячої віспи. Знешкодження ракових клітин пацієнта виконують шляхом застосування фармацевтичної композиції на основі дикого типу аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) і переносника або одного чи декількох білкових продуктів аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2), що викликають апоптоз ракових клітин пацієнта. Проводять профілактичне лікування пацієнта. UA 72689 U (12) UA 72689 U UA 72689 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Спосіб належить до біотехнологій і медицини та може бути використаний для лікування ракових захворювань у пацієнтів. Відомі звичайні методи лікування раку, що включають атаки ракових клітин смертельними хімікатами, руйнівними випромінюваннями і небезпечною хірургією [1]. Недоліком цих методів є те, що вони без розбору знищують як хворі, так і здорові клітини. Навіть коли пацієнти здатні витримати такі суворі методи лікування, боротьба за їх здоров'я часто стає безперервною, оскільки в їх ослаблених тілах розвиваються нові хвороби або пухлини. До того ж традиційні методи лікування раку нічого не роблять безпосередньо, щоб запобігти метастазам або розповсюдженню ракових клітин з однієї частини тіла в іншу [1]. Також відомий спосіб фотодинамічної терапії злоякісних новоутворень, який включає в себе введення фотосенсибілізатора перед наступним сеансом опромінювання терапевтичним лазерним світлом, при цьому фотосенсибілізатор вводять безпосередньо в день опромінювання, а доза фотосенсибілізатора при першому введенні складає 0,1-0,5 мг/кг ваги тіла і при наступних введеннях від 0,05-0,25 мг/кг ваги тіла [2]. Перевагою цього способу [2] є достатньо висока ефективність руйнування ракових клітин в пухлинах, а також його застосування сьогодні на стадіях клінічних випробувань. Проте недоліком способу [2] є те, що лазерне освітлення не може проникати на великі і достатні глибини в ракових пухлинах пацієнта, що обмежує зону знешкодження ракових клітин. Крім того, для лазерної дії на пухлини необхідний до них доступ, який часто важко забезпечити у випадку розташування ракової пухлини всередині організму пацієнта. Також після лазерного опромінювання пацієнта йому потрібно захищати свої очі певний період часу від сонячного світла. Найбільш близьким технічним рішенням до корисної моделі за технічною суттю є спосіб знешкодження ракових клітин [3], який ґрунтується на застосуванні парвовіруса, такого як аденоасоційований вірус типу 2 (AAV2) ефективної кількості, при цьому створюють вибірково опосередковано апоптози в ракових клітинах і їх попередників, залишаючи здорові клітини не пошкодженими. Спосіб виконують при відсутності будь-яких терапевтичних протиракових препаратів і його застосовують до ракових клітин з групи, що складається з клітин раку шийки матки, плоско-клітинного раку, раку молочної залози або меланоми. Спосіб забезпечує введення клітинам пацієнту парвовіруса в присутності допоміжного вірусу, який вибирають з групи, що складається з вірусу папіломи людини (ВПЛ), аденовірусу, вірусу коров'ячої віспи. Спосіб також виконують шляхом введення клітинам пацієнта ефективної кількості вектора аденоасоційованого вірусу AAV2 або продукції з нього, так що вказаний вектор або його продукти будуть вибірково індукувати апоптоз пухлинних клітин при відсутності будь-якого гена. В способі також може застосовуватися для знешкодження ракових клітин фармацевтична композиція, яка включає дикий тип вірусу AAV2 і його переносник. Крім того, в способі використовують фармацевтичну композицію для знешкодження пухлинних і передпухлинних клітин, яка складається з одного або декількох білкових продуктів аденоасоційованого вірусу AAV2, що викликають апоптоз вказаних клітин, при цьому білковий продукт є білковою оболонкою вірусу (капсидним білком) або Rep білком. Також спосіб знешкодження пухлинних клітин включає введення вказаним клітинам агента (препарату), який стимулює або уповільнює клітинний каскад реакцій, що є цілями аденоасоційованого вірусу AAV2 підчас онкологічного придушення пухлинних клітин. Перевагою цього способу є застосування аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2), який надає можливість легко маніпулювати ним генетично, мати гарні знання функцій вірусного білка, а головне цей вірус є одним з небагатьох вірусів, які можуть викликати тільки відносно м'якої форми побічні ефекти захворювання. Недоліком способу є те, що він забезпечує можливість лікувати з високою ефективністю різні види ракових захворювань обмеженої кількості, зокрема раку шийки матки, плоскоклітинному раку і раку молочної залози (при лабораторних дослідженнях досягається 100 % ефективність), в той же час лабораторні дослідження продемонстрували гіршу ефективність лікування цим методом раку передміхурової залози і меланоми (відповідно 50 % і 25 % ефективності знешкодження ракових клітин) [3]. Звичайно при клінічних випробуваннях слід очікувати зниження ефективності лікування ракових захворювань, крім того в способі існує проблема тривалості дії заходів лікування захворювань, оскільки не можна вважати, що цю проблему повністю вирішено за рахунок допоміжних вірусів. Також в способі не виключена повністю проблема рецидиву відновлення ракової хвороби. В основу корисної моделі поставлено задачу створення високоефективного способу знешкодження ракових клітин, який повинен забезпечити як підвищення ефективності лікування 1 UA 72689 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ракових захворювань, так і зменшення шкідливого впливу на організм пацієнта, який може виникнути при лікуванні ракових захворювань. Технічний результат корисної моделі полягає в підвищенні ефективності знешкодження ракових клітин у хворого пацієнта шляхом як збільшення рівня знешкодження ракових клітин одного виду раку, так і розширення кола видів ракових клітин, які будуть пригніченими або знешкодженими в процесі лікування. Також запропонований спосіб дозволить зменшити шкідливий вплив на організм пацієнта, який може виникнути при лікуванні ракових захворювань і уникнути рецидивів повторення ракових захворювань у пацієнта у майбутньому. Поставлена задача вирішується тим, що в способі знешкодження ракових клітин, який ґрунтується на застосуванні парвовірусу, такого як аденоасоційований вірус типу 2 (AAV2), проводять знешкодження ракових клітин пацієнта шляхом вибіркового індукування апоптозу ракових клітин за рахунок безпосереднього введення раковим клітинам пацієнта аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) або вектора аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) одночасно з допоміжним вірусом одним з групи вірусів таких як аденовірус, вірус папіломи людини (ВПЛ), вірус герпесу та вірус коров'ячої віспи, крім того знешкодження ракових клітин пацієнта виконують шляхом застосування фармацевтичної композиції на основі дикого типу аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) і переносника або одного чи декількох білкових продуктів аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2), що викликають апоптоз ракових клітин пацієнта, згідно з корисною моделлю, після завершення апоптозу ракових клітин, що викликані застосуванням аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) чи його продуктів, проводять профілактичне лікування пацієнта. Крім того, для досягнення поставленої задачі корисної моделі профілактичне лікування пацієнта проводять шляхом застосування штаму вірусу. Також для досягнення поставленої задачі корисної моделі тип штаму вірусу для профілактичного лікування пацієнта установлюють шляхом визначення виду ракового захворювання у пацієнта, відбирання ракових клітин у хворого пацієнта для лабораторного аналізу та підбирання штаму при лабораторному дослідженні на підставі отриманої оцінки ефективності знешкодження ракових клітин в живильному середовищі. Також для досягнення поставленої задачі корисної моделі для профілактичного лікування застосовують штам вірусу типу Rigvir - ЕСНО-7 virus strain. Також для досягнення поставленої задачі корисної моделі для профілактичного лікування застосовують лікарський засіб з вітаміну С, L-лізину, L-проліну та епігалокатехіну галату (ЕГКГ). Порівняно з найближчим аналогом [3] запропонований згідно з корисною моделлю спосіб знешкодження ракових клітин відрізняється такими ознаками: - проведенням профілактичного лікування пацієнта після завершення апоптозу ракових клітин, що викликаний застосуванням аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2); - тип штаму вірусу для профілактичного лікування пацієнта установлюють шляхом визначення виду ракового захворювання у пацієнта, відбирання ракових клітин у хворого пацієнта для лабораторного аналізу та підбирання штаму при лабораторному дослідженні на підставі отриманої оцінки ефективності знешкодження ракових клітин в живильному середовищі; - для профілактичного лікування застосовують штам вірусу типу Rigvir - ЕСНО-7 virus strain; - для профілактичного лікування застосовують лікарський засіб з вітаміну С, L-лізину, Lпроліну та епігалокатехіну галату (ЕГКГ). Завдяки тому, що в запропонованому згідно з корисною моделлю способі проводиться профілактичне лікування пацієнта ліквідовується можливість виникнення повторного рецидиву хвороби, зменшується шкідлива дія на організм пацієнта процесу лікування та забезпечується можливість збільшення ефективності лікування ракових захворювань завдяки можливості виліковування розширеного кола видів ракових захворювань та додаткового знешкодження пригнічених ракових клітин пацієнта при лікуванні. Відповідно до корисної моделі спосіб знешкодження ракових клітин реалізують наступним чином. Аденоасоційований вірус типу 2 (AAV2) отримують природнім шляхом або при культивуванні з використанням ультрафільтрації [4]. Після цього проводять знешкодження ракових клітин шляхом вибіркового індукування апоптозу ракових клітин за рахунок безпосереднього введення раковим клітинам пацієнта аденоасоційованого вірусу типу 2 (AVV2) або вектора аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) одночасно з допоміжним вірусом одним з групи вірусів таких як аденовірус, вірус папіломи людини (ВПЛ), вірус герпесу та вірусу коров'ячої віспи. Реалізація способу з використанням допоміжного вірусу при введенні раковим клітинам пацієнта аденоасоційованого вірусу типу 2 (AVV2) є кращим варіантом, оскільки 2 UA 72689 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 створений вірусний вектор може вбудовуватися в геном ракової клітини і забезпечувати реплікацію новоствореного гену, яку не можливо виконати без допоміжного вірусу. Аденоасоційований вірус типу 2 (AAV2) є пригнічуваним вірусом для хворих клітин і не викликає пухлинні захворювання, а порушує регулювання клітинного циклу інфікованих ракових клітин і знешкоджує їх. Введення аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) та його білкових продуктів або вірусних частинок до ракових клітин приводить до їх знешкодження, тоді як введення до неракових клітин аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) та його білкових продуктів не виробляє таких наслідків. Крім того, корисна модель включає необхідні для знешкодження ракових клітин ракові фармацевтичні композиції, які включають аденоасоційований вірус типу 2 (AAV2) і його частинки або вектор аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2), в якому сам аденоасоційований вірус типу 2 (AAV2) є терапевтичним засобом. Далі композиція включає генні продукти аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2): REP білки, геномні послідовності, капсиди білків або інші протоколи лікування, які активують одні і ті ж сигнальні шляхи, при цьому вірус активується при зв'язуванні з рецепторами клітинної поверхні. Білки, які вироблені аденоасоційованими вірусами типу 2 (AAV2), зокрема REP білки, нуклеотидна U-подібна кінцівка і капсиди білків, що також виробляються аденоасоційованим вірусом типу 2 (AAV2) викликають бажаний ефект [4]. Заключним етапом лікування ракової хвороби відповідно до корисної моделі є профілактичне лікування пацієнта, яке включає застосування штаму онкотропного і онколітичного вірусу [5] або застосування біологічних препаратів [1] для додаткової дії на пригнічені, але не знешкоджені повністю ракові клітини в організмі пацієнта. Завдяки профілактичному етапу лікування ракового захворювання пацієнта після закінчення основного етапу лікування ракового захворювання з допомогою аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) та його компонентів на клітинному рівні забезпечується підвищення ефективності лікування ракових захворювань, зменшується можливість повторного виникнення рецидиву ракового захворювання. В способі можливе двояке застосування штаму онколітичного вірусу. В першому випадку проводять визначення штаму вірусу за наступною процедурою. Тип штаму вірусу для профілактичного лікування пацієнта установлюють шляхом визначення виду ракового захворювання у пацієнта, відбирання ракових клітин у хворого пацієнта для лабораторного аналізу та підбирання штаму при лабораторному дослідженні на підставі отриманої оцінки ефективності знешкодження ракових клітин в живильному середовищі. В другому випадку використовують апробований штам вірусу типу Rigvir - ЕСНО-7 virus strain. Штам вірусу Rigvir ЕСНО-7 virus strain, код ATX: L03AX, зареєстрований в Латвійському державному агентстві ліків: 03.07.2009, номер реєстрації 04-0229. Штам вірусу належить до групи лікувальних засобів імунних модуляторів, показаний для лікування різних ракових захворювань [5]. В способі також для профілактичного лікування застосовують лікарський засіб з вітаміну С, L-лізину, L-проліну та епігалокатехіну галату (ЕГКГ). Такий лікарський засіб ефективний проти раку товстої кишки, раку молочної залози і меланоми [1]. Для лікування на першому етапі пацієнту вводять вітамін С, а на другому етапі вводять пацієнту L-лізин, L-пролін та епігалокатехін галату (ЕГКГ). Застосування такої комбінації лікувальних засобів пригнічує ракові клітини метастазів [1]. Таким чином, запропонована в способі послідовність лікувальних дій (етапів) підвищує ефективність лікування ракових захворювань завдяки застосуванню комбінованого методу лікування. Таке лікування ракових захворювань практично не проявляє шкідливих дій на організм пацієнта, на відміну від відомих комбінаційних методів лікування ракових захворювань, які на допомогу підключають традиційні методи лікування ракових захворювань, радіаційну медицину та хіміотерапію [6]. Детальна реалізація способу та підтвердження його придатності для лікування ракових хвороб буде наведена далі. Спосіб за яким проводять введення аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2), а також розроблення переносника або транспортного засобу буде залежати від місцезнаходження та типу пухлини. Можливий широкий вибір способів введення аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2), так наприклад, для твердих новоутворень доступний вірус може бути введений у вигляді ін'єкції безпосередньо в пухлину. Для гемопоетичного новоутворення доцільно вірус AAV2 ввести внутрішньосудинно. Для новоутворень, які не є легкодоступними органами, такими як метастази або пухлини мозку, вірус AAV2 вводять таким чином, щоб його можливо транспортувати системно і тим самим досягти новоутворення (наприклад інтратекально, внутрішньосудинно чи внутрішньом'язово). Крім того, вірус AAV2 може бути введено безпосередньо в одне суцільне новоутворення, звідки він транспортується системно через тіло до метастазів. Вірус можливо вводити підшкірно, внутрішньочеревно, місцево (наприклад при 3 UA 72689 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 меланомі), орально (наприклад при оральній або стравохідній пухлині), ректально (наприклад при біля ректальному новоутворенні), вагінально (наприклад для новоутворення шийки матки чи піхви), аерозольно або у вигляді інгаляцій, наприклад, для новоутворень в легенях. Вірус може бути введено системно для ссавців, які мають імунодефіцит або які не утворили імунітет до вірусу. В таких випадках віруси використовують для введення системно, тобто шляхом внутрішньовенної ін'єкції, що дозволить їм розповсюджуватися до розташування пухлинних клітин в організмі пацієнта і забезпечувати лізис ракових клітин. Процес введення генних конструкцій відбувається таким чином. Вірусні вектори, подібно їх вірусам-прабатькам, розповсюджуються в організмі і проникають в клітини. Такі конструкції вводяться внутрішньосудинно, внутрішньочеревно, підшкірно або внутрішньом'язово. В деяких випадках додаткові способи підвищення ефективності трансфекції, які ґрунтуються на використанні ліпосом, катіонних ліпідів з утворенням ДНК-ліпідних комплексів або комплексів з полікатіонами (наприклад з полілізином). В способі доцільно застосовувати пряму ін'єкцію генетичного матеріалу (векторів), оскільки він є самим простим постачанням трансгена (введення гена) в клітини in vivo, при якому ДНК вводиться безпосередньо в тканини шляхом ін'єкції. Область застосування такого методу обмежується такими тканинами як шкіра, тимус і поперечно-смугастими м'язами, деякими так званими солідними пухлинами, при цьому достатньо тривалою експресія трансгена спостерігається переважно в м'язових тканинах. Ефективність такої трансфекції звичайно низька (менше 1 %), але є цілком достатньою для досягнення результату. Введення генетичного матеріалу всередину кров'яних судин, що живлять трансфекційний орган має застосування в першу чергу при лікуванні печінки. Аерозольне введення генетичного матеріалу в дихальні шляхи використовується при лікуванні легень. Генна терапія ex vivo, тобто генетичне маніпулювання з клітинами, які виділені з організму, і їх введення назад в організм хворого виконується за таким алгоритмом: витягнення клітин з організму; культивування і генетична трансформація; відбір трансформованих клітинних клонів і трансплантація генетично змінених клітин. Фармацевтичні композиції, які включають один або декілька активних компонентів вірусів AAV2, зокрема активні білки, шпильки, капсиди білків чи будь-який компонент, який зберігає онколітичні властивості AAV2 вірусів, що пов'язані з фармацевтичними прийнятними носіями або наповнювачами. При створенні композиції цієї корисної моделі активний інгредієнт/вірус звичайно змішують з наповнювачем або укладають в такий носій як контейнери або капсули. Коли фармацевтичний прийнятний наповнювач слугує розріджувачем він може бути твердим, напівтвердим або рідким матеріалом, який виступає як транспортний засіб, переносник чи середовищем для активного інгредієнта. Таким чином, композиції можуть бути у вигляді таблеток, пілюль, порошків, пакетиків, еліксирів, аерозолів (як в твердому, так і в рідкому середовищі), мазей, наприклад, які вміщують до 10 % на вагу активного з'єднання, м'яких і твердих желатинових капсул, стерильних розчинів для ін'єкцій і стерильних впакованих порошків. Деякими прикладами відповідних наповнювачів є лактоза, глюкоза, сахароза, сорбіт, маніт, крохмаль, камедь акації, фосфат кальцію, альгінат, трагакант, желатин, силікат кальцію, мікроскопічна целюлоза, стерильна вода, сироп, метилцелюлоза та інші композиції можуть додатково включати мастильні речовини, такі як тальк, стеарат магнію і мінеральне масло, зволожувальні агенти, консерванти, підсолоджувальні речовини і ароматизатори. Композиції згідно з корисною моделлю можуть бути сформовані таким чином, щоб забезпечити швидке, стійке чи уповільнене звільнення активного інгредієнта після введення пацієнту. Для виготовлення твердих композицій, таких як таблетки, основний активний інгредієнт/вірус змішують з фармацевтичним наповнювачем для формування складу твердого попереднього формування вміщуваних компонентів для отримання однорідної суміші. Таблетки і пілюлі цієї корисної моделі можуть бути покриті або іншим чином приготовлені за рецептом лікаря для забезпечення лікарської форми і давати переваги пролонгованої дії. Механізм застосування для лікування ракових захворювань аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) полягає в тому, що цей вірус є непатогенним для людини і разом з тим він здатен знешкоджувати різні види ракових клітин при його введенні людині. Раніше установлено, що аденоасоційовані віруси здатні забезпечити ефективний лікувальний процес тільки при допомозі неродинних вірусів-помічників, найкращими з запропонованих в способі є аденовірус, вірус папіломи людини (ВПЛ), вірус герпесу та вірус коров'ячої віспи. Перевага для використання з вищеприведених помічників аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) надається аденовірусу (особливо типу 5) з-за його високої ефективності, а також виключення можливості утворення при генній терапії вірусів-мутантів, тоді як допоміжні віруси папіломи людини (ВПЛ), 4 UA 72689 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 герпесу та коров'ячої віспи стовідсотково не виключать такої можливості. Проте вони включені до групи помічників аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2), оскільки дозволяють розширити коло можливого знешкодження різних видів ракових клітин цим вірусом з такими допоміжними вірусами. Аденоасоційовані віруси здатні заражати клітини при допомозі неродинних вірусівпомічників (звичайно аденовірусів). Вони вбудовуються в геном і залишаються там як провірус до того часу, поки не з'явиться вірус-помічник. Як тільки це відбулося може розпочатися транскрипція за участю генів, які запозичені у вірусу-помічника. Ці віруси не вимагають реплікації в клітині мішені для її інфікування і здатні інфікувати велику кількість культур клітин людини. Проте вектор цього типу досить важко продукувати з високими титрами. Доказано, що вони можуть експресувати трансгени до 3 місяців. Продемонстрована також здатність аденоасоційованих вірусних векторів гарно реплікуватися в клітинах гліоми. Звідси можна припустити, що ці вектори можуть бути корисними для використання трансгенів, що мають відношення до центральної нервової системи (ЦНС). Аденовірусні вектори, що використовуються для генної терапії, модифікуються шляхом ділення різних компонентів вірусного геному, в наслідок чого створюються проміжки для вставлення сторонніх генів, і вірус стає нездатним до реплікації при укорінюванні до господаря. При використанні з самими різними типами клітин ці вектори мають високу ефективністю трансдукції. Вони можуть бути приготовленими з високими титрами і не включати ДНК в геном клітини-господаря. Проте їх експресія часто знижується вже через два тижні і стає зовсім незначною через 4 тижні, можливо, внаслідок індукування імунітету на вірусний чи трансгенний білок. Зовсім недавно з'явилися рекомбінаційні аденовіруси, які притупляють імунну реакцію господаря, що дозволяє експресувати гени протягом більш тривалого часу. Деякі з новітніх аденовірусних векторів включають дуже великі трансгени. Аденоасоційований вірус дикого типу має деякі переваги для генної терапії. Одною з основних переваг є те, що цей вірус не є патогенним. Аденоасоційований вірус може інфікувати неподільні клітини і може вбудовуватися в геном господаря на специфічних ділянках дев'ятнадцятої хромосоми. Така особливість робить аденоасоційований вірус більш передбачуваним, ніж ретровіруси. Ретровіруси є потенційно небезпечними як мутагени, оскільки вони вбудовуються в геном господаря випадковим чином, що може призвести до виникнення ракових пухлин. Геном аденоасоційованого вірусу звичайно вбудовується за специфічним сайтом, а випадкові вбудовування відбуваються з незначною частотою. При створенні векторів для генної терапії на основі аденоасоційованих вірусів з ДНК вірусу видаляють гени rep і cap. Необхідний ген разом з промотором вбудовують між інвертованими кінцевими повторами (ITR), в наслідок чого в ядрі після синтезу клітинною ДНК-полімеразою другого ланцюгу ДНК утворюються конкатемери. Вектори для генної терапії на основі аденоасоційованих вірусів утворюють епісомні конкатемери в ядрі клітини-господаря. В неподільних клітинах ці конкатемери залишаються інактивними, в подільних клітинах ДНК аденоасоційованого вірусу втрачається при діленні клітини, оскільки епісомальна ДНК не реплікується при реплікації ДНК клітини-господаря. Аденоасоційований вірус також має дуже низьку імуногенність, яка напевно обмежена низькою ефективністю утворення нейтралізуючих антитіл, в той же час для останніх чітко не показана цитотоксичність. Описані особливості, а також можливість заражати неподільні клітини, обумовлює переваги аденоасоційованого вірусу над аденовірусами для генної терапії. Використання аденоасоційованого вірусу має також деякі недоліки. Ємність геному вірусу, яка доступна для клонування терапевтичних генів, складає біля 4800 пар нуклеотидів. Таким чином, цей вектор не підходить для клонування великих генів. Інвертовані кінцеві повтори (ITR) геномів можуть гібридизуватися і утворювати конкатемери голова-хвіст і практично подвоювати ємність вектора. Інфекція вірусом дикого типу часто викликає активізацію гуморального імунітету. Активність нейтралізуючих антитіл в деяких випадках знижує застосовність серотипу AAV2. AAV2 може проникати до мозку і є суворо специфічним для нейронів. Аденоасоційований вірус не здатний реплікуватися до клітин, які не заражені аденовірусами. Ця особливість утворювати вірусні частинки свідчить про те, що аденоасоційований вірус походить від аденовірусів. Показано, що реплікація ДНК аденоасоційованого вірусу полегшується за наявності деяких білків аденовірусів або генотоксичних агентів, таких як ультрафіолетове опромінювання. Оскільки аденоасоційований вірус типу 2 (AAV2) не у всіх випадках може самостійно справитися з деякими типами ракових захворювань, тому є необхідність комбінувати різні віруси або додаткові методи для лікування ракових захворювань. В першу чергу для профілактичного лікування доцільно застосовувати штами вірусів або додаткові методи, які забезпечуватимуть безпечне і ефективне лікування ракових захворювань. При цьому тип штаму вірусу для 5 UA 72689 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 профілактичного лікування пацієнта установлюють шляхом визначення виду ракового захворювання у пацієнта і проводять відбирання ракових клітин у хворого пацієнта для лабораторного аналізу та підбирання штаму при лабораторних дослідженнях на підставі отриманої оцінки ефективності знешкодження ракових клітин в живильному середовищі. Такий варіант вибору штаму вірусу є безпечним для клієнта, дозволяє більш широкий вибір штаму вірусу і значно ретельніше підібрати штам вірусу за параметрами і характеристиками, необхідними для знешкодження необхідного типу ракових клітин. На підставі наведеного вище в способі є доцільність застосування для профілактичного лікування штаму вірусу типу Rigvir-ECHO-7 virus strain, код - ATX: L03AX, який зареєстрований в Латвійському державному агентстві ліків від 03.07.2009, номер реєстрації: 04-0229. Rigvir містить в собі живий непатогенний РНК вірус типу ентеровірусу, який генетично не модифікований, не вміщує наркотичних або психотропних речовин, не розмножується в органах, тканинах і крові людини та не виділяється в навколишнє середовище. Rigvir використовується в онкології для профілактики вторинного імунодефіциту. Його імунний модулятор нормалізує і активізує лімфатичні вузли, лімфоїдні тканини та імунні клітини. Структурно-функціональна побудова Rigvir дозволяє вибірково діяти на клітини чутливих пухлин, викликає специфічні імунні реакції проти себе, активізує клітини імунної системи. Активним компонентом Rigvir є ентеровірус групи ECHO, який є не патогенним для людини і не викликає імунні супресії. Безпосередня протипухлинна дія Rigvir зв'язана з онкотропізмом і онколізом. Цитолітична дія препарату є вибіркова і розповсюджується на злоякісні пухлини, не зачіпаючи нормальні клітини тканин. До того ж на поверхні не лізованих злоякісних клітин Rigvir індукує експресію пухлино-асоційованих клітин антигенів диференціації і пригнічує експресію антигенів групи MAGE, пресуючи зростання меланоми. Змінені поверхневі структури злоякісних клітин перетворюються в мішень для цитотоксичних механізмів імунної системи. Імуномоделююча дія Rigvir пов'язана з активацією імунних клітин лімфатичних вузлів і лімфоїдних тканин. Викликаючи проти себе імунну реакцію, Rigvir стимулює первинний і вторинний імуногенез і знімає викликане пухлиною блокування локального імунітету. В наслідок активації імунних реакцій проти пухлино-асоційованих антигенів реалізується апоптоз пухлинних клітин. Rigvir вводиться внутрішньо-м'язово з використанням ін'єкцій. Зберігати Rigvir треба при температурі - 20°±2 °C. Умови транспортування забезпечуються в замороженому вигляді. Rigvir доцільно застосовувати для лікування меланоми, локальної терапії шкірних і підшкірних метастазів; для профілактики рецидивів в метастазів після радикальної операції; раку шлунку, прямої і товстої кишки; раку підшлункової залози; раку нирки; раку сечового міхура; раку простати; різних видів саркоми. Згідно з способом для підвищення його ефективності також проводять профілактичне лікування шляхом застосування лікарського засобу з вітаміну С, L-лізину, L-проліну та епігалокатехіну галату (ЕГКГ). Відомо, що ракові клітини розвиваються в організмі в результаті пошкодження клітинної ДНК, яка руйнує механізм контролю клітинної реплікації. Такі аномальні клітини постійно створюються в тілі пацієнта протягом життя, але тіло має різні засоби щоб знищити ці клітини. На жаль аномальні клітини іноді уникають знищення і починають швидко розмножуватися й рости в пухлині. Пухлина, що міститься в одному місці тіла, рідко ставить під загрозу життя людини. Для полегшення її вторгнення в органи людини ракові клітини виділяють ферменти, які перетравлюють навколишню сполучну тканину. Розпад сполучної тканини дозволяє раковим клітинам поширюватися і вторгатися в інші органи. Останні дослідження підтверджують, що такі живильні речовини будуть ефективними інгібіторами вторгнення різних видів ракових клітин через колаген та інші сполучні компоненти тканин. Епігалокатехін галату (ЕГКГ) є важливою поліфенольною сполукою зеленого чаю. Поліфеноли зеленого чаю, такі як епігалокатехін галату (ЕГКГ), мають протимутагенні і протипухлинні властивості. Крім того, ЕГКГ є потужним антиоксидантом, який здатний нейтралізувати вільні радикали і запобігти пошкодженням клітин. ЕГКГ також стимулює детоксифікаційні системи на основі селективної індукції і модифікації фази І і фази II метаболічних ферментів. Вітамін С в його ліпідній розчинній формі, як було показано, є ефективний в усуненні аномальних клітин в тілі, одночасно з цим захищає здорові клітини. L-лізин і L-пролін є природними амінокислотами, які є будівельними блоками колагенових еластинових волокон. Крім того, L-лізин перешкоджає травленню колагену, блокуючи сайти, які надають ферменти, роблячи з цією живильною речовиною вирішальну роль у запобіганні деградації сполучної 6 UA 72689 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 тканини. Хоча вони мають важливе значення для життя, вітамін С і L-лізин не виробляються в організмі людини. Здоров'я сполучної тканини залежить від оптимального щоденного споживання цих двох ключових поживних речовин. Підтвердження придатності способу для лікування і профілактики ракових захворювань підтверджується лабораторними дослідженнями. Лабораторні дослідження застосування аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) та його продуктів продемонстрували загибель шляхом апоптозу клітин шийки матки раку протягом приблизно 6 днів після інфекції вірусом AAV2. Подальші дослідження підтвердили, що вірус AAV2 може викликати загибель ракових клітин шийки матки на всіх етапах канцерогенної прогресії, а саме від передракової внутрішньо епітеліальної неоплазії шийки матки і (CIN-I) до клітин інвазивної карциноми шийки матки. Також 100 % загибель ракових клітин спостерігається при інфікуванні вірусом AAV2 при захворюванні плоско-клітинним раком та карциноми молочної залози. В той же час гірше відбуваються справи з лікуванням раку передміхурової залози з допомогою вірусу AAV2 (загинуло від 50 до 75 % ракових клітин) та лікуванням меланоми з допомогою вірусу AAV2 (загинуло від 25 до 50 % ракових клітин) [3]. Проте це ще раз підтверджує правильність поставленої задачі в корисній моделі, а саме підвищення ефективності знешкодження ракових клітин. Запропоноване в способі профілактичне лікування як раз і дозволяє вирішити проблему лікування тих ракових захворювань, що є складними при застосуванні вірусу AAV2 (наприклад меланоми, раку передміхурової залози). Проведені лабораторні дослідження фірмою Matthias Rath, Inc. (США) підтвердили високу ефективність лікування ракових захворювань як меланоми, раку молочної залози, так і раку товстої кишки з використанням природних нешкідливих засобів з вітаміну С, а також L-лізину, Lпроліну та епігалокахетіну галату (ЕГКГ). Тобто використання таких природних засобів лікування раку дозволяє зменшити шкідливий вплив на організм пацієнта, який може виникнути при лікуванні ракових захворювань. До того ж лабораторні дослідження фірми Matthias Rath, Inc. дозволили отримати гарні результати при лікуванні меланоми і раку молочної залози (100 % загибелі ракових клітин при експерименті) та раку товстої кишки (91 % загибелі ракових клітин при експерименті). Ефективність застосування в способі вірусного штаму Rigvir - ЕСНО-7 підтверджена довготривалими дослідженнями і випробуваннями, в тому числі клінічними. Необхідно відмітити широкий спектр дії цього препарату при лікуванні ракових захворювань, а також, що з самого початку він створювався для лікування меланоми, а тому в цьому напрямку лікування раку він має переваги. Також важливо, що завдяки застосуванню його у формі штаму досягнута не патогенність для людини і висока лікувальна ефективність. Таким чином, в запропонованій корисній моделі на спосіб знешкодження ракових клітин завдяки комбінованому застосуванню лікарських засобів і наявності в способі профілактичного лікування досягнуто виконання поставленої задачі способу, а саме створення високоефективного способу знешкодження ракових клітин, який повинен дозволити як підвищення ефективності лікування ракових захворювань, так і зменшення шкідливого впливу на організм пацієнта, який може виникнути при лікуванні ракових захворювань. Джерела інформації: 3. DR. MATTHIAS RATH'S. CELLULAR HEALTH TM SERIES: CANCER. The Victory Over Is At Hand. - 2002. - 15 p. (USA)/ www.dr-rath-research.org 2. Патент РФ № 2169015C2. Способ фотодинамической терапии злокачественных опухолей. Опубл. 28.06.2001. 3. Патент WO № 2006/047301А2. Parvovirus methods and compositions for killing neoplastic cells. Опубл. 04.05.2006. 4.Аденоассоциированный вирус - Материал из Википедии (RU). 5. Виротерапия. - Материал из Википедии (RU). 6. Ottollino-Perry Kathryn, Diallo Jean-Simon, Lichty Brian D, et al., 2010. Intelligent Design: Combination Therapy With Oncolytic Viruses/Molecular Therapy, vol. 18 no.2, 251-263 feb. 2010. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 55 60 1. Спосіб знешкодження ракових клітин, що включає застосування парвовірусу, такого як аденоасоційований вірус типу 2 (AAV2), і проведення знешкодження ракових клітин пацієнта шляхом вибіркового індукування апоптозу ракових клітин за рахунок або безпосереднього введення раковим клітинам пацієнта аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) або вектора аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) одночасно з допоміжним вірусом одним з групи 7 UA 72689 U 5 10 15 вірусів, таких як аденовірус, вірус папіломи людини (ВПЛ), вірус герпесу та вірус коров'ячої віспи, крім того знешкодження ракових клітин пацієнта виконують шляхом застосування фармацевтичної композиції на основі дикого типу аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) і переносника або одного чи декількох білкових продуктів аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2), що викликають апоптоз ракових клітин пацієнта, який відрізняється тим, що після завершення апоптозу ракових клітин, що викликані застосуванням аденоасоційованого вірусу типу 2 (AAV2) чи його продуктів, проводять профілактичне лікування пацієнта. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що профілактичне лікування пацієнта проводять шляхом застосування штаму вірусу. 3. Спосіб за пп. 1, 2, який відрізняється тим, що тип штаму вірусу для профілактичного лікування пацієнта установлюють шляхом визначення виду ракового захворювання у пацієнта, відбирання ракових клітин у хворого пацієнта для лабораторного аналізу та підбирання штаму при лабораторному аналізі на підставі отриманої оцінки ефективності знешкодження ракових клітин в живильному середовищі. 4. Спосіб за пп. 1, 2, який відрізняється тим, що для профілактичного лікування застосовують штам вірусу типу Rigvir - ЕСНО-7 virus strain. 5. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що для профілактичного лікування застосовують лікарський засіб з вітаміну С, L-лізину, L-проліну та епігалокатехіну галату (ЕГКГ). Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 8