Застосування n-циклоалкіл- або n-циклоалкарил-2-[(8-r1-9-r2-10-r3-3-r-2-оксо-2н-[1,2,4]триазино[2,3-c]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамідів як активної основи лікарських препаратів противірусної дії щодо штамів influenza virus типів a та b

Реферат: UA 111855 C2 (12) UA 111855 C2 Винахід належить до застосування N-циклоалкіл- або N-циклоалкарил-2-[(8-R1-9-R2-10-R3-3-R-2оксо-2H-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамідів як активної основи лікарських препаратів противірусної дії щодо штамів Influenza Virus типів А та В, формули І: 1 2 3 ,I в яких А позначає адамантил-1, 4-(1-адамантил)феніл, 3-етилбіцикло[2.2.1]гепт-2іл; R позначає метил-, бензил-, фенетил-, 4-метилфеніл-, 4-етилфеніл, 4-ізопропілфеніл-, 4-трет-бутилфеніл-, 3,4-диметилфеніл-, 4-фторо-(хлоро-, бромо-)феніл-, R1, R2, R3 незалежно один від одного позначають гідроген, алкіл-, алкокси-, галоген, гідрокси-, нітро-, аміно- та алкіламіно-, алкоксикарбоніл- або гідроксикарбоніл-, які можуть бути відтворені в умовах вітчизняних промислових хіміко-фармацевтичних підприємств з використанням стандартного обладнання; синтезовані з доступних вихідних реагентів. UA 111855 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 Даний винахід належить до хіміко-фармацевтичної галузі, зокрема до хімії біологічно активних сполук, і стосується застосування N-циклоалкіл- або N-циклоалкарил-2-[(8-R1-9-R2-10R3-3-R-2-оксо-2H-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамідів як активної основи лікарських препаратів противірусної дії щодо штамів Influenza Virus типів А та В. 1 3-R-6-R -тіо-6,7-дигідро-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-2-они та їх заміщені були неодноразово описані в патентах України на винахід № 90982 та № 96186 (Патент України на 1 винахід № 90982 МПК C07D 487/04 (2006.01). 3-R-6-R -тio-6,7-дигідро-2H-[1,2,4]триазино[2,3с]хіназолін-2-они та їх заміщені // С.І. Коваленко, Г.І. Степанюк, Г.Г. Берест, О.Ю. Воскобойник, Р.С. Синяк, О.А. Ходаківський, Л.І. Маринич, В.Ю. Бабій, Н.І. Чорноіван (UA). - Заявл. 18.09.2009; Опубл. 10.06.2010. - Бюл. № 11; Патент України № 96186 МПК (2006.01) C07D 253/06, C07D 253/10, C07D 253/10, C07D 239/72. Солі (3-R-2-oкco-2H-[1,2,4]триазино[2,3с]хіназолін-6-іл-сульфаніл)алкілкарбонових кислот, що проявляють протиішемічну, ноотропну, протисудомну та актопротекторну активність // Степанюк Г.І., Берест Г.Г., Маринич Л.І., Чорноіван Н.І., Пашинська О.С., Саєнко А.В., Бабій В.Ю., Воскобойнік О.Ю., Коваленко С.І., Белєнічев І.Ф., Синяк Р.С. (UA). - Заявл. 19.10. 2009). Близькими за структурою до сполук, що патентуються, є S-заміщені 3-R-6-тіоксо-6,7-дигідро-2H-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-2-онів, що містять циклоалкільні та циклоалкарильні фрагменти, які були описанні у статті Synthesis and biological activity of novel N-cycloalkyl-(cycloalkylaryl)-2-[(3-R-2-oxo-2H-[1,2,4]triazino[2,3c]quinazoline-6-yl)thio]acetamides/ G.G. Berest, A.Yu. Voskoboynik, S.I. Kovalenko, A.M. Antypenko, I.S. Nosulenko, A. M. Katsev, A.S. Shandrovskaya/ European Journal of Medicinal Chemistry. - 2011. - Vol. 46, Issue 12. - P. 6066-6074. Автори зазначають, що синтезовані сполуки виявлять протиракову дію, та можуть бути використані для розробки ефективних хіміотерапевтичних препаратів. Прототипом представленого винаходу є патент України на винахід № 89992 МПК C07D 235/02 (2006.01), C07D 239/91 (2006.010), А61K 31/517 (2006.01), А61Р 31/00 (2006.01) Діалкіламіноалкілбензімідазо[1,2-с]хіназоліни як противірусні агенти та індуктори інтерферону. Ляхова О.А., Погосова Ю.О., Ляхов С.А., Жолобак Н.М., Співак М.Я., Андронаті С.А. (UA). Заявл. 04.12.2007; Опубл. 25.03.2010.- Бюл. № 6. Спільними суттєвими ознаками прототипу та винаходу, що заявляється є те, що сполуки за прототипом та винаходом являють собою противірусні агенти та можуть бути віднесені до конденсованих за ребром с похідних хіназоліну. Однак прототип, а саме діалкіламіноалкілбензімідазо[1,2-с]хіназоліни містять в своєму складі бензімідазольний, а не [1,2,4]триазинний фрагмент. Також сполуки, які є об'єктом винаходу, що заявляється нами, відмінно від прототипу, є сірковмісними сполуками та містять каркасні ароматичні фрагменти, що можуть бути визначені як фармакофорні. В основу винаходу "Застосування N-циклоалкіл- або N-циклоалкарил-2-[(8-R1-9-R2-10-R3-3R-2-оксо-2H-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамідів як активної основи лікарських препаратів противірусної дії щодо штамів Influenza Virus типів А та В поставлена задача пошуку хіміотерапевтичних засобів, спроможних інгібувати Influenza Virus типів А та В і придатних для створення на їх основі нового конкурентоспроможного противірусного препарату. У відповідності з цим пропонуються нове застосування N-циклоалкіл- або N-циклоалкарил-2[(8-R1-9-R2-10-R3-3-R-2-оксо-2H-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамідів як активної основи лікарських препаратів противірусної дії щодо штамів Influenza Virus типів А та В, формули І: 1 2 3 45 50 ,I в яких А позначає адамантил-1, 4-(1-адамантил)феніл, 3-етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил; R позначає метил-, бензил-, фенетил-, 4-метилфеніл-, 4-етилфеніл, 4-ізопропілфеніл-, 4-третбутилфеніл-, 3,4-диметилфеніл-, 4-фторо-(хлоро-, бромо-)феніл-, R1, R2, R3 незалежно один від одного позначають гідроген, алкіл-, алкокси-, галоген, гідрокси-, нітро-, аміно- та алкіламіно-, алкоксикарбоніл- або гідроксикарбоніл-. Винахід ілюструється прикладами 1 отримання сполук загальної формули І 1 UA 111855 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Приклад 1. Загальні методи синтезу N-(1-адамантил-)-, (4-(1-адамантил)феніл-)-2-(8-R1-9R2-10-R3-3-R-2-оксо-2H-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамідів (1.1-1.11) Метод А. До 0,011 М N-(1-адамантил-)-, (4-(1-адамантил)феніл-)-2-хлороацетамідів в 20 мл пропанолу-2 або суміші вода-пропанол-2 (1:2) додають 0,01 М відповідного калій 8-R1-9-R2-10R3-3-R-2-оксо-2H-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-тіолату та кип'ятять 60-90 хвилин. Суміш охолоджують і вливають у воду. Осад відфільтровують, сушать і перекристалізовують із суміші діоксан-вода (1:1). Метод Б. До 1,78 г (0,011 М) N, N'-карбонілдіімідазолу в 10 мл безводного діоксану або ДМФА додають 0,01 М відповідних 2-[(8-R1-9-R2-10-R3-3-R-2-оксо-2H-[1,2,4]триазино[2,3с]хіназолін-6-iл)тio]oцтoвиx кислот та витримують при температурі 60-80 °C протягом 1 години до припинення виділення двоокису Карбону. Після цього у реакційну суміш додають 0,01 М 2адамантиламіну або [4-(2-адамантил)феніл]аміну і кип'ятять протягом 5-6 годин. Суміш охолоджують, вливають у воду, нейтралізують до рН 6-7 хлороводневою кислотою. Осад відфільтровують, сушать і перекристалізовують із суміші діоксан-вода (1:1). N-(Адамантил-1)-2-[(3-метил-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамід (1,1) -1 Вихід: 89,2 % (Метод А), 64,3 % (Метод Б); Т.пл. 160-162 °C; ІЧ (см ): 3516, 3358, 3259, 3077, 2907, 2849, 1676, 1663, 1585, 1558, 1505, 1470, 1425, 1388, 1360, 1344, 1306, 1286, 1265, 1210, 1 1165, 1139, 1103, 1045, 998, 956, 885, 862, 813, 773, 687, 633, 608; Н-ЯМР (400 MHz) δ: 1,62 (s, 6Н, Н-4', 6', 10' Ad), 1,96 (s, 6Н, Н-2', 8', 9' Ad), 2,01 (с, 3Н, Н-3', 5', 7' Ad), 2,39 (с, 3Н, 3-СH3), 3,94 (с, 2Н, -S-CH2-), 7,67 (т, 1Н, J=7,7 Hz, Н-10), 7,74 (д, 1Н, J=7,9 Hz, Н-8), 7,84 (с, 1Н, -NH), 7,98 (т, 13 1H, J=7,7 Hz, H-9), 8.46 (д, 1H, J=7,9 Hz, H-11); С-ЯМР (100 MHz) : 18.18 (CH3), 29.23 (3', 5', 7' Ad), 36,49 (4', 6', 10' Ad), 36,68 (-SCH2), 41,43 (2', 8', 9' Ad), 51,72 (1' Ad), 118.55 (11a), 126,05 (8), 126,65 (10), 127,88 (11), 136,03 (9), 144,24 (11b), 151,94 (3), 154,94 (7a), 155,16 (6), 161,02 (2), 166,17 (CONH); LC-MS, m/z=436 [M+1], 438 [M+3]; Емпірична формула: C23H25N5O2S, Вирахувано: С - 63,43; H-5,79; N-16,08; S-7,36; Знайдено: С - 63,42; Н - 5,79; N-16,08; S-7,34. N-(Адамантил-1)-2-[(3-феніл-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамід (1,2) -1 Вихід: 91,3 % (Метод А), 77,4 % (Метод Б); Т.пл. 214-216 °C; ІЧ (см ): 3287, 3067, 2904, 2848, 1674, 1644, 1590, 1555, 1509, 1487, 1469, 1455, 1359, 1337, 1310, 1286, 1269, 1242, 1183, 1161, 1 1136, 1102, 1020, 988, 939, 878, 844, 811, 782, 773, 753, 688, 668, 653, 615; Н-ЯМР (400 MHz) : 1,63 (с, 6Н, Н-4', 6', 10' Ad), 1,97 (с, 6Н, Н-2', 8', 9' Ad), 2,01 (с, 3Н, Н-3', 5', 7' Ad), 3,99 (с, 2Н, -SСH2-), 7,64-7,57 (м, 3Н, Н-3', 4', 5' 3-Ph), 7,69 (т, 1Н, J=7,7 Hz, Н-10), 7,76 (д, 1Н, J=7,8 Hz, Н-8), 7,88 (с, 1Н, -NH), 8.01 (т, 1H, J=7,7 Hz, H-9), 8.28 (д, 2H, J=8.1 Hz, H-2', 6' 3-Ph), 8.49 (д, 1Н, J=7,9 Hz, H-11); LC-MS, m/z=498 [M+1], 500 [M+3]; Емпірична формула: C28H27N5O2S: Вирахувано: С 67,58; H-5,47; N-14,07; S-6,44; Знайдено: С - 67,58; Н - 5,47; N-14,09; S-6,46. N-(Адамантил-1)-2-[(3-(4-метилфеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино-[2,3-с]хіназолін-6-1 іл)тіо]ацетамід (1,3) Вихід: 94,2 % (Метод А); Т.пл. 218-220 °C; ІЧ (см ): 3318, 3065, 3037, 2972, 2905, 2849, 1682, 1658, 1588, 1562, 1538, 1496, 1470, 1453, 1399, 1377, 1359, 1339, 1321, 1304, 1285, 1269, 1240, 1182, 1164, 1154, 1139, 1119, 1089, 1045, 989, 939, 876, 831, 810, 784, 770, 1 710, 701, 685, 653, 641, 625; Н-ЯМР (400 MHz) : 1,63 (с, 6Н, Н-4', 6', 10' Ad), 1,98 (с, 6Н, Н-2', 8', 9' Ad), 2,01 (с, 3Н, Н-3', 5', 7' Ad), 2,42 (с, 3Н, 3-(4-CH3Ph)), 3,99 (с, 2Н, -S-CH2-), 7,39 (д., 2Н, Н-3', 5' 3-(4-CH3Ph)), 7,68 (т., 1Н, J=7,7 Hz, H-10), 7,82-7,74 (м., 2Н, H-8, -NH), 7,98 (т., 1Н, J=7,7 Hz, H13 9), 8,24 (д, 2Н, Н-2', 6' 3-(4-CH3Ph)), 8.48 (д., 1Н, J=7,9 Hz, Н-11); С-ЯМР (100 MHz): : 21,66 (СН3), 29.30 (3', 5', 7' Ad), 36,49 (4', 6', 10' Ad), 36,79 (-SCH2), 41,43 (2', 8', 9' Ad), 51,74 (1' Ad), 118.25 (11а), 126,09 (8), 126,73 (10), 127,93 (11), 129.32 (1' Ph), 129.53 (2', 6' Ph), 129.78 (3', 5' Ph), 135,99 (9), 142,20 (4' Ph), 144,20 (3), 149.29 (l1b), 150,80 (7a), 155,20 (6), 160,13 (2), 166,17 (CONH); Емпірична формула: C29H29N5O2S: Вирахувано: С - 68.08; Н - 5,71; N-13,69; S-6,27; Знайдено: С - 69.00; Н - 5,71; N-13,70; S-6,27. N-(Адамантил-1)-2-{[3-(4-фторофеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино-[2,3-с]хіназолін-6-1 іл]тіо}ацетамід (1,4) Вихід: 78.5 % (Метод А), 80,2 % (Метод Б); Т.пл. 257-259 °C; ІЧ (см ): 3358, 2905, 2888, 2846, 1745, 1675, 1660, 1587, 1562, 1547, 1511, 1492, 1465, 1408, 1357, 1338, 1317, 1297, 1267, 1230, 1183, 1171, 1157, 1135, 1099, 1072, 1015, 992, 940, 894, 840, 813, 803, 769, 1 714, 704, 694, 676, 669, 637, 619; Н ЯМР (400 MHz), : 1,67 (уш.с, 6Н, Н-4, 4', 6, 6', 10, 10' Ad), 1,99 (уш.с, 6Н, Н-2, 2', 8, 8', 9, 9' Ad), 2,06 (уш.с, 3Н, Н-3, 5, 7 Ad), 3,94 (с, 2Н, S-CH2-), 7,32 (т., J=7,7 Hz, 2Н, 3-Ph Н-3',5'), 7,67 (м., 2Н, -NH, Н-10), 7,76 (д., J=7,8 Hz, 1H, Н-8), 7,94 (т., J=7,8 Hz, 1H, Н-9), 8.53 (д., J=5,5 Hz, 2Н, 3-Ph Н-2', 6'), 8.53 (д., J=7,8 Hz, 1Н, Н-11); LC-MS, m/z=516 [M+1], 518 [M+3]; Емпірична формула C28H26FN5O2S: Вирахувано: С - 65,22; H-5,08; N-13,58; S-6,22; Знайдено: С - 65,20; H-5,08; N-13,55; S-6,25. N-(Адамантил-1)-2-[(9-фторо-2~оксо-3-феніл-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-1 іл)тіо]ацетамід (1,5) Вихід: 80,4 % (Метод А), 76,5 % (Метод Б); Т.пл. 245-247 °C; ІЧ (см ): 3309, 3080, 2905, 2850, 1673, 1649, 1591, 1566, 1556, 1512, 1479, 1443, 1346, 1317, 1283, 1259, 1213, 2 UA 111855 C2 1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1193, 1165, 1129, 1102, 988, 971, 927, 881, 860, 841, 811, 753, 704, 686, 653, 625; Н ЯМР (400 MHz), : 1,67 (br.s., 6Н, Н-4, 4', 6, 6', 10, 10'Ad); 1,98 (уш.с, 6Н, Н-2, 2', 8, 8', 9, 9' Ad), 2,06 (уш.с, 3Н, Н-3, 5, 7 Ad), 3,93 (с, 2Н, S-CH2-), 7,82-7,21 (м., 6Н, Н-8, 10, 3-Ph Н-3', 4', 5', -NH), 8.33 (д., J=7,1 Hz, 2Н, 3-Ph Н-2', 6'), 8.61 (д.д., J=7,7, 5,9 Hz, 1Н, H-11); LC-MS, m/z=516 [M+1], 517 [M+2], 518 [M+3]; Емпірична формула: C28H26FN5O2S: Вирахувано: С - 65,22; H-5,08; N-13,58; S-6,22; Знайдено: С - 65,23; Н - 5,08; N-13,59; S-6,20. N-(Адамантил-1)-2-{[9-фторо-3-(4-фторофеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-1 іл]тіо}ацетамід (1,6) Вихід: 32,4 % (Метод А), 73,9 % (Метод Б); Т.пл. 282-284 °C; ІЧ (см ): 3271,3069, 2903, 2850,, 1673, 1657, 1620, 1598., 1585, 1570, 1555, 1510, 1501, 1483, 1471, 1445, 1413, 1368, 1344, 1324, 1298, 1279, 1262, 1242, 1227, 1175, 1159, 1128, 1100, 1093, 1070, 10456, 1015, 1 994, 973, 960, 930, 909, 869, 859, 822, 799, 761, 730, 714, 696, 678, 655, 637, 620; Н ЯМР (400 MHz), : 1,67 (уш.с, 6Н, Н-4, 4', 6, 6', 10, 10' Ad), 1,98 (уш.с, 6Н, Н-2, 2', 8, 8', 9, 9' Ad), 2,06 (уш.с, 3Н, Н-3, 5,7 Ad), 3,94 (с, 2H, S-CH2-), 7,34 (т., J=8.0 Hz, 2H, 3-Ph H-3', 5'), 7,56-7,41 (м., 2Н, Н-8, Н-10), 7,69 (уш.с, 1Н, -NH), 8.51-8.32 (м., 2Н, 3-Ph Н-2', 6'), 8.65-8.52 (м., 1Н, Н-11); Емпірична формула: C28H25F2N5O2S: Вирахувано: С - 63,03; Н - 4,72; N-13,12; S-6,01; Знайдено: С - 63,06; Н - 4,72; N-13,11; S-6,00. N-(Адамантил-1)-2-{[10-хлоро-3-(4-фторофеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-1 іл]тіо}ацетамід (1,7) Вихід: 67,3 % (Метод А); Т.пл. 294-296 °C; ІЧ (см ): 3271, 3052, 2902, 2849, 16734, 1657, 1585, 1550, 1539, 1509, 1497, 1467, 1411, 1368, 1360, 1336, 1324, 1310, 1281, 1256, 1232, 1213, 1164, 1136, 1120, 1104, 1089, 1046, 1013, 990, 954, 908, 894, 857, 830, 821, 800, 769, 1 744, 731, 708, 691, 671, 638, 623; Н ЯМР (400 MHz), : 1,67 (уш.с, 6Н, Н-4, 4', 6, 6', 10, 10' Ad), 1,98 (уш.с, 6Н, Н-2, 2', 8, 8', 9, 9' Ad), 2,03 (уш.с, 3Н, Н-3, 5, 7 Ad), 3,93 (с, 2Н, S-CH2-), 7,33 (т., J=8.4 Hz, 2Н, 3-Ph Н-3', 5'), 7,68 (с, 1Н, -NH), 7,77 (д., J=8.6 Hz, 1Н, Н-9), 7,92 (д., J=8,3 Hz, 1Н, Н8), 8.45 (м., 3Н, Н-11, 3-Ph H-2',6'); Емпірична формула: C28H25C1FN5O2S: Вирахувано: С - 61,14; Н - 4,58; N-12,73; S-5,83; Знайдено: С - 61,17; Н - 4,58; N-12,72; S-5,81. N-(4-(1-Адамантил)феніл]-2-[3-метил-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-1 іл)тіо]ацетамід (1,8) Вихід: 97,3 % (Метод А), 81,2 % (Метод Б); Т.пл. 225-227 °C; ІЧ (см ): 3251, 3184, 2897, 2845, 1655, 1583, 1558, 1503, 1466, 1449, 1433, 1405, 1393, 1361, 1332, 1315, 1286, 1259, 1220, 1206, 1190, 1163, 1131, 1101, 1046, 1016, 969, 955, 832, 807, 772, 715, 699, 685, 630, 1 607; Н-ЯМР (400 MHz) : 1,73 (с, 6Н, Н-4', 6', 10' Ad), 1,84 (с, 6Н, Н-2', 8', 9' Ad), 2,05 (с, 3Н, Н-3', 5', 7' Ad), 2,39 (с, 3Н, 3-СH3-), 4,21 (с, 2Н, -S-СH2), 7,30 (д., 2Н, J=8.5 Hz, Н-3', 5' -NHC6H4-Ad), 7,55 (д., 2Н, J=8.5 Hz, Н-2', 6' –NHC6H4-Ad), 7,66 (т., 1Н, J=7,7 Hz, Н-10), 7,70 (д., 1Н, J=7,9 Hz, Н8), 7,95 (т., 1H, J=7,7 Hz, Н-9), 8.45 (д., 1Н, J=7,9 Hz, H-11), 10,36 (с, 1Н, -NH); LC-MS, m/z=512 [М+1], 514 [М+3]; Емпірична формула C29H29N5O2S: Вирахувано: С - 68.08; Н - 5,71; N-13,69; S6,27; Знайдено: С - 68.10; Н - 5,71; N-13,70; S-6,29. N-[4-(1-Адамантил)феніл]-2-[3-феніл-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-1 іл)тіо]ацетамід (1,9) Вихід: 94,5 % (Метод А); Т.пл. 314-318 °C; ІЧ (см ): 3349, 3047, 2982, 2899, 2849, 1678, 1657, 1596, 1587, 1564, 1546, 1519, 1498, 1486, 1470, 1444, 1407, 1380, 1341, 1331, 1311, 1287, 1263, 1246, 1237, 1187, 1171, 1138, 1100, 1076, 1033, 1017, 1002, 988, 963, 941, 895, 1 877, 848, 836, 810, 779, 768, 751, 706, 687, 665, 654, 636; Н-ЯМР (400 MHz) : 1,73 (с, 6Н, Н-4', 6', 10' Ad), 1,84 (с, 6Н, Н-2', 8', 9' Ad), 2,05 (с, 3Н, Н-3', 5', 7' Ad), 4,25 (с, 2Н, -S-CH2-), 7,31 (д., 2Н, J=8.5 Hz, Н-3', 5' -NHC6H4-Ad), 7,56 (д., 2Н, J=8.5 Hz, Н-2', 6' -NHC6H4-Ad), 7,77-7,59 (т., 5Н, Н-3', 4', 5' 3-Ph, Н-8, 10), 7,98 (т., 1Н, J=7,7 Hz, Н-9), 8.30 (д., 2Н, J=7,3, Н-2', 6' 3-Ph), 8.49 (д., 1H, J=7,9 Hz, H-11), 10,40 (с, 1Н, -NH); EI-MS, m/z (Irel, %) = 396 (6,3), 395 (5,7), 348 (16,9), 347 (73,5), 346 (49.1), 345 (16,1), 339 (7,2), 316 (5,4), 307 (8.7), 302 (15,9), 301 (64,8), 269 (16,0), 268 (5,2), 258 (5,1), 254 (13,8), 253 (57,9), 252 (10,8), 246 (7,0), 245 (16,1), 244 (99.9), 243 (26,4), 240 (5,4), 228 (5,8), 227 (49.5), 226 (8.0), 218 (25,8), 217 (29.8), 216 (58.8), 213 (8.9), 212 (7,1), 211 (7,0), 210 (16,6), 197 (9.5), 196 (55,8), 195 (5,6), 189 (5,4), 188 (9.0), 186 (7,2), 185 (20,9), 184 (11,2), 183 (7,0), 182 (8.6), 180 (6,1), 179 (8.3), 178 (43,2), 170 (42,5), 161 (5,0), 160 (5,6), 159 (17,8), 158 (9.6), 157 (9.0), 156 (20,0),155 (8.7), 154 (9.4), 153 (12,0), 152 (9.6), 148 (21,9), 145 (8.0), 144 (7,8), 143 (16,9), 142 (7,5), 141 (6,0), 135 (22,4), 134 (8.4), 133 (24,1), 132 (32,9), 131 (12,6), 130 (16,0), 129 (22,9), 128 (18.2), 127 (12,5), 119 (10,4), 118 (21,9), 117 (22,4), 116 (18.3), 115 (12,5), 106 (5,3), 105 (7,2), 104 (14,4), 103 (80,9), 101 (12,8), 95 (7,0), 94 (27,6), 93 (34,4), 92 (12,9), 90 (12,7), 89 (10,5), 86 (13,8), 79 (26,3), 77 (10,2), 75 (5,4), 67 (16,5), 66 (7,4), 65 (21,6), 64 (14,3), 63 (15,4), 56 (14,9), 55 (19.1), 53 (6,1), 47 (9.2), 43 (15,2), 41 (21,1)LC-MS, m/z=574 [M+1], 575 [M+2], 576 [M+3]; Емпірична формула: C34H31N5O2S: Вирахувано: С - 71,18; H-5,45; N-12,21; S-5,59; Знайдено: С 71,19; Н - 5,45; N-12,23; S-5,61. N-[4-(1-Адамантил)феніл]-2-[3-(4-метилфеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[1,2,3-с]хіназолін-6-1 іл)тіо]ацетамід (1,10) Вихід: 99.9 % (Метод А); 84,3 % (Метод Б); Т.пл. 266-268 °C; ІЧ (см ): 3344, 2982, 2915, 2898, 2882, 2849, 1675, 1655, 1584, 1562, 1542, 1517, 1490, 1469, 1451, 1406, 1368, 3 UA 111855 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1340, 1329, 1308, 1285, 1264, 1237, 1189, 1139, 1125, 1106, 1071, 1036, 1017, 989, 961, 942, 893, 1 875, 834, 807, 779, 768, 708, 686, 665, 643, 624; Н-ЯМР (400 MHz) : 1,73 (s., 6Н, Н-4', 6', 10' Ad), 1,84 (с, 6Н, Н-2', 8', 9' Ad), 2,05 (с, 3Н, Н-3', 5', 7' Ad), 2,42 (с, 3Н, 3-(4-CH3Ph)), 4,25 (с, 2Н, -SСH2), 7,31 (д., 2Н, J=8.5, Н-3', 5' -NHC6H4-Ad), 7,41 (д., 2Н, J=7,9 Hz, Н-3', 5' 3-(4-CH3Ph)), 7,56 (д., 2Н, J=8.5 Hz, Н-2', 6' -NHC6H4-Ad), 7,68 (т., 1Н, J=7,7 Hz, Н-10), 7,74 (д., 1Н, J=7,8 Hz, H-8), 7,99 (т., 1Н, J=7,7 Hz, H-9), 8.25 (д., 2Н, J=7,9 Hz, Н-2', 6' 3-(4-CH3Ph)), 8.49 (д., 1Н, J=7,9 Hz, H-11), 10,39 (с, 1Н, -NH); LC-MS, m/z=588 [M+1], 590 [M+3]; Емпірична формула: C35H33N5O2S: Вирахувано: С - 71,53; H-5,66; N-11,92; S-5,46; Знайдено: С - 71,53; Н - 5,66; N-11,92; S-5,44. N-[4-(1-Адамантил)феніл]-2-[3-(4-метоксифеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-1 іл)тіо]ацетамід (1,11) Вихід: 93,2 % (Метод А); Т.пл. 259-262 °C; ІЧ (см ): 3346, 2982, 2898, 2849, 1678, 1654, 1597, 1563, 1538, 1518, 1504, 1490, 1469, 1452, 1406, 1370, 1341, 1315, 1304, 1255, 1244, 1177, 1140, 1117, 1050, 1036, 1016, 989, 942, 879, 843, 808, 780, 769, 722, 701, 687, 665, 1 643, 621; Н-ЯМР (400 MHz) : 1,73 (с, 6Н, Н-4', 6', 10' Ad), 1,84 (с, 6Н, Н-2', 8', 9' Ad), 2,05 (с, 3Н, Н-3', 5', 7' Ad), 3,88 (с, 3Н, 3-(4-СH3ОРh)), 4,25 (с, 2H, -S-CH2-), 7,17 (д., 2Н, J=8.3, Н-3', 5' 3-(4CH3OPh)), 7,31 (д., 2Н, J=8.5 Hz, Н-3', 5' -NHC6H4-Ad), 7,56 (д., 2Н, J=8.5 Hz, Н-2', 6' -NHC6H4-Ad), 7,68 (т., 1Н, J=7,7 Hz, Н-10), 7,74 (д., 1Н, J=7,8 Hz, Н-8), 7,97 (т., 1Н, J=7,7 Hz, Н-9), 8.39 (д., 2Н, J=8.3, Н-2', 6' 3-(4-CH3OPh)), 8.49 (д., 1Н, J=7,9 Hz, H-11), 10,40 (с, 1Н, -NH); LC-MS, m/z=604 [М+1], 607 [М+3]; Емпірична формула: C35H33N5O3S: Вирахувано: С, 69.63; Н, 5,51; N, 11,60; S, 5,31; Знайдено: С - 69.64; Н - 5,51; N-11,61; S-5,32. Приклад 2. Загальний метод синтезу N-(3-етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-[(8-R1-9-R2-10-R3-3R-2-оксо-2H-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамідів (2.1-2.8). До 0,011 M N-(3-етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-хлороацетаміду в 20 мл пропанолу-2 або суміші вода-пропанол-2 (1:2) додають 0,01 М відповідного калій 8-R1-9-R2-10-R3-3-R-2-оксо-2H[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-тіолату та кип'ятять 60-90 хвилин. Суміш охолоджують і вливають у воду. Осад відфільтровували, висушували і перекристалізовували із суміші діоксанвода (1:1). N-(3-Етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-[3-метил-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-1 іл)тіо]ацетамід (2.1). Вихід: 84,6 %; Т.пл. 217-219 °C; ІЧ (см ): 3287, 2944, 2866, 1667, 1636, 1584, 1558, 1538, 1509, 1469, 1454, 1418, 1386, 1360, 1337, 1287, 1261, 1208, 1173, 1133, 1102, 1 1045, 955, 880, 856, 768, 698, 685, 630, 607; Н-ЯМР (400 MHz) : 1,48-0,94 (м., 11Н, 3-СH3СН2-, 3-СН3СH2-, 5, 5', 6, 6', 7, 7' біцикло[2.2.1]гептил), 2,16-2,09 (м., 2Н, Н-3, 4 біцикло[2.2.1]гептил), 2,38 (с, 3Н, 3-СH3), 2,66 (м., 1Н, Н-1 біцикло[2.2.1]гептил), 3,50-3,39 (м., 1Н, Н-2 біцикло[2.2.1]гептил), 3,96 (с, 2Н, -S-СH2-), 7,66 (т., 1Н, J=7,7 Hz, H-10), 7,73 (т., 1Н, J=7,9 Hz, H13 8), 7,97 (т., 1H, J=7,7 Hz, H-9), 8.05 (д., 1Н, J=8.5 Hz, -NHC(O)-), 8.46 (д., 1Н, J=7,9 Hz, H-11); CNMR (100 MHz): : 18.17 (CH3), 18.79 (CH3CH2), 20,70 (6'), 28.87 (CH3CH2), 30,33 (5'), 35,78 (SCH2), 36,33 (7'), 36,85 (1'), 38.95 (4'), 48.51 (3'), 49.37 (2'), 118.50 (11a), 125,99 (8), 126,70 (10), 127,90 (11), 135,91 (9), 144,21 (3), 151,92 (l1b), 154,74 (7a), 155,16 (6), 160,98 (2), 166,39 (CONH); EI-MS, m/z (Irel, %) = 303 (7,2), 302 (45,1), 285 (31,8), 246 (7,9), 245 (24,1), 244 (100,0), 143 (16,3), 218 (5,6), 217 (17,7), 216 (51,5), 188 (4,9), 179 (6,3), 170 (7,9), 148 (12,6), 143 (7,7), 129 (7,0), 123 (5,9), 122 (9.0), 95 (24,4), 93 (14,0), 91 (5,3), 90 (8.6), 81 (11,8), 67 (20,2), 57 (8.7), 56 (9.4), 55 (12,9); LC-MS, m/z=424 [M+1], 426 [М+3]; Емпірична формула: C22H25N5O2S: Вирахувано: С 62,39; H-5,95; N-16,54; S-7,57; Знайдено: С - 62,40; Н - 5,95; N-16,54; S-7,58. N-(3-Етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-[3-(4-метилфеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-1 с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамід (2.2). Вихід: 87,3 %; Т.пл. 248-250 °C; ІЧ (см ): 3285, 3078, 2950, 2868, 1668, 1633, 1589, 1562, 1549, 1501, 1468, 1454, 1391, 1372, 1335, 1308, 1270, 1239, 1183, 1 1135, 1104, 1019, 991, 939, 830, 782, 770, 712, 699, 684, 641, 626; Н-ЯМР (400 MHz) : 1,51-0,94 (м., 11H, 3-CH3CH2-, 3-СН3СH2-, 5, 5', 6, 6', 7, 7' біцикло[2.2.1]гептил), 2,16-2,09 (м., 2Н, Н-3, 4 біцикло[2.2.1]гептил), 2,42 (с, 3Н, 3-(4-CH3Ph), 2,67 (м., 1Н, Н-1 біцикло[2.2.1]гептил), 3,60-3,41 (т., 1H, Н-2 біцикло[2.2.1]гептил), 4,00 (с, 2Н, -S-CH2-), 7,41 (д., 2Н, J=7,5 Hz, Н-3, Н-5 4-CH3Ph), 7,68 (т., 1Н, J=7,7 Hz, H-10), 7,76 (д., 1Н, J=7,9 Hz, Н-8), 7,98 (т., 1Н, J=7,7 Hz, Н-9), 8,07 (д., 1Н, J=8,5 Hz, -NHC(O)-), 8,24 (д., 2Н, J=7,5 Hz, Н-2, Н-6 4-CH3Ph), 8,48 (д., 1H, J=7,9 Hz, H-11); LCMS, m/z=500 [M+1], 502 [М+3]; Емпірична формула: C28H29N5O2S: Вирахувано: С - 67,31; Н - 5,85; N-14,02; S-6,42; Знайдено: С - 67,31; Н - 5,85; N-14,02; S-6,42. N-(3-Етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-[3-(4-метоксифеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-1 с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамід (2.3). Вихід: 89.6 %; Т.пл. 230-233 °C; ІЧ (см ): 3274, 3067, 2945, 2866, 1668, 1643, 1590, 1563, 1545, 1500, 1469, 1454, 1421, 1372, 1340, 1317, 1306, 1288, 1272, 1259, 1238, 1174, 1137, 1105, 1049, 1016, 989, 965, 940, 878, 840, 810, 766, 723, 700, 684, 641, 1 622; Н-ЯМР (400 MHz) : 1,47-0,92 (м., 11Н, 3-СН3СН2-, 3-СН3СН2-, 5, 5', 6, 6', 7, 7' біцикло[2.2.1]гептил), 2,16-2,11 (м., 2Н, Н-3, 4 біцикло[2.2.1]гептил), 2,60 (м., 1Н, Н-1 біцикло[2.2.1]гептил), 3,55-3,43 (м., 1H, Н-2' біцикло[2.2.1]гептил), 3,87 (с, 3Н, 3-(4-CH3OPh), 4,00 4 UA 111855 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (с, 2Н, -S-CH2-), 7,16 (д., 2Н, J=7,9 Hz, Н-3, Н-5 4-CH3OPh), 7,68 (т., 1Н, J=7,7 Hz, Н-10), 7,76 (д., 1Н, J=7,9 Hz, H-8), 7,98 (т., 1Н, J=7,7 Hz, Н-9), 8,08 (д., 1Н, J=8,5 Hz, -NHC(O)-), 8,37 (д., 2Н, J=7,9 Hz, Н-2, Н-6 4-CH3OPh), 8,48 (д., 1Н, J=7,9 Hz, H-11); LC-MS, m/z=516 [M+1], 518 [М+3]; Емпірична формула: C28H29N5O3S: Вирахувано: С, 65,22; Н, 5,67; N, 13,58; S, 6,22; Знайдено: С 65,24; Н - 5,67; N-13,56; S-6,20. N-(3-Етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-[9-фторо-3-(4-метоксифеніл)-2-оксо-2Н-1 [1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо}ацетамід (2.4). Вихід: 88,2 %; Т.пл. 272-274 °C; ІЧ (см ): 3289, 3072, 2954, 2869, 1667, 1634, 1591, 1564, 1546, 1502, 1477, 1455, 1443, 1422, 1392, 1350, 1323, 1285, 1259, 1217, 1176, 1164, 1131, 1104, 1071, 1023, 992, 974, 926, 872, 841, 808, 779, 1 766, 723, 694, 681, 641, 619; Н ЯМР (400 MHz), : 1,74-0,64 (м., 11Н, 3-СН3СН2-, 3-СН3СH2-, 5, 5', 6, 6', 7, 7' біцикло[2.2.1]гептил), 2,12 (м., 1Н, Н-3 біцикло[2.2.1]гептил), 2,18 (м., 1Н, Н-4 біцикло[2.2.1]гептил), 2,69 (м., 1Н, Н-1 біцикло[2.2.1]гептил), 3,46 (с, 1Н, Н-2 bicyclo[2.2.1] heptyl), 3,91 (с, 3Н, О-СН3), 3,94 (с, 2Н, S-CH2-), 7,08 (д., J=8,4 Hz, 2Н, 3-Ph Н-3', 5'), 7,51-7,42 (м., 1Н, Н10), 8,17 (с, 1H, Н-8), 8,41 (д., J=8,2 Hz, 2H, 3-Ph H-2', 6'), 8,66-8,52 (м., 1Н, H-11); LC-MS, m/z=534 [М+1], 535 [М+2], 536 [М+3]; Емпірична формула: C 28H28FN5O3S: Вирахувано: С - 63,02; Н - 5,29; N-13,12; S-6,01; Знайдено: С - 63,05; Н - 5,29; N-13,10; S-6,03. N-(3-Етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-[9-фторо-3-(4-фторофеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-1 с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамід (2.5). Вихід: 42,7 %; Т.пл. 264-266 °C; ІЧ (см ): 3270, 3073, 2954, 2871, 1672, 1644, 1586, 1555, 1510, 1498, 1483, 1445, 1412, 1375, 1347, 1321, 1297, 1279, 1262, 1229, 1159, 1132, 1101, 1070, 1015, 995, 973, 929, 869, 858, 847, 823, 761, 715, 696, 679, 657, 1 637, 621; H ЯМР (400 MHz), : 1,66-0,64 (м., 14Н, 3-СН3СН2-, 3-СН3СН2-, Н-1, 3, 4, 5, 5', 6, 6', 7, 7' біцикло[2.2.1]гептил), 3,67-3,40 (м., 1Н, Н-2 біцикло[2.2.1]гептил), 3,95 (с, 2Н, S-CH2-), 7,33 (т., J=8,9 Hz, 2H, 3-Ph H-3', 5'), 7,57-7,42 (м., 2Н, H-8,10), 8,18 (с 1Н, NH), 8,52-8,39 (м., 2Н, 3-Ph H-2', 6'), 8,61 (д.д., J=10,6, 5,4 Hz, 1H, H-11); LC-MS, m/z=522 [M+1], 524 [M+3]; Емпірична формула: C27H25F2N5O2S: Вирахувано: С - 62,17; Н - 4,83; N-13,43; S-6,15; Знайдено: С - 62,19; Н - 4,83; N13,45; S-6,14. N-(3-Етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-[9-бромо-3-(4-фторофеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-1 с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамід (2.6). Вихід: 78,79 %; Т.пл. 264-266 °C; ІЧ (см ): 3275, 3072, 2949, 2868, 1670, 1639, 1583, 1556, 1498, 1458, 1424, 1411, 1392, 1373, 1339, 1312, 1296, 1270, 1237, 1 1179, 1161, 1149, 1103, 1075, 1060, 991, 968, 939, 895, 845, 820, 765, 715, 681, 647, 615; Н ЯМР (400 MHz), : 1,66-0,78 (м., 12Н, 3-СН3СН2-, 3-СН3СН2-, Н-3, 5, 5', 6, 6', 7, 7' біцикло[2.2.1]гептил), 2,25-2,03 (м., 2Н, Н-1, 4 біцикло[2.2.1]гептил), 3,61-3,42 (м., 1Н, Н-2 біцикло[2.2.1]гептил), 4,043,81 (м., 2Н, S-CH2-), 7,32 (т, J7,6 Hz, 2Н, 3-Ph Н-3', 5'), 7,77 (д., J=7,6 Hz, 1Н, Н-10), 8,07-7,82 (м., 2Н, Н-8, NH), 8,53-8,34 (м., 3Н, Н-11, 3-Ph Н-2', 6'); LC-MS, m/z=582 [М+0], 586 [М+4]; Емпірична формула: C27H25BrFN5O2S: Вирахувано: С, 55,67; Н - 4,33; N-12,02; S, 5,50; Знайдено: С - 55,69; Н - 4,33; N-12,00; S-5,53. N-(3-Етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-[10-бромо-3-(4-фторофеніл)-2-оксо-2Н-1 [1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамід (2.7). Вихід: 66,7 %; Т.пл. 264-266 °C; ІЧ (см ): 3278, 2952, 2868, 1668, 1644, 1588, 1556, 1496, 1466, 1412, 1377, 1336, 1283, 1261, 1236, 1218, 1175, 1161, 1139, 1121, 1103, 1077, 1064, 1015, 991, 952, 896, 845, 773, 730, 717, 691, 669, 656, 1 635, 624; Н ЯМР (400 MHz), : 1,67-0,59 (т., 12Н, 3-СН3СН2-, 3-СН3СН2-, Н-3, 5, 5', 6, 6', 7, 7' біцикло[2.2.1]гептил), 2,29-1,98 (м., 2Н, Н-1, 4 біцикло[2.2.1]гептил), 3,61-3,32 (м., 1Н, Н-2 біцикло[2.2.1]гептил), 3,96 (с, 2Н, S-СН2-), 7,34 (т., J=8,5 Hz, 2Н, 3-Ph Н-3', 5'), 7,70 (д., J=6,4 Hz, 1Н, Н-9), 8,11-7,96 (м, 2Н, Н-8, NH), 8,43 (д., J=6,5 Hz, 2Н, 3-Ph Н-2', 6'), 8,58 (с, 1Н, H-11); LCMS, m/z=582 [М+0], 586 [М+4]; Емпірична формула: C27H25BrFN5O2S: Вирахувано: С - 55,67; Н 4,33; N-12,02; S-5,50; Знайдено: С - 55,69; Н - 4,33; N-12,00; S-5,51. N-(3-Етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил)-2-[10-йодо-3-(4-фторофеніл)-2-оксо-2Н-[1,2,4]триазино[2,3-1 с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамід (2.8). Вихід: 80,4 %; Т.пл. 272-274 °C; ІЧ (см ): 3274, 3080, 2946, 2866, 1667, 1641, 1585, 1555, 1495, 1462, 1410, 1374, 1331, 1280, 1261, 1234, 1216, 1158, 1138, 1 1101, 1074, 1013, 988, 946, 843, 771, 717, 688, 646, 633, 622; Н ЯМР (400 MHz), : 1,58-0,82 (м., 12Н, 3-СН3СН2-, 3-СН3СН2-, Н-3, 5, 5', 6, 6', 7, 7' біцикло[2.2.1]гептил), 2,28-2,00 (м., 2Н, Н-1, 4 біцикло[2.2.1]гептил), 3,63-3,33 (м., 1H, Н-2 біцикло[2.2.1]гептил), 3,95 (с, 2Н, S-CH2-), 7,33 (т., J=8,1 Hz, 2H, 3-Ph Н-3', 5'), 7,55 (д.д., J=8,3, 1,8 Hz, 1Н, H-8), 8,08-7,85 (м., 1Н, NH), 8,18 (d., J=8,2 Hz, 1H, H-9), 8,46 (t, J=5,6 Hz, 2H, 3-Ph H-2', 6'), 8,79 (с, 1Н, H-11); LC-MS, m/z=630 [M+1], 632 [M+3]; Емпірична формула: C27H25FIN5O2S: Вирахувано: С - 51,52; H-4,00; N-11,13; S-5,09; Знайдено: С - 51,55; Н - 4,00; N-11,10; S-5,08. Противірусна активність синтезованих сполук 1.1-1.11 та 2.1-2.18 ілюструється прикладом 3. Приклад 3. Первинна оцінка противірусної активності проводилася на штамах распіраторних вірусів (Flu A H1N1/California/07/2009/MDCK, Flu A H3N2/Perth/16/2009/MDCK, Flu A H5N1/Vietnam/1203/2004H/MDCK, Flu B/Florida/4/2006/MDCK) згідно з протоколом програми 5 UA 111855 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 Antimicrobial Acquisition and Coordinating. Результати по кожній тестованій сполуці представлені у вигляді вірус-інгибуючих концентрацій: 50 % ефективна концентрація (ЕС50), 90 % ефективна концентрація (ЕС90) та 50 % клітинно-інгібуюча концентрація (СС50). Також був розрахований загальний індекс селективності (SI50) як відношення (ЕС50)/(СС50). У випадку, коли значення SI50 дорівнювало 3 або вище, проводилося підтверджуюче тестування. Інгібування патологічного впливу вірусу на клітину (V-теcт) Вказаний тест проводився на 96-лункових плоскодонних планшетах та був використаний для попереднього (первинного) вивчення противірусної активності. В даному тесті чотири розведення кожної тестованої сполуки (1000, 100, 10, 1 μg/mL) було добавлено в три лунки, що містять моношар клітин, протягом 5 хвилин. На наступній стадії на планшету був перенесений вірус, планшети були запечатані та інкубувались при 37 °C (від 72 до 120 годин). Патологічний вплив вірусу на клітину визначався мікроскопічно паралельно з контрольним дослідом (от 3 до 4 визначень). Дія препаратів з відомою противірусною дією визначалась паралельно з кожним тестуванням нових сполук. Результати були виражені у вигляді 50 % ефективної концентрації (ЕС50). Як сполука порівняння використовувався Рибавірин (1-[(2R, 3R, 4S, 5R)-3,4-дигідрокси-5(гідроксиметил)оксолан-2-іл]-1Н-1,2,4-триазол-3-карбоксамід), лікарський препарат з вираженою противірусною дією. Підвищення захвату барвника Нейтрального червоного (NR-тест). Вказаний тест проводився для підтвердження даних по тесту на інгібування патологічного впливу вірусу на клітину (СРЕ). При виконанні випробування використовувалась та сама планшета, в якої проводився попередній тест. Коли барвник нейтральний червоний додавали до лунки, непошкоджені вірусом клітини поглинали більшу частину барвника. Дані вимірювались автоматичним "ридером". Результати були виражені у вигляді 50 % ефективної концентрації (ЕС50). Випробування на зменшення виходу вірусних часток. (VYR-тест) Сполуки, що були ідентифіковані як активні за результатами тестів на інгібування патологічного впливу вірусу на клітину та поглинання барвника, були дослідженні на здатність зменшувати вихід вірусних часток шляхом дослідження заморожених та відталих елюатів з кожної лунки на титр вірусів (вміст вірусів) методом серійних розведень на моношарах чутливих клітин. Виявлення патологічного впливу вірусу на клітину є ознакою присутності вірусів. Так, як і у попередніх тестах, дія препаратів з відомою противірусною дією визначалась паралельно з кожним тестуванням сполук, що досліджувалися. 90 % ефективна концентрація (ЕС90) являє собою кількість сполуки, що пригнічує вихід вірусу на 1 log10, була одержана за результатами цього випробування. Середні значення основних параметрів противірусної активності деяких сполук по відношенню до вірусу Influenza Virus типів А та В наведено у таблицях 1-4. Встановлено, що зазначена група сполук проявляє вірус-інгібуючу активність. Як сполука порівняння використовувався Рибавірин (1-[(2R, 3R, 4S, 5R)-3,4-дигідрокси-5(гідроксиметил)оксолан-2-іл]-1Н-1,2,4-триазол-3-карбоксамід), лікарський препарат з вираженою противірусною дією. Таблиця 1 Чутливість штаму вірусу Flu A H3N2 до синтезованих сполук Сполуки 1.2 1.3 1.10 2.1 Концентрація (μg/mL) 0,1-100 0,1-100 0,032-100 0,032-100 0,032-100 0,032-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 Метод* Вірус PV PNR SV SNR TNR TVYR/NR PV PNR PV PNR PV PNR PNR Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 FluAH3N2 6 ЕС50 ЕС90 3,2 4,1 6,5 12 12 32 27 60 65 32 33 31 45 СС50 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 32 >100 >100 SI50 >31 >24 >15 >8,3 >8,3 >3,1 >3,7 >1,7 >1,5 1 >3 >3,2 UA 111855 C2 2.3 Рибавірин 0,1-100 0,1-100 0,032-100 0,032-100 0,1-100 0,1-100 0,032-100 0,032-100 0,032-100 0,032-100 PV PNR SV SNR PV PNR SV SNR TNR TVYR/NR Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 Flu A H3N2 4,2 3,1 18 25 12 11 5,5 7,1 7,1 2,3 >100 43 52 88 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >24 14 2,9 3,5 >8,3 >9,1 >18 >14 >14 Примітка: * - PV - первинний візуальний тест, PNR - первинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, SV - вторинний візуальний тест, SNR - вторинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, TNR - третинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, TVYR/NR - третинний тест на зменшення виходу вірусних часток. Таблиця 2 Чутливість штаму вірусу Flu A H5N1 до синтезованих сполук Сполуки 1.2 Рибавірин Концентрація (μg/mL) 0,1-100 0,1-100 0,032-100 0,032-100 0,064-200 0,064-200 0,064-200 0,064-200 0,1-100 0,1-100 0,032-100 0,032-100 0,064-200 0,064-200 0,064-200 0,064-200 Метод Вірус PV PNR PV PNR SV SNR TNR TVYR/NR PV PNR PV PNR SV SNR TNR TVYR/NR Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 Flu A H5N1 EC50 EC90 3,6 3,3 4,3 9,7 4,1 5,5 5,5 3,2 3,2 6,5 5,7 0,68 1,7 1,7 CC50 18 2,8 SI50 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >18 >30 >47 >21 >49 >36 >36 >31 >31 >15 >18 >150 >59 >59 Примітка: * - PV - первинний візуальний тест, PNR - первинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, SV - вторинний візуальний тест, SNR - вторинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, TNR - третинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, TVYR/NR - третинний тест на зменшення виходу вірусних часток. Таблиця 3 Чутливість штаму вірусу Flu A H1N1 до синтезованих сполук Сполуки 1.2 Концентрація (μg/mL) 0,1-100 0,1-100 0,032-100 0,032-100 0,064-200 0,064-200 0,064-200 Метод Вірус PV PNR PV PNR SV SNR TNR Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 7 EC50 3,2 3 25 6,8 8,5 5,7 5,7 EC90 CC50 >100 >100 >100 32 >100 >200 >200 SI50 >31 >33 >4 4,7 >24 >35 >35 UA 111855 C2 Рибавірін 0,064-200 0,1-100 0,1-100 0,032-100 0,032-100 0,064-200 0,064-200 0,064-200 0,064-200 TVYR/NR PV PNR PV PNR SV SNR TNR TVYR/NR Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 Flu A H1N1 FluA H1N1 3,2 4,9 5,7 5,9 6,2 6,2 6,2 77 4,9 >200 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >31 >20 >18 >17 >16 >16 >16 Примітка: * - PV - первинний візуальний тест, PNR - первинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, SV - вторинний візуальний тест, SNR - вторинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, TNR - третинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, TVYR/NR - третинний тест на зменшення виходу вірусних часток. Таблиця 4 Чутливість штаму вірусу Flu В до синтезованих сполук Сполуки 1.1 1.9 1.11 2.2 2.3 Рибавірин Концентрація (μg/mL) 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,1-100 0,32-320 0,32-320 Метод Вірус PV PNR PV PNR PV PNR PV PNR PV PNR PV PNR Flu В Flu В Flu В Flu В Flu В Flu В Flu В Flu В Flu В Flu В Flu В Flu В EC50 3,2 3 32 >33 >24 28 32 23 32 30 10 9,3 EC90 CC50 3,2 3,7 32 33 24 35 32 27 32 34 >320 >320 SI50 1 1,2 1 0 0 1,3 1 1,3 1 1,1 >32 >34 Примітка: * - PV - первинний візуальний тест, PNR - первинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, SV - вторинний візуальний тест, SNR - вторинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, TNR - третинний тест підвищення захвату барвника Нейтрального червоного, TVYR/NR - третинний тест на зменшення виходу вірусних часток. 5 Проведенні дослідження вказують на високу противірусну активність окремих синтезованих сполук по відношенню до штамів вірусу грипу, що дозволяє стверджувати про можливість їх застосування при створенні нових лікарських препаратів. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 10 Застосування N-циклоалкілабо N-циклоалкарил-2-[(8-R1-9-R2-10-R3-3-R-2-оксо-2H[1,2,4]триазино[2,3-с]хіназолін-6-іл)тіо]ацетамідів як активної основи лікарських препаратів противірусної дії щодо штамів Influenza Virus типів А та В формули І: 8 UA 111855 C2 1 2 3 5 ,I в яких А позначає адамантил-1, 4-(1-адамантил)феніл, 3-етилбіцикло[2.2.1]гепт-2-ил; R позначає метил-, бензил-, фенетил-, 4-метилфеніл-, 4-етилфеніл, 4-ізопропілфеніл-, 4-третбутилфеніл-, 3,4-диметилфеніл-, 4-фторо-(хлоро-, бромо-)феніл-, R1, R2, R3 незалежно один від одного позначають гідроген, алкіл-, алкокси-, галоген, гідрокси-, нітро-, аміно- та алкіламіно-, алкоксикарбоніл- або гідроксикарбоніл-. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 9