Гемісукцинат 3-окси-7-бром-5-( орто-хлор) феніл1,2-дигідро-3н-1,4-бензді азепін-2-она, що має снотворну, седативну, транквілізуючу активність

Данное изобретение относится к новому производному 1,4-бенздиазепина, в частности к гемисукцианату 3-окси-7-бром-5-(орто-хлор)-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазе-пин-2-она (I) (циназепам): формулы обладающему снотворной, седативной транквилизирующей активностью. Известны производные 1,4-бенздиазепина (феназепам, седуксен), которые наряду с транквилизирующим свойством, обладают снотворным эффектом [1]. Основным недостатком этих препаратов является их слабый и неспецифический снотворный эффект. Производные 1,4-бенздиазепин-2-она-прёпараты нитразепам (эуноктин) и флунитразепам известны в качестве снотворных средств. Однако, нитразепам и флунитразепам способны нарушать физиологическую структур у сна, число циклов сна, обладают недостаточным седэтивным эффектом и имеют значительное число побочных эффектoв (дневная сонливость, ощущение вялости, нарушение координации движений, головокружение, тошнота, тахикардия и др.) [1] Наиболее близким к описываемому соединению по структуре и действию является феназепам соединение формулы: обладающий транквилизирующей и снотворной активностью. Под действием небольших доз феназепама (0,05-0.5 мг/кг) наблюдается значительное увеличение продолжительности сна от гексанала с укорочением времени засыпания и удлинением времени пробуждения. Внутрибрюшинное введение феназепама в дозе 0,05 мг/кг увеличивало продолжительность гексеналового сна в 3,1 раза; в дозе 0,1 мг/кг - в 4,5 раза, а в дозе 2,0 мг/кг - в 10,1 раза [2]. К недостаткам феназепама как снотворного средства относится то, что нарушает стр уктур у сна, уменьшает парадоксальную фазу сна, уменьшает число сонных циклов. Цель изобретения - создание нового, высокоэффективного, не нарушающего структур у сна препарата 1,4бенздиазепи-нового ряда, обладающего также высокой анксиолитической и седативной активностью. Поставленная цель достигается получением производного 1,4-бенздиазепин-2-она-гемисукцината-3-окси7-бром-5-(орто-хлор)фенил -1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазе-пин-2-она (I), который обладает высоким снотворным действием наряду с седативной и транквилизирующей активностью. Соединение I исследовано наанксиоли-тическую, противосудорожную, седативн ую, снотворную активность, токсичность, анти-гипоксические, миорелаксантные, противосудорожные свойства. Пример 1. Гемисукцинат 3-окси-7-6ром-5-(о-хлор)-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-она (I). 251,0 г (0,8 моль) 5-бром-2'-хлор-2-ами-нобенаофенола растворяют в 2,5 л хлороформа, отгоняют азеотроп (~ 300 мл) и при энергичном перемешивании прибавляют из капельной воронки 210 мл (2,32 моль) брома-цетилбромида с такой скоростью, чтобы реакционная смесь равномерно перемешивалась выделяющимся бромистым водородом. После добавления всего бромацетилбромида реакционную смесь кипятят с обратным холодильником 2часа, затем охлаждают, выпавший осадок отфильтровывают, промывают холодным хлороформом (300 мл), а маточный раствор упаривают и выделяют дополнительное количество продукта. Выход 5-бром-2'-хлор-2-бромацетиламинобен-зофенона 840 г. (97,3%). т.пл. 155-160°С. В 3,5 л ацетона растворяют 840 г (5,6 моль) йодистого натрия, прибавляют 840 г. (1,95 моль) 5-бром-2'-хлор2-бромацетиламино-бензофенона, полученный раствор кипятят при перемешивании с обратным холодильником 5 часов. Реакционную смесь охлаждают и выливают в 20 л холодной воды, осадок отсасывают, промывают водой и кристаллизуют из 3 л ацетона. Выход 5-бром-2'-хлор-2йодацетиламинобензофенона 834 г (90%), т.пл. 113-117°С. Растворяют 1540 г (12 моль) сернокислого гидроксиламина в 5 л этилового спирта, прибавляют раствор 834 г (1,71 моль)5-бром-2'-хлор-2йодацетиламинобензофенона в 17.5 л этилового спирта и при перемешивании добавляют раствор 500 г едкого натра в 5 л воды. После окончания прибавления щелочи смесь нагревают на кипящей водяной бане 1 час, охлаждают и выливают в 80 л воды. Осадок отсасывают, промывают водой (5 л) и сушат. Получают 5бром-2'-хлор-2-(2-оксиаминоацетил) ами-нобензофенон с выходом 614.5 (92%), т.пл. 165-170°С. Полученное вещество растворяют в 10 л этилового спирта, прибавляют 200 мл 6N соляной кислоты нагревают при кипении 1 час. охлаждают, выливают в 50 л воды, осадок отфильтровывают, промывают водой и кристаллизуют из 9 л этилового спирта. Вы ход 7-бром-5(о-хлор)-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2он-4-оксм 401.5 г (67%) с т.пл. 240-250°С. Растворяют полученную N-окись 7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-она-4-окси 401,5 г (1,1 моль в 1500 мл уксусного ангидрида при нагревании, охлаждают реакционную смесь, осадок отфильтровывают, маточный раствор выливают в 10л воды и выделяют дополнительное количество 3ацетокси-7-бром-5-(о-хлор)фе-нил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-она. Осадок суспендируют в 6 л этилового спирта и при перемешивании добавляют 4 л 4 N едкого натра, реакционную смесь нейтрализуют разбавленной уксусной кислотой (1:3) до pH 5-6 и выливают в 40 л воды, осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат и кристаллизуют из 20 л хлороформа. Получают 221 г (55%) 3-окси-7-бром-5-{охлорфенил)-1,2-дигидро--3Н-1,4-бенздиазепим-2-он ст.пл. 145°С. Помещают в реактор 221 г (0,605 моль) 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро--3Н-1,4-бенздиазепин 2-она 154,9 г (1,55 моль) янтарного ангидрида, 350 мл сухого пиридина и 4,2 л сухого хлороформа и кипятят 2 часа с обратным холодильником. Реакционную смесь охлаждают, промывают два раза водой (по 700 мл), 4 раза по 1 л 2 N соляной кислотой, снова водой до нейтральной реакции. Хлороформный раствор упаривают, к остатку прибавляют 1,8 л горячего этилового спирта, охлаждают, осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают и выделяют дополнительное количество продукта, которые перекристаллизовывают из 3 л толуола с отгонкой азеотропа. Выход гемисукцината 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-ЗН-1,4бенздиазепин- 2-она 180,2 (64%), т.пл. 202-211°С. Мол.масса = 465,70. С19Н14ВrСІN2O5 . Найдено.%: С 49,0; Н 3,05; Вr 17,2; СІ 7.6; N6,1. Вычислено.%: С 49,0; Н 3.0; Вr 17,2; СІ 7,6; N 6.0. ИК-спектр (таблетки КВr) - С = 0-1692, 1702,1745см -1 С = N- 1630см -1, N-H-3470см -1. ОН - 3570 см-1. УФ-спектр: (0,001% раствор в этиловом спирте) имеет три максимума при 213, 234 и 321 нм. Спектр ПМР: (CDCl3):2,82 м (СН2, 4Н), 3,12 м (СН. 1Н), 6.05 с (NH, 1H), 7,13-7,64 м (аромат.колец. Н.7Н), 9,81 с(СООН, 1Н)м.д. Пример 2. Гемисукцинат 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-она (I). Растворяют 225 г (0,72 моль) 5-бром-2-хлор-2-аминобензофенона в 1,5 л хлороформа, отгоняют азеотроп (~ 500 мл), охлаждают, прибавляют 125 г (0,96 моль) гидрохлорида хлорангидрида глицирина и при перемешивании кипятят 1 час, охлаждают и нейтрализуют 25% гидроокисью аммония до pH 8. Хлороформный раствор промывают водой 3 раза по 200 мл до pH 7, хлороформ отгоняют, добавляют 0,8 л толуола и отгоняют азеотроп, остаток кристаллизуют из 3 л толуола. Получают 180 г (71%) 7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4 -бенздиазепин-2-она с т.пл. 220°С. В реактор загружают 180 г (0,51 моль) 7-бром-5-(о-хлор)-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4 -бенздиазепин-2-она, прибавляют 4 л ледяной уксусной кислоты и 0,58 л 30% перекиси водорода, раствор нагревают до 70°С и выдерживают при перемешивании и этой температуре 3 часа, охлаждают, выливают в 20 л воды со льдом, осадок отфильтровывают, промывают водой до нейтральной реакции, сушат и кристаллизуют из 1,5 л диоксана. Выход 7-бром-5-(о-хлор)-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-он-4-окси 148 г (79%), т.пл. 256°С. В реактор загружают 7-бром-5-(о-хлор)-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2--он- 4-оксид и 600 мл уксусного ангидрида и нагревают до полного растворения N-окиси, охлаждают, выливают в 20 л холодной воды, осадок отфильтровывают, промывают водой до нейтральной реакции, суспендируют в 3 л этилового спирта, прибавляют при перемешивании 1,5 л 4 N едкого натра, затем реакционную смесь нейтрализуют разбавленной уксусной кислотой до pH 5-6, выливают в 15 л холодной воды, осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из 10 л хлороформа. Выход 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4бенздиазепин-2-она 104 г (70%), т.пл. 145°С. С15Н10ВrСІN2 O2. Помещают в реактор 285 г (0,78 моль) 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро--3Н-1,4-бенздиазепин2-она, 154,7 г (1,54 моль) янтарного ангидрида, 175 мл сухого пиридина и 2,1 л сухого хлороформа и кипятят 2 часа с обратным холодильником. Реакционную смесь охлаждают, промывают два раза водой (по 30 мл, 4 раза по 0,5 л 2 N соляной кислотой, снова водой до нейтральной реакции. Хлороформный раствор упаривают, к остатку прибавляют 0,9 л горячего этилового спирта, охлаждают, осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают и выделяют дополнительное количество продукта, которое перекристаллизовывают из 3 л толуола с отгонкой азеотропа. Выход гемисукцината 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4бенздиазепин-2-она 247 г (63%), т.пл. 202-211°С. Мол.масса 465,70. С19Н14ВrСІN2O 5. Найдено,%: С 49,3; Н 3,1; Вr 16,9; CI 7,8; N6.0. Вычислено,%: С 49,0; Н 3,0; Вr 17,2; CI 7.6; N 6.0. ИК-спектр: (таблетки КВr); С=0 1692, 1705, 1746 см -1. C=N- 1630 см, N-H - 3470 см-1. ОН-3570 см-1. УФ-спектр (0,001% раствор в этиловом спирте): 213, 234, 321 нм. Спектр ПМР (CDCI3): 2,82 м (СНr, 4Н). 3,12 м (СН, 1Н), 6,05 с (NH. 1H), 7,15-7,64 м (ароматич.колец. Н, 7Н), 8,81 с (СООН, 1Н) м.д. Образец препарата идентичен образцу, описанному в примере 1. Острая токсичность циназепама. Острая токсичность циназепама изучалась в опытах на мышах при внутрибрюшинном введении препарата. Во время эксперимента животные содержались в индивидуальных прозрачных домиках со свободным доступом к пище и воде при температуре окружающей среды 22°С. Исследования проводились в сравнении с феназепамом и нитразепамом и показали, что. ЛД50 (доза вызывающая гибель 50% животных) составляет для і циназепама-615 (439-861) мг/кг; феназепама - 620 (410-930) мг/кг; Противосудорожные свойства циназепама. Противосудорожный эффект определяли в опытах на мышах по антагонизму с судорожным действием коразола - через 30 минут после внутрибрюшинного введения препарата, подкожно вводили коразол в дозе 130 мг/кг (в дозе вызывающей судороги и гибель 95% интактных животных). Затем в течение часа наблюдали развитие судорог и гибель животных. Вычислялись ЭД50-доза, вызывающая защитный эффект у 50% животных. Опыты проводились в сравнении с феназепамом. ЭДбо: циназепам 0,07 (0.036-0,13) мг/кг; феназепам 0,037 (0,026-0,053) мг/кг. Установлено, что ценазепам, начиная с дозы 0,01 мг/кг вызывал у мышей защитный эффект, характеризующийся предупреждением у 33% животных тонический экстензии и гибели, вызванных коразолом. При увеличении дозы до 1 мг/кг противосудорожное действие циназепама возрастает до защиты всех животных. Эффективность циназепама сопоставима с эффектом феназепама. Миорелаксантные свойства циназепама, Миорелаксантные свойства соединений оценивали по нарушению координации движений, походки и равновесия у мышей по тесту вращающегося стержня. С этой целью животных помещали на стержень диаметром 2 см, вращающийся со скоростью 5 обор/мин. Неспособность животных под влиянием веществ удерживать равновесие на стержне в течение двух минут рассматривали как проявление нарушения координации движений. Установлено, что все контрольные животные удерживались на вращающемся стержне. ЭДбо для исследованных веществ: циназепам - 2,2 (1,04 - 4,62) мг/кг; феназепам - 2,1 (1,50 - 2.94) мг/кг; Таким образом, по миорелаксантным свойствам циназепам, нитразепам и феназепам-идентичны. Противогипоксические свойства циназепама. Противогипоксическое действие веществ изучали на модели гиперкапнической гипоксии. С этой целью мышей помещали в ванны объемом 200 мл с герметически закупоривающимися крышками. Регистрировали продолжительность жизни мышей в этих условиях (табл.1.). Установлено, что циназепам в дозе 1 мг/кг увеличивал продолжительность жизни животных в условиях гермообъема на 20%, а в дозах 5 мг/кг, и особенно 10 мг/кг. статистически значимо увеличивал выживаемость мышей на 26 и 31% соответственно. В дозе 10 мг/кг циназепам. подобно феназепаму, не уступал по эффекту ноотропному препарату пирацетаму, а в спектре фармакологической активности которого противогипоксический эффект является одним из основных проявлений действия. Седативное действие циназепама. а) Поведение инбредных мышей в открытом поле. Эксперименты были выполнены на мышах-самцах линии ВАТ В/с и С 57 BL/b (питомник "Столбовая" АМН СССР), весом 18-20 г. Животных содержали на обычной диете, при 12-часовом световом режиме. Эмоциональный стресс вызывали помещением животного в "открытое поле", которое представляет собой равномерную освещенную площадку, имеющую форму круга, с поверхностью, разделенной тремя концентрическими окружностями и секторами. Поверхность освещается четырьмя электрическими лампами по 60 Вт каждая, прикрепленными к симметрично расположенным кронштейном на высоте 1 м. Перед помещением в "открытое поле" животных выдерживали в темной камере 1 мин. Затем животных помещали в поле, где в течение трех минут регистрировались количество пересеченных квадратов на периферии (периферическая активность), в центре (центральная активность) и число стоек (вертикальная). Препараты вводили в виде водной суспензии с твином-80 за 30 мин до начала эксперимента внутрибрюшинно. Контрольным животным вводили дистиллированную воду с твином-80. Растворы вводили из расчета 0,1 мл на 10 г веса. Установлено, что у мышей с пассивной эмоционально-стрессовой реакцией (BAL В/с) циназепам снижал двигательную активность (ДА) начиная с дозы 0,05 мг/кг (табл.2). У животных, активно реагирующи х в условиях эмоционального стресса (C57BL/b) циназепам начинал снижать ДА уже в дозе 0.025. мг/кг (табл.3). В обоих случаях седативное действие циназепама увеличивалось с увеличением дозы препарата. 3-окси-7-бром-5-(о-хлорфенил)-1,2-дигидро--3Н-1,4-бенздиазепин-2-он с т.пл. 145°С. Помещают в реактор 221 г (0,605 моль) 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро--3Н-1,4-бенздиазепин2-она 154,9 г(1,55 моль) янтарного ангидрида, 350 мл сухого пиридина и 4,2 л сухого хлороформа и кипятят 2 часа с обратным холодильником. Реакционную смесь охлаждают, промывают два раза водой (по 700 мл), 4 раза по 1 л 2 N соляной кислотой, снова водой до нейтральной реакции. Хлороформный раствор упаривают, к остатку прибавляют 1,8 л горячего этилового спирта, охлаждают, осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают и выделяют дополнительное количество продукта, которые перекристаллизовывают из 3 л толуола с отгонкой азеотропа. Выход гемисукцината 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фе-нил-1.2-дигидро-3Н-1,4бенздиазепин- 2-она 180,2 (64%), т.пл. 202-21 ГС. Мол.масса = 465,70. CigHi4BrCIN2O5. Найдено.%: С 49.0; Н 3,05; Вr 17,2; CI 7,6; N6,1. Вычислено.%: С 49.0; Н 3,0: Вr 17,2; CI 7,6; N 6.0. ИК-спектр: (таблетки КВr) - С = 0-1692, 1702. 1745см -1. ON- 1630см -1, N-H-3470 см -1, ОН - 3570 см -1. УФ-спектр: (0,001% раствор в этиловом спирте) имеет три максимума при 213. 234 и 321 нм. Спектр ПМР: (CDCl3):2,82 м (СН2, 4Н), 3,12 м (СН, 1Н), 6,05 с (NH, 1H), 7,13-7,64 м (аромат.колец. Н.7Н), 9,81 с(СООН, 1Н)м.д. Пример 2. Гемисукцинат 3-окси-7-6ром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-она (I). Растворяют 225 г (0,72 моль) 5-бром-2-хлор-2-аминобензофенона в 1,5 л хлороформа, отгоняют азеотроп (~ 500 мл), охлаждают, прибавляют 125 г (0,96 моль) гидрохлорида хлорангидрида глицирина и при перемешивании кипятят 1 час, охлаждают и нейтрализуют 25% гидроокисью аммония до pH 8. Хлороформный раствор промывают водой 3 раза по 200 мл до pH 7, хлороформ отгоняют, добавляют 0,8 л толуола и отгоняют азеотроп, остаток кристаллизуют из 3 л толуола. Получают 180 г (71%) 7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4 -бенздиазепин-2-она с т.пл. 220°С. В реактор загружают 180 г (0,51 моль) 7-бром-5-(о-хлор)-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4 -бенздиазепин-2-она, прибавляют 4 л ледяной уксусной кислоты и 0,58 л 30% перекиси водорода, раствор нагревают до 70°С и выдерживают при перемешивании и этой температуре 3 часа, охлаждают, выливают в 20 л воды со льдом, осадок отфильтровывают, промывают водой до нейтральной реакции, сушат и кристаллизуют из 1,5 л диоксана. Выход 7-бром-5-(о-хлор)-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2-он-4-окси 148 г (79%), т.пл. 256°С. В реактор загружают 7-бром-5-(о-хлор)-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бенздиазепин-2--он- 4-оксид и 600 мл уксусного ангидрида и нагревают до полного растворения N-окиси, охлаждают, выливают в 20 л холодной воды, осадок отфильтровывают, промывают водой до нейтральной ракции, суспендируют в 3 л этилового спирта, прибавляют при перемешивании 1,5 л 4 N едкого натра, затем реакционную смесь нейтрализуют разбавленной уксусной кислотой до pH 5-6, выливают в 15 л холодной воды, осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из 10 л хлороформа. Выход 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4бенздиазепин-2-она 104 г (70%), т.пл. 145°С. С15Н10ВrСІN2 O2. Помещают в реактор 285 г (0,78 моль) 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро--3Н-1,4-бенздиазепин 2-она, 154,7 г (1,54 моль) янтарного ангидрида, 175 мл сухого пиридина и 2,1 л сухого хлороформа и кипятят 2 часа с обратным холодильником. Реакционную смесь охлаждают, промывают два раза водой (по 30 мл, 4 раза по 0,5 л 2 N соляной кислотой, снова водой до нейтральной реакции. Хлороформный раствор упаривают, к остатку прибавляют 0,9 л горячего этилового спирта, охлаждают, осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают и выделяют дополнительное количество продукта, которое перекристаллизовывают из 3 л толуола с отгонкой азеотропа. Выход гемисукцината 3-окси-7-бром-5-(о-хлор)фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4бенздиазепин-2-она 247 г (63%), т.пл. 202-211°С. Мол.масса 465,70. С19Н14ВrСІN2O 5. Найдено, %: С 49,3; Н 3,1; Вr 16,9; CI 7,8; N6.0. Вычислено,%: С 49,0; Н 3,0; Вr 17,2; CI 7.6; N 6.0. ИК-спектр: (таблетки КВr): С=0 1692, 1705, 1746 см -1, C=N- 1630 см-1, N-H - 3470 см-1. ОН-3570 см-1. УФ-спектр (0,001% раствор в этиловом спирте): 213, 234, 321 нм. Спектр ПМР (CDCI3): 2,82 м (СН2, 4Н), 3,12 м (СН, 1Н), 6,05 с (NH. 1H), 7,15-7,64 м (ароматич.колец. Н, 7Н), 8.81 с (СООН, 1Н) м.д. Образец препарата идентичен образцу, описанному в примере 1. Острая токсичность циназепама. Острая токсичность циназепама изучалась в опытах на мышах при внутрибрюшинном введении препарата. Во время эксперимента животные содержались в индивидуальных прозрачных домиках со свободным доступом к пище и воде при температуре окружающей среды 22°С. Исследования проводились в сравнении с феназепамом и нитразепамом и показали, что ЛД50 (доза вызывающая гибель 50% животных) составляет для циназепама-615 (439-861) мг/кг; феназепама - 620 (410-930) мг/кг; Противосудорожные свойства циназепама. Противосудорожный эффект определяли в опытах на мышах по антагонизму с судорожным действием коразола - через 30 минут после внутрибрюшинного введения препарата, подкожно вводили коразол в дозе 130 мг/кг (в дозе вызывающей судороги и гибель 95% интактных животных). Затем в течение часа наблюдали развитие судорог и гибель животных. Вычислялись ЭД50-доза, вызывающая защитный эффект у 50% животных. Опыты проводились в сравнении с феназепамом. ЭДбо: циназёпам 0,07 (0,036-0.13) мг/кг; феназепам 0,037 (0,026-0.053) мг/кг. Установлено, что ценазепам, начиная с дозы 0,01 мг/кг вызывал у мышей защитный эффект, характеризующийся предупреждением у 33% животных тонический экстензии и гибели, вызванных коразолом. При увеличении дозы до 1 мг/кг противосудорожное действие циназепама возрастает до защиты всех животных. Эффективность циназепама сопоставима с эффектом феназепама. Миорелаксантные свойства циназепама.. Миорелаксантные свойства соединений оценивали по нарушению координации движений, походки и равновесия у мышей по тесту вращающегося стержня. С этой целью животных помещали на стержень диаметром 2 см, вращающийся со скоростью 5 обор/мин. Неспособность животных под влиянием веществ удерживать равновесие на стержне в течение двух минут рассматривали как проявление нарушения координации движений. Установлено, что все контрольные животные удерживались на вращающемся стержне. ЭД50 для исследованных веществ: циназепам - 2,2 (1,04 - 4,-62) мг/кг; феназепам - 2,1 (1,50 - 2,94) мг/кг; Таким образом, по миорелаксантным свойствам циназепам, нитразепам и феназелам-идентичны. Противогипоксические свойства циназепама. Противогипоксическое действие веществ изучали на модели гиперкапнической гипоксии. С этой целью мышей помещали в ванны объемом 200 мл с герметически закупоривающимися крышками. Регистрировали продолжительность жизни мышей в этих условиях (табл.1.). Установлено, что циназепам в дозе 1 мг/кг увеличивал продолжительность жизни животных в условиях гермообьема на 20%, а в дозах 5 мг/кг, и особенно 10 мг/кг. статистически значимо увеличивал выживаемость мышей на 26 и 31% соответственно. В дозе 10 мг/кг циназепам. подобно феназепаму, не уступал по эффекту ноотропному препарату пирацетаму, а в спектре фармакологической активности которого противогипоксический эффект является одним из основных проявлений действия. Седативное действие циназепама. а) Поведение инбредных мышей в открытом поле. Эксперименты были выполнены на мышах-самцах линии ВАТ В/с и С 57 BL/b (питомник "Столбовая" АМН СССР), весом 18-20 г. Животных содержали на обычной диете, при 12-часовом световом режиме. Эмоциональный стресс вызывали помещением животного в "открытое поле", которое представляет собой равномерную освещенную площадку, имеющую форму круга, с поверхностью, разделенной тремя концентрическими окружностями и секторами. Поверхность освещается четырьмя электрическими лампами по 60 Вт каждая, прикрепленными к симметрично расположенным кронштейном на высоте 1 м. Перед помещением в "открытое поле" животных выдерживали в темной камере 1 мин. Затем животных помещали в поле, где в течение трех минут регистрировались количество пересеченных квадратов на периферии (периферическая активность), в центре (центральная активность) и число стоек (вертикальная). Препараты вводили в виде водной суспензии с твином-80 за 30 мин до начала эксперимента внутрибрюшинно. Контрольным животным вводили дистиллированную воду с твином-80. Растворы вводили из расчета 0,1 мл на 10 г веса. Установлено, что у мышей с пассивной эмоционально-стрессовой реакцией (BAL В /с) циназепам снижал двигательную активность (ДА) начиная с дозы 0,05 мг/кг (табл.2). У животных, активно реагирующи х в условиях эмоционального стресса (C57BL/b) циназепам начинал снижать ДА уже в дозе 0,025, мг/кг (табл.3). В обоих случаях седативное действие циназепама увеличивалось с увеличением дозы препарата. Поведенческие эффекты циназепама сравнивали с известным транквилизатором феназепамом. Показано, что фенэепам в дозе 0,05 мг/кг Стимулировал исследовательскую активность у мышей BAL В/с, а в дозе 0,1 мг/кг снижал ее уровень (табл.4). У животных линии С57 BL/b все испытанные дозы феназепама (0,05,0,075 и 0,1 мг/кг) снижали уровень ДА (табл.5). Полученные данные указывают на то, что циназепам обладает более выраженным седативным эффектом в сравнении с феназепамом. б) Ориентировочный эффект по тесту залезания на сетку. Способность препаратов угнетать ориентировочные реакции животных изучали в опытах на мышах с использованием теста залезания на сетку. Регистрировали количество мышей, поднявшихся в течение 5 минут по проволочной сетке, натянутой под углом 60°, в верхний затемненный отсек камеры. В контрольной группе животных наблюдалось 100% залезание в темную камеру. Установлено, что циназепам существенно угнетал ориентировочное поведение мышей в тесте залезания на сетку. ЭД50 по этому тесту: циназепам - 0,07 (0,03 - 0,16) мг/кг; феназепам - 1,05 (0,4-3,73) мг/кг. Таким образом, циназепам почти на порядок превосходит по активности феназепам, угнетая ориентировочное поведение животных. Анксиолитическое действие циназепама. Анксиолитическое действие препаратов изучали на модели конфликтного поведения, которая основана на столкновении питьевой мотивации и страха перед наказанием (удар током при попытке взятия воды). Исследование проводили на беспородных белых крысах-самцах массой 200-250 г, получавших в избытке стандартной сухой корм. Опыт продолжался 3 дня. Вначале животных подвергали односуточной полной депривации питья, а на вторые сутки их на 5 минут помещали в экспериментальную камеру с поилкой для выработки навыка взятия воды. На третьи сутки крыс помещали в ту же камеру, а через 10 сек. после первого взятия воды на поилку подавали ток силой 1 мА так, что каждое взятие воды сопровождалось наказанием. Мерой анксиолитического действия препарата являлось число наказуемых взятий воды за 10 минут наблюдения. Циназепам в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг вводили внутрибрюшинно за 30 минут до помещения животных в экспериментальную камеру на третий день опыта. Циназепам и феназепам использовали в виде суспензий, приготовленных с твином-80 непосредственно перед введением (табл.6). Из данных табл.6 следуе т, что циназепам оказывает ярко выраженное анксиолитическое действие, которое проявляется в резком увеличении количества взятий воды в сравнении с контролем, стабилизации двигательной активности и вегетативных показателей. Установлено, что по антиконфликтному действию циназепам превосходит феназепам. Влияние циназепама на связывание S35-третбутилбициклофосфат-ионата (S35TBPS) с мембранной фракцией мозга. Седативные свойства бенздиазепинов коррелируют с их способностью вытеснять 35ТВР из мест связывания с мембранной фракцией мозга. Нами оценена способность циназепама вытеснять S35TBPS из фракцией мозга животных мышей-самцов линии BAI В/с (питомник "Столбовая" АМН СССР) весом 8-10 г. Животных содержали на обычной диете, при 12 часовом режиме. У мышей после их декапитации быстро на холоду извлекали мозг, отделяли мозг и мозжечек. Оставшуюся часть гомогенизировали в 25 мл трис-цитратного буфера (50 мм, pH 7,4), центрифугировали при 45000 в течение 25 мин на центрифуге I 5-50(ротор 42,1, Вестап, США). Осадок ресуспендировали повторной гомогенезацией в том же объеме буфера, затем вновь центрифугировали. Процедуру отмывки проводили трижды. Конечный осадок ресуспендировали в трис-HCI буфере. В качестве радиолиганда использовали S35-третбутилциклофосфоротионат (ТБФТ) (New England Nuclear, США) (удельная активность 87,7 Ku/мМ в конечной концентрации 2 нМ, при содержании белка 400-600 мкг, конечный объем инкубационной смеси - 1 мл. Неспецифическое связывание определяли в присутствии пикротоксина (конечная концентрация (100 мкМ), связывание проводили при концентрации NaCI в среде 200 мМ, в течение 90 мин при 21°С. Из маточных растворов феназепама и циназепама, приготовленных в 96% этиловом спирте, готовили разведения, в которых в среде инкубации конечная концентрация этилового спирта не превышала 1%. Реакцию связывания останавливали быстрой фильтрацией через СГ/В фильтры (Whatman, Англия) с последующей трехкратной промывкой холодным буферным раствором. Фильтры помещали в сцинтиляционную жидкость ЖС-8. Радиоактивность измеряли на счетчике 1-1000 (Вестап, США). Результаты влияния циназепама и феназепама на связывание S35-ТБФТ с мембранами мозга мышей линии BAL В/с представлены в таблице 7. Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о том, что циназепам в большей степени снижает связывание S35 -ТБФТ с мембранами мозга животных, т.е. обладает большим седативным и снотворным действиями. Снотворное действие циназепама. Исследование снотворного действия проводили на беспородных крысах-самцах массой 200-250 г. в условиях хронических опытов. Животных оперировали, стереотак-сически вживляя им хронические электроды из нихромовой проволоки даметром 0,2мм в следующие области мозга: сенсомоторная кора (с координатами А=1, 1 = 2, Н = 1), дорсальный гиппокамп (с координатами А = 4, 1 - 2, Н = 3,5) и группу мышц шеи. Электроэнцефалографическую регистрацию (ЭЭГ) цикла бодрствование-сон начинали через 7 дней после операции, адаптируя, в течение 5 дней до начала ЭЭГ к экспериментальным условиям, помещая животных в индивидуальные камеры из плексиглаза (20x15x25 см) в одно и то же время суток (12-16 часов). Регистрацию цикла бодрствование-сон на 17 канальном электроэнцефалографе "Nikan konden" со скоростью движения бумаги 0,5 см/сек. При обработке полученной информации, учитывали следующие параметры цикла бодрствование-сон: а) общее время поведенческого бодрствования; б) общую длительность сна (ОДС); в) абсолютное время длительности медленноволнового сна (ДМС); г) абсолютное времядлительности парадоксального сна (ДПС); д) число отдельных эпизодов парадоксального сна за весь период регистрации (ЭПС); е) латентный период первого эпизода парадоксального сна (ЛП и ПС), Циназепам суспендировали с использованием твин-80 в физиологическом растворе и вводили за 30-40 минут до начала эксперимента внутрибрюшинно, контрольным животным вводили равные объемы физиологического раствора. Эффект циназепама изучен на 30 крысах. В качестве препаратов сравнения использовали отечественный транквилизатор со снотворным действием феназепам, снотворное средство бенздиа-зепиновой природы нитразепам и наиболее мощный из известных снотворных препаратов флунитразепам. Последний широко применяется за рубежом. Результаты исследований представлены в таблице 8. По данным Н.И.Андреевой (Хим.-фарм.журн., 1980, Ns 12, с.107-112)в дозах В и 1 мг/кг общая длительность гексаналового сна составляла 152,6 и 121 мин. Под влиянием циназепама в дозе 1 мг/кг через 5-10 минут после введения животные начинают зевать, но при этом не наблюдается существенных нарушений координации движений. Препарат сокращает время засыпания, увеличивает общее время сна и длительность его медленноволновой и парадоксальной фаз. Он не оказывает влияния на количество эпизодов парадоксального сна, а также способствует уменьшению латентного периода первого эпизода парадоксального сна по сравнению с контролем. Циназепам в дозе 1 мг/кг оказывает существенное влияние на параметры сна крыс, причем особенностью снотворного действия препарата, в отличие от др уги х снотворных из групп бенздиазепинов (феназепам, нитразепам, флунитразепам, табл.8) является его способность увеличивать длительность не только медленноволнового. но и парадоксального сна при неизменном количестве его эпизодов, что делает его снотворный эффект более физиологичным. То есть, циназепам обладает способностью активировать системы, участвующие в поддержании как медленноволнового, так и парадоксального сна. В опытах на животных показано, что соединение 1 обладает оригинальным сочетанием свойств снотворного наряду с седативным, транквилизирующим, которые по своей выраженности превосходят все известные препараты этого типа. Преимуществом нового соединения является то, что он в отличие от всех известных снотворных препаратов, обладая мощным снотворным эффектом, не нарушая структуры сна, удлиняет парадоксальный сон, проявляет выраженные седативные и транквизирующие эффекты без сопутствующе го побочного миорелаксантного действия. Таким образом, новое соединение (циназепам) имеет преимущества перед известными препаратами этого типа действия, сочетая мощные снотворный, седативный и транквилизирующий эффекты без сопутствующе го побочного миорелаксантного действия. Существенным преимуществом циназепама является диссоциация седативного и миорелаксирующего действия, так как в отличие от известных транквилизаторов, миорелаксантный эффект циназепама развивается при использовании более высоких доз, чем седативные.