Діюча речовина медичних та фармакологічних засобів з активністю антагоніста ексайторних амінокислот

Применение флюпиртина в качестве действующего вещества медицинских и фармакологических средств с активностью антагониста эксайторных аминокислот при лечении церебральной ишемии, дегенеративных и ишемических процессов в сетчатке, травм головного мозга, синдромов повышенной церебральной возбудимости, нейродегенеративных синдромов периферической нервной системы, болезни Альцгеймера, хореи Гентингтона, множественного склероза, амиотрофического латерального склероза, нейродегенеративных расстройств инфекционного генеза и метаболическо-токсических нейродегенеративных расстройств перационном болевом синдроме, переломах, ожогах, эрозиях, болях при дисменореє, купирования зубной боли Показания и используемые дозировки даны в профессиональной информации (Катадолон®, моноанальгетик, научный бюллетень, второе переработанное издание 04/1992, издано ASTAMedicaAG) Комбинация препаратов флюпиртина с нестероидными противовоспалительными препаратами описана в ЕР 189788 В таких назначениях польза флюпиртина заключается не только в обезболивающих свойствах, но также и в действии в качестве мышечного релаксанта, как описано в опубликованной заявке ФРГ 4122166 4 По химическому строению флюпиртин представляет собой малеат 2-амино-З-этил-этоксикарбониламино-6[5-фторбензил]-аминопиридин Синтез Флюпиртина и его фармацевтических производных солей описан в ЕР 160865 и 199951 Флюпиртина малеат имеет химическую структуру, отличную от других известных ранее анальгетиков Флюпиртин - бесцветный кристаллический порошок, практически без запаха, с легким сладкогорьким вкусом Обезболивающее действие флюпиртина было продемонстрировано во время экспериментального моделирования боли у животных на крысах, мышах и собаках, путем механи О ю ГО ГО 43351 ческого (тест Хаффнера), термического (тест с горячей пластинкой), электрического (электроболевой тест, раздражение пульпы зуба), химического (тест на судорогу) и химико-механического раздражения (тест Рэнделла-Селито) Более полная информация о действии и побочных эффектах моноанальгетика флюпиртина дана в научном бюллетене (Катадолон®, моноанальгетик, научный бюллетень, второе дополненное издание 04/1992 издано ASTA, Medica AG) Фармакологические исследования показали, что флюпиргин действует как на уровне спинного так и головного мозга Эксперименты с антагонистами показали, что обезболивающее действие флюпиртина не может быть объяснено блокадой серотонинергических и опиоидных рецепторов Наиболее вероятно действие флюпиртина объясняется его влиянием на нисходящие норадренергические пути, ответственные за болевые ощущения (I Szelenyi В Nickel, Н О Borbe К Вшпе Вг, J Pharmacol (1989), 97, 835-842), несмотря на то, что флюпиртин не имеет сродства к ои или (Х2-адренергическим рецепторам (В Nickel et al, Br J Pharmacol (1989)97, 835) Кроме того, отсутствие сродства флюпиртина к опиатным рецепторам головного мозга крыс также говорит против опиатоподобного механизма действия препарата Таким образом, подобный механизм действия флюпиртина можно исключить Толерантность и зависимость к флюпиртину также не наблюдались Во время изучения на крысах миорелаксантного действия флюпиртина неожиданно было обнаружено, что это действие блокируется возбудительной аминокислотой N-метил-О-аспартатом (NMDA) Предположительно это означает, что действие флюпиртина, по крайней мере частично, достигается вследствие подавления NMDA-onocредованных стимуляций Это открывает возможности для использования флюпиртина, как антагониста возбудительных аминокислот при лечении заболеваний, вызываемых возбудительными аминокислотами, таких как эпилепсия, церебральная ишемия, нейродегенеративные заболевания Описание экспериментов Эксперименты in vivo проводились на крысах Самцы крысы Вистара (вес 250-280 г) получали анестезию уретаном (400 мг/кг) и а-хоралозой (80 мг/кг) Nervus tibiahs стимулировался чрескожными игольчатыми электродами для упреждения Н-рефлекса (индивидуальные квадратные импульсы длительностью 0,2 мсек со стимулирующей силой, вдвое превышающей пороговую, вызывающую рефлекс) Электромиографические упреждения записывались с мышц подошвы ног с использованием пары кожных электродов Клиппеля Электрическая стимуляция Nervus tibiahs малой стимулирующей силы вызывается рефлекторной реакцией, сходной с рефлексом Хофмана (Н)-рефлекс) у человека, который приписывают моносинаптическому возбуждению спинальных амотонейронов, преимущественно мышечными веретенообразными афферентными нейронами С увеличением силы электростимуляции Н-рефлексу предшествует вторая EMG волна, называемой также М-волна с более коротким латентным периодом, которую можно объяснить прямой сти муляцией аксонов альфа-мотонейронов Десять последовательных мышечных сокращений (рефлексов) усреднили с помощью компьютера как до (контроль) так и после внутрибрюшинного или интратекального введения растворителя или других веществ Размер М-волны (и соответственно Нрефлекс) определяли измерением амплитуды между двумя пиками Для получения сгибательного рефлекса мышцы лапки животного раздражались двумя тонкими подкожными игольчатыми электродами (5 последовательных квадратных импульсов со стимулирующей частотой 500 Гц по 0,2 мсек длительностью каждый, со стимулирующей силой в три раза превышающей пороговую, вызывающую рефлекс) Электромиографические (EMG) упреждения записывались при помощи пары тонких игольчатых электродов, отведенных от N tibiahs Семь последовательных EMG реакций были выделены и усреднены с помощью компьютера PC как до, так и после внутрибрюшинного или интратекального введения растворителя или веществ Величину сгибательного рефлекса определяли по площади, заключенной между рефлекторными кривыми и линией основания Во всех рефлекторных опытах измеряемые величины, полученные после введения растворителя или других веществ, давались в процентах относительно соответствующих контрольных величин, измеренных до введения Статистический анализ выполнен с использованием U-теста МаннУитни Для интратекальных инъекций катетеризация крыс производилась при помощи полиэтиленовых катетеров (РЕ 10) Атланто-окципитальная мембрана была обнажена и осторожно надрезана в области срединной линии Катетер был помещен в спинномозговой канал и тонким концом введен в область поясничного отдела Инъекция растворителя или веществ производилась в объеме 5 ці со скоростью 1 ці в мин Для того, чтобы быть уверенным, что все количество вещества попало в спинномозговой канал, через катетер затем вводили еще 10 ці растворителя После окончания эксперимента точное местонахождение кончика катетера определялось путем введения 2% синьки Эванса Флюпиртин (ASTA Medica, AG, Germany), иохимбина гидрохлорид (Sigma Chemicals, USA) и празозин (RBI, USA) растворялись в физиологическом растворе NMDA (Sigma), бикукуллина метиодид (Sigma), 6,7-динитрохиноксалин-2,3-дион (DNQX) (RBI, USA) и АТРА (любезно предоставленный др Турски, Шеринг, Германия) растворялись в небольшом количестве 1М NaOH, объем дополнен солевым раствором Факлофен (Tocns, "Great Britain) растворялся 0,2 N HCI, окончательный объем также достигался добавлением солевого раствора Флюмаженил (любезно предоставленный проф Haefely, Hoffmann-La Roche, Швейцария) растворялся в Твине 80 и дистиллированной воде рН всех растворов доводили до 1,2-1,А Во время внутрибрюшинного введения растворитель не влиял ни на моносинагтгический Н-рефлекс, ни на полисинаптический сгибательный рефлекс Однако, системное применение флюпиртина в дозах от 43351 1 до 10 мг на кг массы тела снижало флексорный (сгибательный) рефлекс в зависимости от введенной дозы (Фиг 1-3) Эффект от введения флюпиртина наблюдался уже в первые 10 мин и достигал максимума через 10-30 мин после введения Длительность действия составляла 20-60 мин в зависимости от дозы Напротив, на моносинаптический Н-рефлекс флюпиртин не оказал воздействия Даже в самой высокой дозе (10 мг на кг) , которая снижает флексорный рефлекс на 50% от начального уровня, на Н-рефлекс флюпиртин не повлиял (Фиг 3) Различное влияние флюпиргина на флексорный и Н-рефлекс было подтверждено при интратекальном введении препарата В дозах 33-330 нмоль, флюпиртин снижает флексорный рефлекс после интратекального введения без каких-либо изменений Н-рефлекса (Фиг 4) Этот эффект также появлялся в течение 10 мин и длился 40-60 мин в зависимости от выбранной дозы (Фиг 5) Интратекальное введение растворителя не влияет ни на флексорный рефлекс ни на Н-рефлекс При введении как растворителя, так и флюпиртина Мволна не изменялась Это свидетельствует об устойчивости выбранного препарата Данные, полученные во время фармакологических исследований на животных, подтверждены также при изучении воздействия флюпиртина на человека У людей флюпиртин также снижает флексорные рефлексы, не влияя на Н-рефлекс Для того, чтобы узнать, участвуют ли в миорелаксирующем действии флюпиртина изменения в передаче GABA (у -аминомасляной кислоты), норадреналина или аминокислот, выделяющихся при возбуждении нервных окончаний, мы исследовали влияние на миорелаксирующий эффект флюпиртина различных веществ, действующих на рецепторы как агонисты или антагонисты Депрессорный эффект от интратекального введения 165 нмоль флюпиртина оставался неизменным при совместном введении GABAA-антагониста бикукулина (1 нмоль) и GABAB-антагониста Факлофена (100 нмоль) (Фиг 6), си-антагониста празозина (10 нмоль) (Фиг 7), или аминокислоты АТРА (а-амино3-гидрокси-5-тертил-4-изоксазол-пропионовая кислота) (0,1 пМ) (Фиг 8), которая представляет собой сильный агонист на кискулатном рецепторе Эффект от флюпиртина оставался неизменным при внутрибрюшинном введении бензодиазепинового антагониста флюмаженила (5 мг/кг) Флюмаженил назначался системно, поскольку препарат нерастворим в воде и не может вводиться интратекально В противоположность этому, смешанный ои-а2-антагонист иохимбин (10 нмоль) (Фиг 7) и аминокислота NMDA (0,1 нмоль) (Фиг 8) предотвращали при совместном введении с флюпиртином его воздействие на флексорный рефлекс Бикукулин, празозин, факлофен, АТРА, флюмаженил, иохимбин и NMDA вводились в дозах, которые, сами по себе, не влияют на силу рефлекса (Фиг 6-9), однако достаточных, чтобы блокировать депрессорное действие GABAA-агониста мусцимола, сі2-агониста тизанидина и NMDA-антагониста 2-амино-фосфоногегтганоата (АР7) и мемантина (Schwarz et al, 1992) на спинномозговые рефлексы Эксперименты последовательно показы вают, что полисинаптические флексорные рефлексы снижаются в зависимости от дозы флюпиртина как после интратекального (33-330 нмоль), так и после внутрибрюшинного (1-10 мг/кг) введения препарата, при этом моносинаптический Нрефлекс остается неизменным При совместном введении возбудительной аминокислоты N-метилD-аспартата (NMDA) и флюпиртина эффект от последнего уменьшается В соответствии с полученными данными можно сделать вывод, что действие флюпиртина основано на торможении переноса возбудительных аминокислот В данном случае перенос через NMDA рецепторы чрезвычайно ухудшается Описание рисунков Рис 1 Флексорный рефлекс (верхний график), полученный в результате электрической стимуляции М tibiahs (5 стимулов с частотой 500 Гц с силой, в 3 раза превышающей пороговую) на тыльной стороне лапки и Н-рефлекс (рефлекс Хоффманна) и М-волна (нижний график), записанная при сокращении мышц стопы после электрической стимуляции N tibiahs (однократный стимул, с силой в 2 раза превышающей пороговую) до введения (слева) и через 20 мин после введения (справа) флюпиртина 10 мг/кг Артефакты стимулов помечены стрелками Рис 2 Длительность действия на силу флексорного рефлекса после внутрибрюшинного введенния растворителя или флюпиртина в различных дозах Абсцисса время (в мин) после инъекции Ордината сила рефлекса после введения препарата в процентном отношении к силе рефлекса до введения (средняя величина ± SEM каждого опыта (6-8 животных)) Достоверность **р