(1s,2s)-1-(4-гідроксифеніл)-2-(4-гідрокси-4-фенілпіперидин-1-іл)-1-пропанолметансульфонат тригідрат

1 Трипдрат метансульфонату (1S,2S)-1-(4пдроксифеніл)-2-(4-пдрокси-4-фенілпіперидин-1іл)-1-пропанолу 2 Фармацевтична композиція для лікування захворювання, вибраного з групи, що включає дегенеративні захворювання ЦНС, такі як напад, хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та хвороба Хантингтона, епілепсію, стан страху, церебральну ішемію, м'язові спазми, недоумство, викликане множинними інфарктами, травматичне ураження головного мозку, біль, недоумство, викликане СНІДом, гіпоглікемію, мігрень, бічний аміотрофічний склероз, залежність від ЛІКІВ та алкоголю, синдроми ВІДМІНИ ЛІКІВ та алкоголю, психотичні стани та нетримання сечі у ссавців, у тому числі у людини, що містить трипдрат мезилатної солі за п 1 в ефективній КІЛЬКОСТІ, та фармацевтично прийнятний носій 3 Фармацевтична композиція за п 2, яка відрізняється тим, що ефективною КІЛЬКІСТЮ є КІЛЬКІСТЬ, ефективна для антагоністичної взаємодії з NMDA рецепторами 4 Фармацевтична композиція за п 2, яка відрізняється тим, що ефективною КІЛЬКІСТЮ є КІЛЬКІСТЬ, ефективна для лікування кожного захворювання 5 Спосіб лікування захворювання, вибраного з групи, що включає дегенеративні захворювання ЦНС, такі як напад, хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та хвороба Хантингтона, епілепсію, стан страху, церебральну ішемію, м'язові спазми, недоумство, викликане множинними інфарктами, травматичне ураження головного мозку, біль, недоумство, викликане СНІДом, гіпоглікемію, міг рень, бічний амютрофічний склероз, залежність від ЛІКІВ та алкоголю, синдроми ВІДМІНИ ЛІКІВ та алкоголю, психотичні стани та нетримання сечі у ссавців, у тому числі у людини, який полягає у введенні ссавцю трипдрату мезилатної солі за п 1 в ефективній КІЛЬКОСТІ 6 Спосіб за п 5, який відрізняється тим, що ефективною КІЛЬКІСТЮ є КІЛЬКІСТЬ, що справляє антагоні стичну дію на NMDA рецептори 7 Спосіб за п 5, який відрізняється тим, що ефективною КІЛЬКІСТЮ є КІЛЬКІСТЬ, ефективна для ліку вання кожного захворювання 8 Спосіб лікування хвороби Паркінсона у ссавця, який включає введення зазначеному ссавцю ефективної для лікування хвороби Паркінсона КІЛЬКОСТІ синергічного поєднання трипдрату мезилатної солі за п 1 (13,23)-1-(4-пдроксифеніл)-2-(4-пдрокси-4феніл-піперидин-1-іл)-1-пропанолу та засобу, здатного відновлювати баланс збуджувального зворотного зв'язку з вентрального латерального ядра таламуса в кору головного мозку 9 Спосіб лікування хвороби Паркінсона у ссавця, який включає лікування зазначеного ссавця ефективною для лікування хвороби Паркінсона КІЛЬКІСТЮ синергічного поєднання трипдрату мезилатної солі за п 1 та засобу, що підвищує збуджувальний зворотний зв'язок, який вибрано з групи, що включає агоністи допамшу, агоністи допамшу D1, агоністи D2, агоністи взаємодії допамш/адренорецептор, агоністи взаємодії допамш/5НТ інгібітор поглинання/5-НТ-1А, агоністи взаємодії допамш/опіат, агоністи адренорецепторів, агоністи взаємодії а2-адренорецептор/допамш D2, інгібітори абсорбції допамшу, інгібітори моноамшоксидази, інгібітори моноамшоксидази-В, інгібітори СОМТ, інгібітори трансфераз та леводопи 10 Спосіб за п 9, де зазначений реагент, що підвищує збуджувальний зворотний зв'язок, являє собою леводопу 11 Спосіб за будь-яким з пп 5-7, де захворювання, що підлягає лікуванню, являє собою хворобу Паркінсона 12 Спосіб за будь-яким з пп 5-7, де захворювання, що підлягає лікуванню, являє собою травматичне ураження головного мозку або церебральну ішемію О со ю Цей винахід стосується нового трипдрату метансульфонатної солі (13,23)-1-(4-гідроксифеніл)2-(4-пдрокси-4-фенілпіперидин-1 -іл)-1 -пропанолу /далі в описі наводиться як "трипдрат мезилатної солі"/, ЩО має КЛІНІЧНІ переваги Цей трипдрат мезилатної солі, а також ВІДПОВІДНІ безводна мезилатна сіль та вільна основа — (1 S,2S)-1 -(4пдроксифеніл)-2-(4-пдрокси-4-фенілпіперидин-1іл)-1-пропанолу /далі в описі наводяться як, ВІДПОВІДНО, "безводний мезилат" та "вільна основа"/ виявляють активність як антагоністи NMDA (Nметил-D-acnaprmoBa кислота) рецепторів і можуть використовуватися для лікування епілепсії, стану страху, церебральної ішемії, м'язових спазмів, недоумства, спричиненого множинним інфарктом, травматичного ураження головного мозку, болю, слабоумства, пов'язаного зі СНІДом, гіпоглікемії, мігрені, бокового амютрофічного склерозу, залежності від ЛІКІВ та алкоголю, синдромів ВІДМІНИ ЛІКІВ та алкоголю, психотичних станів, нетримання сечі й дегенеративних захворювань ЦНС /центральної нервової системи/, таких як напад, хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та хвороба ХантингтонаВільна основа, безводний мезилат та способи їх одержання описано, головним чином, в патенті США 5185343, що його видано 9 лютого 1993 року Ці речовини та їх застосування для лікування деяких з зазначених вище захворювань описано конкретно в патенті США 5272160, який видано 21 грудня 1993 року, їх використання для лікування названих вище захворювань описано в патентній заявці РСТ/ІВ 95/00380, розробленій в США та поданій 18 травня 1995 року Застосування цих сполук у поєднанні з сполукою, що здатна підвищувати і, таким чином, відновлювати баланс збуджувального зворотного зв'язку від вентрального латерального ядра таламуса у кору головного мозку для лікування хвороби Паркінсона, описано в патентній заявці РСТ/ІВ 95/00398, що розроблена в США та подана 26 травня 1995 року Зазначені патенти США та заявки включено тут як посилання NMDA являє собою збуджувальну амінокислоту Збуджуючі амінокислоти є важливою групою нейромедіаторів, які передають нервовий імпульс у центральну нервову систему Глютамінова кислота та аспаргінова кислота являють собою два ендогенні ліганди, що активують збуджуючі амінокислотні /excitatory ammo acid — (ЕАА)/ рецептори Є два типи ЕАА рецепторів — юнотропний та метаботропний, які відрізняються механізмом перетворення сигналу Існують принаймні три різноманітні юнотропні ЕАА рецептори, що характеризуються селективним антагоністом, який активує кожен тип Рецептори NMDA, AMPA (2-амшо-3-(5-метил3-пдроксмзоксазол-4-іл)пропіонова кислота) та каїнової кислоти Іонотропні ЕАА рецептори з'єднуються з іонними каналами, що є проникними для натрію і, у випадку NMDA рецепторів, для кальцію Метаботропні рецептори, зв'язані з фофсфошоситидним гідролізом за допомогою мембранасоційованого G-білка, активуються кіскаловою (quisquahc) кислотою, іботеновою (ibotenic) кислотою та (1 S,3R)-1 -аміноциклопентан-1,3дикарбонової кислоти NMDA рецептор являє собою макромолекулярний комплекс, який складається з ряду сайтів, що зв'язуються по-різному, які "замикають" на йонних каналах проникність для йонів натрію та кальцію Hansen and Krogsgaard-Larson, Med Res Rev, 10, 55-94 (1990) Існують сайти, що зв'язують, для глютамінової кислоти, гліцерину та поліамшів, та сайт всередині іонного каналу, де сполуки такі як фенциклідин (РСР), викликають підсилення їх антагоністичних ефектів Конкурентними NMDA антагоністами є cgjkerb, що блокують NMDA рецептор, взаємодіючи з глютамат-зв'язувальним сайтом Здатність конкретної сполуки до конкурентного зв'язування з NMDA глутамат-рецептором може бути визначено з використанням методу радюлігандного зв'язування , як це описується у публікації Murphy et al , British J Pharmacol , 95, 932-938 (1988) Антагоністи можуть відрізнятись від антагоністів, що використовуються у методі кортикального клина щура (rat cortical wedge assay), як описано в публікації Harrison and Simmond, British J Pharmacol , 84, 381-391 (1984) Приклади конкурентних NMDA антагоністів включають D-2 аміно-5-фосфонопентанову кислоту (DАР5) та 0-2-амшо-7-фосфоногептанову кислоту, Schoepp et al , J Neur Transm, 85, 131-143(1991) Цей винахід також стосується способу лікування ссавців, які страждають хворобою Паркінсона, що включає введення зазначеному ссавцю метансульфонату (13,23)-транс-2-метил-2-(4пдрокси-4-пентилпі-перидин-1 -іл)-1 -пдрокси-1 -(4пдроксифеніл)етанолу трипдрату та сполуки, здатної підвищувати збуджувальний зворотний зв'язок з вентрального латерального ядра таламуса в кору головного мозку таким чином, що баланс збуджувального зворотного зв'язку з вентрального латерального ядра таламуса в кору головного мозку зазначеного ссавця, порушений внаслідок хвороби Паркінсона, відновлюється Патентна заявка РСТ/ІВ 95/00398, яку названо вище та включено тут як посилання, стосується використання для лікування хвороби Паркінсона вільної основи та безводного мезилату у поєднанні з таким реагентом, що підвищує збуджувальний зворотний зв'язок Мезилат трипдрат по суті є кращим терапевтичним засобом порівняно з безводним мезилатом Він ЯВЛЯЄ собою більш стабільну кристалічну форму, ніж відповідна безводна сіль, має істотно більш тривалий період напіврозпаду та менше піддається руйнуванню кристалічної структури завдяки включенню води до кристалу Суть винаходу Цей винахід стосується трипдрату метансульфонату(1 S,2S)-1 -(4-пдро-ксифеніл)-2-(4пдрокси-4-фенілпіперидин-1 -іл)-1 -пропанолу Цей винахід стосується також фармацевтичної композиції для лікування захворювання, вибраного з групи, що включає дегенеративні захворювання центральної нервової системи /ЦНС/ такі, як напад, хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та хвороба Хантингтона, травми спинного мозку, епілепсію, стан страху, церебральну ішемію,м'язові спазми, недоумство, спричинене множинними інфарктами, травматичне ураження головного мозку, біль, недоумство, спричинене СНІДом, гіпоглікемію, мігрень, бічний амютрофіч 59341 ний склероз, залежність від ЛІКІВ та алкоголю, синдроми ВІДМІНИ ЛІКІВ та алкоголю, психотичні стани та нетримання сечі у ссавців, в тому числі у людини, яка містить трипдрат метан сул ьфон ату (1 S,2S)-1 -(4-пдроксифеніл)-2-(4-пдрокси-4фенілпіперидин-1 -іл)-1 -пропанолу, КІЛЬКІСТЮ, ЩО справляє антагоністичну дію на NMDA рецептори, й фармацевтичне прийнятний носій Цей винахід стосується також фармацевтичної композиції для лікування захворювань, вибраних з групи, що включає дегенеративні захворювання ЦНС такі, як напад, хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та хвороба Хантингтона, епілепсію, стан страху, церебральну ішемію, м'язові спазми, недоумство, спричинене множинними Інфарктами, травматичне ураження головного мозку, біль, недоумство, спричинене СНІДом, гіпоглікемію, мігрень, бічний амютрофічний склероз, залежність від ЛІКІВ та алкоголю, синдроми ВІДМІНИ ЛІКІВ та алкоголю, психотичні стани та нетримання сечі у ссавців, в тому числі у людини, яка містить трипдрат метан сульфонату (13,23)-1-(4-пдроксифеніл)2-(4-пдрокси-4-фенілпіпери-дин-1 -іл)-1 -пропанолу у КІЛЬКОСТІ, ефективної для лікування такого захворювання, та фармацевтично прийнятний носій Цей винахід стосується також способу лікування захворювання, вибраного з групи, що включає дегенеративні захворювання ЦНС такі, як напад, хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона й хвороба Хантингтона, епілепсію, стан страху, церебральну ішемію, м'язові спазми, недоумство, викликане множинними інфарктами, травматичне ураження головного мозку, біль, недоумство, викликане СНІДом, гіпоглікемію, мігрень, бічний аміотрофічний склероз, залежність від ЛІКІВ та алкоголю, синдроми ВІДМІНИ ліки та алкоголю, психотичні стани, нетримання сечі у ссавців, у тому числі у людини, який включає введення зазначеному ссавцю такої КІЛЬКОСТІ трипдрату метансульфонату (1 S,2S)-1 -(4-пдроксифеніл)-2-(4пдрокси-4-фенілпіперидин-1-іл)-1-пропанолу, що є ефективною для лікування такого захворювання Цей винахід стосується також способу лікування захворювання, вибраного з групи, що включає дегенеративні захворювання ЦНС, такі як напад, хвороба Альцгеймера, хвороба Паркінсона та хвороба Хантингтона, епілепсію, стан страху, церебральну ішемію, м'язові спазми, недоумство, викликане множинними інфарктами, травматичний удар головного мозку, біль, недоумство, викликане СНІДом, гіпоглікемію, мігрень, бічний амютрофічний склероз, залежність від ЛІКІВ та алкоголю, синдроми ВІДМІНИ ЛІКІВ та алкоголю, психотичні стани та нетримання сечі у ссавців, в тому числі у людини, який включає введення зазначеному ссавцю такої КІЛЬКОСТІ трипдрату метан сул ьфон ату (1 S,2S)-1 -(4-пдроксифеніл)-2-(4-пдрокси-4фенілпіперидин-1 -іл)-1 -пропанолу, що справляє антагоністичну дію на NMDA рецептори Цей винахід стосується способу лікування хвороби Паркінсона у ссавців, у тому числі у людини, що включає введення зазначеному ссавцю ефективної для лікування хвороби Паркінсона КІЛЬКОСТІ синергічного поєднання трипдрату метансульфонату (13,23)-1-(4-пдроксифеніл)-2-(4пдрокси-4-фенілпіперидин-1 -іл)-1 -пропанолу і засобу, здатного відновлювати баланс збуджувального зворотного зв'язку з вентрального латерального ядра таламуса в кору головного мозку Цей винахід стосується також способу лікування хвороби Паркінсона у ссавців, у тому числі у людини, що включає лікування зазначеного ссавця ефективною для лікування хвороби Паркінсона КІЛЬКІСТЮ синергічного поєднання трипдрату метансульфонату (13,23)-1-(4-пдроксифеніл)-2-(4пдрокси-4-фенілпіперидин-1 -іл)-1 -пропанолу та засобу, який підвищує збуджувальний зворотний зв'язок, вибраного з групи, що включає агоністи допаміну, агоністи допамшу D1, агоністи допамшу D2, агоністи взаємодії допамін/ - адренорецептор, агоністи взаємодії допамш/5-НТ інгібітор поглинання/5-НТ-1А, агоністи взаємодії допамш/опіат, агоністи адренорецепторів, агоністи взаємодії 2адренорецептор/допамш D2, інгібітори поглинання допаміну, інгібітори моноамшоксидази, інгібітори моноамшоксидази-В, катехол метил, інгібітори трансфераз /СОМТ/та леводопу Опис малюнків На Фіг 1 подано зображення спектру порошкової рентгенографії трипдрату мезилату /одержано на дифрактометрі марки Siemens D 5000 після зрівноваження безводного мезилату за відносної вологості 81% ("ВВ"), виражений у вигляді інтенсивності /CPS/ залежно від куту розсіювання /два-тета градусів/ На Фіг 2 подано зображення спектру порошкової рентгенографії безводного мезилату, одержаного на дифрактометрі марки Siemens D 5000 і вираженого у вигляді інтенсивності залежно від куту розсіювання /два-тета, градуси/ В таблицях 1 та 2, що їх подано нижче, описуються окремі піки з спектрів, наведених на Фіг 1 та 2, ВІДПОВІДНО, за допомогою величини куту розсіювання /два тета/, d-параметру (d), відносної інтенсивності /відн інт/та максимальної інтенсивності /макс інт/ Таблиця 1 ДАНІ ПОРОШКОВОЇ РЕНТГЕНОГРАФІЇ ДЛЯ МЕЗИЛАТУ ТРИПДРАТУ 2 Э (градуси) 8 290 11 786 14 267 16618 18 473 D-параметр (градуси) 10 6563 7 5026 6 2027 5 3302 4 7989 Макс інт (частинок/сек) 668 50 3202 ЗО 1160 00 2910 00 1513 00 Відносна інт (%) 10 78 51 65 18 71 46 94 24 41 59341 20 261 23 272 23 640 24 965 26 380 27 755 29 165 29 839 30 160 30 480 31 106 31 480 33 564 34 649 35 574 36 568 37 680 38 507 38 920 39 320 4 3792 3 8190 3 7604 3 5638 3 3757 32116 3 0594 2 9919 2 9607 2 9303 2 8728 2 8395 2 6678 2 5867 2 5216 2 4553 2 3853 2 3360 2 3121 2 2895 8 Продовження таблиці 1 6199 50 893 50 493 00 633 00 2042 50 445 50 214 00 259 50 256 50 207 50 449 50 493 50 125 50 388 00 358 00 193 50 254 50 215 00 158 00 129 00 100 00 14 41 7 95 10 21 32 95 719 3 45 419 414 3 35 7 25 7 96 2 02 6 26 5 77 312 411 3 47 2 55 2 08 Таблиця 2 ДАНІ ПОРОШКОВОЇ РЕНТГЕНОГРАФІЇ ДЛЯ БЕЗВОДНОГО МЕЗИЛАТУ 2 Э (градуси) 4 495 9 098 9 656 11 733 12 374 12 976 13 564 14 120 14 484 15313 16 268 17 088 17 799 18 264 18916 19 368 19 937 20 743 21 357 22 410 23 056 23 672 24 725 26 024 27 098 28 276 28 820 30 083 32 611 33 272 34 292 38 188 D-параметр (градуси) 19 6436 97116 9 1524 7 5362 7 1472 6 8167 6 5229 6 2671 6 1106 5 7814 5 4440 5 1847 4 9791 4 8535 4 6876 4 5791 4 4498 4 2787 4 1571 3 9641 3 8544 3 7554 3 5978 3 4211 3 2880 3 1535 3 0953 2 9681 2 7435 2 6905 2 6128 2 3548 Макс інт (частинок/сек) 149 50 1610 00 221 00 682 50 284 50 123 00 149 50 130 50 196 00 667 00 213 50 777 00 694 00 569 50 440 00 679 50 1332 50 296 50 216 50 354 50 230 50 250 50 243 00 246 00 127 00 126 50 121 00 103 00 97 00 100 50 83 50 87 50 Відносна інт (%) 9 29 100 00 13 73 42 39 17 67 7 64 9 29 811 1217 41 43 13 26 48 26 43 11 35 37 27 33 42 20 82 76 18 42 13 45 22 02 14 32 15 56 15 09 15 28 7 89 7 86 7 52 6 40 6 02 6 24 519 5 43 Докладний опис винаходу Трипдрат мезилатної солі являє собою білу кристалічну речовину, що дає вузькі піки рентгенівської дифракції, які є добре розрізнянними /Фіг 1/ на відміну від безводного мезилату, у якого діаграма рентгенівської дифракції має слабке розрішення ПІКІВ, збільшене тло та пік при 20>26° відсутній /Фіг 2/ Для трипдрату мезилату спостерігається лише одна кристалічна форма Ця кристалічна форма характеризується доброю розчинністю у воді /25 та 15мг/мл у водних буферних розчинах з рН 3 і 7, ВІДПОВІДНО/ Трипдрат мезилатної солі може бути одержано у такий спосіб Вільну основу розчиняють у воді при 30°С До цього розчину додають принаймні 1 еквівалент метансульфонової кислоти і одержану суміш нагрівають до 60-65°С Теплий розчин фільтрують для одержання розчину, вільного від частинок Розчин упарюють до приблизно 40% від початкового об'єму, охолоджують до температури нижче 10°С, відфільтровують та сушать до одержання вмісту води /який виміряно методом титрування Карла Фішера/ меншого, ніж приблизно 11,3% Отриманий кристалічний трипдрат мезилатної солі потім може бути додатково очищено перекристалізацією Вільна основа та безводний мезилат можуть бути отримані методом, який описано в патенті США 5272160, що його названо вище та включено сюди як посилання Розподіл рацемічного 1 -(4пдроксифеніл)-2-(4-пдрокси-4-фенілпіперидин-1іл)-1-пропанолу для одержання вільної основи та ВІДПОВІДНОГО (1R.2R) енантюмеру проводять за методикою, яку наведено в Прикладі 1 Інший спосіб одержання вільної основи описано в Прикладі 2, що також являє собою приклад синтезу трипдрату мезилатної солі Гідроскопічність трипдрату мезилатної солі вивчалася при контрольованих відносних вологостях (ВВ) 0%, 52% та 98% та за нормальних умов (24-27°С, 31-64%ВВ) Зміни ваги не спостерігалося при відносних вологостях 52% та 98% або за нормальних умов Втрата кристаліч Безводний мезилат при зберіганні в ДОВКІЛЛІ з відносною вологістю 81%, буде перетворюватися на трипдрат мезилатної солі І навпаки, у безводного мезилату за нормальних умов спостерігалося збільшення ваги, як показано в таблиці 3, що її подано нижче ної води спостерігалася при ВІДНОСНІЙ ВОЛОГОСТІ 0% Втрата кристалічної води, що спостерігається при 0% ВВ, була зворотною, безводна форма швидко перетворювалася на рівноважну гідратну форму при витримуванні при більш високій вологості Втрата ваги спостерігалася також при зберіганні насипних зразків в поліетиленових пакетах при 40°С /30%ВВ/ за 9 МІСЯЦІ втрата ваги становила >10%/ Таблиця З ГІГРОСКОПІЧНІСТЬ СОЛІ ТА БЕЗВОДНОГО МЕЗИЛАТУ ЗА НОРМАЛЬНИХ УМОВ Вага зразку 0 4974 г 0 4977 г 0 4977 г 0 4990 г 0 5002 г 0 5070 г 0 5102 г 0 5170 г 0 5170 г 0 5171 г 0 5184г 0 5203 г 0 5193 г 0 5193 г Зміна у % від попереднього зважування — 0 06 0 00 0 26 0 24 1 36 0 63 1 33 0 00 0 02 0 25 0 37 -0 19 0 00 Спектри протонного магнітного резонансу та вуглецевого ядерного магнітного резонансу трипдрату мезилатної солі Спектр протонного магнітного резонансу та вуглецевого ядерного магнітного резонансу трипдрату мезилатної солі описано нижче ХІМІЧНІ зсуви в CD3OD /відносно тетраметилсилану /ТМС// визначали на основі двох вимірів метода % ВІДМІННІСТЬ від першого Час (години) — 0 06 0 06 0 32 0 56 1 93 2 57 3 94 3 94 3 96 4 22 4 60 4 40 4 40 — 1 година 3 5 годин 22 годин ЗО 5 годин 45 5 годин 98 годин 170 годин 194 годин 215 годин 246 годин 382 годин 408 годин 533 години ми 1Н-1Н корельованої спектроскопії /COSY/, 1 H13 С невикривленого збільшення поляризаційного переміщення /DEPT/ та кореляцією Н-13С гетероядерного ХІМІЧНОГО зсуву /HETCOR/ Результати експериментальних вимірів протонного магнітного резонансу та ядерного магнітного резонансу вуглецю наведено нижче, й вони погоджуються з структурою трипдрату мезилатної солі 11 59341 12 -CH3SO3H 4 -ЗНгО Позиція 4 І Г" Г 2і 3і" 2і" 3і 1 4" 2 6"(1) 2"(1) 4 5 й (2) 3" (2) 3 "С (5, ррт) 159 2 148 2 132 6 129 8 129 5 128 4 125 6 1165 73 5 69 8 68 3 48 8 43 2 39 5 36 6 36 5 97 m - мультиплет, t - триплет, d - дуплет, s - синглет (1) 6' та 2' позиції не є ХІМІЧНО еквівалентними тому значення можуть взаємно перекриватися, (2) позиції 5" та 3" не є ХІМІЧНО еквівалентними, тому значення можуть взаємно перекриватися Картина протонного розщеплення при 1 962,06м д виявлялася у вигляді двох дуплетів, при використанні високочастотної апаратури /500МГц/ Вважають, що це зумовлено впливом солі, яка утворюється з мезилату Трипдрат мезилатної солі, аналогічно до безводного мезилату та вільної основи, характеризується селективною нейрозахисною активністю, що грунтується на його антиішемічній активності та здатності блокувати збуджувальні амінокислотні рецептори Більш прийнятну методику для оцінки нейрозахисної активності цієї сполуки описано в публікації Ismail A Shalaby et al , J Pharm and Experimental Therapeutics, 260, 925 (1992) Цю статтю включено сюди як посилання та описано нижче Культура клітин Сімнадцятиденні фетальні ппокампальні клітини щура вирощують на культуральних планшетах PRIMARIA (Falcon Co , Lincoln Park, NJ) протягом 2-3 тижнів в культуральному середовищі, що містить сироватку /мінімум життєво важливого середовища з неістотними амінокислотами, яке містить 1 мМ глютамша, 21 мМ глюкози, пеніцилш/стрептоміцин/5000 од кожної/, 10% фетальної телячої сироватки /1-7 днів/ # протонів 0 0 0 2 2 1 2 2 1 0 1 2 2 3 2 2 3 'Н (5, ррт) — — — 7 ЗО (т) 7 38 (t) 7 ЗО (т) 7 56 (d) 6 84 (d) 4 66 (d) — 3 58 (т) 3 32 (d), 3 72 (t) 3 58 (m) 2 70 (s) 2 64 (t), 1 98 (d) 2 42 (t), 1 98 (d) 1 12 (d) та 10% сироватки коня /1-21 дні/ клітини або приміщують на 96-коміркові титраційні мікропланшети при ЩІЛЬНОСТІ 80000 клітин на комірку, або в 24-коміркові мікропланшети при ЩІЛЬНОСТІ 250000 клітин на комірку Культури вирощують при 37°С в інкубаторі культури тканини, що містить СОг у співвідношенні 5% СОг/95% повітря Профілерацію не нейронних клітин регулюють доданням 20мкМ уридину та 20мкМ 5-фтор-2деоксиуридину/Sigma Chemical Co , St Louis, Mo/ з 6-8 денної культури Середовище культури замінюють кожні 2-3 дні свіжим джерелом Токсичність у відношенні до глютамата Культури оцінюють на токсичність у відношенні до глютамата через 2-3 тижні від первісного посіву Культуральне середовище вилучають і культури промивають ДВІЧІ CSS (МІЛІМОЛІ) NaCI, 12-, КСІ, 5,4, МдСІ2, 0,8СаСІ2, 1,8, глюкоза, 15 та 4-(2пдроксіетил)-1-піперазинетансульфонова кислота, 25мМ (рН 7,4) Культури потім витримують протягом 15 хвил (37°) в розчинах глютамата різної концентрації Після цього витримування культури промивають три рази CSS та ДВІЧІ СВІЖИМ розчином культурального середовища без сироватки Досліджувану сполуку додають за 2 хвилини перед та під час 15 хвилинного витримування в глютаматі У деяких експериментах сполуку додають у різний час після витримування в глютаматі та при лікуванні у наступні 20-24 години Життєздатність клітин визначають у стандартний спосіб через 20-24 години після витриму 59341 14 13 вання в екзитоксині вимірювання активності цина та хворобу Хантингтона, епілепсію, стан страл тозольного ферменту LDH Активність LDH виху, церебральну ішемію, м язові спазми, недоумзначають з культурального середовища кожної з ство в результаті множинного інфаркту, 96 комірок на панелі мікротитратора 50 мкл зразтравматичне ураження головного мозку, біль, ка середовища додають до рівного об'єму фоснедоумство, викликане СНІДом, гіпоглікемію, мігфатно-натрієвого буферу/0,1М РН 7 4/, що місрень, бічний амютрофічний склероз, лікарську та тить 1,32мМ пуривату натрію та 2,9мМ NADH алкогольну залежність, симптоми ВІДМІНИ ЛІКІВ та Спроможність спектрального поглинання при 340 алкоголю, психотичні стани та нетримання сечі нм загальної реакційної суміші для кожної з 96 У системному лікуванні таких захворювань комірок вимірюють за допомогою автоматичного дозування як правило становить від приблизно мікротитровального пристрою, що зчитує, кожні 5 0,02 до 250мг/кг/день /0,001-12,5г/день при звисекунд протягом 2 хвилин /Molecular Devices, чайній вазі людини 50кг/ в одній дозі або в кількох Menlo Park, CA/ Інтенсивність поглинання автодозах, незалежно від способу введення Ще матично обчислюють з використанням програми більш прийнятний інтервал доз становить від IBM SOFTmax (version 1 01, Molecular Devices) та близько 0,15мг/кг/день до близько 250мг/кг/день використовують як показник LDH активності Звичайно, залежно від точної природи захворювання та стану пацієнта, лікуючий лікар може Морфологічну оцінку нейронної життєздатнопризначити дози, що виходять за межі цього інсті визначають, використовуючи фазовотервалу Пероральне введення як правило є контрастну мікроскопію 96 комірковий культурабільш прийнятним Однак, якщо пацієнт не здатльний планшет не дає змогу одержати гарну фаний проковтувати ліки, або оральна абсорбція є зово-контрастну візуалізацію, тому з цією метою порушеною, більш прийнятним способом введенвикористовують клітини, вирощені на 24ня має бути парентеральний /внутрішньом'язово, коміркових планшетах КІЛЬКІСНО обидва культувнутрішньовенне/ або місцевий ральні посіви є однаково чутливими до глютаматної токсичності, і виявляють 2-3-разове підвиТрипдрат мезилатної солі може бути введено щення LDH активності після витримування у вигляді фармацевтичних композицій разом з протягом 24 годин в 0,1-1,0 глютаматі фармацевтичне прийнятним носієм або наповнювачем Такі композиції як правило готуються у Реагенти DTG можна закупити у фірми АІзагальновідомі способи з використанням твердих dnch Chemical Company (MilwauKee, Wl), а галоабо рідких наповнювачів згідно з потрібним споперідол-у Research Biochemicals Inc (Natick, MA) собом введення для перорального введення — у Спермін може поставлятися від Sigma Chemical формі таблеток, твердих або м'яких желатинових Co Сироватку коня та фетальну телячу сироваткапсул, суспензій, гранул, порошків тощо, для ку можна закупити у фірми Hyclone (LOgan, UT) парентерального введення - у вигляді придатних Культуральне середовище, глютамін й пеніцидля ІН'ЄКЦІЙ розчинів або суспензій тощо, для міслш/стрептоміцин можна також закупити у фірми цевого введення — у формі розчинів, лосьйонів, Gibco Co (Grand Island, NY) мазей тощо Дані аналізу Нейротоксичність може бути КІЛЬКІСНО оцінено шляхом вимірювання активності LDH, що наявний в культуральному середовищі протягом 20-24 годин після глютаматної експозиції Підвищення LDH активності в культуральному середовищі пов'язано з деструкцією та дегенерацією нейронів (Koh and Choi, 1987) Зважаючи на те, що ДІЙСНІ КІЛЬКОСТІ LDH змінюються залежно від різних культур, дані виражають у традиційний спосіб відносно оброблених буферним розчином сестринських комірок цього самого культурального планшета Для одержання індексу LDH активності для культур, які оброблено глютаматом та ліками, значення LDH з контрольних культур віднімають від значень LDH для оброблених груп Дані для обробок ліками виражають як відсоток підвищення в LDH, індукованої 1мМ глютамата (або NMDA) для кожного експерименту Концентрації NMDA антагоністів, потрібні для звернення 50% LDH підвищення, індукованого екзитоксинами (ICso), розраховують, використовуючи пробіт аналіз за сукупними результатами трьох незалежних експериментів Селективна нейрозахисна антиішемічна активність та активність блокування збуджувальної амінокислоти трипдрату мезилатної солі ВІДПОВІДНО до цього винаходу надає їй корисну якість для лікування захворювань, вибраних з групи дегенеративних захворювань ЦНС, що включає напад, хворобу Альцгеймера, хворобу Паркінсо Приклад 1 Енантюмерні (1 S,2S)-Ta (1 R,2R)-1 -(4пдроксифеніл)-2-(4-пдрокси-4-фенілпіперидин-1іл)-1-пропаноли (+)-Винну кислоти (ЗООмг, 2ммоль) розчиняють в ЗОмл теплого метанолу Рацемічний ^3*2з*-1-(4-пдроксифен1л)-2-(4-пдрокси-4фенілпі-перидин-1 -іл)-1 -пропанол (655мг, 2ммоль) додають однією порцією При перемішуванні та незначному нагріванні одержують безбарвний гомогенний розчин По витримуванні його при кімнатній температурі протягом 24 годин одержують 319мг /66%/ пластівцеподібного білого осаду Цей продукт перекристалізовують з метанолу, в результаті одержують 263мг (+)тартрату лівообертальної сполуки, зазначеної в заголовку, у вигляді твердої білої речовини, т пл 206,5-207,5°С, [a]D=-36,2°C Цю сіль /115мг/ додають до 50мл насиченого ІЧаНСОз До суміші додають етилацетат /5мл/ та суміш енергійно перемішують протягом ЗО хвилин Водну фазу повторно екстрагують етилацетатом Органічні фази об'єднують й промивають сольовим розчином, сушать над сульфатом кальцію та упарюють Жовтувато-коричневий залишок перекристалізовують з суміші етилацетат-гексан, в результаті чого одержують 32 мг /39%/ білої речовини, що являє собою лівообертальну сполуку, зазначену в заголовку, т пл 203-204°С, 59341 16 15 [а]о=56,9°С Аналіз Розраховано для C20H25NO3 годин та фільтрування одержують 320 мг /66%/ С 73,37, Н 7,70, N 4,28 Знайдено С 72,61, Н продукту, який додатково перекристалізовують з 7,45, N 4,21 метанолу, в результаті одержують 239 мгсолі (-)тартрату правообертальної сполуки, зазначеної у Фільтрат з одержання вище (+)-тартратноі заголовку, т пл 206,5-207,5°С [a]D=+33,9° солі обробляють ЮОмл насиченого водного Останню перетворюють на правообертальну ЫаНСОз та ретельно екстрагують етилацетатом сполуку, зазначену у заголовку, у описаний вище Об'єднані органічні екстракти промивають сольоспосіб з виходом 49%, т пл 204-205°С, [a] D вим розчином, сушать над сульфатом кальцію та =+58,4 Аналіз Знайдено % С 72,94, Н 7,64, N упарюють, в результаті одержують 380 мг відно4,24 вленого вихідного матеріалу /частково повторно розчиненого/ Цей матеріал обробляють (-)Приклад 2 (1 S,2S)-1 -(4-пдроксифеніл)-2-(4винною кислотою /174мг/ в ЗОмл метанолу, як пдрокси-4-фенілпіперидиніл)-1-пропанол метанописано вище Після витримування протягом 24 сулъфонаттри гідрат Стадія 1 Бензилбромід Ацетон У скляний реактор об'ємом 50 галонів (189,27л), що має футеровку, завантажують 17,1 галонів (64,729л) ацетону, 8,65 кілограмів /кг/ (57,7моль) 4-пдроксипропюфенону, 9,95кг (72,0моль) карбонату калію та 6,8 літрів /л/ (57,7моль) бензилброміду Суміш нагрівають до температури кипіння (56°С) та кип'ятять із зворотним холодильником протягом 20 годин Аналіз методом тонкошарової хроматографії /ТШХ/ показує, що реакція по суті закінчилася Суспензію упарюють при атмосферному тиску до об'єму 10 галонів (37,853л) та додають 17,1 галонів (64,73л) води Суспензію гранулюють при 25°С протягом 1 години Продукт фільтрують на фільтрі ЗО" Lapp, промивають 4,6 галонами (17,41л) води, а потім суміш 6,8 галонів (25,74л) гексану та 2,3 галона (8,71л) ізопропанолу Після сушіння під вакуумом при 45°С одержують 13,35кг (96,4%) зазначеного у заголовку продукту Друге промивання проводять 9,8мг (65,25моль) 4'-пдроксипропюфенону за описаною вище методикою Після сушіння одержують 15,1кг (96%) наведеного вище продукту Стадія 2 Brz Метиленхлорид В атмосфері азоту в реактор об'ємом 100 галонів (378,533л), що має футеровку, завантажують 75 галонів (283,90л) метиленхлориду та 28,2 кг (117,5моль) продукту стадії 1 Розчин перемішують протягом п'яти хвилин, потім завантажують 18,8 кг брому Реакційну масу перемішують протягом 0,5 години при температурі 22°С Аналіз методом ТШХ показує, що реакція по суті повністю пройшла До розчину додають 37 галонів (140,06л) води й суміш перемішують протягом 15 хвилин Метиленхлорид ВІДДІЛЯЮТЬ та промивають 18,5 галонами (70,03л) насиченого водного розчину гідрокарбонату натрію Метиленхлорид упарюють при атмосферному тиску до кінцевого об'єму 40 галонів (151,413л) та додають 60 галонів (227,120л) ізопропанолу Упарювання продовжують, доки температура дефлектору не сягне 80°С і кінцевий об'єм не становитиме 40 галонів (151,413л) Суспензію охолоджують до 20°С та гранулюють протягом 18 годин Продукт відфільтровують на фільтрі ЗО'І_арр, промивають 10 галонами (37,85л) ізопропанолу Після сушіння під вакуумом при 45°С одержують 29,1 кг (77%) наведеного вище продукту 17 59341 18 4-Пдрокси-4-фенілпіперидин —— ЧЇ й^ Етилацетат TEA В атмосфері азоту в скляний реактор об'ємом 20 галонів (75,71л), що має футеровку, завантажують 4,90кг (15,3моль) продукту з стадії 2, 7,0 галонів (26,497 л) етилацетату, 2,70 кг (215,3моль) 4-пдрокси-4-фенілпіперидину та 1,54кг триетиламшу (15,3моль) Розчин нагрівають до температури кипіння (77°С) та кип'ятять із зворотним холодильником протягом 18 годин Отриману суспензію охолоджують до 20°С Аналіз методом ТШХ показує, що реакція по суті закінчилася Побічний продукт л^иетиламш пдробромід/ відфільтровують на фільтрі 3'Lapp, промивають 4 галонами (15,14л) етилацетату Фільтрат упарюють в вакуумі до об'єму 17 літрів Концентрат приміщують в 48 літрів гексану й отриману суспензію гранулюють протягом 2 годин при 20°С Продукт відфільтровують на фільтрі ЗО'І_арр і промивають 4 галонами гексану Після сушіння у вакуумі при 50°С одержують 4,9кг (77%) зазначеного вище продукту Друге промивання проводять з 3,6кг (11,3моль) продукту з стадії 2 згідно з описаною вище методикою Після сушіння одержують 4,1кг зазначеного продукту Стадія 4 Боргідрид натрію р-> Етанол В атмосфері азоту в скляний реактор об'ємом 100 галонів (378,53л) з футеровкою завантажують 87,0 галонів (329,3 л) 2В етанолу та 1,7кг (45,2моль) борпдриду натрію Отриманий розчин перемішують при 25°С та завантажують 9,4 кг (22,6моль) продукту з стадії 3 Суспензію перемішують 18 годин при 25-30°С Аналіз методом ТШХ показує, що реакція по суті пройшла повністю до потрібного "Tpeo''-діастереомеру До суспензії додають 7,8 літрів води Суспензію упарюють у вакуумі до кінцевого об'єму 40 галонів (151,413л) Після гранулювання протягом 1 години продукт фільтрують на ЗО'І_аррта промивають 2 галонами (7,57л) 2В етанолу Вологий продукт, 9,4 галона (323,93л) 2В-етанолу та 8,7 галонів (32,93) води завантажують в скляний реактор, об'ємом 100 галонів (378,53л), з футеровкою Суспензію кип'ятять (78°С) з зворотним холодильникам 16 годин Суспензію охолоджують до 25°С, фільтрують на ЗО'І_арр та промивають 7 галонами (26,50л) води, а потім 4 галонами (15,14л) етанолу Після сушіння на повітрі при 50°С одержують 8,2кг (86,5%) наведеного в рівнянні реакції продукту Цей продукт перекристалізовуютьтак В скляний реактор об'ємом 100 галонів (378,53л) з футеровкою завантажують 7,9кг (18,9моль) продукту з стадії 3, 20 галонів (75,71л) 2В-етанолута 4 галона (15,14л) ацетону Суспензію нагрівають до 70°С, одержуючи розчин Розчин упарюють атмосферою до об'єму 15 галонів (56,78 л) Суспензію охолоджують до 25°С та гранулюють 1 годину Продукт відфільтровують на ЗО'І_арр Вологий продукт та 11,7 галонів (44,29л) етанолу 2В завантажують в скляний реактор об'ємом 100 галонів (378,53л), що має футеровку Суспензію нагрівають до температури кипіння (78°С) та кип'ятять із зворотним 19 59341 холодильником 18 годин Суспензію охолоджують до 25°С, фільтрують на ЗО'І_арр й промивають 2 галонами (7,57л) 2В етанолу Після сушіння 20 на повітрі при 50°С одержують 5,6кг (70,6%) зазначеного в рівнянні реакції продукту Стадія 5 НУІОКРМГ ТГФ "Threo''-ізомер Під атмосферою азоту в скляний реактор об'ємом 50 галонів (189,27л) з футеровкою завантажують 25г 10% паладію на вугіллі (50% водн волог), 5,5кг (13,2моль) продукту з стадії 4 та 15,5 галонів (58,67л) тетрапдрофурану /ТГФ/ Суміш гідрують при 40-50°С протягом 2 годин Після ЦЬОГО аналіз методом ТШХ показує, що відновлення пройшло повністю Суміш фільтрують крізь 14" sparkler precoated з целітом та промивають 8 галонами (30,283л) ТГФ Фільтрат пе реносять у чистий скляний реактор об'ємом 100 галонів (378,53л) з футеровкою, упарюють під вакуумом до об'єму 7 галонів (26,50л) і завантажують 21 галон (79,49л) етилацетату Суспензію упарюють під атмосферним тиском до об'єму 10 галонів (37,85л) та температури 72°С Суспензію охолоджують до 10°С, фільтрують на ЗОТарр і промивають 2 галонами (7,57л) етилацетату Після сушіння при 55°С одержують 3,9кг (90%) зазначеного вище продукту л^бто вільної основи/ Стадія 6 О-(-)-винна кислота • Винна кислота У скляний реактор об'ємом 100 галонів (378,53л) завантажують 20 галонів (75,71л) метанолу та 3,7кг (11,4 моль) продукту з стадії 5 л^бто вільної основи/ Суспензію нагрівають до 60°С та завантажують 1,7кг (11,4 моль) D-(-)винної кислоти Отриманий розчин кип'ятять (65°С) із зворотним холодильником протягом З годин після чого утворюється суспензія Суспензію охолоджують до 35°С, фільтрують на ЗОТарр й промивають 1 галоном (3,785л) етанолу Вологий твердий продукт завантажують в скляний реактор об'ємом 100 галонів (378,53л) з футеровкою, де знаходяться 10 галонів (37,85л) метанолу Суспензію перемішують 18 годин при 25°С Суспензію фільтрують на ЗОТарр та промивають 2 галонами (7,57л) метанолу Після сушіння на повітрі при 50°С одержують 2,7кг (101%) зазначеного вище продукту л^бто солі винної кислоти та вільної основи (Р-(+)-енантюмеру)/ Цей матеріал очищають так В скляний реактор об'ємом 100 галонів (378,53л) з футеровкою завантажують 10,6 галонів (40,12л) метанолу та 2,67кг (5,6моль) названої солі винної кислоти Суспензію кип'ятять (80°С) із зворотним холодильником 18 годин Суспензію охолоджують до 30°С, фільтрують на ЗОТарр та промивають 4 галонами метанолу Після сушіння на повітрі при 50°С одержують 2,05кг (76,7%) названого вище продукту /тобто солі винної кислоти та вільної основи/ 21 22 59341 Стадія 7 NaHCO Винна кислота В nalgene tub об'ємом 55 літрів завантажують ЗО літрів води та 1056г (12,6моль) гідрокарбонату натрію при 20°С До отриманого розчину додають 2,0кг (4,2моль) продукту з стадії 6 /тобто солі вільної основи та винної кислоти/ Суспензію перемішують протягом 4 годин, в процесі чого утво рюється велика КІЛЬКІСТЬ ПІНИ ПІСЛЯ припинення пшоутворення суспензію фільтрують на 32см ЛІЙЦІ та промивають 1 (3,785л) галоном води Після повітряного сушіння при 50°С одержують 1,28кг (93,5%) зображеного на схемі продукту /тобто вільної основи/ Стадія 8 У колбу об'ємом 22 літри завантажують 1277г (3,9моль) продукту з стадії 7 та 14 літрів води Суспензію нагрівають до 30°С та додають 375г (3,9моль) метансульфонової кислоти Отриманий розчин нагрівають до 60°С, фільтрують крізь целіт та промивають 2 літрами води Фільтрат, що не містить частинок твердої речовини, упарюють С 99 50 И у вакуумі до об'єму 6 літрів Суспензію охолоджують до 0-5°С та гранулюють 1 годину Продукт відфільтровують крізь 18" фільтрувальну лійку та промивають 635мл чистої води Після сушіння при 25°С протягом 18 годин одержують 1646г (88%) продукту, наведеного на схемі реакції /тобто трипдрат мезилатної солі/ 23 Комп'ютерна верстка Н Кураєва 59341 24 Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна