Спосіб вакцинації проти інфекції сім’яників, викликаної вірусом бичачої вірусної діареї

1. Спосіб профілактики інфекції сім'яників, викликаної вірусом BVDV, у сприйнятливого самця тварини, який передбачає: введення тварині ефективної кількості вакцини, вибраної з групи, яка складається з інактивованої вакцини BVDV типу 1, інактивованої вакцини BVDV типу 2, модифікованої живої вакцини BVDV типу 1 і модифікованої живої вакцини BVDV типу 2. 2. Спосіб за п. 1, де тварина вибрана з групи, яка складається з биків, баранів і кабанів. 3. Спосіб за п. 2, де тварина являє собою бика. 4. Спосіб за п. 1, де вакцина включає одночасно і модифіковану живу вакцину BVDV типу 1, і модифіковану живу вакцину BVDV типу 2. 5. Спосіб за п. 4, де щонайменше одна модифікована жива вакцина BVDV одержана з цитопатичного вірусу. 6. Спосіб за п. 4, де щонайменше одна модифікована жива вакцина BVDV одержана з нецитопатичного вірусу. 7. Спосіб за п. 4, де обидві модифіковані живі вакцини BVDV одержані з цитопатичного вірусу. 8. Спосіб за будь-яким з пп. 1-7, де вакцина включає щонайменше один додатковий антиген, виб 2 (19) 1 3 86405 4 grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii hardioPasteurella multocida, Mycobacterium bovis і prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagia, Leptospira Mycobacterium dispar. interrogans pomona, Leptospira borgpetersenii 18. Застосування за п. 17, де вказані додаткові hardjo-bovis, Leptospira Bratislava, Campylobacter антигени включають бичачий вірус герпесу (BHVfetus, Mannheimia (Pasteurella) haemolytica, 1); вірус парагрипу типу 3 (PIV3) і бичачий респіраторний синцитіальний вірус (BRSV). Способи за даним винаходом належать до способів профілактики інфекції сім'яників вірусом бичачої вірусної діареї шляхом імунізації сприйнятливих самців тварин проти інфекції. Вірус бичачої вірусної діареї (BVDV) являє собою економічно значущий патоген великої рогатої худоби і інших сприйнятливих тварин, який може виділятися з сім'ям хронічно і гостро інфікованих биків і самців інших сприйнятливих тварин. Цей патоген викликає у сприйнятливих тварин захворювання шлунково-кишкового тракту, респіраторної і репродуктивної систем. Хоч шлунково-кишкові і респіраторні захворювання, викликані високо патогенними штамами BVDV більш значущі з клінічної точки зору, проте репродуктивні втрати внаслідок BVDV можуть бути набагато більш значущими з економічної точки зору. У літературних джерелах, що описують передачу BVDV, указано, що вірус в сім'ї биків може інфікувати сприйнятливих запліднених корів, спричиняючи зниження частоти вагітності, ранню загибель зародка, викидні і народження телят, хронічно інфікованих BVDV.[1-3] Хронічно інфіковані бики найчастіше інфікують сприйнятливих запліднених корів, оскільки їх сім'я містить високу концентрацію вірусу (10 [7, 6] інфікуючих доз клітинної культури (50%)/мл) (ССГО50/МЛ).[3] При порівнянні інфіковані сім'яники гостро інфікованих імунокомпетентних биків виділяли більш низькі концентрації вірусу (5-75 ССГО50/мл) в сім'ї, але вони також здатні передавати BVDV.[4] В одному з досліджень повідомлялося, що 25-50 ССГО50/мл вірусу в сім'ї інфікували 5% запліднених нетелей, і подальша горизонтальна передача BVDV від інфікованих нетелей вагітним коровам того ж стада призводила до хронічної інфекції їх плодів.[5] Дві групи дослідників повідомили, що гостра інфекція биків після статевого дозрівання може викликати хронічну інфекцію BVDV. яка локалізується в сім'яниках.[6, 7] Один незвичайний випадок виник у серопозитивного, бика, що не мав віремії, якого тримали на станції штучного запліднення в Новій Зеландії. Бика доставили в центр штучного запліднення після безрезультатних спроб виділення BVDV з крові. Незважаючи на присутність нейтралізуючих антитіл до BVDV, бик постійно виділяв низькі рівні вірусу в сім'я (2´103 ССГО50/мл) протягом 11 місяців, після чого тварину забили. Джерело гострої інфекції було невідоме. При розтині вірус був виділений тільки з сім'яників бика.[6] Вірус в сім'ї цього бика призвів до інфекції і подальшої сероконверсії 1 з 3 запліднених серонегативних нетелей.[8] При другій штучно викликаній інфекції BVDV був виявлений за допомогою зворотної «гніздової» полімерної ланцюгової реакції (RT-nPCR) в сім'ї 2 з 3 биків, що не мали віремії, після статевого дозрівання протягом періоду до 7міс, але вірус не можна було виділити стандартними способами тканинної культури. Сім'я, зібране через 5міс. після первинного контакту і введене внутрішньовенно, викликало інфекцію BVDV у одного серонегативного теляти. Сім'я, взяте в день контакту і через 7 міс. після контакту, не викликало інфекції ще у двох інших серонегативних телят.[7] У двох дослідженнях було зазначено, що бики з гострою інфекцією можуть виділяти BVDV в сім'я з прийнятною концентрацією, рухливістю і морфологією сперматозоїдів.[4, 5] В іншому дослідженні було виявлене зниження рухливості, збільшення вінцевих дефектів, маленькі голівки сперматозоїдів і проксимальні краплі (було виявлено у биків з гострою інфекцією).[9] Незалежно від невідомості відносно деталей передачі при природному розмноженні і впливу на фертильність биків, зрозуміло, що інфікування сім'яників BVDV у сприйнятливих самців тварин є значущою економічною втратою в зв'язку з репродуктивними втратами внаслідок передачі BVDV коровам. Вірусні інфекції сім'яників представляють серйозну проблему для лікування або профілактики за допомогою імунізації, оскільки відомо, що сім'яники є імунологічно ізольованими На здивування, автори винаходу показали, що імунізація с ефективним способом боротьби з інфекцією сім'яників BVDV серед сприйнятливих тварин Фіг.1 Процент зразків біопсії тканини сім'яників, позитивних у відношенні BVDV після антигенної стимуляції BVDV типу 2. Надписи: VI = виділення вірусу, PCR = полімеразна ланцюгова реакція, ІНС = імуногістохімія, a, b - відмінності процентних часток з різними підрядковими буквами є статистично значущими (Р£0,05). Винахід належить до способу профілактики або лікування інфекції сім'яників BVDV у сприйнятливого самця тварини, який передбачає введення тварині ефективної кількості вакцини, вибраної з групи, яка складається з інактивованої вакцини BVDV типу 1, інактивованої вакцини BVDV типу 2, модифікованої живої вакцини BVDV типу 1 і модифікованої живої вакцини BVDV типу 2. Винахід також належить до вакцини, вибраної з групи, яка складається з інактивованої вакцини BVDV типу 1, інактивованої вакцини BVDV типу 2, модифікованої живої вакцини BVDV типу 1 і модифікованої живої вакцини BVDV типу 2, для використання як лікарського засобу для профілактики інфекції сім'яників BVDV у сприйнятливого самця тварини. Винахід, крім того, належить до застосування вакцини, вибраної з групи, яка складається з інактивованої вакцини BVDV типу 1, інактивованої вакцини BVDV типу 2, модифікованої живої вакци 5 86405 6 ни BVDV типу 1 і модифікованої живої вакцини вірусу парагрипу типу 3(PIV3) і бичачого респіраBVDV типу 2, для одержання лікарського засобу торного синцитіального вірусу (BRSV). для профілактики інфекції сім'яників BVDV у Винахід належить до способу лікування або сприйнятливого самця тварини. профілактики інфекції сім'яників вірусами BVDV у Винахід також належить до способу профілаксприйнятливого самця тварини. Спосіб за даним тики інфекції сім'яників BVDV у сприйнятливого винаходом ефективний для профілактики або самця тварини, який передбачає ідентифікацію зниження інфекції сім'яників, викликаної інфекцією тварини з підвищеним ризиком інфекції сім'яників BVDV типу 1 і 2. BVDV, і введення тварині ефективної кількості «Вірус бичачої вірусної діареї» («BVDV») яввакцини, вибраної з групи, яка складається з інакляє собою дрібний, однонитковий РНК вірус (з потивованої вакцини BVDV типу 1, інактивованої зитивним геномом) сімейства Flaviviridae і роду вакцини BVDV типу 2, модифікованої живої вакциPestivirus. Були описані два біотипи BVDV, цитопани BVDV типу 1 і модифікованої живої вакцини тичний (СР) і нецитопатичний (NC), на основі приBVDV типу 2. сутності або відсутності видимого цитопатичного Винахід також належить до вакцини, вибраної ефекту in vitro при інфікуванні моношарів сприйняз групи, яка складається з інактивованої вакцини тливих клітин. У більшості випадків нецитопатичBVDV типу 1, інактивованої вакцини BVDV типу 2, ний біотип виділений при спалахах захворювання модифікованої живої вакцини BVDV типу 1 і мов полі. На основі значних відмінностей вірусної дифікованої живої вакцини BVDV типу 2, для заРНК штами вірусу бичачої вірусної діареї можна стосування як лікарського засобу для профілактитакож розділити на 2 окремих види (тобто, генотики інфекції сім'яників BVDV у сприйнятливого пи), тип 1 і тип 2. самця тварини з підвищеним ризиком інфекції сіТермін «сприйнятлива тварина» означає будьм'яників BVDV. яку тварину, яка сприйнятлива до інфекцій BVDV, Винахід, крім того, належить до застосування наприклад, велика рогата худоба, вівці і свині. вакцини, вибраної з групи, яка складається з інакТермін «сприйнятливий самець тварини» тивованої вакцини BVDV типу 1, інактивованої означає будь-якого самця тварини, який сприйнятвакцини BVDV типу 2, модифікованої живої вакциливий до інфекцій BVDV сім'яників, наприклад, ни BVDV типу 1 і модифікованої живої вакцини самець великої рогатої худоби, овець і свиней. BVDV типу 2, для одержання лікарського засобу Невихолощені самці великої худоби називаються для профілактики інфекції сім'яників BVDV у «биками». Невихолощені самці овець називаються сприйнятливого самця тварини з підвищеним ри«баранами». Невихолощені самці свиней називазиком інфекції сім'яників BVDV. ються «кабанами». Винахід також належить до виробу, який місТермін «запобігання» або «контроль» відносно тить посудину або посудини, що включають вакінфекції сім'яників означає зниження або усунення цину BVDV, вибрану з групи, яка складається з ризику інфекції сім'яників сприйнятливого самця інактивованої вакцини BVDV типу 1, інактивованої тварини вірулентними типами 1 і 2 BVDV; ослабвакцини BVDV типу 2, модифікованої живої вакцилення або зменшення симптомів інфекції або прини BVDV типу 1 і модифікованої живої вакцини скорення одужання після інфекції. Вакцинація BVDV типу 2; і інструкцію по застосуванню вакцини вважається терапевтичною, якщо спостерігається BVDV для профілактики інфекції сім'яників BVDV у зниження вірусного або бактеріального навантасприйнятливого самця тварини. ження за даними біопсії сім'яників або при наявноСприйнятливі самці тварин можуть включати сті вірусу в сім'ї. биків, баранів і кабанів. У переважному варіанті Термін «інфекція» може означати гостру або здійснення твариною є бик. хронічну інфекцію BVDV. Вакцини і вироби можуть включати одночасно «Гостра» або «транзиторна» інфекція BVDV як модифіковану живу вакцину BVDV типу 1, так і виникає при контакті імунокомпетентної сприйнятмодифіковану живу вакцину BVDV типу 2. ливої тварини з цитопатичним або нецитопатичВакцини можуть бути одержані з цитопатогенним штамом BVDV. Хоч частіше за все зустрічаного і нецитопатогенного вірусу. ється субклінічна інфекція, проте можуть Необов'язково, вакцини і вироби за винаходом спостерігатися такі симптоми як депресія, відсутможуть включати щонайменше один додатковий ність апетиту, ерозії слизової і покриття виразками антиген, вибраний з групи, яка складається з биротової порожнини, діарея і смерть. Імунокомпечачого вірусу герпесу (BHV-1); вірусу парагрипу тентна тварина з гострою інфекцією може передатипу 3 (PIV3); бичачого респіраторного синцитіати вірус сприйнятливій тварині, але набагато менш льного вірусу (BRSV); Leptospira canicola, Leptoефективно, ніж хронічно інфіковані тварини. spira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii harГостра інфекція сім'яників належить до гострої dio-prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagia, або транзиторної інфекції сім'яників сприйнятливоLeptospira interrogans pomona, Leptospira го самця тварини, що виникла внаслідок транзитоborgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira Bratislava, рної системної інфекції. У деяких повідомленнях Campylobacter fetus, Mannheimia (Pasteurella) вказується на те, що бик з гострою інфекцією може haemolytica, Pasteurella multocida, Mycobacterium виділяти вірус в сім'я, зберігаючи прийнятну конbovis і Mycobacterium dispar. центрацію, рухливість і морфологію сперматозоїУ переважному варіанті здійснення вакцини і дів. Однак в інших повідомленнях автори спостерівироби за винаходом можуть включати щонаймегали зниження рухливості сперматозоїдів і нше один додатковий антиген, вибраний з групи, збільшення кількості вінцевих дефектів, маленьких яка складається з бичачого вірусу герпесу (BHV-1); 7 86405 8 голівок сперматозоїдів і проксимальних крапель, 75:183 (1994)]. Однак міркування безпеки, наприщо супроводжують гостру інфекцію. клад, можлива ембріональна передача вірусу, Хронічна інфекція BVDV виникає при інфікувикликали великий неспокій щодо застосування ванні сприйнятливої тварини нецигопатичним цих вакцин [Bolin, Vet. Clin. North Am. Food Anim. штамом BVDV перед розвитком імунокомпетентPract. 11:615-625 (1995)]. ності приблизно на 125-й день вагітності. У тварин У переважному варіанті здійснення компонент з хронічною інфекцією розвивається імунотолераBVDV типу 1 є модифікованим живим цитопатонтність до штаму, яким вони були інфіковані, і вони генним (штам cpBVD-1 NADL (National Animal Disдіють як резервуар патогену і звичайно виділяють ease Center Міністерство сільського господарства великі кількості вірусу з сечею, фекаліями, сім'ям, США, Еймс, Айова, АТСС VR-534)). В іншому песлиною, слізною рідиною і носовим слизом протяреважному варіанті здійснення компонент BVDV гом всього життя. типу 2 є модифікованим живим цитопатогенним Хронічна інфекція сім'яників належить до хро(cpBVD-2, штам 53637, АТСС № РОТА-4859). Як нічної інфекції сім'яників сприйнятливого самця описано в одночасно поданій заявці на патент тварини, викликаної в гострій або хронічній систеСША № 60/490834, поданій 29.07.03, обидва ізомній інфекції. ляти містять вставку в області NS2-3. Ослаблений Вакцина, що використовується в даному винавірус штаму cpBVDV-Ι містить вставку кодуючої ході, включає вірус BVDV типу 1 і/або 2 і прийнятпослідовності 3' Bos taurus DnaJl тимідину в нукний у ветеринарії носій. леотидному положенні 4993 (нумерація послідовЗвичайно, вірусні вакцини ділять на 2 класи: ності NADL), яка являє собою третій нуклеотид Живі вакцини, що містять живі віруси, які були кодону, що кодує гліциновий залишок в положенні піддані обробці або вирощувалися таким чином, 1536 амінокислоти. Ослаблений cpBVDV-2 містить щоб зробити їх менш патогенними (ослабленими), вставку кодуючої послідовності 3' Bos taurus DnaJ1 і вакцини, що містять убиті (інактивовані) вірусні в тому ж геномному сайті. В інших переважних частинки. У контексті вірусу BVDV. власне вірус варіантах здійснення модифіковані живі антигени є може бути цитопатичним або нецитопатичним. На висушеними, ліофілізованими або вітрифікованиоснові значних відмінностей вірусної РНК штами ми. вірусу вірусної діареї можна також розділити на 2 В одному з варіантів здійснення композиції ваокремих види (тобто, генотипи), тип 1 і тип 2. Такцини за даним винаходом включають ефективну ким чином, в принципі існують вісім основних клакількість одного або декількох описаних вище вірусів вакцини BVDV, але, проте, більшість комерційсів BVD, переважно штам cpBVD-1 NADL вірусу них вакцин основані на цитопатогенних вірусах. (штам вірусу cpBVD-1 NADL - National Animal DisСеред вакцин BVDV, які в цей час є в продажу, ease Center Міністерства Сільського Господарства є вакцини, в яких вірус був підданий хімічній інакСША, Еймс, Айова АТСС VR-534), 53637 cpBVD-2 тивації [McClurkin, et al., Arch. Virol. 58:119 (1978); штам, (АТСС № РОТА-4859), штам С-13 IBRV віFernelius, et al., Am. J. Vet. Res. 33:1421-1431 русу (Cutter Laboratories); штам Reisinger вірусу (1972); і Kolar, et al., Am. J. Vet. Res. 33:1415-1420 PIV3 (Univ. Nebraska); штам 375 вірусу BRSV, (1972)]. У разі цих вакцин для досягнення первин(Veterinary Medical Research Institute, Еймс, Айоної імунізації, звичайно потрібне введення мнова). Очищені вакцини BVD можна використовувати жинних доз і імунітет, що досягається, має коротку безпосередньо в композиції вакцини або переважтривалість і не захищає від передачі ембріону но віруси BVD можуть бути піддані подальшій мо[Bolin, Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract. 11:615дифікації шляхом серійних пасажів in vitro. Зви625 (1995). Повідомлялося, що у овець застосовна чайно, вакцина містить від приблизно 1´102 до субодинична вакцина, основана на очищеному приблизно 1´1010 бляшкоутворювальних або білку Е2 (Bruschke, et al., Vaccine 15:1940-1945 TCID50 одиниць вірусу разом з прийнятним у вете(1997)]. На жаль, виявилося, що ця вакцина є єдиренарії носієм і, необов'язково, разом з ад'юванною вакциною, що захищає ембріон від інфекції, і том, в об'ємі від 0,1 до 5мл, і переважно приблизцей захист обмежується одним штамом гомологічно 2мл. Точна кількість вірусу в композиції ного вірусу. вакцини, ефективна для одержання захисного Крім того, були одержані вакцини модифіковаефекту, може бути визначена ветеринарним ліканого живого вірусу (MLV), використовуючи вірус рем. Прийнятні у ветеренарії носії, що придатні BVD, який був ослаблений повторним пасажем в для використання в композиціях вакцин, можуть коров'ячих або свинячих клітинах [Coggins, et al., являти собою будь-які носії, описані тут нижче. Cornell Vet. 51:539 (1961); і Phillips, et al., Am. J. Vet Звичайно, вакцина містить від приблизно Res. 36:135 (1975)] або хімічно викликаними мута1´102 до приблизно 1´1010 бляшкоутворювальних ціями, які додають вірусу температурно-чутливий або колонієутворювальних одиниць вірусу з прифенотип [Lobmann, et al., Am. J. Vet. Res. 45:2498 йнятним у ветеренарії носієм і ад'ювантом, в об'(1984); і Lobmann, et al., Am. J. Vet. Res. 47:557ємі від 0,1 до 5мл, і переважно приблизно 2мл. 561 (1986)]. Однократна доза вакцини MLV виявиТочна кількість вірусу в композиції вакцини, ефеклася достатньою для імунізації, і тривалість імунітивна для одержання захисного ефекту, може бути тету у вакцинованої великої рогатої худоби може визначена ветеринарним лікарем. Прийнятні у тривати протягом декількох років [Coria, et al., Can. ветеринарії носії, що придатні для використання в J. Con. Med. 42:239 (1978)]. Крім того, повідомлякомпозиціях вакцин, можуть являти собою носії, лося про перехресний захист у телят, вакциноваописані тут нижче. Звичайним шляхом введення є них вакцинами типу MLV [Martin, et al., In Proceedвнутрішньом'язова або підшкірна ін'єкція в об'ємі ings of the Conference Res. Workers' Anim. Dis., від приблизно 0,1 до приблизно 5мл вакцини. Ком 9 86405 10 позиції вакцин за даним винаходом можуть також spira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira включати додаткові активні інгредієнти, такі як інші borgpetersenii hardio-prajitno, Leptospira icteroкомпозиції вакцин проти BVDV, наприклад, компоhaemmorrhagia, Leptospira interrogans pomona, зиції вакцин, описані в WO 95/12682, WO 99/55366, Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira Патент США №6,060,457, Патент США bratislava, Campylobacter fetus Mannheimia (Pas№6,015,795, Патент США №6,001,613, і Патент teurella) haemolytica, Pasteurella multocida, MycoСША №5,593,873. bacterium bovis і Mycobacterium dispar. У декількохВакцинацію можна здійснити одним щепленпереважних варіантах здійснення джерелом комням або за допомогою множинного щеплення. При бінованої вакцини є Bovi-Shieldâ GOLDТМ IBR-BVD, бажанні, у щеплених тварин можна зібрати сироBovi-Shieldâ GOLDТМ 3, Bovi-Shieldâ GOLDТМ 5, ватку і дослідити на наявність антитіл до вірусу Bovi-Shieldâ GOLDТМ IBR-BVD-BRSV-LP, BoviBVD. В іншому варіанті здійснення даного винахоShieldâ GOLDТМ FP 5 L5, Bovi-Shieldâ GOLDТМ FP 5 ду композиції вакцин використовують для лікуванVL5 або Preguardâ GOLD FP 10 (Pfizer, Inc.). ня інфекцій сім'яників, викликаних BVDV. ВідповідКрім того, імуногенні композиції і композиції но, даний винахід належить до способів контролю вакцин, що використовуються в способах за даним або профілактики інфекцій у тварин, викликаних винаходом, можуть включати один або більше вірусами BVD типів 1 або 2, або поєднанням типу прийнятних у ветеринарії носіїв. Термін «прийнят1 і типу 2, шляхом введення тварині ефективної ний у ветеринарії носій», що використовується тут, кількості вірусу BVDV за даним винаходом. В інвключає будь-який і кожний розчинник, дисперсійшому варіанті здійснення композиції вакцини за не середовище, покриття, ад'ювант, солюбілізуюданим винаходом ефективні для поліпшення ферчий агент, розріджувач, консервант, антибактеріатильності стада і для зниження ризику інфекції льний і протигрибковий засіб, ізотонічний агент, сім'яників у сприйнятливих самців тварин. агент, що затримує всмоктування, і тому подібні. При здійсненні способів за даним винаходом, Розріджувачі можуть включати воду, сольовий композицію вакцин за даним винаходом вводять розчин, декстрозу, етанол, гліцерин і тому подібне. великій рогатій худобі переважно внутрішньом'яІзотонічні агенти можуть включати, нарівні з іншизовим або підшкірним шляхами, хоч також можна ми, хлорид натрію, декстрозу, маніт, сорбіт і лаквикористовувати інші шляхи введення, такі як, натозу. Стабілізатори, нарівні з іншими, включають приклад, пероральний, інтраназальний шляхи альбумін. Ад'юванти включають, але ними не обвведення (наприклад, аерозолем або іншим безмежуються, нарівні з багатьма іншими, ад'ювантну голковим способом введення), введення в лімфасистему RIBI (Ribi Inc.), галуни, гель гідроксиду тичний вузол, внутрішньошкірний, внутрішньочеалюмінію, холестерин, емульсії «масло-в-воді», ревинний, ректальний або вагінальний шляхи емульсії «вода-в-маслі», такі як, наприклад, повведення, або поєднання цих шляхів. Переважним вний і неповний ад'юванти Фрейнда, блокє внутрішньом'язове введення в область шиї тваспівполімери (CytRx, Atlanta GA), SAF-M (Chiron, рини. Можуть бути потрібні схеми повторної імуніEmeryville CA), AMPHIGENâ ад'ювант, сапонін, Quil зації, і можна підібрати схеми дозування для заA, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), безпечення оптимальної імунізації. GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., BirmingПід «імуногенним» мають на увазі здатність ham, AL) або інші фракції сапоніну, монофосфовірусу BVD викликати імунну відповідь у тварини рильний ліпід А, ліпідаміновий ад'ювант Avridine, проти вірусів BVD типу 1 або типу 2, або проти термолабільний ентеротоксин з Е.соlі (рекомбінанобох вірусів BVD типу 1 або типу 2. Імунна відпотний або інший), холерний токсин або мурамілдивідь може являти собою клітинну імунну відповідь, пептид. Композиція вакцини може, крім того, вклюопосередковану передусім цитотоксичними Тчати один або більше інших імуномодуляторних клітинами, або гуморальну імунну відповідь, опоагентів, таких як, наприклад, інтерлейкіни, інтерсередковану передусім хелперними Т-клітинами, ферони або інші цитокіни. Композиції вакцин, що що, в свою чергу, активує В-клітини, приводячи до використовуються в способах за даним винахопродукції антитіл. дом, можуть також включати гентаміцин і мертіоВідповідно до даного винаходу, віруси перелат. Хоч фахівець в даній галузі може легко виважно атенуюють серійними пасажами в клітинній значити кількість і концентрацію ад'ювантів і культурі перед використанням в імуногенній комдобавок, які можна використати в контексті даного позиції. Способи модифікації добре відомі фахіввинаходу, даний винахід належить до композицій, цям в даній галузі. що включають від приблизно 50мг до приблизно Композиції вакцин, що використовуються в 2000мг ад'юванту, і переважно приблизно від способах за даним винаходом, можуть також 500мг до 2мл дозу композиції вакцин. В іншому включати активні інгредієнти, такі як інші імуногенпереважному варіанті здійснення, даний винахід ні композиції проти BVDV, наприклад, імуногенні належить до композицій вакцин, що включають від композиції проти BVDV, описані в одночасно поприблизно 1мг/мл до приблизно 60мг/мл антибіоданій заявці № 08/107908, WO 95/12682, WO тика, і більш переважніше менше ніж приблизно 99/55366, Патент США №6,060,457, Патент США 30мг/мл антибіотика. №6,015,795, Патент США №6,001,613 і Патент Композиції вакцин, що використовуються в США №5,593,873. способах за даним винаходом, можуть бути одерКрім того, об'єкти за даним винаходом можна жані в різноманітних формах в залежності від здійснити введенням інших антигенів, а не BVDV шляху введення. Наприклад, композиції вакцин типів 1 і/або 2 («комбінована вакцина»); такі антиможуть бути одержані в формі стерильних водних гени включають, але ними не обмежуються, Leptoрозчинів або дисперсій, які придатні для ін'єкційно 11 86405 12 го введення, або одержані в ліофілізованих форльного імунітету. Кількість вакцини, яка є терапевмах, використовуючи методики ліофілізації. Ліофітично ефективною, може змінюватися в залежнослізовані композиції вакцин звичайно зберігаються ті від конкретного вірусу, що використовується, стану великої рогатої худоби і/або ступеня інфекприблизно при 4°С, і можуть бути розчинені в стації, і її може визначити ветеринарний лікар. білізуючому розчині, наприклад, сольовому розчиІнактивовані або модифіковані живі вакцини, ні або HEPES, разом або без ад'юванту. що використовуються в способі за даним винахоКомпозиції вакцин за даним винаходом можна дом, можуть бути одержані, з використанням різвводити тваринам для індукції імунної відповіді номанітних способів, які відомі в даній галузі. проти вірусів BVD типу 1 або типу 2, або проти Наприклад, ізоляти BVDV можуть бути одеробох вірусів BVD типу 1 і типу 2. Відповідно, ще жані безпосередньо з маток інфікованих корів, з один варіант здійснення даного винаходу налевикористанням відомих методик. жить до способів стимуляції імунної відповіді проти Ізоляти BVDV можуть бути атенуйовані, виковірусів BVD типу 1 і типу 2 або проти поєднання ристовуючи різноманітність відомих способів, вірусів BVD типу 1 і типу 2 шляхом введення твавключаючи, наприклад, серійні пасажі. У доповрині ефективної кількості описаної вище імуногеннення до модифікованих живих вірусних ізолятів, ної композиції за даним винаходом. Під терміном продукт вакцин, що використовується в способах «тварина» розуміють будь-яку тварину, яка сприйза даним винаходом, може також включати відпонятлива до інфекцій BVDV, таку як бик, вівця і свивідну кількість одного або декількох ад'ювантів, що ня. звичайно використовуються. Відповідні ад'юванти Відповідно до способів за даним винаходом, можуть включати, але ними не обмежуються, міпереважна імуногенна композиція для введення неральні гелі, наприклад гідроксид алюмінію; потварині, включає штам cpNADL вірусу BVDV і/або верхнево-активні речовини, такі як лізолецитин; штам ср53637 вірусу BVDV. Імуногенна композиглікозиди, наприклад, похідні сапоніну, такі як Quil ція, що містить вірус BVDV, переважно живий, моА або GPI-0100; плюронові поліоли; поліаніони; дифікований декількома пасажами в культурі, ввонеіонні блок-співполімери, наприклад, Pluronic Fдиться великій рогатій худобі, переважно, 127 (B.A.S.F., USA); пептиди; мінеральні масла, внутрішньом'язовим або підшкірним шляхами, хоч наприклад, Montanide ISA-50 (Seppic, Paris, також можна використовувати інші шляхи введенFrance), карбопол, Amphigen, Amphigen Mark II ня, такі як, наприклад, пероральний, інтраназаль(Hydronics, USA), Alhydrogel, масляні емульсії, наний шляхи введення, введення в лімфатичний приклад, емульсію мінерального масла, такого як вузол, внутрішньошкірний, внутрішньочеревинний, BayolF/Arlacel А і воду, або емульсію рослинної ректальний або вагінальний шлях введення, або олії, воду і емульгатор, такий як лецитин; галуни; поєднання цих шляхів введення. цитокіни биків; холестерин і поєднання ад'ювантів. Протоколи імунізації можуть бути оптимізовані, У переважному варіанті здійснення, сапонін, що використовуючи процедури, добре відомі в даній містить емульсію масла у воді, зазнає звичайної галузі. Тваринам можна вводити одиночну дозу мікрофлюїдизації. або, альтернативно, можна провести 2 або більше Особливо переважним джерелом вірусу BVDV щеплень з інтервалами 2-10 тижнів. В залежності типу 1 і 2 для використання в способі за даним від віку тварини, імуногенну композицію або комвинаходом є лінія вакцинних продуктів Bovi-Shieldâ позицію вакцин можна вводити повторно. Наприклад, даний винахід передбачає вакцинацію здоGOLDТМ (PFIZER INC.), що містить штам NADL рової великої рогатої худоби до віку 6міс. і вірусу BVDV (придбаний в National Animal Disease ревакцинацію у віці 6міс. У ще одному прикладі, Center (NADC), USDA, Еймс, Айова) і штам 53637 даний винахід передбачає вакцинацію великої вірусу BVDV типу 2 (Univ. Guelph, Guelph, Ont.) рогатої худоби перед злучанням, приблизно за 5 (ATCC No. PTA-4859). тижнів до злучання (або перед введенням в стадо) Переважно, штами NADL і 53637 являють соі, необов'язково, знов приблизно за 2 тижні до злубою модифіковані живі штами. Відповідно до даночання або під час вагітності для захисту ембріона го винаходу, штами за даним винаходом можуть проти інфекції, викликаної BVDV типів 1 і 2. Однобути доповнені комерційно доступними ад'юванкратні дози композицій за даним винаходом можна тами, переважно Quil A-Cholesterol-Amphigen (Hyтакож вводити приблизно через 3-4 тижні після dronics, USA). Переважна доза імуногенних компопершої дози. Передбачена також ревакцинація 1 зицій і композицій вакцин за даним винаходом раз на півроку однією дозою комбінованої вакцини становить приблизно 2,0мл. У композиції, що видля профілактики інфекції ембріона вірусом BVDV. користовуються в способах за даним винаходом, Ступінь і природу імунних відповідей, що індуможна включити консерванти. Консерванти, які куються у великої рогатої худоби, можна оцінити можуть використовуватися в даному винаході, різноманітними методиками. Наприклад, у щеплевключають гентаміцин і мертіолат. Можна також них тварин можна взяти сироватки і дослідити на додати носій, переважно PBS. Одержання модифінаявність антитіл, специфічних для вірусів BVDV, кованих живих вакцин, таке як атенуювання вірунаприклад, звичайним аналізом нейтралізації вірулентних штамів пасажем в культурі, відоме в даній су. галузі. Термін «ефективна кількість» належить до кіМодифіковані живі ізоляти BVDV можна також лькості комбінованої вакцини, достатньої для того, поєднувати з наступними бактеріями і вірусами, щоб викликати імунну відповідь у тварини, якій включаючи, але ними не обмежуючись, бичачий вона введена. Імунна відповідь може включати, вірус герпесу (BHV-1); бичачий респіраторний синбез обмеження, індукцію клітинного і/або гуморацитіальний вірус (BRSV), вірус парагрипу (PIV3), 13 86405 14 Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, LepПереважним шляхом введення є внутрішньом'язоtospira borgpetersenii hardio-prajitno, Leptospira icвий або підшкірний шлях введення. terohaemmorrhagia, Leptospira interrogans pomona, Даний винахід також передбачає однократну Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis, Leptospira первинну дозу з подальшою щорічною ревакцинаBratislava, Campylobacter fetus, Mannheimia (Pasцією, яка виключає необхідність введення додатteurella) haemolytica, Pasteurella multocida, Mycoкових доз телятам перед щорічною ревакцинацією bactenum bovis і Mycobacterium dispar. для створення і/або підтримки імунітету проти інВідповідно до даного винаходу, ефективна кіфекції. лькість BVDV або комбінованої вакцини, введена Вакцини, що вводяться відповідно до даного сприйнятливим самцям тварин, забезпечує ефеквинаходу, можуть включати додаткові компоненти, тивний імунітет проти інфекції сім'яників, викликатакі як ад'ювант (наприклад, мінеральні гелі, наної BVDV типу 2. В одному з варіантів здійснення, приклад гідроксид алюмінію; поверхнево-активні вакцина вводиться телятам двома дозами з інтерречовини, такі як холестерин, лізолецитин; гліковалом приблизно 3-4 тижні. Наприклад, перше зиди, наприклад похідні сапоніну, такі як Quil A, введення виконується, коли вік тварини складає QS-21 або GPI-0100; плюронові поліоли; поліаніовід приблизно 1 до приблизно 3 міс. Друге введенни; неіонні блок-співполімери, наприклад Pluronic ня виконується приблизно через 1-4 тижні після F-127; пептиди; мінеральні масла, наприклад, першого введення комбінованої вакцини. Montanide ISA-50, карбопол, Amphigenâ, AlhyВ іншому переважному варіанті здійснення drogel, масляні емульсії, наприклад емульсію мівведення виконується приблизно за 4-5 тижнів нерального масла, такого як BayolF/Arlacel А і воперед виведенням тварини або перед доставкою в ду, або емульсію рослинної олії, воду і емульгатор, установу штучного запліднення. Введення податаку як лецитин; галуни; цитокіни бика і поєднання льших доз вакцини переважно здійснюється щоріад'ювантів). чно. В іншому переважному варіанті здійснення, Відповідно до даного винаходу, введення тварину, вакциновану до віку приблизно 6 місяців, ефективної кількості вакцини, введене сприйнятпотрібно повторно вакцинувати після 6-місячного ливим самцям тварин у віці приблизно 3 міс, завіку. Введення подальших доз вакцини переважно безпечує ефективний імунітет проти інфекції сім'яздійснюється щорічно, хоч даним винаходом також ників. передбачається подальше введення доз вакцини У переважному варіанті здійснення вакцину 1 раз на 2 роки і 1 раз на півроку. вводять внутрішньом'язово. У ще одному переваЕфективна кількість вакцини залежить від інгжному варіанті здійснення вакцину вводять підшкіредієнтів вакцини і схеми введення. Звичайно, рно. Більш того, переважно, щоб доза вакцини коли у вакцині використовується препарат модифімістила від приблизно 1мл до приблизно 7мл, і кованого живого BVDV, то кількість вакцини, що переважно приблизно 2мл, причому щоб кожний містить від приблизно 102 до приблизно 1010 мл містив від приблизно 102 до приблизно 10 TCID50 одиниць на дозу BVDV, і переважно від TCID50 одиниць на дозу вірусу. Комбіновану вакприблизно 104 до приблизно 107 TCID50 одиниць цину бажано вводити тварині двічі; один раз у віці на дозу BVDV типів 1 і 2, ефективно для однократвід приблизно 1 до приблизно 3 міс. і інший раз ного введення сприйнятливим самцям тварин. приблизно через 3-5 тижнів. Даний винахід також Переважно, вакцина, яка забезпечує ефективний передбачає щорічну ревакцинацію однократною імунітет, містить приблизно 104-107 TCID50 одидозою. ниць/дозу BVDV типів 1 і 2, а переважніше приВинахід, крім того, належить до способу проблизно 105 TCID50 одиниць/дозу при однократному філактики інфекції сім'яників BVDV, який передбавведенні сприйнятливій тварині. Введення подачає: льших доз вакцини переважно проводять на щоріa) ідентифікацію тварини з підвищеним ризичній основі. Тварин, вакцинованих до віку прибликом інфекції сім'яників BVDV; і зно 6 міс, слід ревакцинувати у віці після 6 міс. b) введення тварині ефективної кількості вакВведення подальших доз вакцини переважно процини, вибраної з групи, яка складається з убитої водять щорічно. вакцини BVDV типу 1, убитої вакцини BVDV типу 2, Відповідно до даного винаходу, при введенні модифікованої живої вакцини BVDV типу 1, модипереважного продукту Bovi-Shieldâ GOLDТМ (Pfizer фікованої живої вакцини BVDV типу 2. Inc.), продукт вводять переважно однократно в Для ідентифікації тварини з підвищеним ризикількості від приблизно 0,1 до приблизно 5,0мл, ком інфекції BVDV фахівець дізнається, що тварипереважно від приблизно 1,5мл до приблизно на має підвищений ризик інфекції, якщо інфекція 2,5мл і переважніше приблизно 2мл. Введення BVDV з'являється в раніше неінфікованому стаді, подальших доз вакцини переважно проводять щоабо якщо сприйнятлива тварина контактує з іншою річно. Тварин, вакцинованих до віку приблизно 6 сприйнятливою твариною з інфекцією BVDV. міс, слід ревакцинувати після 6-місячного віку. BVDV передається від тварини до тварини фекаВведення подальших доз вакцини переважно прольно-оральним способом. Вірусне навантаження, водять щорічно. необхідне для виникнення симптомів інфекції, коВідповідно до даного винаходу, введення морелює з типом і штамом вірусу BVD, і це корелює же здійснюватися відомими шляхами, включаючи зі швидкістю поширення в стаді. Інфікованих твапероральний, інтраназальний, місцевий, трансдерин можна ідентифікувати по симптомах захворюрмальний і парентеральний (наприклад, внутрішвання. Загальні прояви інфекції BVDV можуть ньовенний, внутрішньочеревинний, внутрішньовключати: масові викидні, неродючість, нерівномішкірний, підшкірний або внутрішньом'язовий). рні статеві цикли, випадки ранньої загибелі плоду, 15 86405 16 висихання плоду в матці, пригнічення імунітету, танням BVDV типу 2 (10), в порівнянні з плацебо дизентерію, тромбоцитопенію і гіпоплазію мозку. (Bovi-Shieldâ-PI3-BRSV). Симптоми захворювання звичайно передують Проводили додаткову оцінку стану всіх бичків лейкопенії і зусилля дослідження до цього часу (n=17), включених в дослідження більш широкої були зосереджені на ідентифікації цього факту. антигенної стимуляції з використанням BVDV типу Серологічні дослідження показали, що висока 2, для визначення ефективності вакцинації Boviпроцентна частка великої рогатої худоби, інфікоShieldâ GOLDТМ 5 в профілактиці інфекції сім'яниваної BVDV, в тому числі та частина, яка вважаків, викликаної BVDV. Всі телята в первинному ється хронічно інфікованою (РІ), залишається клідослідженні являли собою 3-4-місячних, позбавнічно безсимптомною. Тому, переважним лених молозива телят (бичків і теличок). На 28-й способом ідентифікації інфікованих тварин є виявдень після вакцинації препаративною формою, що лення присутності самого вірусу, а не відстеження містить мінімальні імунізуючі дози (рівні мінімальсимптомів. Було розроблено декілька різних ної імунізуючої дози встановлюються перед ліценспособів тестування для виявлення вірусу зуванням вакцини і відображають більш низький BVDV і/або для виявлення тварин, інфікованих об'єм антигенного вірусу, ніж той, який присутній в BVDV. Ці способи тестування включають: зворотну кінцевому продукті. Визначення мінімальної імуні«гніздову» полімерну ланцюгову реакцію, імунозуючої дози допомагає гарантувати те, що коли ферментний аналіз (ELISA), стандартні методики продукт буде використовуватися на рівнях, що виділення вірусу і імуногістохімію (Haines et al., випускаються, він буде послідовно стимулювати "Monoclonal Antibody-Based Immunohistochemical адекватний захист проти захворювання) і BVDV Detection of Bovine Viral Diarrhea Virus in Formalinтипу 1, і BVDV типу 2, у всіх телят, що були вакциFixed, Paraffin-Embedded Tissues, " Vet. Pathol., новані і одержували плацебо контроль, проводили 29:27-32 (1992)). інтраназальну антигенну стимуляцію штамом Як PCR, так і методики виділення вірусу, за24515 нецитопатичного BVDV типу 2. Штам 24515 вдяки властивій їм чутливості, здатні виявити дуже був виділений в Канаді при важкому спалаху BVD, низькі рівні BVDV. Імуногістохімія зразків тканини, внаслідок якого загинуло більше 40% худоби в таких як зразки біопсії, одержані вищипом на вусі, уражених стадах. Після антигенної стимуляції, у є ефективною методикою виявлення тварин з РІ. всіх 10 контрольних телят розвинулося важке заТехнологія ELISA також ефективна, хоч вона менш хворювання, що характеризувалося тривалою вічутлива, і добре придатна як універсальний діагремією (9-14 днів), лихоманкою в діапазоні від ностичний інструмент для виявлення інфекції 105,6°F до 107,2°F протягом 4-9 днів, лейкопенією BVDV у тварин, оскільки є недорогою, дає резуль(1-9 днів), тромбоцитопенією (