Нейрозахисна сполука dlhw та її застосування

1. Нейрозахисна сполука, що містить амінокислотну послідовність DLHW. 2. Фармацевтична композиція, що містить сполуку за п. 1 та необов'язково фармацевтичний прийнятний наповнювач та/або носій. 3. Композиція за п. 2, яка відрізняється тим, що композиція додатково містить щонайменше один додатковий фармацевтично активний компонент. 4. Композиція за п. 3, яка відрізняється тим, що зазначений щонайменше один фармацевтично активний компонент вибраний з групи, що містить тетрапептид L-аланіл-L-глутаміл-L-аспарагіл-Lпролін та церебролізин. 5. Композиція за будь-яким одним з пп. 2-4, яка відрізняється тим, що композиція забезпечена для внутрішньовенного, внутрішньом'язового, спінального, епідурального, трансдермального, парентерального, орального, кишкового, внутрішньоназального або ректального введення. 6. Композиція за будь-яким одним з пп. 2-5, яка відрізняється тим, що сполука включена в композицію в кількості від 0,1 мкг/г до 100 мг/г, переважно від 1 мкг/г до 80 мг/г. 7. Застосування сполуки з нейрозахисною активністю, що складається з амінокислотної послідовності DLHW для виготовлення лікарського засобу для лікування та/або попередження нейродегенеративної хвороби. 8. Застосування сполуки з нейрозахисною та нейротрофічною активністю, що складається з амінокислотної послідовності DLHW для виготовлення 2 (19) 1 3 Даний винахід стосується нейрозахисної сполуки та її застосувань. Населення індустріальних країн швидко старіє через більшу тривалість життя, та постійно збільшується кількість людей, уражених нейродегенеративними хворобами, що створює глобальну проблему цих хвороб. Нейродегенеративні хвороби виникають через поступову та прогресуючу втрату нервових клітин, що призводить до дисфункції нервової системи, та можуть йти поруч з різними причинами старіння (наприклад, вплив навколишнього середовища, генетичні дефекти). До теперішнього часу відомо більш ніж 600 нейрологічних порушень. Головні відомі фактори ризику нейродегенеративної хвороби включають певні генетичні поліморфізми та збільшення віку. Інші можливі причини можуть включати стать, погану освіту, ендокринні стани, окислювальний стрес, запалення, удар, гіпертензію, діабет, паління, травму голови, депресію, інфекцію, пухлини, дефіцит вітамінів, імунні та метаболічні стани та вплив хімічних речовин. Через те, що патогенез багатьох з цих хвороб залишається невідомим, також визнають роль навколишнього середовища в цих хворобах. Огляд нейродегенеративних хвороб можна знайти, наприклад, в "Neurodegenerative Diseases: Neurobiology, Pathogenesis and Therapeutics" [M. Flint Beal, Anthony E. Lang, and Albert C. Ludolph; Cambridge University Press; 2005]. Для лікування нейродегенеративних хвороб регулярно застосовують декілька лікарських засобів, що містять одну або більше активну сполуку, таких як пірацетам, німотоп, вінпоцетин, гліатиніл, церебролізин, цитофлавін та подібне. Сполуки, відомі в даній галузі, проявляють різні способи дії. Наприклад, церебролізин, лікарський засіб на основі пептиду, отриманий з очищених білків мозку тварин шляхом стандартного ферментативного розкладу, проявляє активність, подібну фактору росту нервів, на нейрони від нервового вузла задніх корінців, нейротрофічні та нейрозахисні ефекти. З попереднього рівня техніки відомі декілька терапевтичних речовин з нейрозахисними властивостями. Міжнародна заявка WO 01/29067, наприклад, стосується тетрапептиду L-аланіл-Lглутаміл-L-аспарагіл-L-пролін, що як біологічно активна сполука стимулює функціональну активність нейронів. Застосування L-Ala-L-Glu-L-Asp-LPro тетрапептиду в медицині запропоновано для виготовлення лікарських засобів, що стимулюють функціональну активність нейронів. Заявка на патент США №2004/102370 стосується пептидів, що містять незамінну тетрамерну пептидну структуральну одиницю Xaa-Xaa-XaaXaa, де Xaa в положенні 1 представляє Glu або Asp, Xaa в положенні 2 представляє будь-яку амінокислоту, Xaa в положенні 3 представляє будьяку амінокислоту, а Xaa в положенні 4 представляє Glu або Asp. Зазначені пептиди застосовують 94604 4 для лікування нейродегенеративних хвороб та нервових порушень, та вони, як описано, є стимуляторами регенерації аксонів та виживання. Метою даного винаходу є забезпечення нових сполук, які будуть застосовуватися у курсі лікування нейродегенеративних хвороб та для поліпшення пам'яті у здорових людей. Таким чином, даний винахід стосується нейрозахисної сполуки, що містить амінокислотну послідовність DLHW. Застосовують абревіатури залишків амінокислоти, загально відомі в даній галузі, а саме D означає аспарагінову кислоту (Asp), L означає лейцин (Leu), H означає гістидин (His), та W означає триптофан (Тrр). Сполука за даним винаходом може проявляти нейрозахисні та нейротрофічні властивості, впливаючи на життєздатність нервових клітин. Такі властивості дозволяють посилити життєздатність нейронних клітин. Зазначена сполука, яка також може бути частиною білка, кон'югованою з білком, кон'югованою з іншими молекулами і т. д., показує нейрозахисні властивості, подібні властивостям інших нейрозахисних засобів, добре відомих в даній галузі. Сполуку за даним винаходом можна вводити разом (наприклад, як одну окрему дозовану форму) або паралельно (наприклад, різними шляхами застосування та/або ділянками) з іншими активними компонентами, або як окремий активний компонент. Якщо сполука за даним винаходом є частиною білка, або кон'югована, або злита з білком, або кон'югована з іншою молекулою (наприклад, гліканом), зазначена сполука повинна бути представлена на поверхні зазначеного білка або зазначеної кон'югованої молекули, щоб активувати або інактивувати каскади передачі сигналу. Доступність пептиду за даним винаходом можна визначити за конформацією білка, розрахованою за допомогою комп'ютерних програм або за допомогою експериментальних підходів. Переважними партнерами кон'югації або злиття сполуки даного винаходу є молекули, які можуть дозволити націлювання сполуки на специфічну ділянку в організмі індивідуума після її введення. Партнерами злиття можуть бути, наприклад, антитіла, спрямовані на певні клітини у індивідуума. Як застосовують в даному описі, вираз "нейрозахисна" сполука або "нейрозахисна" композиція означає сполуку (або суміш сполук), що захищає нейронну клітину від токсичної речовини, стабілізує клітинну мембрану нейронної клітини та/або допомагає в нормалізації функцій нейронних клітин. Тим самим, "нейрозахисна" сполука попереджує втрату життєздатності або функцій нейронних клітин у стресових станах. Нейрозахисну активність можна визначити аналізом клітинної культури (вимірюючи життєздатність нейронних клітин, наприклад, аналізом МТТ (3-(4,5диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифеніл тетранатрій 5 бромід) [Mosmann Т (1983), J. Immuno. Methods 65: 55-61]. Сполуки даного винаходу також проявляють нейротрофічні та/або нейрогенні властивості. Це означає, що сполуки за даним винаходом також можуть стимулювати ріст нейронних клітин. Основна структура сполуки за даним винаходом, яка сформована амінокислотами, переважно синтезована хімічно за способами, відомими в даній галузі, наприклад, способом, розробленим Merrifield та ін. [Merrifield, R.B. (1963) J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2154; твердофазовий пептидний синтез]. Спосіб твердофазового пептидного синтезу, введений Merrifield в 1963 p., наприклад, включає приєднання ланцюга пептиду росту до твердої основи. Амінокислота, що відповідає С-кінцю цільового пептиду, ковалентно приєднана до нерозчинної полімерної основи ("смоли"). Наступна амінокислота із захищеною альфа-амінокислотою активується та реагує з амінокислотою, зв'язаною зі смолою, для утворення аміно-захищеного дипептиду на смолі. Амінозахисна група видаляється, а подовження ланцюга продовжується з третьою та наступною захищеними амінокислотами. Після того, як ланцюг цільового захищеного пептиду побудовано, смола розщеплюється придатними хімічними засобами, тим самим, вивільняючи неочищений пептидний продукт у розчин (для способів твердофазного пептидного синтезу та інших способів пептидних синтезів дивись також Fields G.B. (ed.), Solid-Phase Peptide Synthesis in Methods in ENZYMOLOGY, Vol. 289, Academic Press, San Diego (1997); Bodansky, M., Bodansky, A., The practice of peptide synthesis (2nd edn.), Springer Verlag, Berlin (1995); Pennington, M.W., Dunn, B.M. (eds), Peptide Synthesis Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol. 35, Humana Press Inc., Totowa (1994); Grant, G.A. (ed.), Synthetic peptides: a user's guide, W.H. Freemann & Co., New York (1992)). Неорганічний катіон на С-кінці сполуки за даним винаходом може бути катіоном лужного металу або лужноземельного металу, переважно катіоном літію, натрію, калію, магнію або кальцію. Ці неорганічні катіони регулярно застосовують для виготовлення солей фармацевтично активних речовин. Органічним катіоном може бути четвертинний іон амонію. Якщо N-кінець сполуки за даним винаходом несе позитивний заряд, зазначений заряд може бути переважно компенсується еквівалентом неорганічного або органічного аніона. Органічним аніоном може бути, наприклад, аніон оцтової кислоти. За іншим переважним варіантом здійснення даного винаходу алкільний залишок містить менш ніж 30, переважно менш ніж 20, більш переважно менш ніж 10 атомів вуглецю. Жирна кислота, наприклад, яка етерифікується із сполукою за даним винаходом, може змінювати її фізичні властивості, що робить сполуку більш гідрофобною. 94604 6 За іншим переважним варіантом здійснення даного винаходу сполука формули (І) може бути структурною одиницею вищої молекули. Зазначена молекула може містити 2, 3, 4, 5, 6, 10 або більше сполук за даним винаходом. Така вища молекула може бути значно більш ефективною при введенні індивідууму, ніж окрема молекула сполуки. Інший аспект даного винаходу стосується фармацевтичної композиції, що містить сполуку за даним винаходом та необов'язково, щонайменш, один фармацевтично прийнятний наповнювач та/або носій. Сполука за даним винаходом може бути сформульована у фармацевтичний препарат, який можна вводити пацієнту для попередження або лікування хвороби мозку, а саме, нейродегенеративної хвороби. Фармацевтичний препарат може додатково містити фармацевтично прийнятні наповнювачі та/або носії. Придатні наповнювачі та носії добре відомі в даній галузі [дивись, наприклад, "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 5th Edition by Raymond C. Rowe, Paul J. Sheskey, Sian C Owen (2005), APhA Publications]. За переважним варіантом здійснення даного винаходу композиція може додатково містити, щонайменш, один додатковий фармацевтично активний компонент. Фармацевтичний препарат за даним винаходом може містити разом з нейрозахисною сполукою за даним винаходом додатково активні компоненти, які можуть мати подібні властивості при введенні індивідууму або можуть викликати інші реакції у пацієнта. Зазначений, щонайменш, один фармацевтично активний компонент переважно вибирають з групи, що містить тетрапептид L-аланіл-Lглутаміл-L-аспарагіл-L-пролін [дивись, наприклад, WO 01/29067] та церебролізин [дивись, наприклад, ЕР 452299]. За даним винаходом, наприклад, подібні до антиоксидантів вітаміни можна передбачати як додаткові активні компоненти через те, що антиоксиданти інгібують окислення або пригнічують реакції за участю кисню, вільних радикалів кисню, реактивних видів кисню, включаючи пероксиди. Антиоксиданти, особливо антиоксиданти, що розчиняються у ліпідах, можуть абсорбуватися на клітинній мембрані для нейтралізації радикалів кисню та, тим самим, захищати мембрану. Антиоксидантами, що застосовують у даному винаході, переважно є вітамінні антиоксиданти, які можна вибрати з групи, що містить усі форми вітаміну А, включаючи ретинол та 3,4-дидегідроретинол, усі форми каротину, такі як альфа-каротин, бетакаротин, гама-каротин, дельта-каротин, усі форми вітаміну С (D-аскорбінова кислота, L-аскорбінова кислота), усі форми токоферолу, такі як вітамін Е (альфа-токоферол, 3,4-дигідро-2,5,7,8тетраметил-2-(4,8,12-триметилтридецил)-2Н-1бензопіран-6-ол), бета-токоферол, гаматокоферол, дельта-токоферол, токохінон, токотріенол, та складні ефіри вітаміну Е, які легко гідролізуються до вітаміну Е, такі як вітаміну Е ацетат та вітаміну Е сукцинат, та фармацевтично прийнятні 7 солі вітаміну Е, такі як вітаміну Е фосфат, проліки вітаміну А, каротину, вітаміну С та вітаміну Е, фармацевтично прийнятні солі вітаміну А, каротину, вітаміну С та вітаміну Е і подібне, та їх суміші. За іншим переважним варіантом здійснення даного винаходу композиція забезпечена для внутрішньовенного, внутрішньом'язового, спінального, епідурального, трансдермального, парентерального, орального, кишкового, внутрішньоназального або ректального введення. В залежності від шляху введення фармацевтична композиція за даним винаходом може бути сформульована, наприклад, як таблетки, капсули, рідини, вливання та супозиторії [дивись, наприклад, "Pharmaceutical Formulation Development of Compounds" by Sven Frokjaer (1999), CRC; "Handbook of Pharmaceutical Manufacturing Formulations" by Sarfaraz K. Niazi (2004), CRC]. Сполуки переважно включають до композиції в кількості від 0,1 мкг/г до 100 мг/г, переважно від 1 мкг/г до 80 мг/г. Інший аспект даного винаходу стосується застосування сполуки з нейрозахисною активністю, що містить молекулу формули (І): Xn-DLHW-Ym, де X та Y представляють залишок амінокислоти, та n і m являють собою ціле число від 0 до 3, та, як зазначено вище, виготовлення лікарського засобу для лікування та/або попередження нейродегенеративної хвороби. За даним винаходом усі сполуки формули (І), що мають нейрозахисну активність, можна застосовувати для виготовлення лікарського засобу для лікування та/або попередження нейродегенеративних хвороб. Нейрозахисну активність можна визначити, наприклад, аналізом МТТ (Mosmann T (1983), J. Immuno. Methods 65: 55-61). Аналіз МТТ є аналізом клітинної життєздатності. В метаболічно активних клітинах (наприклад, нейронних клітинах), фермент сукцинатдегідрогеназа руйнує МТТ до пурпурно-блакитних частинок формазану. Усі життєздатні клітини, оброблені МТТ, стають пурпурноблакитними. Усі мертві оброблені клітини не здатні руйнувати МТТ, та, таким чином, їх кольори не змінюються. Ступень зміни кольору, що є мірою кількості частинок формазану, можна виміряти зчитуванням спектральної поглинаючої здатності за допомогою зчитувача планшетів. Життєздатність виражають як відсоток контролю. Якщо С-кінець сполуки (І) негативно заряджений, зазначений заряд може бути компенсований еквівалентом неорганічного або органічного катіону або алкільного залишку. Сполука за даним винаходом може проявляти нейрозахисні та нейротрофічні властивості, впливаючи на життєздатність нервових клітин. Ці властивості дозволяють посилити життєздатність нейронних клітин. Зазначена сполука, яка також може бути частиною білка, кон'югованою з білком, кон'югованою з іншими молекулами і т. д., показує нейрозахисні властивості, подібні до таких властивостей інших нейрозахисних засобів, добре відомих в даній галузі. Сполуку за даним винаходом можна 94604 8 вводити разом (наприклад, в формі однієї окремої дози), або паралельно (наприклад, різні шляхи та/або ділянки застосування) з іншими активними компонентами, або як окремий активний компонент. Якщо сполука за даним винаходом є частиною, або кон'югованою або злитою з білком, або кон'югованою з іншою молекулою (наприклад, гліканом), зазначена сполука повинна бути представленою на поверхні зазначеного білка або зазначеної кон'югованої молекули, щоб активувати або інактивувати каскади передачі сигналу. Доступність пептиду за даним винаходом можна визначити за конформацією білка, розрахованою за допомогою комп'ютерних програм, або за допомогою експериментальних підходів. Переважними партнерами кон'югації або злиття сполуки даного винаходу є молекули, що можуть дозволити націлювання сполуки на специфічну ділянку організму індивідууму після її введення. Партнерами злиття можуть бути, наприклад, антитіла, спрямовані на певні клітини у індивідуума. Залишок амінокислоти, переважно зв'язаний зі сполукою за даним винаходом, можна вибрати з групи усіх відомих амінокислот природного походження (аланін, аргінін, аспарагін, аспарагінова кислота, цистеїн, глутамін, глутамінова кислота, гліцин, гістидин, ізолейцин, лейцин, лізин, метіонін, фенілаланін, пролін, серин, треонін, триптофан, тирозин, валін) або звичайно з "нестандартних" амінокислот, таких як селеноцистеїн, піролізин, таурин, GABA (гама-аміномасляна кислота), лантіонін, 1-аміноізомасляна кислота, дегідроаланін, дегідро-аміномасляна кислота, гідроксипролін та орнітин. Сполука за даним винаходом переважно неімуногенна. Вираз "неімуногенна сполука", як застосовують в даному описі, означає молекулу, а саме сполуку, яка по суті не провокує імунну відповідь in vivo, коли її вводять людині або тварині. Цю властивість молекули можна визначити способами, відомими в даній галузі. Наприклад, якщо введення молекули за даним винаходом тварині (наприклад, кролю, миші) провокує у тварини суттєве збільшення антитіл, спрямованих проти зазначеної молекули, зазначену молекулу вважають "імуногенною сполукою", однак, якщо специфічні до молекули антитіла не можуть бути індуковані у тварини або людини після введення зазначеної молекули, її вважають "неімуногенною сполукою". Важливо, що сполуки за даним винаходом є неімуногенними через те, що імуногенні сполуки звичайно виділяються з організму імунною системою. Основну структуру сполуки за даним винаходом, яка сформована амінокислотами, переважно синтезують хімічно способами, відомими в даній галузі, наприклад способом, розробленим Merrifield та ін. (Merrifield, R.B. (1963) J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2154; твердо фазовий синтез пептиду). Неорганічний катіон на С-кінці сполуки за даним винаходом може бути катіоном лужного або лужноземельного металу, переважно катіоном літію, натрію, калію, магнію або кальцію. 9 Ці неорганічні катіони регулярно застосовують для виготовлення солей фармацевтично активних речовин. Органічний катіон може бути іоном четвертинного амонію. Якщо N-кінець сполуки за даним винаходом несе позитивний заряд, зазначений заряд може бути переважно компенсованим еквівалентом неорганічного або органічного аніона. Органічним аніоном може бути, наприклад, аніон оцтової кислоти. За іншим переважним варіантом здійснення даного винаходу алкільний залишок містить менш ніж 30, переважно менш ніж 20, більш переважно менш ніж 10 атомів вуглецю. Жирна кислота, наприклад, яка етерифікується із сполукою за даним винаходом, може змінювати її фізичні властивості, що робить сполуку більш гідрофобною. За іншим переважним варіантом здійснення даного винаходу сполука формули (І) може бути структурною одиницею вищої молекулу. Зазначена молекула може містити 2, 3, 4, 5, 6, 10 або більше сполук за даним винаходом. Така вища молекула може бути значно більш ефективною при введенні індивідууму, ніж окрема молекула сполуки. За переважним варіантом здійснення даного винаходу сполука є сполукою за даним винаходом, як зазначено вище. Нейродегенеративну хворобу переважно вибирають з групи, що містить хворобу Александера, хворобу Альпера, хворобу Альцгеймера, бічний аміотрофічний склероз, атаксію-телеангіектазію, хворобу Канавана, синдром Коккейна, кортикобазальну дегенерацію, хворобу КрейтцфельдаЯкоба, епілепсію, хворобу Гентингтона, хворобу Кенеді, хворобу Крабе, деменцію з тільцями Леві, хворобу Мачадо-Джозефа (спінальноцеребелярна атаксія типу 3), розсіяний склероз, множинну системну атрофію, хворобу Паркінсона, хворобу Пеліцеуса-Мерцбахера, хворобу Піка, первинний бічний склероз, хворобу Рефсума, хворобу Сандгофа, хворобу Шилдера, спінальноцеребелярну атаксію, хворобу Стіла-РичардсонаОльшевського, удар та сухотку спинного мозку. Разом з цими переважними нейродегенеративними хворобами сполуки за даним винаходом також можна застосовувати для лікування інших порушень мозку. В переважному варіанті здійснення даного винаходу сполуки даного винаходу можна застосовувати для виготовлення лікарського засобу для поліпшення здатностей навчання та пам'яті у індивідуума. Введення сполуки даного винаходу індивідууму, здоровій персоні або персоні, що страждає на хворобу, переважно нейрологічну хворобу, значно покращує здатності до навчання та пам'яті зазначеної персони. Таким чином, введення сполук даного винаходу здоровим індивідуумам покращує пам'ять. Придатним аналізом для виявлення цих позитивних ефектів на тваринній моделі може бути аналіз "водний лабіринт Моріса". В одному варіанті здійснення даного винаходу пептид або білок, що містить DLHW, можна засто 94604 10 совувати як лікарський засіб, що стимулює процес відновлення мозку, та застосовувати для лікування та попередження пошкоджень мозку, пов'язаних з травмою, включаючи лікування пошкоджень мозку після перелому склепіння черепа, основи черепа, множинні переломи кісток, лікування пошкоджень мозку у випадках внутрішньочерепної травми (наприклад, посттравматичний струс мозку, поранення мозку та контузія, субарахноїдальна, субдуральна та екстрадуральна кровотеча), лікування та попередження травматичного шоку, лікування пошкоджень мозку, пов'язаних з впливом радіації, низької температури, нагрівання та світла, тиску повітря, електричного струму та струму надвисокої частоти, лікування та попередження сповільнених ефектів переломів черепа, лікування та попередження сповільнених ефектів внутрішньочерепної травми, лікування та попередження сповільнених пошкоджень мозку, спричинених радіацією, ускладнень після хірургічних та інших медичних втручань. В іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати як лікарський засіб, що пригнічує токсичні ефекти нейротрофічних засобів, стимулює процес відновлення мозку та відкриває активність захисту мозку для лікування та попередження пошкоджень мозку після отруєння, включаючи лікування пошкоджень мозку після отруєння терапевтичними засобами, медичними та біологічними сполуками, лікування ураження мозку засобами немедичного походження, лікування та попередження сповільнених пошкоджень мозку, спричинених отруєнням лікарськими засобами та немедичними речовинами. У іншому варіант здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу з ноотропною активністю та стимулюючого процес відновлення мозку для лікування та попередження розумової недостатності. У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати для стимуляції процесу відновлення мозку та рухової активності для лікування та попередження паралітичних порушень включаючи лікування та попередження геміплегії, лікування та попередження дитячого церебрального паралічу, лікування та попередження інших паралітичних синдромів (квадриплегія, параплегія, диплегія верхніх кінцівок, моноплегія нижніх кінцівок). У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу, стимулюючого процес відновлення мозку з церебропротекторною активністю для лікування та попередження уражень мозку у випадку аномалій хромосоми, включаючи синдром Дауна. У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу, стимулюючого процес відновлення мозку з церебропротекторною активністю для лікування та попередження уражень мозку у випадку запальних порушень мозку, включаючи лікування та попередження уражень мозку у випадку бактеріального менінгіту, включаючи кри 11 птококовий менінгіт у пацієнтів зі СНІДом, лікування та попередження уражень мозку у випадку не бактеріального менінгіту, лікування та попередження уражень мозку у випадку менінгіту незрозумілого походження, лікування та попередження уражень мозку у випадку енцефаліту, мієліту та енцефаломієліту, включаючи мозковий токсоплазмоз пацієнтів зі СНІДом, для лікування та попередження уражень мозку у випадку інтракраніального абсцесу, для лікування та попередження уражень мозку у випадку флебіту та тромбофлебіту інтракраніального венозного синусу, для лікування та попередження ускладнень після інтракраніального абсцесу або гнійної інфекції. У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу, стимулюючого процес відновлення мозку з церебропротекторною та ноотропною активністю для лікування та попередження уражень мозку у випадку мозково-судинних порушень, включаючи лікування та попередження уражень мозку у випадку субарахноїдальної кровотечі, лікування та попередження уражень мозку у випадку мозкової кровотечі, лікування та попередження уражень мозку у випадку закупорювання та стенозу передмозкових артерій, лікування та попередження уражень мозку у випадку закупорювання мозкових артерій, лікування та попередження уражень мозку у випадку перехідної ішемії головного мозку, лікування та попередження уражень мозку у випадку інших мозково-судинних порушень (гострі мозково-судинні порушення, атеросклероз судин головного мозку та інші узагальнені мозково-судинні порушення, гіпертонічна енцефалопатія, мозкова аневризма, мозковий артеріїт та негнійний тромбоз інтракраніального венозного синусу). У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу, стимулюючого процес відновлення мозку, що має церебропротекторну та ноотропну активність, для лікування та попередження алкогольного психозу, включаючи лікування та попередження гострого алкогольного марення при синдромі абстиненції, лікування та попередження алкогольного амнестичного синдрому та інші порушення алкогольної деменції, лікування та попередження паталогічної алкогольної інтоксикації, лікування та попередження алкогольної параної та алкогольного психозу параноїдального типу. У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу, стимулюючого процес відновлення мозку, що має церебропротекторну та ноотропну активність, для лікування та попередження ураження мозку у випадку алкоголізму. У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу, що пригнічує токсичні ефекти нейротропічних засобів та що має церебропротекторну та ноотропну активність для лікування та попередження психозу, що викликаний лікарським засобом, включаючи лікування та попередження абстинентного синдрому лікарського 94604 12 засобу, лікування та попередження параноїдальних та/або галюцинаторних порушень, викликаних лікарським засобом, лікування та попередження паталогічної інтоксикації медичними засобами, лікування та попередження інших психічних порушень, що викликані лікарським засобом (марення, деменція, амнестичний синдром та органічний афективний синдром). У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу, що пригнічує токсичні ефекти нейротропічних засобів, та що має церебропротекторну активність для лікування та попередження звикання до лікарського засобу, включаючи лікування та попередження звикання до опіоїдних засобів, лікування та попередження звикання до барбітуратів, седативних засобів та транквілізаторів, лікування та попередження звикання до кокаїну, лікування та попередження звикання до коноплі та її похідних, лікування та попередження звикання до амфетаміну та психостимулюючих засобів, лікування та попередження звикання до галюциногенних засобів, лікування та попередження уражень мозку, що викликані неправильним застосуванням лікарського засобу без звикання до лікарського засобу (неправильне застосування алкоголю, тютюну, коноплі, галюциногенів, опіоїдів, кокаїну, психостимулюючих засобів, антидепресантів). У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості засобу для лікування та попередження психогенних симптомів та синдромів, включаючи лікування та попередження психогенних фізіологічних уражень, лікування та попередження інших психогенних симптомів та синдромів (дизартрія та утрудненість, тики, психогенна анорексія, повторні стереотипні рухи, неорганічні порушення сну, психогенні порушення харчування, енурез, психалгія), лікування та попередження гострої реакції на стрес, лікування та попередження реакцій, спричинених психологічними напрямками. У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості засобу для лікування та попередження неорганічний психозів, включаючи лікування та попередження шизофренічних порушень, лікування та попередження афективних психозів, лікування та попередження параноїдальних станів, лікування та попередження іншого неорганічного психозу (психоз депресивного та збудженого станів, реактивний зі сплутаністю свідомості, гострі параноїдальні реакції, психогенний параноїдальний психоз) та недиференційованого психозу, включаючи психоз, що викликаний ураженнями мозку у пацієнтів зі СНІДом, лікування та попередження дитячого психозу, включаючи дитячий аутизм та дезінтегративний психоз. У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу, що стимулює процеси відновлення мозку, а також що має церебропротекторну і ноотропну активність для лікування та попередження уражень мозку у випадку інших мозкових порушень, включаючи лікування та попере 13 дження уражень мозку у випадку захисних оболонок мозку, лікування та попередження гіпоксичного ураження мозку, лікування та попередження уражень мозку у випадку інтракраніальної гіпертензії, лікування та попередження уражень мозку у випадку енцефалопатії. У іншому варіанті здійснення даного винаходу сполуки за даним винаходом можна застосовувати у якості лікарського засобу, стимулюючого процес відновлення мозку та рухову активність, що має церебропротекторні та ноотропні ефекти для лікування та попередження симптомів та синдромів у випадку різних мозкових порушень, включаючи лікування та попередження когнітивних порушень, пам'яті та уваги, уражень (наприклад, у випадку амнестичної хвороби, розумової недостатності, неорганічного психозу і т. д.), лікування та попередження афазії та апраксії (наприклад, у випадку амнестичної хвороби, неорганічного психозу, уражень мозку, що призводить до хромосомних аномалій і т. д.), лікування та попередження емоційних порушень (наприклад, у випадку неорганічних психозів, демієлінізуючих мозкових порушень і т. д.), лікування та попередження психопаталогічного синдрому (наприклад, у випадку перехідних органічних психотичних станів, психозу, що викликаний лікарським засобом, звиканням до лікарського засобу і т. д.), лікування та попередження астенічнодепресивного синдрому (наприклад, у випадку неорганічного психозу, уражень мозку, що призводить до хромосомних аномалій і т. д.), лікування та попередження синдрому марення (наприклад, у випадку психозу, викликаного лікарським засобом та звиканням до лікарського засобу, неорганічного психозу і т. д.), лікування та попередження порушень сну (наприклад, у випадку пухлини головного мозку, перехідних органічних психотичних станів і т. д.), для лікування та попередження церебрально-фокального синдрому (фокальні патологічні синдроми), (наприклад, у випадку уражень мозку, що викликані ускладненнями хірургічних або інших медичних втручань, демієлінуючих мозкових порушень і т. д.), лікування та попередження синдрому рухових порушень (наприклад, у випадку мозкових пухлин, уражень мозку, що викликані отруєнням і т. д.), лікування та попередження периферійної нейропатії, переважно діабетичної нейропатії. За переважним варіантом здійснення даного винаходу лікарський засіб додатково містить фармацевтично прийнятний наповнювач та/або носій як зазначено вище. За іншим переважним варіантом здійснення даного винаходу композиція додатково містить, щонайменш, один додатковий фармацевтично активний компонент. Зазначений, щонайменш, один фармацевтично активний компонент переважно вибирають з групи, що містить тетрапептид L-аланіл-Lглутаміл-L-аспарагіл-L-пролін та церебролізин. Лікарський засіб переважно забезпечений для внутрішньовенного, внутрішньом'язового, спінального, епідурального, трансдермального, парентерального, орального, кишкового або ректального введення. 94604 14 За переважним варіантом здійснення даного винаходу лікарський засіб містить сполуку в кількості від 0,1 мкг/г до 100 мг/г, переважно 1 мкг/г 80 мг/г. Зокрема, є переважним застосування як сполуки тетрапептиду, що має амінокислотну послідовність DLHW. Інший аспект даного винаходу стосується способу попередження прояву нейродегенеративної хвороби у індивідуума та лікування індивідуума, що страждає на нейродегенеративну хворобу, що містить введення фармацевтичного препарату або ефективної кількості сполуки за даним винаходом. Вираз "ефективна кількість" сполуки, як застосовують в даному описі, буде залежати від інших факторів шляху введення та фізичного стану індивідууму, якого піддадуть дії зазначеної сполуки. Способи для дослідження ефективної кількості відомі спеціалістам даної галузі. Нейродегенеративну хворобу переважно вибирають з групи, що містить хворобу Александера, хворобу Альпера, хворобу Альцгеймера, бічний аміотрофічний склероз, атаксію-телеангіектазію, хворобу Канавана, синдром Кокейна, кортикобазальну дегенерацію, хворобу КрейтцфельдаЯкоба, епілепсію, хворобу Гентингтона, хворобу Кенеді, хворобу Крабе, деменцію з тільцями Леві, хворобу Мачадо-Джозефа (спінальноцеребелярна атаксія типу 3), розсіяний склероз, множинну системну атрофію, хворобу Паркінсона, хворобу Пеліцеуса-Мерцбахера, хворобу Піка, первинний бічний склероз, хворобу Рефсума, хворобу Сандгофа, хворобу Шилдера, спінальноцеребелярну атаксію, хворобу Стіла-РичардсонаОльшевського, периферійну нейропатію, діабетичну нейропатію, удар та сухотку спинного мозку. За переважним варіантом здійснення даного винаходу сполуку вводять зазначеному індивідууму дозою 0,1 мкг/кг - 20 мг/кг ваги тіла, переважно 0,5 мкг/кг - 10 мг/кг ваги тіла. Інший аспект даного винаходу стосується способу культивування нейронних клітини, що містить етапи, на яких: - забезпечують культуру нейронних клітин, - додають до зазначеної культури сполуку за даним винаходом, та - інкубують суміш сполуки та культури. Сполука за даним винаходом також може переважно застосовуватись in vitro з метою культивування нейронних клітин, наприклад. Зазначену сполуку просто додають до культивованого середовища, відомого в даній галузі. Сполука переважно включена у зазначеній культурі в кількості 5 мкг/мл -2 мг/мл, переважно 10 мкг/мл - 1 мг/мл, більш переважно 15 мкг/мл 900 мкг/мл, культурального середовища. Сполука за даним винаходом проявляє нейрозахисний ефект на нейронні клітини, а саме коли вона включена в вищезгадану концентрацію культурального середовища. Даний винахід додатково ілюструється наступною фігурою та прикладами без обмеження ними. Фігура показує вплив DLHW у порівнянні з матрицею дослідження, що додали у 1DIV (перший 15 день in vitro), на життєздатність кортикальних нейронів, які отримали у аналізі з виключенням 2% сироватки за допомогою способу МТТ. Результати показані як середнє та SEM (стандартна помилка середнього) даних у % (контроль дорівнює 100%). Значення представлені як середнє та SEM у % (100%=контроль) з двох незалежних експериментів, що виконані за два дні з двома ідентичними 96-лунковими пластинами (n8 для кожної концентрації об'єкту дослідження та для контролів). Необроблений контроль представлений 0 та полягає у тому, що не отримує будь-яку дослідну матрицю. Приклади Приклад 1 Даний приклад виконали, застосовуючи аналіз з 2% сироваткою, для оцінювання нейрозахисного потенціалу пептиду, що містить амінокислотну послідовність DLHW. Ефекти також оцінювали за дослідною матрицею (6,18 мг/мл NaCl та 0,35 мг/мл KCl). 1.1. Дослідні та контрольні групи 1.1.1. Дослідні групи Пептиди, що містять амінокислотну послідовність DLHW, NIVTPR, HGFLPR та NMVPFPR, та дослідна матриця (6,18 мг/мл NaCl та 0,35 мг/мл KCl), як дослід, відповідно. 1.1.2. Умови аналізу Аналіз: аналіз з виключенням в культуру клітин 2% сироватки. Джерело клітин: нейрони кінцевого мозку від 9денного ембріону курчати (гібрид Lohman Brown). Живильне середовище: ЕМЕМ (мінімальне середовище Ігла) з 1 г глюкози/л, 2% FCS (фетальна теляча сироватка), 0,01% гентаміцин сульфату та 2 мМ L-глютаміну. Розмір групи: виконано 4 незалежних експерименти (n=8 для DLHW, NIVTPR, HGFLPR, NMVPFPR і дослідної матриці). Оцінювання ефектів: аналіз життєздатності МТТ; спектральну поглинаючу здатність (OD) вимірювали за допомогою зчитувача планшетів. Тривалість одного окремого експерименту: 8 днів. 1.2. Результати експериментів Даний приклад описує ефекти пептидів, що містять амінокислотні послідовності DLHW, NIVTPR, HGFLPR та NMVPFPR, у узгодженому аналізі з виключенням 2% сироватки, застосовуючи кортикальні нейрони курчати in vitro. Ефекти також оцінювали для дослідної матриці (6,18 мг/мл NaCl та 0,35 мг/мл KCl). Далі приведені головні висновки, що випливають з результатів. Отримані результати показують профіль ефекту дози, що чітко знижує нейронну життєздатність, досягаючи максимального ефекту понад 300% відносно необробленого контролю. Це додатково означає, що обраний аналіз безумовно здатний визначати профіль ефекту дози. В той час, як дослідна матриця була не здатною посилити нейронну життєздатність вище ступеню необробленого контролю, пептид DLHW чітко проявляв нейрозахисні ефекти. 94604 16 У даному прикладі аналізували DLHW як ефективну сполуку, що досягає високої величини ефекту (330% за межами контролів) при відносно низьких концентраціях. Результати даного прикладу показують, що цей невеликий пептид DLHW або сполуки, що містять зазначений пептид, вносять значний та ефективний вклад у посилення нейронної життєздатності. На відміну від цього, пептиди, що містять іншу амінокислотну послідовність, не проявляють такі ефекти. 2. Дослідні речовини 2.1. Мета експериментів Експерименти були виконані для визначення нейрозахисних ефектів пептиду, що містить амінокислотну послідовність DLHW, NIVTPR, HGFLPR, NMVPFPR, та дослідної матриці. 2.2. Дослідні та контрольні групи 2.2.1. Дослідні групи 2.2.1.1. Дослідна група (DLHW) Засіб для розбавлення: дослідна матриця (6,18 мг/мл NaCl та 0,35 мг/мл КС1). Спосіб застосування: один раз у перший день. Період застосування: протягом всього експерименту, тобто 8 днів, починаючи з першого дня. Концентрації: 5,6, 11,25, 22,5, 45, 90, 180, 360 і 720 мкг/мл. Об'єм введення: 0,625, 1,25, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80 мкл/мл середовища. 2.2.1.2. Дослідна група (NIVTPR) Засіб для розбавлення: дослідна матриця (6,18 мг/мл NaCl та 0,35 мг/мл KCl). Спосіб застосування: один раз у перший день. Період застосування: протягом всього експерименту, тобто 8 днів, починаючи з першого дня. Концентрації: 5,6, 11,25, 22,5, 45, 90, 180, 360 і 720 мкг/мл. Об'єм введення: 0,625, 1,25, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80 мкл/мл середовища. 2.2.1.3. Дослідна група (HGFLPR) Засіб для розбавлення: дослідна матриця (6,18 мг/мл NaCl та 0,35 мг/мл KCl). Спосіб застосування: один раз у перший день. Період застосування: протягом всього експерименту, тобто 8 днів, починаючи з першого дня. Концентрації: 5,6, 11,25, 22,5, 45, 90, 180, 360 і 720 мкг/мл. Об'єм введення: 0,625, 1,25, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80 мкл/мл середовища. 2.2.1.4. Дослідна група (NMVPFPR) Засіб для розбавлення: дослідна матриця (6,18 мг/мл NaCl та 0,35 мг/мл KCl). Спосіб застосування: один раз у перший день. Період застосування: протягом всього експерименту, тобто 8 днів, починаючи з першого дня. Концентрації: 5,6, 11,25, 22,5, 45, 90, 180, 360 і 720 мкг/мл. Об'єм введення: 0,625, 1,25, 2.5, 5, 10, 20, 40, 80 мкл/мл середовища. 2.2.1.5. Дослідна група (дослідна матриця) Назва, концентрація солі: дослідна матриця або контроль (6,18 мг/мл NaCl і 0,35 мг/мл KCl). Засіб для розбавлення: не застосовується ніякий засіб, застосовуються готові до застосування ін'єкційні розчини. Спосіб застосування: один раз у перший день. 17 Період застосування: протягом всього експерименту, тобто 8 днів, починаючи з першого дня. Концентрації: 5,6, 11,25, 22,5, 45, 90, 180, 360 та 720 мкг/мл. Об'єм введення: 0,625, 1,25, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80 мкл/мл середовища. 2.3. Умови аналізу Аналізи клітинної культури: аналіз з виключенням 2% сироватки. Джерело клітин: нейрони кінцевого мозку від 9денного ембріону курчати (гібрид Lohman Brown). Живильне середовище: ЕМЕМ з 1 г глюкози/л, 2% FCS, 0,01% гентаміцин сульфату та 2 мМ Lглютаміну. Розмір групи: виконано 4 незалежних експерименти (n=8 для DLHW і дослідної матриці; n=224 для контролів) Оцінювання ефектів: аналіз життєздатності МТТ; спектральну поглинаючу здатність (OD) вимірювали за допомогою зчитувача планшетів. Тривалість одного окремого експерименту: 8 днів. 3. Способи Аналітична процедура, яку застосовують у даному прикладі, представляє собою аналіз з виключенням 2% сироватки, застосовуючи виділені пташині кортикальні нейрони. У цьому аналізі культури клітин in vitro нейрозахисного та/або нейротрофічного потенціалу сполуки можна оцінювати визначенням життєздатності живих нейронів через певний період часу у культурі. Спосіб вимірювання кількості життєздатних нейронів представляє собою аналіз МТТ. 3.1. Об'єкти аналізу Біологічну активність DLHW, NIVTPR, HGFLPR, NMVPFPR та матриці дослідження (6,18 мг/мл NaCl та 0,35 мг/мл KCl) вивчали, застосовуючи визнану модельну систему культури пташиних клітин. 3.1.1. Приготування базових розчинів пептиду Пептиди, які потрібно аналізувати, розчинили у дослідній матриці (6,18 мг/мл NaCl та 0,35 мг/мл KCl). 3.2. Контролі Для контролю застосовували нейрони, не оброблені DLHW, NIVTPR, HGFLPR та NMVPFPR. 3.3. Об'єкти аналітичної процедури В даному прикладі пептиди, що містять амінокислотну послідовність DLHW, NIVTPR, HGFLPR та NMVPFPR, досліджували для оцінювання їх можливої активності посилення нейронної життєздатності виділених кортикальних нейронів. Пептид застосовували у концентрації 4,5 мг/мл. 3.4. Розмір групи/Концентрації До виділених нервових клітин один раз додали пептиди або матриці дослідження, тобто у перший день. Концентраціями, що містять діапазон дози, були 5,6, 11,25, 22,5, 45, 90, 180, 360 та 720 мкг/мл середовища; об'єми, що застосовували, складали 94604 18 0,625, 1,25, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80 мкл/мл середовища. 4. Оцінювання 4.1. Аналіз життєздатності МТТ Життєздатність нейронних культур визначали аналізом МТТ, застосовуючи зчитувач планшетів (570 нм). Аналіз МТТ являє собою чутливий аналіз, що вимірює активність мітохондріальної дегідрогенази тільки у життєздатних клітин. Його виконують за способом, що описаний Mosmann, J. Immunol. Meth, 1983, 55-63. Даний аналіз оснований на відновленні жовтого МТТ (3-(4,5диметилтіазол-2-іл)-2,5-дифенілтетразол бромід) до темно-синіх кристалів формазану мітохондріальною дегідрогеназою (сукцинат дегідрогенази). Так як дана реакція каталізується тільки в життєздатних клітинах, аналіз можна застосовувати для кількісного опису життєздатності клітини. Для дослідження життєздатності клітини розчин МТТ додали у кожну лунку у заключній концентрації 0,5 мг/мл. Через 2 години МТТ, що містить середовище, видалили. Клітини лізували у 3% SDS (додецилсульфат натрію), кристали формазану розчинили у ізопропанолі/НСІ. Для оцінювання спектральної поглинаючої здатності застосовували зчитувач планшетів (Anthos НТ II) при довжині хвилі 570 нм. Нейронну життєздатність виражали як спектральні поглинаючі здатності (OD). 5. Статистика Для оцінки різниці між обробленими і необробленими нейронами застосовували t-критерій Ст'юдента. Вважали, що різниця була значною, коли р