Похідні трипептиду у вигляді r- або rs-форми або їх фармацевтично прийнятні нетоксичні солі, що мають протитромботичні властивості, фармацевтична композиція

Изобретение относится к ингибиторам тромбина, полезным в качестве антикоагулянтов для человека и животных. В частности, изобретение относится к производным дипептида, а именно: L-пролин-L-аргининового альдегида, обладающим высокой противотромбозной активностью. Ингибирование тромбина в настоящее время достигается введением гепаринов и кумаринов. Механизм действия указанных средств подвергался усиленному изучению. Гепарины могут вводиться исключительно перентерально; и их дозировки должны тщательно контролироваться. Действие кумаринов основано на блокировании или ингибировании образования протромбина, при этом необходимо некоторое время для достижения максимальной эффективности. Хотя как гепарины, так и кумарины являются эффективными антикоагулянтами, тем не менее существует необходимость в антитромбиновых средствах быстрого действия с целью предотвращения образования сгустков крови, и не препятствующих действию плазмина по растворению существующих сгустков. Ингибирующие тромбин соединения, даваемые настоящим изобретением, представлены нижеследующей формулой l: где A представляет 1 группу формулы: в которой R - фенил формулы: где a и a' - независимо представляет водород, низший алкил, низшую алкоксигруппу, галоген, трифторметил, гидроксил; или R представляет тиенил; нафтил, незамещенный или моно- или дизамещенный низшей алкоксигруплой, циклогексил; R1 представляет водород; метил или этил; B представляет низший алкил, низшую алкоксигруппу или аминогруппу формулы: в которой R2 и R3 независимо представляют водород или низший алкил, или же R2 - водород, a R3 - ацетил, NBoc(низший) алкил, при условии, что когда R1 - метил или этил, тогда B отличен от метила или этила, или A представляет бициклическую группу формулы: Y представляет одноуглеродный радикал -CH2-; R5 представляет водород или трет-бутоксикарбонил; R6 представляет водород; и обозначенный пунктиром круг в пределах 6 - членного цикла бициклической группы указывает на пергидроцикл; и их фармацевтически приемлемые нетоксичные соли. Пептиды формулы (l) применимы в качестве противотромбозных средств и могут быть использованы в виде вспомогательных средств при лечении тканей активатором плазминогена (АПт), стрептокиназой или урокиназой. Эти соединения получают обычными способами. Например, Boc-D-Phg соединяют с эфиром L-пролина с образованием сложного эфира Boc-D-Phg-Pro. Сложноэфирную группу удаляют и Boc-D-Phg-Prg соединяют с лактамной формулой L-аргинина с получением лактама Boc-D-Phg-Pro-Arp в аминозащищенной форме. Лактамный цикл аргинина раскрывают восстановлением и после удаления аминозащитной группы в аргинине получают Boc-D-Phg-Pro-Arg-альдегид. Полученные пептиды превращают в приемлемые солевые формы, такие как ацетаты и сульфаты. Изобретением также дается способ предотвращения у человека и животных сгустков крови и фармацевтические составы, применимые в таком способе. Соединения формулы (l) являются трипептидами, когда A представляют аминокислотный остаток, такой как фенилглицил (Phg), а когда A отличен от аминокислотного остатка, т.е. когда B представляет группу, отличную от аминогруппы или алкиламиногруппы, в этом случае соединения являются N-ацильными производными дипептида-пролин-аргинин-альдегида (Pro-Arg-H). Как показано формулой (l) асимметрический центр фрагмента: A(C=O) имеет R- или RS-конфигурацию, в то время как фрагментов пролина и аргинин-альдегида - Lконфигурацию. Термины, применяемые при определении формулы (l), имеют следующие значения. "Низший апкил" относится к C1-C4-алкилу нормального или изо-строения, такому как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил и т.п. "Низшая алкоксигруппа" относится к C1-C4-алкоксигруппе, такой как метокси-, этокси-, н-пропокси-, изопропокси-, н-бутокси-, трет-бутоксигруппе и т.п. "Галоген" относится к фтору, хлору, брому и йоду. "Моно- или ди(низший алкил) аминогруппа" относится к таким группам, как метиламино-, этиламино-, диметиламино-, метилэтиламино-, диэтиламино-, н-бутиламино-, н-пропиламино-группа и т.п. Термин "C1-C6-алкил" относится к алкилу нормального или изо-строения, такому как C1-C4-алкил, определенный выше, и кроме того: н-пептил, изопентил, н-гексил, изомерные гексильные группы и т.п. "C2-C6алкенил" относится к ненасыщенным группам, таким как винил, аллил, бутенил, изомерные пентенильные и гексенильные группы, "C3-C7-циклоалкил" относится к циклическим углеводородам с 3 - 7 атомами углерода в цикле, таким как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил. Согласно определению формулы l, когда A представляет группу (R)(R1)(B)C-,тогда R может быть фенилом, который может быть моно- или дизамещен. Примеры таких фенилов включают: (a и a' = H), 4-метилфенил, 3этилфенил, 4-метоксифенил, 3-метоксифенил, 3-этоксифенил, 2-метоксифенил, 3-изопропоксифенил, 4гидроксифенил, 4-хлорфенил, 3-хлорфенил, 2-фторфенил, 3-фторфенил, 3-бромфенил, 4-фторфенил, 3трифторметилфенил, 4-гидроксиметилфенил, 2-гидроксиметилфенил, 3-ваминофенил, 4-аминофенил, 3-амино-4хлорфенил, 3,4-дихлорфенил, 3-гидрокси-4-фторфенил, 3-гидрокси-4-метилфенил, 3-метокси-4-гидроксифенил, 3-хлор-4-этоксифенил и аналогичные моно- или дизамещенные фенильные группы. Примеры R групп, когда R представляет нафтил или моно- или дизамещенный нафтил, включают: 1-нафтил, 2-нафтил, 6-метокси-2-нафтил, 8-гидрокси-1-нафтил, 8-амино-2-нафтил, 4-метил-1-нафтил, 6-хлор-2-нафтил, 4гидрокси-6-этокси-2-нафтил, 8-метиламино-4-хлор-2-нафтил, 6,8-диметокси-2-нафтил, 6-этил-1-нафтил, 4гидрокси-1-нафтил, 3-метокси-1-нафтил и аналогичные нафтильные группы. Примеры группы, представленных в формуле (l), когда B - аминогруппа формулы: -N(R2)(R3), включают: амино- (R2 = R3 = H), метиламино-, этиламино-, изопропиламино-, диметиламиногруппу и аналогичные аминогруппы; и когда R2 - водород, a R3 - оксикарбонил формулы: R4-O-C(O)-, тогда примеры таких групп включают: C1-C6-алкоксикарбониламиногруппы, такие как метоксикарбониламино-, этоксикарбониламино-, третбутоксикарбониламино-, изоамилоксикарбониламиногруппа и т.п.; C2-C6-алкенилоксикарбониламиногруппы, такие как винилоксикарбониламино-, аллилоксикарбониламино-, 2-бутенилоксикарбониламиногруппа и т.п.; C3-C7циклоалкоксикарбониламиногруппы, такие как циклопропилоксикарбониламино-, циклопентилоксикарбониламино, циклогексилоксикарбониламиногруппа и т.п. Оксикарбониламиногруппы, представленные символом B, кроме того, включают, например: бензилоксикарбониламино-, 4-нитробензилоксикарбониламино-, дифенилметоксикарбониламино-, фенилоксикарбониламиногруппу или замещенную фенилоксикарбониламиногруппу, в которой замещенный фенильный фрагмент принимает вышеприведенные значения, и т.п. Примеры групп A(C=O) из формулы l, когда A представляет радикал группы 1 формулы: (R)(P1)(B)C-, включают: фенилглицил, 3-метокстифенилглицил, 4-метоксифенилглицил, 4-хлорфенилглицил, 3,4дихлорфенилглицил, 3-трифторметилфенилглицил, N-(третбутилоксикарбонил)фенилглицил, N-(третбутилоксикарбонил-11-метил)фенилглицил, a-метилфенилацетил, a-этилфенилацетил, a-метоксифенилацетил, a-изопропоксифенилацетил, 1-нафтилглицил, 2-нафтилглицил, N-(трет-бутоксикарбонил)-2-нафтилглицил, 2тиенилглицил, 3-тиенилглицил, N-(циклопентилоксикарбонил)-2-тиенилглицил, 2-фурилглицил, N-этил-2фурилглицил, манделоил, 4-хлорманделоил, 3-метоксиманделоил, a-гидрокси-a-(2-нафтил)ацетил, a-гидрокси-a(2-тиенил)ацетил, 1,4-циклогексадиенилглицил, 1-циклогексадиенилглицил, N-(трет-бутилоксикарбонил)-1,4циклогексадиенилглицил, циклогексилглицил и аналогичные A(CO) группы. Пептидные производные, представленные формулой 1, где A - ахиральный 1-аминоциклопентил или 1аминоциклогексил, отраженные нижеследующей структурной формулой: где p представляет углерод-углеродную связь или -CH2-; R2 и R3 принимают вышеуказанные значения. Примеры подобных трипептидов включают: N-(1-аминоциклогексаноил)-Pro-Arg-H, N-(1-аминоциклопентаноил)-Pro-Arg-H; N-(1-метиламиноциклогексаноил)-Pro-Arg-H, N-(1-трет-бутилоксикарбониламиноциклогексаноил)-Pro-Arg-H и т.п. Примеры пептидов, представленных формулой l, где A - бициклическая группа вышеприведенной формулы 2, включают D-1,2,3,4-тетраизохинолин-1-илкарбонил- и D-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-илкарбонил-11-ацильные производные Pro-Arg-H, отраженные ниже: дигидроизоиндол-1-илкарбонильные производные, отраженные нижеприведенной формулой: оксо-производные, представленные формулами: и их пергидрированные производные. Символы R6 и R5 принимают вышеуказанные значения. R5 предпочтительно - водород и предпочтительно - водород, метоксигруппа, этоксигруппа, хлор или метил. Фармацевтически приемлемые соли пептидов изобретения включают соли с кислотами, образованные добавлением неорганических и карбоновых кислот. Примеры образующих соли неорганических кислот включают галоидводородные кислоты, такие как хлористоводородная кислота и бромистоводородная кислота; фосфорную кислоту и серную кислоту. Соли с карбоновыми кислотами образованы с такими кислотами, как уксусная, пропионовая, малоновая, малеиновая, лимонная, янтарная, яблочная, бензойная, фумаровая и аналогичными карбоновыми кислотами. Соли с кислотами получают обычным путем, например, нейтрализации соединения l в виде свободного основания кислотой. Рекомендуемые соли с кислотами включают сульфаты и гидрохлориды. Рекомендуемые воплощения изобретения включают соединения формулы l, где A представляет группу формулы: в которой R представляют фенил; или нафтил, или замещенный нафтил, R1 - водород и B - аминогруппа формулы: -N(R2)(R3). Дополнительные рекомендуемые соединения представлены вариантом, в котором R2 - водород и R3 - оксикарбонил формулы: R4O-C(O)-. Еще одно рекомендуемое воплощение изобретения включает соединения формулы l, где A - бициклическая группа формулы (ll). Рекомендуемые соединения такого воплощения представлены формулой l, где A(C=O) 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-илкарбонил (формула ll, Q = -CH2-CH2-, Y = -CH- и R5=R6= и 1,2,3,4тетрагидроизохинолин-3-илкарбонил (формула ll, Соединения формулы l получают известными способами соединения пептидов. Согласно одному из таких способов кислоту A-COOH, где A принимает значения, указанные для формулы l, соединяют с защищенными по карбоксилу пролином с образованием дипептида (если A - аминокислота) или сложного эфира N-ацилпролина (если A отличен от аминокислоты). Карбоксилзащитную сложно-эфирную группу пролинового фрагмента в полученном продукте удаляют и дипептид в виде свободной кислоты соединяют с лактамной формой аргинина. Вышеприведенная реакционная последовательность иллюстрируется нижеследующей схемой: где P представляет аминозащитную группу. Полученный присоединением Arg(P)-лактамный продукт (c) восстанавливают литийалюминийгидридом в инертном растворителе с раскрытием лактамного цикла и образованием трипептида в аргининальдегидной форме, представленного формулой: где Arg(P)-H представляет аминозащищенный аргинилальдегид. Лактамную форму аргинина получают внутримолекулярной реакцией аминозащищенного аргинина (Arg-OH). К примеру, Boc-Arg(CbZ)O, представленной формулой: вначале превращают в активную сложноэфирную форму, такую как активный смешанный ангидрид в реакции с хлорформатом, например, от этилхлорформата до изобутилхлорформата. Образование сложного эфира проводят в присутствии третичного амина, такого как 11-метилформалин. Добавление более сильного третичного амина, такого как триэтиламин приводит к внутримолекулярному ацилированию с образованием лактамной формы диаминозащищенного аргинина нижеприведенной формулы: Перед использованием в реакции соединения с A(C=O)-Pro-OH согласно вышеприведенной схема защитную Boc-группу селективно удаляют действием трифторуксусной кислоты с образованием необходимой свободной аминогруппы. Присоединение соединения ACOOH к сложному эфиру пролина, когда A - аминокислотный остаток, осуществляют первоначальной защитой аминогруппы аминокислоты. Используют обычные аминозащитные группы, часто применяемые для временной защиты или блокировки аминогруппы. Примеры подобных защитных групп включают: алкокси-, алкенилокси-, циклоалокси- и арилоксикарбонильные группы, такие как: этоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, адамантилоксикарбонил, трихлорэтоксикарбонил, бензилоксикарбонил, дифенилметоксикарбонил и аналогичные группы. Сложноэфирной группой, используемой для защиты карбоксила пролина в ходе реакции присоединения, может служить любая из обычно применяемых легко удаляемых сложно-эфирных групп, таких как: трет-бутил, бензил, п-нитробензил, пметоксибензил, дифенилметил, трихлорэтил, фенацил или триалкилсилил, образующие сложный эфир. При проведении реакции присоединения для пролина используют сложноэфирную группу, которая может быть удалена в условиях, при которых аминозащитная группа остается нетронутой. Аминозащитная группа ацилирующей кислоты (ACOOP) в результате остается в месте защиты аминогруппы в ходе последующего соединения с аргининлактамными производными и образования соединения c. Соединения формулы l, где A - группа (R)(R1)(B)C и B - аминогруппа -N(R2(R3), где R2 - водород и R3 - низший алкил, получают на основе соответствующего соединения, в котором B - аминогруппа, известными способами алкилирования. Например, N-метил-D-фенилглицил-L-пропил-L-аргининальдегид получают восстановительным алкилированием следующим образом. CbZ-защищенный D-фенилглицин соединяют в ДМФА с трет-бутиловым эфиром L-пролина в присутствии дициклогексилкарбодиимида (ДЦК) и гидроксибензотриазолла (ГОБт) с образованием дипептида: трет-бутилового эфира CbZ-D-фенилглицил-L-пролина. Полученный пептид гидрируют в этиловом спирте над палладием на угле с удалением защитной CbZ-группы, к продукту восстановления добавляют формальдегид и гидрирование продолжает с образованием трет-бутилового эфира N-метил-Dфенилглицил-L-пролина. N-метильную вторичную аминогруппу фенилглицильного фрагмента защищают CbZгруппой в реакции трет-бутилового эфира дипептида с бензилхлорформатом в ТГФ, содержащим Nметилморфолин, и образованием N-CbZ-N-метил-D-фенилглицил-L-пролин-трет-бутилового эфира. Сложноэфирную трет-бутильную группу удаляют при комнатной температуре в трифторуксусной кислоте, содержащей анизол, и получают N-CbZ-N-метил-D-фенилглицил-L-пролин. Полученный дипептид затем соединяют с CbZ-защищенной Arg-лактамом, после чего лактамный цикл раскрывают восстановлением с образованием ArG-альдегида по вышеприведенной методике. CbZ-защитные группы трипептида удаляют гидрированием над Pd-C в качестве катализатора с получением N-метил-D-фенилглицил-L-пролил-Lаргининальдегида. Соединения формулы l, где A - группу (R)(R1)(B)C-, в которой R - циклогексадиенил или циклогексенил и B алкиламиногруппа формулы: -N(R2)(R3), могут быть синтезированы восстановлением амина, образованного в реакции с низшим алкиловым альдегидом, цианоборгидридом натрия. Аналогично подобное N-алкилирование может быть осуществлено с помощью алкилйодида и гидрида натрия. Соединения формулы (l), где A - бициклическая группа формулы ll, получают теми же самыми вышеприведенными способами присоединения. Например, пептид формулы l, где A представляет 1,2,3,4тетрагидроизохинолин-1-ил, получают ацилированием сложного эфира пролина, такого как бензиловый эфир активным производным 1,2,3,4-тетрагидро-1-карбоксиизохинолина. Активные производные, которые можно при этом использовать, включают галоидангидриды кислоты, такие как хлорангидрид или бромангидрид, азид кислоты, а также активные сложные эфиры и ангидриды, типа тех, которые образуют вышеприведенным способом в реакции с хлорформатами. В ходе ацилирующего присоединения азот цикла в тетрагидроизохинолине (формула 2, R5=H) защищают или алкилируют. Например, для ацилирования сложного эфира пролина применяют такой активный эфир, как N-Boc-1,2,3,4-тетрагидро-1-карбоксиизохинолин, образованный реакцией с изобутилхлороформатом. В полученном в качестве продукта пептиде - N-Boc-1,2,3,4тетрагидроизохинолин-1-илкарбонил-пролин-слойный эфир удаляют эфирную группу, свободную кислоту превращают в активный эфир и последний присоединяют к лактамной форме аргинина. Полученную в качестве продукта лактам затем превращают вышеприведенным способом в альдегидную форму и получают соединение формулы д, а именно: Boc-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-илкарбонил-Pro-Arg-H. Пергидрированную бициклическую группу, представленную формулой ll, получают гидрированием обычным способом либо частично восстановленных, либо ненасыщенных кислот. К примеру, 1,2,3,4тетрагидроизохинолин-1-карбоновую кислоту гидрируют над оксидом платины в таком растворителе, как этанол, или уксусная кислота, и получают пергидро(декагидро)изохинолин-1-карбоновую кислоту. Затем пергидрокислоту используют вышеприведенным способом для ацилирования сложного эфира пролина. Примеры подобных пергидропроизводных формулы l включают: N-(D-декагидроизохинолин-1-оил)-L-пропил-L-аргининальдегид и N(D-декагидроизохинолин-3-оил)-1-пролил-1-аргинин-альдегид. Вышеописанные реакции присоединения проводят на холоду, предпочтительно в температурном интервале от примерно -20°C до примерно 15°C. Реакции присоединения осуществляют в инертном органическом растворителе, таком как диметилформамид, тетрагидрофуран, хлористый метилен, хлороформ и аналогичные обычные растворители. При использовании в реакции присоединения активного эфира ацилирующей кислоты такую реакцию обычно проводят в безводных условиях. Соединения изобретения лучше всего выделяют в виде солей с кислотами. Соли соединений формулы l, образованные с кислотами типа, упомянутых выше, применимы в качестве фармацевтически приемлемых солей для введения противотромбоцитных средств и для приготовления составов таких средств. Для выделения и очистки пептидов могут быть использованы и другие соли с кислотами. Например, могут быть использованы соли, образованные с сульфокислотами, такими как метансульфоновая кислота, н-бутансульфоновая кислота, птолуолсульфокислота и нафталинсульфокислота. Рекомендуемым способом выделения и очистки соединений формулы l с одновременным получением целевой стабильной солевой формы является способ, согласно которому стабильные соли неорганических кислот, такие как сульфат и гидрохлорид, получают препаративной очисткой с помощью хроматографии над C18 обращенной фазой. При этом водная фаза включает серную кислоту или хлористоводородную кислоту в концентрации 0,01 - 0,05%, ацетонитрил, ТГФ, метанол или другой приемлемый растворитель служит органическим компонентом. Значение pH кислотного элюента выдерживают в интервале значений pH 4 - 6, при этом точное значение pH зависит от конкретного пептида и применяемой основной смолы, например, БиО-РадAG-1X8 смолы в гидроксильной форме. После установления pH раствор соли трипептида, например, сульфат или гидрохлорид лиофилизуют с получением очищенной соли в виде сухого порошка. В примере такого способа сырой сульфат D-Phg-L-Pro-L-Arg-H, загрязненный примесью эпимерного сульфата D-Arg-H, растворяют в примерно 0,01% - ной серной кислоте и раствор переносят в колонку для ВЭЖХ с обращением фаз Втдак C18. Для элюирования колонки в течение 10 часов используют градиент 2 - 10% ацетонитрила в 0,01% - ной H2O4. Отбирают ряд фракций и содержащие целевой продукт фракции (согласно аналитической ОФ-ВЭЖХ) объединяют. Значение pH в объединенных фракциях устанавливают в пределах 4 - 4,5 добавлением смолы БиоРад AG-1X8 в гидроксильной форме. После фильтрования раствор лиофилизуют и получают чистый сульфат DPhg-L-Pro-L-Arg-H. Соединения изобретения формулы l ингибируют действие тромбина у человека и животных. Ингибирование тромбина показано in vivo ингибирования амидазной активности тромбина. В нижеследующей табл.1 приведены кажущиеся константы равновесия (Kk для взаимодействия между испытуемым соединением (ингибитор) и тромбином. Приведенные в таблице данные получены в испытании, в котором тромбин гидролизует хромогенный субстрат N-бензоил-D-фенилаланил-L-валил-L-аргинин-п-нитроанилид. Испытание проводят в 50мкл буфера (0,03М трис, 0,15М NaCl, pH 7,4) с 25мкл раствора тромбина 0,21мг/мл порошка тромбостата в 0,06М Трис, 0,3М NaCl, pH 7,4) и 150мкл водного раствора хромогенного субстрата в концентрации 0,25мг/мл. Добавляют растворы испытуемого соединения (25мкл) в различных концентрациях. Степень гидролиза субстрата определяют анализом реакционной смеси при 405нм на выделения пнитроанилина. Строят стандартные кривые отложением концентрации свободного тромбина относительно степени гидролиза. Использованием стандартных кривых степени гидролиза, наблюдаемые в присутствии испытуемых соединений, затем переводят в значения "свободного тромбина" в соответствующих испытаниях. Связанный тромбин (связан с испытуемым соединением) подсчитывают вычитанием количества свободного тромбина, наблюдаемого в каждом испытании, из известного начального количества тромбина, применяемого в испытании. Количество свободного ингибитора подсчитывают в каждом испытании вычитанием числа молей связанного тромбина из числа молей добавляемого ингибитора (испытуемое соединение). Значения Kk являются гипотетическими константами равновесия реакции между тромбином и испытуемым соединением (И). Значение Kk рассчитывают для интервала концентрацией испытуемых соединений и средние величины приводят в единицах литр на моль. Антикоагулянтная активность соединений изобретения определена в стандартных испытаниях. В нижеследующей табл.2 представлены данные, полученные для представительных соединений изобретения в испытаниях, использованных для определения времени протромбинового времени, тромбинового времени и времени активированного частичного тромбопластина (ВАЧТ). Цифровые значения в таблице относятся к концентрациям испытуемых соединений (нг/мл), необходим для пролонгирования коагуляции в 2 раза в трех испытаниях. Выявление тромбинового времени осуществлено в плазме и отдельно определено в буферной системе при pH 7,5. Представленные в табл.2 данные получены с помощью прибора КоаСкинер фирмы Текан Инк. в испытаниях, осуществленных по нижеследующей методике. Промтромбированное время: 50мкл плазмы, 50мкл солевого раствора, 7мкл испытуемого раствора, 50мкл тромбопластина (Дейд). Тромбиновое время: 50мкл плазмы, 50мкл солевого раствора, 7мкл испытуемого раствора, 50мкл бычьего тромбина (2ед. Nl Н/мл). При определении тромбинового времени в буфере с pH 7,4 вместо плазмы используют фибриноген. ВАЧТ: 50мкл плазмы, 50мкл актина (Дейд), 7мкл испытуемого раствора, 50мкл CaCl2 (0,01М). Антитромботическая активность представительных соединений изобретения определялась в испытаниях in vivo, проводимых на крысах. В испытаниях используют созданный искусственно тромбоз в сонной артерии крыс, при этом замеряют вливаемую дозу испытуемого соединения, необходимую для поддержания потока крови в течение пятидесяти минут после времени закупорки. Испытание проводят следующим образом. У крыс искусственно создают тромбоз повреждением сонной артерии. Для повреждения сосуда используют нанесение местно раствора хлорида железа (lll). Самцов крыс линии Спраг-Доли (375 - 450г) анестезируют ксилазином (20мг/кг, подкожно) и затем кетамин. HCl (100мг/кг, п.к.). Животных помещают на водяное одеяло, в котором циркулирует вода с температурой 37°C. Доступ к сонной артерии получают через середину цервикального разреза. Для обнаружения сосуда и отделения его от оболочки используют аккуратное отслаивание. Под артерией натягивают шелковую нить, поднимающую сосуд и создающую просвет для введения под сосудом термопары. Изменения температуры сосуда регистрируют на самописце с ленточной диаграммой, снабженным пишущими чернилами таймером. Небольшим пинцетом с раствором (35%) погружают дискит (диам. 3мм) из ватмановской фильтровальной бумаги №1. Диски вырезают одинаковыми по размеру с помощью заостренной трубочки (3мм в д.) из нержавеющей стали, зажатой в патрон сверлильного пресса. Пропитанные диски накладывают на каждую сонную артерию выше термопары. Время между наложением FeCl3 и временем резкого снижения температуры отмечают, как время закупорки сосуда (ВЗС). Среднее время, необходимое для закупорки обоих сосудов, используют для представления ВЗС для каждого зверька. Испытуемые соединения растворяют в изотоническом солевом растворе. Для вливания растворов лекарства используют шприц-насос, и растворы начинают вливать за 15 минут до наложения FeCl3 и продолжают вливать 60 минут после наложения FeCl3. Для определения связи между log10 вливаемых дозировок и ВЗС поврежденных артерий строят кривые реакции на вводимые дозы. На основе кривых определяют сравнительный показатель антитромботической активности путем подсчета вливаемой дозы, необходимой для поддержания кровяного потока в течение 50 мин (ЭД 50мин). Связь между закупоркой сосуда и резким понижением температуры выявляют одновременно записью температуры и кровяного потока на одном самописце. Проксимально к термопаре вблизи к сонной артерии помещают пульсационный зонд потока Допплера. Зондом замеряют изменения в скорости потока, вследствие чего зонд устанавливают в момент отсутствия тромбоза, и когда внутренний диаметр сосуда остается постоянным в результате растяжения кровяным потоком. Нулевую линию для температуры и скорость потока (определяют пульсационным по направлению измерителем потока Допплера, модели 545-С, Университет штата Айова, Биоэнджениринг) устанавливают перед нанесением 35% - ного раствора хлорида железа (lll). Результаты регистрируют в виде процента отклонения от начальной нулевой линии (6мин до закупорки). Время, с которой температура сосуда быстро понижается, произвольно устанавливают, как нулевое, и температуру и значения скорости потока до и после закупорки сравнивают с этим моментом. В нижеследующей табл.3 содержатся результаты, полученные для испытуемых соединений в вышеописанном испытании с химически вызванным тромбозом у крыс. Соединения изобретения ингибируют образование сгустков крови без заметного влияния на естественную способность организма лизировать кровяные сгустки, например, соединения оказывают низкое ингибирующее действие на фибринолизис. Изобретением в одном из его аспектов дается способ ингибирования образования сгустков крови у человека и животных, заключающийся в ведении человеку или животному ингибирующей нетоксичной дозы соединения формулы l. Антикоагулянтное соединение вводят перорально, парентерально, например; внутривенным вливанием (в.в.), внутримышечной инъекцией (в.м.) или подкожно (п.к.). Рекомендуется введение осуществлять в.в. вливанием. Эффективная, ингибирующая образование кровяных сгустков доза находится в интервале 5 - 1000мг. Режим введения дозы может меняться, например, в профилактических целях может быть использована ежедневная разовая доза или же может оказаться приемлемым назначение в виде нескольких доз, например, 3 или 5 раз в день. В случае критических ситуаций соединение изобретения вводят в.в. вливанием со скоростью примерно между 1мг/кг/ч и 50мг/кг/ч, предпочтительно примерно 2,5 - 25мг/кг/ч. Способ настоящего изобретения также практикуют в сочетании с агентом лизирования кровяных сгустков, например, активатором плазминогена тканей (АПт), модифицированным АПт, стрептокиназой или урокиназой. В случаях, когда произошло образование сгустков и артерия или вена оказались блокированными частично или полностью, обычно используют агент лизирования кровяного сгустка. Соединение изобретения может быть введено одновременно с визирующим средством или после егоиспользования для предотвращения повторного образования кровяного сгустка. При осуществлении способа изобретения желательно использовать рекомендуемые изобретением соединения. К примеру, используют предпочтительные соединения описанного выше типа. К предпочтительным пептидам относятся: N-Boc-D-фенилглицил-L-пролил-L-аргинилальдегид и N-метил-D-фенилглицил-L-пропил-Lаргининальдегид, которые находятся в виде соли, например, в виде сульфата мли гидрохлорида. Особенно предпочтительным для использования этим способом является сульфат N-(D-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1оил)-2-пролил-2-аргининальдегида. Изобретение представляет также фармацевтические препаративные формулы для использования в описанном выше терапевтическом способе. Фармацевтические препаративные формы изобретения включают эффективное, ингибирующее образование сгустка крови количество соединения формулы l и фармацевтически приемлемый носитель. Для орального введения противотромбическое соединение приготавливают в виде желатиновых капсул или таблеток, которые могут содержать различные наполнители, такие как связующие средства, смазочные агенты, структурирующие агенты и т.п. Для парентерального использования противотромботическое средство вводят в фармацевтически приемлемый разбавитель, например, физиологический солевой раствор (0,9%), 5% - ную декстрозу, раствор Ринджера и т.д. Противотромботическое соединение изобретения может преобразовываться в единичную дозирование формы, содержащие дозу примерно между 1мг и 1000мг предпочтительно соединения находятся в виде фармацевтически приемлемой соли, такой как, например сульфат, ацетат или фосфат. Например, единичный дозированный препарат содержит 5мг сульфата N-Boc-D-фенилглицил-L-пролил-L-аргининальдегида в 10мл стерильной стеклянной ампуле. Другой пример единичной дозированной формы содержит 10мг сульфата Nметил-D-фенилглицил-1-пролил-L-аргининальдегида в 20мл изотонического солевого раствора, заключенного в стерильную ампулу. Предпочтительная препаративная форма представляет собой единичную дозировочную форму, содержащую 5 - 50мг сульфата N-(D-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-оил)-1-пролил-1-аргинин-альдегида в стерильных ампулах. Соединения могут вводиться различными путями, включая оральный, ретальный, трансдермальный, подкожный, внутривенный, внутримышечный, носовой. Соединения настоящего изобретения предпочтительно перед назначением для приема преобразуются в препаративные формы, включающие эффективное количество соединения формулы l или его фармацевтически приемлемой соли, или сольвата в сочетании с фармацевтическими приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом. Активный ингредиент в таких препаративных формах составляет от 0,1% до 99,9% весовых от формы. "Фармацевтически приемлемый" означает, что носитель, разбавитель или эксципиент должен быть совместимыми с другими ингредиентами препаративной формы и не причинять вреда реципенту. Настоящие препаративные формы получают по известным методикам с использованием известных или легко доступных ингредиентов. Композиции данного изобретения могут формулироваться так, чтобы обеспечивать быстрое, поддерживаемое на одном уровне или замедленное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту с использованием известных методик. При получении композиции или составов настоящего изобретения активный ингредиент обычно смешивают с носителем или разбавляют носителем или заключают внутрь носителя, который может быть в форме капсул, пастилок, бумажных или других контейнеров. Когда носитель служит как разбавитель, он может быть твердым, полутвердым или жидким материалом, который действует как связующее вещество, эксципиент или среда для активного ингредиента. Так, составы могут быть в форме таблеток, пилюль, порошков, лепешек, пастилок, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей (в виде твердых веществ или в жидкой среде), мягких и твердых желатиновых капсул, суппозиторий, стерильных растворов для инъекций, стерильных упакованных порошков и т.д. Ниже приводятся примеры препаративных форм, которые иллюстрируют, но не ограничивают объем изобретения. "Активный ингредиент", конечно, означает соединение формулы l или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват. Препаративная форма 1. Твердые желатиновые капсулы готовят с использованием следующих ингредиентов, мг/капсула: Активный ингредиент 250 Крахмал, высушенный 200 Стеарат магния 10 Общий вес 460 Препаративная форма 2. Таблетки готовят с использованием следующих ингредиентов, мг/таблетку: Активный ингредиент 250 Микрокристаллическая целлюлоза 400 Двуокись кремния 10 Стеариновая кислота 5 Общий вес 665 Компоненты смешивают и прессуют с образованием таблеток каждая весом 665мг. Предварительная форма 3. Аэрозольный раствор готовят с использованием следующих компонентов, мас.%: Активный ингредиент 0,25 Этанол 25,75 Распыляющее вещество, препеллент 22 (хлордифторметан) 70,00 Общий вес 100,00 Активное вещество смешивают с этанолом, и смесь добавляют к части пропеллента 22, охлажденного до 30°C, и переносят в наполняющее устройство. Требуемое количество затем подают в контейнер из нержавеющей стали и разбавляют оставшимся пропеллентом. Затем устанавливают на контейнере вентиль. Препаративная форма 4. Таблетки, каждая из которых содержит 60мг активного ингредиента, изготавливают следующим образом, мг: Активный ингредиент 60 Крахмал 45 Микрокристаллическая целлюлоза 35 Поливинилпиролидон (в виде 10% раствора в воде) 4 Карбоксиметилкрахмал натрия 4,5 Стеарат магния 0,5 Тальк 1,0 Общее количество 150,00 Активный ингредиент, крахмал и целлюлозу пропускают через сито с отверстиями №45 мет США и тщательно перемешивают. Водный раствор, содержащий поливинилпиролидон, смешивают с получающимся в результате порошком и смесь пропускают через сито с отверстиями 14мет США. Гранулы, полученные таким образом, сушат при 50°C и пропускают через сито №18 США. Карбоксиметилкрахмал натрия, стеарат магния и тальк, предварительно пропущенные через сито с отверстиями №60 США, затем добавляют в гранулам, которые после перемешивания прессуют в таблетки и получают таблетки, каждая из которых весит 150мг. Препаративная форма 5. Капсулы, каждая из которых содержит 80мг активного ингредиента, приготавливают следующим образом, мг: Активный ингредиент 80 Крахмал 59 Микрокристаллическая целлюлоза 59 Стеарат магния 2 Общее количество 200 Активный ингредиент, целлюлозу, крахмал и стеарат магния смешивают, пропускают через сито с отверстиями №45 и наполняют смесью твердые желатиновые капсулы в количестве 200мг. Препаративная форма 6. Суппозитории, каждая из которых содержит 225мг активного ингредиента, приготавливают следующим образом, мг: Активный ингредиент 225 Глицериды насыщенных жирных кислот 2000 Общее количество 2225 Активный ингредиент пропускают через сито с отверстиями №60 США и суспендируют в глицеридах насыщенных жирных кислот, предварительно расплавленных с использованием минимально необходимого тепла. Затем смесь наливают в пресс-форму для суппозиториев с номинальной емкостью 2г и оставляют охлаждаться. Препаративная форма 7. Суспензии, каждая из которых содержит 50мг активного вещества на 5мл дозу, готовят следующим образом, мг: Активный ингредиент 50 Натриевая карбоксиметилцеллюлоза 50 Сироп 1,25 Раствор бензиновой кислоты 0,10 Отдушка По усмотрению Краситель По усмотрению Очищенная вода до общего количества 5мл Активный ингредиент пропускают через сито с отверстиями 45 мет США смешивают с натриевой карбоксиметилцеллюлозой и сиропом до образования равномерной пасты. Раствор бензойной кислоты, отдушку и краситель разбавляют порцией воды и добавляют при перемешивании. Затем добавляют достаточное количество воды до получения требуемого объема. Препаративная форма 8. Препаративная форма для внутривенного введения готовится следующим образом, мг: Активный ингредиент 100 Изотонический солевой раствор 1,000мл Раствор представленного выше ингредиента обычно вводят внутривенно со скоростью 1мл/мин. Нижеследующие примеры даются для дальнейшей иллюстрации изобретения, и не предназначены для его ограничения. Значения R1 в нижеследующих примерах определялись с использованием тонкослойной хроматографии на Кизельгеле 60F-254 (Мерк, Дармштадт) в следующих системах растворителей: (A) хлороформ - метанол - уксусная кислота (135 : 15 : 1об./об./об.); (B) этилацетат - уксусная кислота - абсолютный этанол (90 : 10 : 10об./об./об.). В примерах использованы следующие аналитические методы ВЭЖХ. Метод 1. Хроматограф Вотерс 600E с колонкой с обращением фаз Видак C18 размером 0,46см ´ 10см. Хроматограмма получена на LDC при 220нм с применением градиента A = 0,01М ацетата аммония и B ацетонитрила. Метод 2. Хроматограф фармация FPLC с колонкой PepRPC размером 0,5см ´ 5см. Запись ведется на приборе Фармация UV-M при 214нм с применением градиента либо A - 0,01М ацетата аммония, либо B ацетонитрила. Используемые в примерах аббревиатуры имеют следующие значения. Аминокислоты: Arg - аргинин, Pro - пролин, Phg - фенилглицин; Boc - трет-бутилоксикарбонил; BZ1 - бензил; CbZ - бензилоксикарбонил; ДЦК -дициклогексилкарбодиимид; ДМФА - диметилформамид; ДМСО - диметилсульфоксид; МС-ББА - масс-спектрометрия с бомбардировкой быстрыми атомами; МС-ДП - масс-спектрометрия с десорбцией в поле; ТГФ - тетрагидрофуран; ТСХ - тонкослойная хроматография. Пример 1. N-Boc-D-фенилглицил-L-пролил-L-аргинин-альдегид (Boc-D-Phg-Pro-Arg-H), полусульфат. 1) Boc-D-Phg-Pro-OBZI Раствор Boc-D-фенилглицина (15мг, 59,7ммоль) и гидрохлорида бензилового эфира пролина (14,43г, 59,7ммоль) с последующим прибавлением гидрата 1-гидроксибензотриазола (8,1г, 59,7ммоль) и ДЦК (12,3г, 59,7ммоль). Реакционную смесь перемешивают 3 дня при комнатной температуре, после чего фильтруют и фильтрат испаряют в вакууме с получением масла. Полученное масло растворяют в 200мл этилацетата и 150мл воды и после встряхивания органический слой отделяют, трижды промывают порциями по 100мл 0,1н. HCl, один раз 150мл воды, трижды порциями по 100мл 5% бикарбоната натрия и снова 150мл воды. Промытый органический раствор сушат над MgSO4 и после испарения в вакууме получают в виде твердого вещества 24,8г (95% от теории Boc-D-Phg-Pro-OBZI, ТСХ Rf (A) 0,75; МС-ББА 439 (М+). 2) Boc-D-Phg-Pro-OH Полученный вышеприведенным способом Boc-Phg-Pro-OBZI (24,5г, 55,7ммоля) растворяют в 40мл ДМФА и к раствору добавляют 225мл изопропилового спирта и 1г 5% Pd на угле в качестве катализатора. Через распределительную газовую трубку в реакционную смесь про-булькивают азот, затем 16ч пробулькивают водород, после чего 5 минут пропускают азот. Катализатор отфильтровывают через фильтровальный слой хайфло и испарением фильтрата досуха в вакууме получают твердый остаток. Остаток кристаллизуют из диэтилового эфира, содержащего небольшое количество этилацетата. Получено 10,35г (выход 53%) продукта удаления сложноэфирной группы: Boc-D-Phg-Pro (2), ТСХ Rf (A) 0,32; МС-ББА 349 (МН'); 1Н-ЯМР (ДМСО-d6) d: 1,35 (с, 9Н), 1,71 - 2,1 (м., 4Н), 3,1 (м, 1Н), 3,74 (м, 1Н), 4,2 (м, 1Н), 5,45 (д, 1Н), 7,09 (д, 1Н), 7,25 - 7,4 (м, 5Н), 12,5 (уш.с., 1Н). 3) Boc-L-Arg(CbZ)-OH В трехгорлой круглодонной колбе в 240мл 5н. NaOH растворяют гидрохлорид N-Boc-аргинина (Boc-ArgOH.HCl) (82,1г, 250ммоль). Раствор охлаждают до -5°C и по каплям в течение 55 минут прибавляют бензилхлорформат (143мл, 1моль, 4экзв.), поддерживая pH в пределах 13,2 - 13,5 добавлением 5н. NaOH (250мл). По окончании прибавления хлорформата реакционную смесь перемешивают 1 час при -5°C. Затем реакционную смесь разбавляют 100мл воды и 500мл диэтилового эфира, водный слой отделяют и дважды экстрагируют диэтиловым эфиром порциями по 40мл. Водный слой подкисляют до pH 3 добавлением 3н. H2SO4 (560мл) и экстрагируют 550мл этилацетата. Отделенный водный слой экстрагируют один раз этилацетатом и экстракт объединяют с полученными ранее экстрактами этилацетата. Объединенные экстракты промывают водой, сушат над MgSO4 и испаряют досуха в вакууме. Остаток ополаскивают эфиром и осажденный продукт фильтруют и сушат. Получено 66,1г (65% от теории) 3) (Boc-Arg(CbZ)-OH, ТСХ Rf=(C) 0,43; МС-ДП 408 (М+D). 1 Н-ЯМР (CDCl3) d: 1,42 (с, 9Н), 1,61 - 1,91 (м, 4Н), 3,23 - 3,41 (м, 2Н), 4,17 (д, 1Н), 5,21 (с, 2Н), 5,62 (д, 1Н), 7,3 7,42 (м, 6Н), 8,37 (м, 1Н). 4) Boc-Arg(CbZ)-лактам Раствор (3) Boc-Arg(CbZ)-OH (66г, 0,162моля), полученного вышеописанным способом, в 230мл сухого ТГФ охлаждают в бане со льдом в ацетоне до -10°C. К холодному раствору добавляют N-метилморфолин (18,7мл, 1,05экв.), затем добавляют изобутилхлорформат (22,5мл, 1,05экв.) и смесь перемешивают 5 минут при -10°C. После этого добавляют триэтиламин (23,5мл, 1,05экв.) и смесь перемешивают 1ч при -10°C и еще 1ч при комнатной температуре. Реакционную смесь переносят в один литр смеси воды со льдом, в результате чего осаждается продукт (4). Осадок отфильтровывают, промывают холодной водой, сушат в вакууме и кристаллизуют из этилацетата. Получено 38,05г (60% от теории) продукта (4): Boc-Arg(CbZ)-лактам, ТСХ Rf-(A) 0,77; МС-ДП 391 (МН+). 1 Н-ЯМР (CDCl3) d: 1,48 (с, 9Н), 1,78 - 1,98 (м, 2Н), 2,5 (м, 1Н), 3,41 (м, 1Н), 4,43 (м, 1Н), 4,9 (м, 1Н), 4,16 (с, 2Н), 5,27 (м, 1Н), 7,28 - 7,45 (м, 6Н), 9,41 (м, 1Н), 9,68 (м, 1Н). 5) Arg(CbZ)-лактам, трифторацетат Boc-Arg(CbZ)-лактам (4) (38г, 0,097моль) смешивают с 200мл трифторуксусной кислоты, содержащим 20мл анизола, и смесь перемешивают один час при 0°C. Затем реакционную смесь испаряют в вакууме без нагревания и к остатку добавляют 400мл диэтилового эфира. Твердый продукт отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром и сушат в вакууме. Получено в качестве продукта 40,5 трифторацетата (5), ТСХ Rf (C) 0,29; МС-ДП 291 (МН+). 6) Boc-D-Pro-Arg(CbZ)-лактам К раствору Boc-D-Phg-Pro (14,5г, 41,6ммоль, получение см. часть 2) выше) в 80мл ДМФА, охлажденному до 15°C, прибавляют 4,6мл N-метилморфолина с последующим прибавлением 5,4мл изобутилхлорформата и затем реакционную смесь перемешивают две минуты при -15°C. В отдельной колбе в 30мл ДМФА растворяют Arg(CbZ)-лактам. ТФА (15,3г, 37,8ммоль, получение см. часть 5) выше), раствор охлаждают до 0°C и к нему прибавляют 4,6мл N-метилморфолина. После перемешивания раствора две минуты при 0°C его переносят в раствор Boc-D-Phg-Pro, полученный по вышеприведенной методике. Полученную реакционную смесь перемешивают 4ч при -15°C и затем оставляют нагреваться до комнатной температуры в течение примерно суток. Затем к реакционной смеси добавляют 5% - ный раствор NaHCO3 (5мл) и последующим испарением в вакууме получают масло. Масло растворяют в 175мл этилацетата и 150мл воды добавляют к раствору. После встряхивания органический слой отделяют, промывают 5% NaHCO3 и водой, сушат над MgSO4 и испарением досуха в вакууме получают 23г (выход 98%) Boc-D-Phg-Pro-Arg(CbZ)лактама (6) в виде аморфного вещества, ТСХ Rf (A) 0,72; МС-ББА 621 (МН+). 7) Boc-D-Pro-Arg(CbZ)-H В 200мл сухого ТГФ растворяют лактам (6) (23г, 37ммолей, получение см. часть 6) выше) и раствор охлаждают до -15°C в атмосфере азота. К охлажденному раствору по каплям в течение 10мин прибавляют 1М раствор литийалюминийгидрида в ТГФ (37мл, 37ммолей) и по окончании прибавлением реакционную смесь нагревают до 0°C, и перемешивают 1ч. Смесь 12мл ТГФ и 12мл 0,5н. H2SO4 медленно по каплям в течение 10мин прибавляют по каплям к реакционной смеси. Затем реакционную смесь разбавляют 200мл этилацетата и 200мл воды и после встряхивания органический слой отделяют. Органический слой трижды промывают водой порциями по 150мл, сушат на MgSO4 и после испарения досуха в вакууме получают 19,2г (выход 83%) Boc-D-Phg-Pro-Aro-H, МС-ББА 623 (МН+); (a)D = 66,1° (c = 0,5, CHCl3). 8) Boc-D-Phg-Pro-Aro-H, полусульфат В 100мл ТГФ и 100мл воды растворяют Boc-D-Phg-Pro-Arg(CbZ) (7) (18,2г, 29,2ммоля) и к раствору добавляют 29,2мл 1н, H2SO4 b 2 и 10% Pd-C. В суспензию 5мин через газораспределительную трубочку пробулькивают азот с последующим пропусканием 4ч водорода. По окончании восстановления вновь 5мин пробулькивают азот. Реакционную смесь фильтруют через слой хайфло с удалением катализатора и испарением в вакууме фильтрат концентрируют до 100мл. К водному концентрату добавляют 200мл н-бутанола и органический слой отделяют от водного слоя. Водный слой трижды экстрагируют н-бутанолом порциями по 100мл, экстракты объединяют и присоединяют к органическому слою. Органический слой испаряют досуха в вакууме, остаток ополаскивают смесью диэтиловый эфирдиизопропиловый эфир (1 : 1об./об.), твердое вещество отфильтровывают и сушкой в вакууме получают 10,26г сухого продукта (8). Сырой продукт растворяют в 10% - ном водном ацетонитриле и раствор переносят в колонку (7,5см ´ 53см) смолы НР-20, предварительно приведенную в равновесие 10% - ным водным ацетонитрилом. Продукт элюируют из колонки ступенчатым элюированием с повышением концентрации ацетонитрилла в воде (10% - 12% - 15%). Отбирают ряд фракций, которые анализируют на наличие продукта с помощью ВЭЖХ с обращенными фазами. Содержащие продукт фракции объединяют и их испарением досуха получают 5,42г (выход 53%) чистого полусульфата Boc-D-Phg-Pro-Arg-H, (a)D = -125,6°, (c = 0,5 CHCl3), МС-ББА 489 (МН+); время удерживания в ОФ-ВЭЖХ (метод 2, 10 - 50% B за 45мин), время 32,3мин. Пример 2. N-(трет-бутилоксикарбонил)-D-фенилглицил-L-пролил-L-аргинин-альдегид (Boc-D-Phg-Pro-Arg-H), диацетат. К раствору Boc-D-Phg-Pro-Arg(CbZ)-H (получение см. часть 7) примера 1, 38г, 61ммоль) в 500мл изопропипового спирта, содержащих 7,1мл (2экв.) уксусной кислоты, добавляют в качестве катализатора 2г 10% Pd в угле. Смесь промывают поступающим через газораспределительную трубку азотом (5мин) и затем через смесь 24ч пропускают водород. По окончании восстановления через смесь вновь 5мин пропускают азот. Затем реакционную смесь фильтруют через слой Хайфло с удалением катализатора и испарением фильтрата досуха получают 33,6г сырого продукта в виде аморфного вещества. Продукт очищают порциями в 5г на колонке (5см ´ 25см) Видак C1в. Полученный трипептид элюируют 8ч градиентом 10 - 30% ацетонитрила в 0,01М ацетате аммония. Собирают ряд фракций и содержащие по данным ВЭЖХ с обращением фаз продукт фракции объединяют, и сушат вымораживанием. Получено 11,7г (35%) заглавного трипептида со следующими показателями: МС-ББА 489 (МН+). Аминокислотный анализ: Phg - 1,07, Pro - 0,94. (a)D = -108,9° (c = 0,6 CHCl3). Элементный анализ, рассчитанный для C29H44 N6O9. Теория: C 55,25; H 7,29; N 13,81%. Найдено: C 55,52; H 7,40; N 13,93%. Соединения, охарактеризованные в нижеследующих примерах 3 и 4, получены по методике примера 1, но с использованием соответственно фенилглицина и п-гидроксифенилглицина вместо фенилглицина примера 1. Пример 3. N-Boc-D-1-нафтилглицил-Pro-Arg-H, диацетат (a)D = +18,87° (с, 0,5, 50% - ная уксусная кислота); МС-ББА 539 (МН+); ВЭЖХ (метод 1, градиент 20 - 60% B за 60мин), время удерживания 42мин. Пример 4. N-Boc-D-2-нафтилглицил-Pro-Arg-H, диацетат ВЭЖХ (метод 2, градиент 30 - 60% B за 60мин), время удерживания 18мин. Элементный анализ, вычисленный для C32H46N6O9: Теория: C 58,35; H 7,04; N 12,76%. Найдено: C 58,59; H 6,83; N 13,03%. Пример 5. N-Boc-D-(4-гидроксифенилглицил)-Pro-Arg-H, диацетат ВЭЖХ (метод 2, градиент 10 - 40% B за 40мин), время удерживания 26,5мин. Аминокислотный анализ: 4-гидроксифенилглицил - 0,99, пролин - 1,01.] Пример 6 - 23. Перечисленные в нижеследующей табл.4 соединения по методикам примера 1 использованием указанных аминокислот или замещенных уксусных кислот (A(C=O)) вместо применяемого в примере 1-фенилглицина. Все соединения таблю1 находятся в виде ацетатов. Пpимер 27. D-1,2,3,4-Тетрагидроизохинолин-1-оил-L-пролил-L-аргинин-альдегид, сульфат. К раствору изохинолин-1-карбоновой кислоты (12,5г, 0,072моля) в 185мл ледяной уксусной кислоты добавляют 2г оксида платины и суспензию гидрируют при комнатной температуре и давлении водорода 60psi (4,2кг/см2 в аппарате для гидрирования Парра 24ч. Реакционную смесь фильтруют через фильтрующий слой (Целит) с удалением катализатора и фильтрат испаряют досуха в вакууме. Твердый остаток ополаскивают водой, фильтруют и после высушивания получают 8г (выход 63%) DL-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-карбоновой кислоты. ДП-масс-спектр 178 (МН+); 1Н-ЯМР (ДМСО-d6) d: 2,8 - 3 (м, 1Н), 3,15 (м, 1Н), 3,3 - 3,4 (м, 2Н), 7,05 - 7,25 (м, 4Н), 7,7 (м, 1Н). Полученный продукт (7,08г, 0,04моля) растворяют в 2н. NaOH (40мл, 0,08моля) и к раствору добавляют 40мл трет-бутилового спирта и 10,5г (0,048моля) ди-третбутилкарбоната. После перемешивания 24ч при комнатной температуре основное количество трет-бутилового спирта испаряют из реакционной смеси. Полученный водный раствор экстрагируют диэтиловым эфиром, водный слой отделяют и подкисляют 2н. PCl до pH 2. Подкисленную водную фазу экстрагируют этилацетатом, экстракт сушат над MgSO4 и испаряют досуха в вакууме. Остаточное масло растворяют в диэтиловом эфире и к раствору добавляют 7,9мл (0,04моля) дициклогексиламина. После выдерживания 4ч при 4°C осадок дициклогексиламиновой соли N-Boc-DL-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1карбоновой кислоты отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром и сушат в вакууме. Получено 15,7г (выход 86% чистой соли. ДП-масс-спектр: 459 (МН+). Элементный анализ, вычисленный для C27H42N2O4: Теория: C 70,71; H 9,23; N 6,11%. Найдено: C 71,07; H 9,37; N 5,87%. Boc-защищенное производное (73,4г, 160ммолей) суспендируют в 200мл этилацетата, суспензию промывают, 1,5н. лимонной кислотой и водой, сушат над MgSO4 и испаряют досуха в вакууме. Остаточное масло растворяют в этилацетате, раствор охлаждают до 0°C и к раствору добавляют 2,4,5-трихлорфенол (31,6г, 160ммолей) с последующими прибавлением ДЦК (33г, 160ммолей). Реакционную смесь перемешивают один час при 0°C и 1,5ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь охлаждают до 0°C, осадок отфильтровывают и фильтрат испаряют досуха в вакууме. Остаточное масло растворяют в 100мл пиридина и к раствору добавляют пролин (18,42г, 160ммолей) и триэтиламин (22,3мл, 160ммолей). После перемешивания 24ч при комнатной температуре реакционную смесь испаряют досуха в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате, к раствору добавляют воду и добавлением 2н. NaOH устанавливают pH 9,5. Водный слой отделяют, подкисляют 2н. HCl до pH 2 и экстрагируют этилацетатом. Экстракт сушат над MgSO4, фильтруют и испаряют досуха в вакууме. Маслянистый остаток растворяют в хлористом метилене и этилацетате. После выдерживания 4ч при 4°C образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают этилацетатом и перекристаллизовывают из смеси хлористый метилен - этилацетат. Полученный BocD-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-оил-L-пролин (Boc-l-Tig-Pro-OH) сушат в виде твердого продукта в вакууме и получают 19,6г (выход 33%) чистого продукта. ТСХ Rf (A) 0,44; МС-ББА: 375 (МН+). Элементный анализ, вычисленный для C20H26N2O5: Теория: C 64,15; H 7,00; N 7,48%. Найдено: C 63,26; H 6,98; N 7,52%. (a)D = +43,14° (c = 0,5, метанол). В первой колбе в 100мл ДМФА растворяют Boc-D-l-Tig-Pro (17,8го, 47,5ммоля), раствор охлаждают до -15°C, после чего добавляют 5,3мл (52,3ммоля) N-метилморфолина и 6,2мл (47,5ммоля) изобутилхлорформата и смесь перемешивают две минуты при -15°C. Во второй колбе в 40мл ДМФА растворяют Co-защищенный аргинил-лактам в виде трифторацетата (Arg(Z)лактам, ТФА) (19,2г, 47,5ммоля), раствор охлаждают до 0°C, после чего прибавляют 5,3мл (52,3ммоля) Nметилморфолина. Перед перенесением в первую колбу смесь перемешивают 2мин при 0°C. Реакционную смесь перемешивают 4ч при -15°C, затем в течение примерно суток медленно нагревают до комнатной температуры, после чего добавляют 5мл 5% NaHCO3. Испарением реакционной смеси в вакууме получают масло. Масло растворяют в 175мл этилацетата и к раствору добавляют 150мл воды. Органический слой отделяют, промывают 5% NaHCO3 водой, 0,1н. HCl и вновь водой, затем сушат над MgSO4. Промытый и высушенный раствор испаряют досуха в вакууме с получением 24,3г (выход 79%) Boc-D-l-Tig-Pro-Arg(Z)-лактама в виде аморфного вещества. ТСХ Rf (A) 0,71; МС-ББА: 647 (МН+); (a)D = -32,8° (c = 0,5, хлороформ). Полученный вышеописанным способом Arg(Z)-лактам (23,4г, 36,2ммоля) растворяют в 300мл сухого ТГФ и раствор помещают в атмосферу N2. Затем раствор охлаждают до -20°C и к охлажденному раствору в течение 30мин по каплям прибавляют 37мл 1М раствора в ТГФ литийалюминийгидрида. По окончании прибавления смесь перемешивают 30мин при -20°C, после чего по каплям в течение 10мин прибавляют смесь 20мл ТГФ и 20мл 0,5н. H2SO4. Реакционную смесь прибавляют 400мл этилацетата и к раствору добавляют 400мл воды. Органический слой отделяют, дважды промывают водой порциями по 150мл и сушат над MgSO4. Испарением в вакууме промывают и высушенного раствора получают 21г (выход 89%) Boc-D-l-Tig-Pro-Arg(Z)-H в виде аморфного вещества, ТСХ Rf (A) 0,28. 0,28. Полученный вышеописанным способом производное Arg(Z) гидрируют по нижеприведенной методике с удалением защитной Co-группы. Полученный продукт (18,1г, 27,9ммоля) растворяют в 200мл ТГФ и 80мл воды и к раствору добавляют 28мл 1н. H2SO4и 3г 5% Pd на угле. Через суспензию 5мин пробулькивают азот, поступающий через барбатер, затем 5ч пропускают водород и вновь 5мин пробулькивают азот. Катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют до объема в 100мл. Концентрат разбавляют 200мл н-бутанола и образовавшиеся слои разделяют. Водный слой трижды экстрагируют нбутанолом порциями по 100мл и экстракты присоединяют к органическому слою. Органический слой испаряют в вакууме, остаток ополаскивают смесью диэтиловый эфир - диизопропиловый эфир (1 : 1об./об.), твердый продукт отфильтровывают и высушиванием в вакууме получают 11,08г сырого продукта. Продукт очищают и переводят в сульфат следующим образом. Полученный вышеописанным способом сырой продукт растворяют в 20мл воды и 20мл 10н. H2SO4. Раствор нагревают 25мин при 50°C, охлаждают до комнатной температуры и добавлением смолы Био-Рад AGl-XB (гидроксидная форма) устанавливают pH 4. Смолу отделяют от раствора фильтрованием и лиофилизацией раствора получают 8,44г сырого продукта в виде сульфата (D-l-Tig-Pro-Arg-H. H2SO4). Полученный сульфат растворяют в 0,01% H2SO4 и раствор переносят в две колонки для ВЭЖХ с обращением фаз размером 5см ´ 25см (смола Видак C18), соединенных последовательно. Для элюирования полученной соли используют градиент повышающейся концентрации ацетонитрила (2 - 10%). Отбирают фракции и объединяют на основе результатов аналитической ОФ-ВЭЖХ. Добавлением в объединенные фракции смолы AGI-XB (аналитическая анионообменная смола фирмы Био-Рад в 50 - 100меш) в гидроксильном цикле устанавливают pH 4. Раствор фильтруют с удалением смолы и фильтрат лиофилизуют. Получено 2,4г (57% от теории) очищенного продукта. МС-ББА; 415 (МН+); (a)D = -78,12° (c = 0,5, 0,01н. H2SO4); Аминокислотный анализ: Pro - 0,92, Trg - 1,00; Элементный анализ, рассчитанный для C21H32 N6O7S; Теория: C 49,21; H 6,28; N 16,29; S 6,26%. Найдено: C 51,20; H 6,17; N 16,88; S 5,37%.