Спосіб оцінки інтенсивності циркуляції вірусів грипу в популяції та антигенної структури циркулюючих вірусів

9340 &S? А 61 В 5/05 АЄі К N Уші Leeuwen J. Serological aspects of Ig G4 antibodies. I Prolonged imrrunization results in an Ig G4-restricted response // j. їтшпоі.- 1983,- 130.p. 722-727. 5) Julkuaen I. s Hovt Т., Seppala L, Kfeikela 0. Immunoglobulin G subclass antibody responses in influenza A and parainfluenza type 1 virus infections // Clin. екр. Immunol.- 1985.- бо.- p. 130-138. 6) Beard L J. , Ferrante A. Ig G4 deficiency in Ig A-deficient patients //Fediatr. Infect. Dis. J-~ 1989.- 8.- p705-709. 7) ПетровP. R Иммунология //\L "Медицина". -1982. -368c. 8) Ляпустин Б. К , Карганова Г. Г. , Соболев С. Г. , Грицун Т, С. Препаративное разделение антигенных структур вируса клещевого эн цефалита с помощью электрофореза в жидкой среде // Вопр. вирусол. 1988.- 1.- с. 98-102 МПК* A 61 В 5/05 A 61 К 39/145)^39/395 СПОСІБ ОЦТЕКУ ІНТЕНСИВНОСТІ ЦИРКУЛЯЦІЇ ВІРУСІВ ГРИПУ В ІЮІЗУЛЯЦП Т/7АНГИГЕШ0Ї СТРУКТУРИ ЦИРКУЛКЮЧИХ ВІРУСІВ Винахід стосується медицини і біології, може бути використаний при епідеміологічному нагляді за циркуляцією вірусів грипу у вивчаемій популяції, а також для діагностики грипозної інфекції у пацієнтів на ПІЗНІЙ стадії, коли ІЗОЛЯЦІЯ вірусу або знаходження вірусних антигенів у матеріалах від хворого, як правило, неможливі. ВІДОМО 2 основних способу вивчення циркуляції вірусів грипу у популяції: Перший спосіб передбачає вивчення захворюваності на гострі ре^пираторні вірусні інфекції у вивчаємому регіоні і визначення втюлогії виявляємих захворювань шляхом ІЗОЛЯЦІЇ вірусів або знаходження вірусного геному чи грипозних антигенів за допомогою методів ланцюгової полімеразної реакці і (ЛІР), імуноферментного (ТФА) та імунофлуоресцентного аналізу. Другий спосіб містить у собі вивчення рівня протигрипозних антитіл в сироватках крові людей з використанням набору тест-антигенів. Недоліком першої групи методів в те, ар вони малоприйнятні в періоди прихованої циркуляції вирусів коли не реєструються , клінічно виразні випадки захворювання і практично неможливо виділити вірус грипу ВІД населення. БІЛЬШ ТОГО» навіть у випадку знаходження грипозних антигенів або вірусного геному за допомогою методів ІФА, ЯІР та інш. , штамова належність виявленого вірусу залишається невідомою, що перешкоджу© розробці протиепідемічних заходів . Недоліком вказаних методів G щэ й те, шр для отримання за їх допомогою узагальнених даних що до циркуляції вірусів у по пуляції необхідні великі об'єми досліджень, складне, коштовне об -5пула сироваток по 7 мл. Пули сироваток крові донорів фракційонуваяи методом електрофорезу в рідкому середовищ за методикою ЕЕЛяпуотина та співавт. (1988г): сироватки розділяли у пристрої, який складався з 3 однотипних блоків. Кожний блок містив в собі камеру введення та дві камери накопичення, з'єднані зі спільними електродними камерами. Анодна та катодна камери накопичення оули відокремлені від камери введення шаром 1% агарози товищною 15мм. , а від електродних камер - діаяізною плівкою. Після заповнення електродних камер і камер накопичення фосфатним буфером (рН 7,8), у камери введення вносили пули досліджусмих сироваток Пристрій . приміщували до холодильника, у якому підтримувалась температура +4 С й проводили електрофорез при 80 В на протязі 5 годин. На прикінці досліду» перед відбором з усіх камер фракцій досліджусмих сироваток, розділених аа ознакою електрокінетичного патент алу білків, давали короткочасний (3 хвил.) зворотний струм, щоб зяяти бюмодекули, які осіли на діалізній плівці. Виділені фракціі сироваток звільняли від неспецифічних інгібіторів гемаглютинсшді ргванольним методом. Далі у дослід брали лише катодні фракції сироваток, які вміщували 1-й та 3-й підкласи SgB. Зазначені фракції досліджувались в РГГА з набором грипозних дзагностикумів для визначення вмісту антитіл до п'яти основних антигенних різновидів вірусу грипу : H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 та В. Отримані результати представлені в таблиці (вони виявилися ідентичними для усіх трьох досліджених пулів). Як показано вип^, вказані титри відображують рівень циркуляції вірусів грипу відповідної антигенної структури в досліджуемій популяції людей. Так, на таблиці видно, що у лютому 1997 року серед населення Одеси циркулювали віруси грипу різної антигенної структури При . цьому, основна маса циркулюючих вірусів грипу відносилася до се~ роіадтипу A(H3N2)S але, поряд з цим у циркуляції знаходились й віруси серопідтипу А(Н1Ш), а також віруси грипу типу В. Отримані результати вбігаються з даними вивчення ьмісту специфічних про тигрипозних IgM в сироватках крові донорів взимку 199б-1997рр. (И. М-Бевброж та співавт., 1997р.)- Вірогідність отриманих результатів підтверджується, також ізоляцією від населення м. Одеси у вказаний період вірусів грипу серояідтипу A(H3N2). - ft _ Таблиця ТИТРИ АНТИТІЛ КАТОДНОЇ МІГРАЦІЇ (зворотні величини) ДО ВІРУСІВ ГРИПУ РІЗНОЇ AFFJdTElfflOI СТРУКТУРИ У ПУЛАХ СИРОВАТОК КРОВІ ДОНОРІВ М. ОДЕСИ У ЛЮТОМУ І БЕРЕЗНІ 1997р. Антигени | А/Одеса/і А/Хабадата 1325 Іровськ/ забору і 174/77 крові | HGN1 1 H1N1 1А/Сінга~ | А/Одеса/ і А/Одеса/1 В/Ленін--1 Іпур/1/57|320/95 Ц/97 |град/369j 1 | | | 75 | і H2N2 | H3N2 | H3N2 ( І 11 лютого | 0 14 | О | 18 березня) 1997р. | 0 ]2 ! і О | | 199 7р . 1 І | І і 16 | 4 ) 2 8 | 4 | ! 2 |. І І Приклад 2. Дослідження, аналогічне описаному у Прикладі 1, проведено з сироватками крові донорів, отриманими на Одеській СПК у березні 1997р. Результати (див. Табл.) свідчать про те, шр у березні, як і СЛІД було чекати, циркуляція вірусів грипу серед населення м.Одеси помітно знизилася (у порівнянні з лютим місяцем цього ж року). При цьому серед залишившихся у циркуляції вірусів як і раніше переважають віруси серопідтилу A(H3N2), які антигенно близькі до изольованого Б Одесі у 1995р. штама А/0деса/320/95. Запропонований спосіб оцінки інтенсивності циркуляції вірусів грипу в популяції і антигенної структури циркулюючих Вірусів мао такі переваги над прототипом: 1) Спосіб забезпечуй більш високу достовірність результатів завдяки унікальній можливості реєстрації підкласів IgGl та IgG3 штамоепецифічних протигрипозних імуноглобулінів, синтезуемих у ВІДПОВІДЬ на гостру грипозну інфекцію. 2) Оперативність: спосіб дозволяє визначити інтенсивність циркуляції вірусів грипу у досліджуємій популяції й антигенну структуру циркулюючих вірусів на протязі однієї доби , тоді як при використанні прототипного способу на отримання результату потрібні тижні. -7 3) На відміну від прототипу, запропонований спосіб не потре бує повторних заборів крові у населення. 4) Бі жьш широка галузь використання: епос і б може бути застосований в умовах протигрипозної вакцинації населення, коли прототшний епос і б G неприйнятним. Крі м того» запропонований спосіб може бути застосований для діагностики грипозної інфекції у пацієнтів на ПІЗНІЙ стадії» ІЮЛШ відсутня МОЖЛИВІСТЬ ІЗОЛЯЦІЇ вірусу або знаходження вірусних антигенів у матеріалах ВІД хворо го. СПИСОК ВИКОРИСТАНОЇ ЛІТЕРАТУРИ і) Rothbarth R H. , Groen J. , Bohnen A. M , de Groot R. , Osterhaus A. D. M.E. Diagnostic value of influenza virus-specific IgM, IgG and Iff A responses // X-th International Congress of Virology. Jerusalem, Israel, 11-16 August,1996. Abstracts. 1996.- p. 47. 2) Найхин A. H. , Иваяяиков Ю. Г. , Денисов Г. М., Скрипченко Г. С. , Безброж її М. "Методические рекомендации по изучению коллективного иммунитета к гриппу в рамках эпидемиологического надзора за этой инфекцией в стране" под ред. Г. II Карпухина // Ленинград, 1984, 22 стр. 3) Денисов Г. М., Вайхин А. Е , Царицина И. М. , Каторгина Л. Г. , Ким Т. Н., Овчинникова JL М. Некоторые вопросы серологического изу чения эпидемий гриппа // В кн.: Этиология и диагностика гриппа и 0РЗ'\- Ленинград, 1986.- с. 1.20-123. 4) Aalberse R. s Van der Gaag R. , Van Leeuwen J. Serological aspects of Ig Q4 antibodies. I Prolonged immuni2ation results in an Ig G4-restricted response // J. Immunol. - 1983.- 130.p. 722-727. 5) Julkunen I., Hovi Т., Seppala Ї. , Makela 0. Immunoglobulin G subclass antibody responses in influenza A and parainfluenza type 1 virus infections // Clin. exp. Immunol.- 1985.- 60.- p. 130-138. 6) Beard L. J. , Ferrante A. Ig Q4 deficiency in Ig A-deficient patients //Pediatr. Infect. Dis. J. - 1989.- 8.- p705-709. 7) Петров Р. E Иммунология //М. "Медицина".-1982.-368c. 8) Ляпустин В. Н. , Каргаїюва Г. Г. , Соболев С. Г. , Грицун Т. С. Препаративное разделение антигенных структур вируса клещевого эн цефалита с помощью электрофореза Б ЖИДКОЙ среде // Вопр. вирусол. 1988.- 1,- с. 98-102