Легеневі клітини бавовняного щура sigmodon hispidus для культивування вірусів

1. Лінія клітин бавовняного щура Sigmodon hispidus ATCC PTA-3930 для продукування вірусу або лінія клітин, що має всі її ідентифікуючі характеристики. 2. Лінія клітин за п. 1, яка відрізняється тим, що являє собою лінію клітин ATCC PTA–3930. 3. Спосіб продукування вірусу, який відрізняється тим, що включає розмноження вірусу на клітинах клітинної лінії за п. 1 або 2. 4. Спосіб за п. 3, який відрізняється тим, що вірус є вірусом, вибраним з групи, що скаладається з вірусу, що підвищує лактатдегідрогеназу (LDV), вірусу кінського артеріїту (EAV), вірусу геморагічної лихоманки мавп (SHFV), вірусу репродуктивного та респіраторного синдрому свиней (PRRSV), 2 (19) 1 3 89347 4 14. Спосіб приготування імуногенної або вакцинної композиції за п. 11, який відрізняється тим, що включає змішування вірусу або його антигену чи епітопу з імуногеном, антигеном чи епітопом, який відрізняється від вірусу або його антигену чи епітопу. 15. Набір для приготування імуногенної або вакцинної композиції за п. 11, який відрізняється тим, що включає (а) вірус або його антиген чи епітоп і (b) імуноген, антиген чи епітоп, який відрізняється від вірусу або його антигену чи епітопу, в окремих контейнерах, необов'язково в спільній упаковці, і необов'язково з інструкціями щодо змішування та введення. 16. Спосіб продукування вірусу для імуногенної або вакцинної композиції, або для забезпечення антигену, імуногену чи епітопу для імуногенної або вакцинної композиції, який відрізняється тим, що включає розмноження вірусу на клітинах клітинної лінії за п. 1 або п. 2. 17. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що вірус вибрано з групи, що містить вірус, що підвищує лактатдегідрогеназу (LDV), вірус кінського артеріїту (EAV), вірус геморагічної лихоманки мавп (SHFV), вірус репродуктивного та респіраторного синдрому свиней (PRRSV), вірус інфекційного бронхіту, собачий коронавірус, кошачий коронавірус, коронавірус людини 229Е, вірус епідемічної діареї свиней, вірус заразного гастроентериту, свинячий вірус заразного гастроентериту, свинячий респіраторний вірус, бичачий коронавірус (BCV), коронавірус людини ОС43, вірус гепатиту мишей, вірус свинячого гемаглютинуючого енцефаломієліту, коронавірус щурів, вірус сіалодакріоаденіту, пташиний вірус інфекційного бронхіту, коронавірус індиків, коронавірус кролів, кінський торовірус, свинячий торовірус, торовірус людини, бичачий торовірус, собачий парагрип (CPI), аденовірус, бичачий герпесвірус (BHV), кінський герпесвірус (EHV), бичачий ротавірус (BRV) або вірус бичачого парагрипу типу 3 (bPI-3). 18. Спосіб за п. 17, який відрізняється тим, що вірус являє собою PRSSV, CPI типу 2, собачий аденовірус типу 2, свинячий аденовірус типу 3, BHV-1, EHV-1, EHV-4, bPI-3, BRV або BCV. 19. Спосіб за п. 18, який відрізняється тим, що вірус являє собою PRSSV. 20. Імуногенна або вакцинна композиція, яка відрізняється тим, що включає вірус за п. 18 або його імуноген, антиген чи епітоп. 21. Імуногенна або вакцинна композиція за п. 20, яка відрізняється тим, що вірус є інактивованим або атенуйованим. 22. Імуногенна або вакцинна композиція за п. 21, яка відрізняється тим, що вірус є інактивованим. 23. Імуногенна або вакцинна композиція за п. 22, яка відрізняється тим, що вірус являє собою PRRSV. 24. Імуногенна або вакцинна композиція за п. 20, яка відрізняється тим, що додатково включає імуноген, антиген або епітоп, який є відмінним від вірусу або його антигену, імуногену чи епітопу. 25. Спосіб індукування імунологічної або захисної відповіді проти вірусу, який відрізняється тим, що включає введення ефективної кількості імуногенної або вакцинної композиції за п. 20 для індукування відповіді тварині. 26. Спосіб за п. 25, який відрізняється тим, що вірус являє собою PRRSV і тварина являє собою свиню. 27. Спосіб приготування імуногенної або вакцинної композиції за п. 26, який відрізняється тим, що включає змішування вірусу або його антигену чи епітопу з імуногеном, антигеном чи епітопом, який відрізняється від вірусу або його антигену чи епітопу. 28. Набір для приготування імуногенної або вакцинної композиції за п. 26, який відрізняється тим, що включає (а) вірус або його антиген чи епітоп і (b) імуноген, антиген чи епітоп, який відрізняється від вірусу або його антигену чи епітопу, в окремих контейнерах, необов'язково в спільній упаковці, і необов'язково з інструкціями щодо змішування та введення. Дана заявка заявляє пріоритет за попередньою заявкою, поданою у США 20 березня 2002р. за серійним номером №60/366,014, що включена до даної заявки як посилання. Попередня заявка та всі документи, які цитуються в ній або під час її експертизи ("документи, які цитуються в заявці") та всі документи, які цитуються або на які є посилання в даній заявці ("документи, які цитуються в даній заявці"), а також всі документи, які цитуються або на які є посилання в "документах, які цитуються в даній заявці", разом з усіма інструкціями виробника, описами, специфікаціями продуктів та переліками продуктів для будь-яких продуктів, згаданих в даній заявці або в будь-якому документі, включеному до даної заявки шляхом посилання, таким чином є включеними до даної заявки шляхом посилання та можуть використовуватися при здійсненні винаходу. Даний винахід стосується нової клітинної лінії та її застосування, в тому числі нового способу продукування організмів або патогенів, таких, як віруси, що спричиняють захворювання свиней, відоме як свинячий репродуктивний та респіраторний синдром (PRRS). Більш узагальнено даний винахід стосується розмноження (розведення) організмів і патогенів, таких як віруси, наприклад, вірулентні або атенуйовані віруси, з використанням легеневих клітин бавовняного щура або клітинної лінії згідно винаходу (наприклад, депозитованих клітин чи клітинної лінії або клітин чи клітинної лінії з їх ідентифікаційними характеристиками) для продукування організмів або патогенів, таких як віруси, напри 5 клад, вірулентні або атенуйовані віруси, таких як організми або патогени, наприклад, віруси, які в нормі не використовують гризунів або щурів, або бавовняного щура, або легеневі клітини бавовняного щура як природного господаря, або РНКвірусів, наприклад, РНК-віруси з позитивно звитою одинарною РНК, подібних до вірусів ряду Nidovirales, наприклад, артевіруси або віруси родини Аrteriviridae, наприклад, вірус, що підвищує лактатдегідрогеназу, (LDV), вірус кінського артеріїту (EAV), вірус геморагічної лихоманки мавп (SHFV) або вірус PRRS (чий вектор типово становлять комахи [arthropods]); віруси родини Coronaviridae, наприклад, коронавіруси, такі як вірус інфекційного бронхіту, собачий коронавірус, кошачий коронавірус, коронавірус людини 229Е, вірус епідемічної діареї свиней, вірус заразного гастроентериту, свинячий вірус заразного гастроентериту, свинячий респіраторний вірус, бичачий коронавірус, коронавірус людини ОС43, вірус гепатиту мишей, вірус свинячого гемаглютинуючого енцефаломієліту, коронавірус щурів, вірус сіалодакріоаденіту, пташиний вірус інфекційного бронхіту, коронавірус індиків, коронавірус кролів (також віруси, чий вектор типово становлять комахи [arthropods]), і торовіруси, такі як кінський торовірус, свинячий торовірус, торовірус людини, бичачий торовірус. Віруси, які переважно розводять з використанням легеневих клітин бавовняного щура або клітин чи клітинної лінії згідно винаходу, включають собачий парагрип (СРІ), у наприклад CPІ типу 2 (СРІ2), аденовірус, такий як собачий аденовірус (CAV), наприклад собачий аденовірус типу 2 (CAV-2), свинячий аденовірус (РAV), наприклад свинячий аденовірус типу 3 і типу 5 (PAV-3),бичачий герпесвірус, наприклад бичачий герпесвірус типу 1 (відповідальний за інфекційний бичачий ринотрахеїт [IBR]), кінський герпесвірус (EHV), наприклад типу 1 (EHV-1) або типу 4 (ЕНV-4), бичачий ротавірус (BRV), бичачий вірус парагрипу типу 3 (РІ-3), кишковий та респіраторний бичачий коронавірус (BCV), свинячий вірус репродуктивного та респіраторного синдрому (PRRSV). Більш переважно вірус являє собою вірус PRRS. В більш переважних втіленнях винаходу легеневі клітини бавовняного щура або клітинна лінія являють собою такі, що депозитовані в АТСС як РТА-3930, або легеневі клітини бавовняного щура чи клітинну лінію, які володіють всіма ідентифікаційними характеристиками АТСС РТА-3930, або легеневі клітини бавовняного щура чи клітинну лінію, продуковані шляхом культивування легеневих клітин бавовняного щура щонайменше до 10, наприклад щонайменше до 21 або 76 або 100 пасажів, такі як 10 або більше, чи 21 або більше, чи 76 або більше пасажів, наприклад, щонайменше 10 або 21 або 7 6 пасажів та переважно до 100 пасажів включно, і створення клітинної лінії таким чином, що легеневі клітини бавовняного щура являють собою суттєвою мірою епітеліальні клітини і їх морфологічні характеристики зберігаються протягом пасажів. 89347 6 Відповідно винахід стосується таких клітин або клітинної лінії, так само, як і всіх способів їх застосування. Віруси, розмножені з використанням легеневих клітин бавовняного щура або клітин чи клітинної лінії згідно винаходу, є корисними для приготування імуногенних композицій та вакцин проти спричинених вірусами захворювань, таких як PRRSV. Подібним чином, організми або інші патогени, розведені з використанням легеневих клітин бавовняного щура або клітин чи клітинної лінії згідно винаходу, є корисними для приготування імуногенних композицій та вакцин проти інших патогенів або організмів. Винахід також стосується використання вірусів, вирощених шляхом пасажів на клітинах згідно винаходу, наприклад, для забезпечення атенуйованих, інактивованих і субодиничних імуногенних композицій та вакцин; і таким чином винахід стосується таких атенуйованих, інактивованих або субодиничних імуногенних композицій та вакцин. Свинячий репродуктивний та респіраторний синдром (PRRS) вперше було описано у Північній Кароліні (США) в 1987р. Це захворювання свиней на той час було визначене як "Міфічне свиняче захворювання" ("Mystery Swine Disease" або MSD), a пізніше воно стало відомим як "Респіраторний синдром та синдром неплідності свиней" або SIRS. Наступного разу воно з'явилося в Центральній Європі в 1990р. В Європі захворювання спочатку називали "Свинячий респіраторний та ендемічний абортивний синдром" або PEARS, і, кінець-кінцем, "Свинячий репродуктивний та респіраторний синдром" або PRRS, що стало прийнятою у світі назвою. Вірус PRRS являє собою огорнутий РНК-вірус з одинарно-звитою РНК, який був вперше виділений у Нідерландах і названий вірусом Lelystad. Він був класифікований як член родини Arteriviridae. Віруси родини Arteriviridae відносяться до ряду Nidovirales. Іншими вірусами ряду Nidovirales є віруси родини Coronaviridae, такі, як коронавіруси і торовіруси. PRRS був описаний у WO 92/21375. Штам депозитований у Національній Колекції Культур Мікроорганізмів (CNCM) Інституту Пастера в Парижі (Франція) під номером входження 1-1102. Північно-американський тип також був виділений (WO 93/03760) і вірус депозитований в Американській Колекцій Типових Культур (АТСС) за номером входження VR-2332. У свиноматок захворювання PRRS характеризується репродуктивними розладами та респіраторними симптомами. Клітинами-мішенями для вірусів PRRS є клітини макрофагів. Однією з проблем, яка заважала одержанню імунологічних продуктів проти вірусу PRRS, є обмежена доступність стабільних субстратів для реплікації вірусу. Вірус PRRS може бути ампліфікований на культурах свинячих альвеолярних макрофагів (РАМ) (Wensvoort G. Μ. et al. in The Vet. Quart. 13: 121-130, 1991). Необхідність використовувати для одержання таких макрофагів вільних від захворювання свиней певного віку створює кілька недолі 7 ків. Більше того, вразливість до вірусної інфекції одержаних РАМ не є гарантованою, оскільки клітинні субстрати, одержані від різних тварин, завжди варіюють. Це означає великий недолік з точки зору продукування серій антигенів постійної та гомогенної якості, і кожна серія повинна оцінюватися окремо з метою визначення її вразливості. Були досліджені також інші клітинні субстрати. Так, у Патенті США №5,476,778, 15 клітинних ліній, одержаних з різних видів (наприклад, бичачі, собачі, кошачі, людські, свинячі, мавпячі) та з різних тканин (наприклад, нирки, легені, яєчка) тестувалися на здатність до культивування вірусу PRRS. З досліджених 15 клітинних ліній тільки один тип (клітини МА-104) дозволяє ріст вірусу PRRS. Клітинні лінії з мавпячих нирок (наприклад, VERO, МА-104, MARC-145, див. відповідно Патент США №5,476,778 та WО 98/00165) використовувалися для культивування та атенуації вірусу PRRS. Але титри вірусу PRRS на цих клітинах були низькими, що зумовлює високу вартість продукування. Хоча інактивовані та атенуйовані PRRS вакцини на сьогоднішній день є комерційно доступними, була б велика користь з наявності альтернативних клітинних субстратів для продукування вірусу PRRS, наприклад, для виробництва вакцин або імуногенних композицій. І, більш узагальнено, була б велика користь з наявності альтернативних клітинних субстратів для продукування патогенів, таких як віруси, наприклад, РНК-віруси, наприклад, РНК-віруси з позитивно звитою одинарною РНК, подібно до вірусів ряду Nidovirales, таких як артевіруси або віруси родини Arteriviridae та віруси родини Coronaviridae, наприклад, для продукування вакцинних або імуногенних композицій. Більше того, було б переважно забезпечити 'нову лінію легеневих клітин бавовняного щура. Даний винахід базується на відкритті стосовно того, що, хоча гризуни не є природними господарями вірусу PRRS, легеневі клітини бавовняного щура дозволяють вірусу PRRS рости та розмножуватися. Далі була створена та депозитована клітинна лінія, одержана з легеневої тканини бавовняного щура. Даний винахід базується також на відкриті того, що легеневі клітини бавовняного щура також дозволяють рости та розмножуватися іншим вірусам, які не є природними патогенами гризунів. Ці віруси включають собачий парагрип типу 2 (СРІ-2), собачий аденовірус типу 2 (CAV-2), кінський герпесвірус типу 1 (EHV-1), кінський герпесвірус типу 4 (EHV-4), бичачий ротавірус (BRV) та бичачий коронавірус (BCV). Даний винахід більш узагальнено включає застосування легеневих клітин бавовняного щура або клітин чи клітинної лінії згідно винаходу для розмноження подібних до вірусів організмів або патогенів, таких, як віруси, які в нормі не використовують гризунів або щурів або бавовняного щура або легеневі клітини бавовняного щура як природного господаря, або РНК вірусів, наприклад, РНКвіруси з позитивно звитою одинарною РНК, подібно до вірусів ряду Nidovirales, наприклад, артевіруси або віруси родини Arteriviridae, наприклад, вірус, що підвищує лактатдегідрогеназу (LDV), 89347 8 вірус кінського артеріїту (EAV), вірус геморагічної лихоманки мавп (SHFV) або вірус PRRS (чий вектор типово становлять комахи [arthropods]); вірусу родини Coronaviridae, наприклад, коронавіруси, такі як вірус інфекційного бронхіту, собачий коронавірус, кошачий коронавірус, коронавірус людини 229Е, вірус епідемічної діареї свиней, вірус заразного гастроентериту, свинячий вірус заразного гастроентериту, свинячий респіраторний вірус, бичачий коронавірус, коронавірус людини ОС43, вірус гепатиту мишей, вірус свинячого гемаглютинуючого енцефаломієліту, коронавірус щурів, вірус сіалодакріоаденіту, пташиний вірус інфекційного бронхіту, коронавірус індиків, коронавірус кролів (також віруси, чий вектор типово становлять комахи [arthropods]), і торовіруси, такі як кінський торовірус, свинячий торовірус, торовірус людини, бичачий торовірус. Віруси, які переважно розводять з використанням легеневих клітин бавовняного щура або клітин чи клітинної лінії згідно винаходу, включають собачий парагрип (СРІ), наприклад СРІ типу 2 (СРІ2), аденовірус, такий як собачий аденовірус (CAV), наприклад собачий аденовірус типу 2 (CAV-2), свинячий аденовірус (PAV), наприклад свинячий аденовірус типу 3 (PAV-3), бичачий герпесвірус, наприклад бичачий герпесвірус типу 1 (відповідальний за інфекційний бичачий ринотрахеїт [IBR]), кінський герпесвірус (EHV), наприклад типу 1 (EHV-1) або типу 4 (EHV-4), бичачий ротавірус (BRV), бичачий вірус парагрипу типу 3 (bРІ-3), бичачий коронавірус (BCV) і свинячий вірус репродуктивного та респіраторного синдрому (PRRSV). Більш переважно вірус являє собою вірус PRRS. Відповідно, винахід стосується розведення або культивування або вирощування таких вірусів. Деякі віруси можуть рости на легеневих клітинах бавовняного щура, такі, як бичачий герпесвірус типу 1 (BHV-1) (див. Papp Z. et al., J. Gen. Virol., 1997, 78: 2933-2943, наприклад стор.2935), вірус бичачого парагрипу типу 3 (bРІ-3) (див. Breker-Klassen Μ.Μ. et al., J. Virol., 1995, 69(7), 4308-4315), та свинячий аденовірус типу 3 (PAV-3) (див. патентну заявку РСТ WO-A3-99/53047). Ці документи нездатні описати або навести на думку про використання таких клітин та вірусів, продукованих таким чином, для приготування інактивованих, атенуйованих або субодиничних імуногенних композицій чи вакцин та їх введення тваринам, або способи імунізації чи вакцинації. Винахід також включає легеневі клітини бавовняного щура або клітинну лінію, які були депозитовані в АТСС як РТА-3930, або легеневі клітини бавовняного щура чи клітинну лінію, які володіють всіма ідентифікаційними характеристиками АТСС РТА-3930 або легеневі клітини бавовняного щура чи клітинну лінію, одержані шляхом культивування легеневих клітин бавовняного щура щонайменше до 10, наприклад щонайменше до 21 або 76 або 100 пасажів, такі як 10 або більше, чи 21 або більше, чи 76 або більше пасажів, наприклад щонайменше 10 або 21 або 76 пасажів та переважно до 100 пасажів включно, і створення клітинної лінії таким чином, що легеневі клітини бавовняного щура являють собою суттєвою мірою епітеліальні 9 клітини та їх морфологічні характеристики зберігаються протягом пасажів. Даний винахід переважно включає легеневі клітини бавовняного щура (клітини CRL), наприклад, створені з цих клітин клітинні лінії, для розмноження вірулентного або атенуйованого вірусу PRRS. Даний винахід переважно також включає використання клітин CRL, наприклад клітин або клітинних ліній, одержаних з цих клітин, таких, як клітини або клітинні лінії за винаходом (наприклад, депозитовані клітинні лінії або клітини, що мають їх характеристики), для розмноження організмів або патогенів, таких, як віруси, наприклад, вірулентні або атенуйовані віруси, такі як СРІ-2, CAV-2, EHV-1, EHV-4, BRV, BCV. Таким чином, винахід охоплює спосіб культивування або розмноження вірусів, таких як PRRSV, СРІ-2, CAV-2, PAV-5, EHV-1, EHV-4, BRV, BCV, LDV, EAV, SHFV, вірус інфекційного бронхіту, собачий коронавірус, кошачий коронавірус, коронавірус людини 229Е, вірус епідемічної діареї свиней, вірус заразного гастроентериту, свинячий вірус заразного гастроентериту, свинячий респіраторний вірус, бичачий коронавірус, коронавірус людини ОС43, вірус гепатиту мишей, вірус свинячого гемаглютинуючого енцефаломієліту, коронавірус щурів, вірус сіалодакріоаденіту, пташиний вірус інфекційного бронхіту, коронавірус індиків, коронавірус кролів, кінський торовірус, свинячий торовірус, торовірус людини, бичачий торовірус, який включає забезпечення контакту з легеневими клітинами бавовняного щура за умов, придатних для культивування або розмноження. Спосіб далі може включати збирання одержаного вірусу. Для приготування імуногенних або імунологічних або вакцинних композицій вірус необов'язково може бути інактивований та/або з нього можуть бути виділені білок(ки) або антиген(и) або епітоп(и) (для інактивованих або субодиничних композицій) та вірус чи субодиниця можуть бути змішані з придатним носієм чи розчинником та/або ад'ювантом, наприклад, ветеринарно прийнятним або фармацевтично прийнятним носієм або розчинником та/або ад'ювантом. Терміни "імуногенна композиція" та "імунологічна композиція" та "імуногенна або імунологічна композиція" охоплюють будь-яку композицію, яка індукує імунну відповідь проти цільового патогену; наприклад, після введення або ін'єкції в тварину (таку, як свиня), викликають імунну відповідь проти цільового патогену (наприкад, PRRS). Терміни "вакцинальна композиція" і "вакцина" і "вакцинна композиція" охоплюють будь-яку композицію, яка спричиняє захисну імунну відповідь проти цільового патогену, або яка ефективно захищає проти патогену; наприклад, після введення або ін'єкції в тварину (таку, як свиня), викликають захисну імунну відповідь проти цільового патогену або забезпечують ефективний захист проти патогену (наприкад, PRRS). Субодиниця патогену, наприклад, вірус, антиген, імуноген чи епітоп, ізольована з патогену (наприклад, вірусу); і композиція, що містить субодиниці, складається, головним чином, з 89347 10 одного або більше антигенів, імуногенів або епітопів, ізольованих з патогену, наприклад, вірусу. Даний винахід також забезпечує культури організму або патогену, наприклад вірусу, такого, як вірус, який в нормі не використовує гризунів або щурів або бавовняного щура або легеневі клітини бавовняного щура як природного господаря, наприклад, PRRSV, LDV, EAV, SHFV, вірус інфекційного бронхіту, собачий коронавірус, кошачий коронавірус, коронавірус людини 229Е, вірус епідемічної діареї свиней, вірус заразного гастроентериту, свинячий вірус заразного гастроентериту, свинячий респіраторний вірус, бичачий коронавірус, коронавірус людини ОС43, вірус гепатиту мишей, вірус свинячого гемаглютинуючого енцефаломієліту, коронавірус щурів, вірус сіалодакріоаденіту, пташиний вірус інфекційного бронхіту, коронавірус індиків, коронавірус кролів, кінський торовірус, свинячий торовірус, торовірус людини, бичачий торовірус. СРІ-2, CAV-2, PAV-5, EHV-1, EHV-4, BRV або BCV, переважно вірус PRRS, СРІ2, CAV-2, EHV-1, EHV-4, BRV чи BCV, одержані внаслідок культивування або розмноження на легеневих клітинах бавовняного щура або клітинах чи клітинній лінії згідно винаходу, наприклад, інактивовані, атенуйовані або субодиничні культури чи препарати. Такі культури відрізняються від попередніх культур, оскільки вони повинні бути вільними від забруднень з культур, розмножуваних на різних клітинах, та можуть мати відмінні титри від культур, розмножуваних на різних клітинах. Наприклад, розглянемо знову вірус PRRS, ампліфікований на свинячих клітинах; його культури вразливі до забруднень з свинячих клітин; тоді як PRRSV, культивований на клітинах CRL з більшою ймовірністю не буде мати забруднень, знайдених у свинячих клітинах. Такий аналіз можна поширити на культури PRRSV та інших вірусів, культивованих на інших клітинах, які використовувалися для розмноження PRRSV, та інших вірусів в порівнянні з культурами вірусів, культивованих на клітинах CRL, як в даному винаході, таким чином, що стає зрозумілим те, що культури за даним винаходом відрізняються від попередніх культур. Даний винахід також охоплює імуногенні композиції та вакцини проти захворювання PRRS або PRRSV, які можуть бути одержані з культури вірусу PRRS згідно винаходу, переважно живих атенуйованих імуногенних композицій та вакцин, інактивованих імуногенних композицій та вакцин та субодиничних імуногенних композицій та вакцин. Даний винахід також охоплює імуногенні композицій та вакцини проти інших патогенів або організмів, культивованих або розмножуваних на клітинах CRL або клітинній лінії чи клітинах згідно винаходу, наприклад, живих атенуйованих, інактивованих або субодиничних композицій чи вакцин. Ці імуногенні композиції або вакцини можуть бути проти будь-якого організму або патогену, або вірусу, вирощеного, культивованого, розмноженого тощо на CRL клітинах або клітинній лінії чи клітинах згідно винаходу, наприклад, такі імуногенні або вакцинні композиції проти будь-якого з наведених в даному описі вірусів або організмів або 11 патогенів, таких як СРІ-2, CAV-2, BHV-1, EHV-1, EHV-4, BRV, bРІ-3 або BCV. Винахід охоплює набори з вмістом клітин та вірусу або організму або патогену для культивування, переважно в окремих контейнерах; і, навіть більш переважно, окремі контейнери в спільній упаковці; і, необов'язково, набір включає інструкції стосовно культивування, вирощування, живлення клітин та/або вірусу, з інструкціями, які необов'язково включають інструкції стосовно збору та/або інактивації вірусу та/або виділення субодиниці антигену чи імуногену чи епітопу. Винахід далі охоплює комбіновані композиції; наприклад, композиції, що складаються з однієї або більше вакцин чи імуногенних композицій за винаходом, або вакцин чи імуногенних композицій за винаходом в комбінації з іншою вакциною чи імуногенною композицією чи активним компонентом (наприклад, інактивованим або атенуйованим вірусом чи патогеном чи організмом або їх субодиницею, антигеном чи імуногеном чи білком чи епітопом). Таким чином, наприклад, винахід охоплює імуногенні композиції та вакцини проти захворювань свиней, які містять суміш культур вірусу PRRS та PAV-3 згідно винаходу, таких як живі атенуйовані імуногенні композиції та вакцини, інактивовані імуногенні композиції та вакцини, або субодиничні імуногенні композиції та вакцини. PAV-3 може бути також рекомбінантним PAV-3, який містить одну або більше кодуючих послідовностей нуклеїнових кислот і який експресує один або більше чужорідних або гетерологічних або екзогенних імуноген(ів), антиген(ів) або епітоп(ів) (чужорідних, гетерологічних або екзогенних по відношенню до аденовірусу). Зазначене описане у WO 99/53047, WO 99/08706, WO 01/83737 та WO 00/47756 як прикладах рекомбінантних векторів свинячого аденовірусу, які можуть бути використані при здійсненні винаходу. Іншим прикладом є те, що винахід охоплює імуногенні композиції та вакцини проти собачого захворювання, які містять суміш культур вірусів СРІ-2 та CAV-2 згідно винаходу, таких як живі атенуйовані імуногенні композиції та вакцини, інактивовані імуногенні композиції та вакцини або субодиничні імуногенні композиції та вакцини. CAV-2 може бути також рекомбінантним CAV-2, який містить одну або більше кодуючих послідовностей нуклеїнових кислот і який експресує один або більше чужорідних або гетерологічних або екзогенних імуноген(ів), антиген(ів) або епітоп(ів) (чужорідних, гетерологічних або екзогенних по відношенню до аденовірусу). Зазначене описане у Патенті США №6,090,393 як прикладі рекомбінантних векторів собачого аденовірусу, які можуть бути використані в здійсненні винаходу. Додатковим прикладом є те, що винахід охоплює імуногенні композиції та вакцини проти бичачого захворювання, які містять суміш щонайменше двох або щонайменше трьох або всіх чотирьох культур вірусів згідно винаходу, в тому числі BHV1, BRV, bРІ-3 та/або BCV, наприклад, BHV-1+BRV, BHV-1+BRV+bРІ-3, BHV-1+BRV+bРІ-3+BCV, BRV+bPI-3, BRV+bPI-3+BCV, bРІ-3+BCV, BHV+bPI 89347 12 3, BHV+bPI-3+BCV, BHV-1+BCV, BRV+BCV, такі як живі атенуйовані імуногенні композиції та вакцини, інактивовані імуногенні композиції та вакцини, або субодиничні імуногенні композиції та вакцини. Імуногенні композиції та вакцини проти бичачого респіраторного захворювання, які містять суміш щонайменше двох культур вірусу згідно винаходу, в тому числі BHV-1 і bРІ-3, та імуногенні композиції і вакцини проти бичачого кишкового захворювання, які містять суміш щонайменше двох культур вірусів згідно винаходу, в тому числі BCV та BRV, вважаються переважними. І ще додатковий приклад комбінованих композицій згідно винаходу являють собою імуногенні композиції та вакцини проти кінського захворювання, які містять суміш культур вірусу EHV-1 та EHV-4 згідно винаходу, таких як живі атенуйовані імуногенні композиції та вакцини, інактивовані імуногенні композиції та вакцини, або субодиничні імуногенні композиції та вакцини. Винахід охоплює приготування таких комбінованих композицій; наприклад, шляхом змішування активних компонентів, переважно разом, та змішування з носієм або розчинником та/або допоміжною речовиною. Винахід також охоплює набір для приготування комбінацій імуногенних або вакцинних композицій згідно винаходу; наприклад, такий набор містить (а) організм, його патоген чи вірус чи антиген чи епітоп (переважно вірус, як зазначено в даному описі) та (b) організм, патоген або вірус, або його антиген чи епітоп (переважно також розглядаються вірус або його імуноген, антиген чи епітоп як зазначено в даному описі), який відрізняється від (а), в окремих контейнерах, необов'язково в спільній упаковці, і необов'язково з інструкціями щодо змішування та введення. Винахід додатково охоплює способи індукування імунної відповіді шляхом введення хазяїну, такому як хазяїн, вразливий до захворювань, спричинених патогеном або організмом, або вірусом, розмноженим на легеневих клітинах бавовняного щура чи клітинній лінії, наприклад, легеневих клітинах бавовняного щура або клітинній лінії за винаходом, наприклад, вірусом з числа зазначених, імуногенної або вакцинної композиції за винаходом, яка охоплює такий інактивований або атенуйований патоген або організм або вірус, або його антиген чи імуноген чи епітоп, в кількості, достатній для індукування імунної відповіді. Таким чином, даний винахід забезпечує способи імунізації або вакцинації або індукування імунної відповіді проти захворювання PRRS або вірусу PRRS з використанням імуногенної композиції та/або вакцини за винаходом, наприклад, введення імуногенної або вакцинної композиції хазяїну, наприклад, свині, в кількості, достатній для індукування придатної імунної відповіді. І додатково винахід забезпечує способи для імунізації або вакцинації або індукції імунної відповіді проти СРІ-2, CAV-2, BHV-1, EHV-1, EHV-4, BRV, bРІ-3 або BCV захворювання або вірусу з використанням імуногенної композиції та/або вакцини за винаходом, введення імуногенної або вакцинної композиції хазяїну, наприклад, природному хазяїну вірусу, в 13 кількості, достатній для індукування придатної імунної відповіді. Даний винахід, наприклад, коли застосовуються коктейль або комбіновані композиції, включає способи імунізації або вакцинації або індукування імунної відповіді у тварини-хазяїна проти двох або більше різних антигенів, епітопів або патогенів або організмів або вірусів, так як у свиней проти захворювання PRRS та PAV-3, які включають введення ефективної для індукування імунної відповіді кількості імуногенної композиції(їй) та/або вакцини (вакцин) за винаходом. (Множина застосовується, оскільки спосіб може також здійснюватися шляхом послідовного введення композицій або вакцин за винаходом.) Подібним чином, як наступний приклад, винахід включає способи імунізації або вакцинації або індукування імунної відповіді у собаки проти захворювання або вірусу СРІ-2 та CAV-2 з використанням вірусу або введення ефективної кількості імуногенної композиції(їй) та/або вакцин (вакцини) за винаходом. Подібним чином, винахід забезпечує способи імунізації або вакцинації або індукування імунної відповіді у бика проти щонайменше двох або щонайменше трьох або щонайменше чотирьох бичачих захворювань або вірусів з використанням введення ефективної кількості імуногенної композиції(їй) та/або вакцини (вакцин) за винаходом. Додатково винахід забезпечує способи імунізації або вакцинації або індукування імунної відповіді у бика проти захворювання або вірусу BHV-1 та bРІ-3 з використанням введення ефективної кількості імуногенної композиції(ій) та/або вакцини (вакцин) за винаходом. Винахід також включає способи імунізації або вакцинації або індукування імунної відповіді у бика проти захворювання або вірусу BCV та BRV з використанням введення ефективної кількості імуногенної композиції(ій) та/або вакцини (вакцин) за винаходом. І винахід включає способи імунізації або вакцинації або індукування імунної відповіді у бика проти захворювання або вірусу EHV-1 та EHV-4 з використанням введення ефективної кількості імуногенної композиції(ій) та/або вакцини (вакцин) за винаходом. Слід зазначити, що в даному описі і особливо у формулі винаходу, терміни, такі як "включає", "включений", "включення" та подібні до них мають значення, визначені Патентним законом США; наприклад, вони можуть означати "включає", "включений", "включення" та подібні до них"; такі терміни, як "складається суттєвою мірою з" та "полягає суттєвою мірою в" мають значення, описані в Патентному Законі США, тобто вони дозволяють повторювати елементи в непрямій формі, але виключають елементи, які є частиною рівня техніки або такі, що впливають на базові чи новітні характеристики винаходу. Це та інші втілення винаходу розкриті або очевидно випливають та містяться в наступному детальному описі винаходу. Винахідники розробили спосіб продукування або розмноження вірусів, який використовує легеневі клітини бавовняного щура, а також нову клітинну лінію; і розмноження або продукування або 89347 14 культивування або вирощування організмів чи патогенів чи вірусів на зазначених клітинах. Легені одержують з бавовняних щурів та передають на ферментне перетравлювання (наприклад, з трипсином та/або колагеназою). Супернатант, який містить дезасоційовані клітини, збирають та культивують, наприклад, як моношар або у вигляді суспензії. Переважно клітини культивують як моношар, наприклад, в мінімальному есенціальному середовищі (Minimum Essential Medium, MEM), до якого додається сироватка бичачого плоду (FBS) та/або гідролізат лактальбуміну (LAH). Переважно середовище культивування може містити антибіотики, наприклад гентаміцин, стрептоміцин та/або пеніцилін. Вірус PRRS культивують на такій культурі легеневих клітин. Віруси PAV-3, СРІ-2, CAV-2, BHV-1, EHV-1, EHV-4, BRV, bРІ-3 або BCV також культивують на такій культурі легеневих клітин. Культура клітин переважно може бути наслідком кількох пасажів цих клітин. Переважно, пасажі цих клітин дозволяють одержати клітинні лінії, які є корисними, наприклад, для розмноження вірусу PRRS. Наприклад, клітини можуть підлягати щонайменше 10 пасажам, наприклад, від 10 до 100 пасажів. Переважно ці клітинні лінії є довговічними за відсутності сироватки бичачого плоду (FBS), хоча створення моношару вимагає певної кількості FBS або іншого придатного фактора росту клітин. Іншою перевагою культури клітин CRL згідно винаходу є те, що культура клітин може зберігатися протягом щонайменше місяця як здоровий моношар або суспензія і не вимагає заміни виснаженого середовища або додаткового підживлення. Ця витривалість надає перевагу множинного збирання вірусів з однієї культури клітин без початкового інтервалу часу (створення культури) та без необхідності утримувати запас клітин. Таким чином, існує можливість декілька разів збирати віруси з однієї клітинної лінії. В одному з втілень процес культивування включає два або більше збирання вірусів, з ре-інокуляцією віруса або без неї, та/або з додаванням свіжого середовища для культивування або без нього. Переважно після кожного збирання до культури клітин додається свіже середовище культивування. За цією процедурою легеневі клітини бавовняного щура культивувалися до 76 пасажів та створювали клітинну лінію. Ці легеневі клітини бавовняного щура істотною мірою являють собою епітеліальні клітини та їх морфологічні характеристики зберігаються протягом пасажів. Пасаж 21 був депозитований 18 грудня 2001р. за умовами Будапештського Договору в Американській Колекції Типів Культур, 10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209, і йому було присвоєно номер входження АТСС РТА-3930. У своєму втіленні даний винахід включає використання епітеліальних легеневих клітин бавовняного щура, одержаних з них ліній епітеліальних клітин, таких, як клітинна лінія РТА-3930 або клітинної лінії, яка має її індентифікаційні характеристики, для продукування вірулентного або атенуйованого вірусу PRRS. У додаткових втіленнях даний винахід включає використання епітеліаль 15 них легеневих клітин бавовняного щура, клітинних ліній, які з них походять, таких, як клітинна лінія РТА-3930, або клітинна лінія, яка має її ідентифікаційні характеристики, для продукування вірулентних або атенуйованих вірусів СРІ-2, CAV-2, EHV1, EHV-4, BRV чи BCV. В подальших втіленнях даний винахід включає використання клітинної лінії РТА-3930 або клітинної лінії, яка має її ідентифікаційні характеристики, для продукування вірулентних або атенуйованих вірусів BHV-1 чи bРІ-3. Клітинна лінія РТА-3930 або клітинна лінія, яка має її ідентифікаційні характеристики, також може бути використана стосовно інших зазначених в даному описі вірусів. Таким чином, іншим аспектом винаходу є спосіб продукування вірусу PRRS, який включає культивування вірусу PRRS на культурі легеневих клітин бавовняного щура, яка включає епітеліальні клітини, переважно на лінії легеневих клітин бавовняного щура. Наприклад, продукування вірусу здійснювалося на клітинній лінії РТА-3930 або на клітинній лінії, яка має її ідентифікаційні характеристики. Цей спосіб продукування вірусів може також використовуватися для вірусів СРІ-2, CAV-2, BHV-1, EHV-1, EHV-4, BRV, bРІ-3 або BCV, а також для інших зазначених в даному описі вірусів. Вірус може бути вірулентним вірусом або атенуйованим вірусом. Продукування вірусу включає кроки інокуляції та розмноження вірусу в таких клітинах. Перед інокуляцією клітини згідно винаходу можуть рости в придатному середовищі для культивування, наприклад, середовищі MEM з додаванням FBS або іншого придатного фактора росту клітин. Культивування клітин переважно здійснюється при температурі між 35 та 39°С, переважно близько 37°С. Переважно культура клітин являє собою моношар. Альтернативно культура клітин являє собою суспензію. Загалом вірус інокулюють, коли клітини, які ростуть в моношарі, зливаються. Внутрішньоклітинний вірус може бути здобутий після руйнування клітин придатним способом, наприклад, шляхом заморожування/розморожування або обробки ультразвуком. У випадку культивування клітин у вигляді суспензії вірус може бути відокремлений, наприклад, після фільтрування фільтрату. Вірус може бути здобутий в період від 2 до 15 днів, наприклад, від 3 до 7 днів, більш переважно від 5 до 7 днів після інокуляції. Продукування вірусу здійснюється згідно загальних знань спеціаліста в галузі розведення вірусів. На цій стадії одержують сиру культуру вірусу. До середовища для культивування, використаного у цьому винаході, можуть додаватися антибіотики. При необхідності вірус, наприклад вірус PRRS, адаптують до росту на клітинах згідно винаходу. Адаптація може здійснюватись культивуванням на суміші клітин згідно винаходу та клітин нирок мавпи, таких як МА-104. Адаптація здійснюється, як це добре відомо, шляхом серійних пасажів на змішаних культурах при поступовому збільшенні долі клітин І згідно винаходу. Така адаптація може бути здійснена також для вірусів СРІ-2, CAV-2, BHV-1, 89347 16 EHV-1, EHV-4, BRV, bРІ-3 або BCV, так само, як і для інших вірусів, зазначених в даному описі. Сиру культуру можна концентрувати та/або очищувати. Концентрування може бути виконане досвідченим спеціалістом в цій галузі за будь-яким традиційно відомим способом, наприклад, шляхом селективної преципітації або ультрафільтрації. Очищення може бути здійснене за будь-яким традиційним способом, відомим досвідченому спеціалісту в цій галузі, наприклад ультрацентрифугуванням або хроматографічними методами, наприклад, гель-фільтрацією. На цій стадії одержують концентровані культури вірусу, очищені культури або концентровані і очищені культури. В іншому аспекті винаходу культури вірусу згідно винаходу (сирі, концентровані, очищені або концентровані і очищені) можуть бути інактивовані з використанням будь-якого традиційного способу, наприклад термального та/або хімічного методу. Переважним способом є хімічна інактивація, наприклад, з використанням бета-пропіолактону, формаліну, етиленіміну або їх похідних, таких як бінарний етиленімін (ВЕІ), та комбінацій цих інактивуючих сполук. На цій стадії одержують інактивовані культури вірусу PRRS. В іншому аспекті винаходу імуногенні фракції, подібні до глікопротеїнів або білків, можуть бути екстраговані з вірусу, присутнього в культурах вірусів згідно винаходу (сирих, концентрованих, очищених або концентрованих і очищених, необов'язково інактивованих). Екстракція імуногенних фракцій вірусу здійснюється згідно загальних знань спеціаліста в даній галузі. На цій стадії одержують препарати субодиниць вірусу. Інші аспекти винаходу, таким чином, являють собою описані сирі культури вірусу, концентровані культури, очищені культури, концентровані і очищені культури, інактивовані культури, препарати субодиниць. В переважному втіленні винаходу вірулентний вірус може бути атенуйований шляхом достатньої кількості пасажів на клітинах згідно винаходу. Спеціаліст в даній галузі здатний визначити достатню для атенуації вірусу кількість пасажів шляхом звичайних експериментів. В результаті одержують препарат атенуйованого вірусу. Об'єктом даного винаходу також є забезпечення імуногенних композицій та вакцин для профілактики спричинених вірусом інфекцій. Ці імуногенні композиції або вакцини включають щонайменше одну культуру або препарат з описаних в даному описі. Термін "імуногенна композиція" охоплює в даному описі охоплює будь-яку композицію, яка після введення тварині, наприклад свині, індукує імунну відповідь проти вірусу або антигену або імуногену або епітопу. Термін "вакцина" охоплює будь-яку композицію, здатну після введення тварині, наприклад свині, індукувати захисну імунну відповідь проти вірусу або ефективно захищати тварину проти зазначеного вірусу. Імуногенні композиції або вакцини згідно винаходу можуть включати культуру або препарат вірусу, або антиген чи імуноген чи епітоп вірусу, і 17 щонайменше один імуноген, антиген чи і епітоп іншого патогену або інший патоген (наприклад, інактивований або атенуйований патоген). Такий імуноген, антиген чи епітоп може бути, наприклад, бактеріального, або паразитарного або вірусного походження, або може являти собою інактивовану чи атенуйовану форму патогену. Винахід також охоплює набори для приготування цих комбінацій композицій, а також способи приготування цих комбінацій композицій та використання компонентів зазначених комбінацій композицій для приготування цих комбінацій композицій. Відповідно, винахід включає набір для приготування комбінацій імуногенних або вакцинних композицій за винаходом; наприклад, такий набір включає (а) організм, патоген або вірус або його антиген чи епітоп (переважно вірус, як зазначено в даному описі) та (b) організм, патоген або вірус або їх імуноген, антиген чи епітоп (переважно вірус або його імуноген, антиген чи епітоп, але інші патогени також розглядаються, як зазначено в даному описі), що відрізняється від (а), в окремих контейнерах, необов'язково в спільній упаковці, і- необов'язково з інструкціями щодо змішування та/або введення Імуногенні композиції та/або вакцини згідно винаходу можуть включати культуру або препарат вірусу PRRS (наприклад, інактивований або атенуйований PRRSV або його імуноген, антиген чи епітоп), і щонайменше один імуноген, антиген чи епітоп іншого свинячого патогену (що включає патогени в інактивованій або атенуйованій формі, але не обмежується ними). Цей патоген може бути обраний з групи, що включає вірус псевдосказу, вірус свинячого грипу, свинячий парвовірус, вірус заразного гастроентериту (коронавірус), свинячий цирковірус, такий як свинячий цирковірус типу 2, ротавірус, свинячий аденовірус типу 3, Esherichia coli, Erusipelothrix rhusiopathiae, Bordetella bronchiseptica, Clostridium spp., Salmonella spp., Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Spreptococcus suis, Mycoplasma hyopneumoniae та Actinobacillus pleuropneumoniae. Переважно імуногенні композиції та вакцини згідно винаходу можуть включати культуру або препарат вірусу PRRS та віруси PAV-3, вирощені та розмножені на клітинах чи клітинних лініях згідно винаходу, наприклад, на клітиннії лінії РТА-3930 або на клітинній лінії, яка має всі її ідентифікаційні характеристики. Імуногени свинячих патогенів можуть включати вірус псевдосказу gB, вірус псевдосказу gC, вірус псевдосказу gD, свинячий грип НА, свинячий грип ΝΑ, свинячий грип NP, ORF4 вірусу свинячого репродуктивного та респіраторного синдрому, ORF7 вірусу свинячого репродуктивного та респіраторного синдрому, PRRSV ORF5, PRRSV ORF3, PRRSV ORF6, PRRSV рамки відкритого читання 5 (ORF5) та 6 (ORF6), PRRSV рамки відкритого читання 5 (ORF5) та 3 (ORF3) та 6 (ORF6), вірус холери кабанів Е1, ген вірусу холери кабанів Е2, парвовірус VP2, свинячий цирковірус типу 2 ORF1 або свинячий цирковірус типу 2 ORF2. Посилання зроблені на Патенти США №№6,517,843, 6,497,883, 6,391,314, 6,379,676, 6,217,883, 6,207,165 і патентну публікацію США 2003003112 та WO 99/53047, WO 99/08706, WO 01/83737, і WO 89347 18 00/47756 для імуногенів свинячих патогенів, кодуючих їх молекул нуклеїнових кислот і конструктів, що їх експресують. Таким чином, винахід також включає способи одержання цих композицій, а також набори для такого одержання. Імуногенні композиції та вакцини згідно винаходу можуть включати культуру або препарат вірусів СРІ-2 та/або CAV-2 (наприклад, інактивовані чи атенуйовані СРІ-2 та/або CAV-2, або їх імуноген чи антиген чи епітоп) та щонайменше один імуноген, антиген чи епітоп іншого собачого патогену (включаючи, але не обмежуючись патогенами у інактивованій та атенуйованій формі). Цей патоген може бути обраний з групи, яка включає, але не обмежується вірусом собачої чуми, собачим парвовірусом, собачим коронавірусом, собачим герпесвірусом, агентом хвороби Лайма, Borrelia burgdorferi та вірусом сказу. Переважно імуногенні композиції та вакцини згідно винаходу включають культуру чи препарат вірусу СРІ-2 та/або культуру чи препарат вірусу CAV-2 згідно винаходу. Імуногени СРІ-2 можуть являти собою СРІ-2 F та/або HN. Див. також Патенти США №№5,616,326, 6,090,393, 6,159,477, 6,228,846 стосовно собачих патогенів та кодуючих їх молекул нуклеїнових кислот і конструктів, які їх експресують. Таким чином винахід включає також способи одержання цих композицій, а також набори для такого одержання. Імуногенні композиції та вакцини згідно винаходу можуть включати культуру або препарат вірусів BHV-1, BRV, bРІ-3 та/або BCV (наприклад, інактивований або атенуйований BHV-1, BRV, bРІ3 та/або BCV або їх імуноген чи антиген чи епітоп), і щонайменше один імуноген, антиген чи епітоп іншого бичачого патогену (включаючи, але не обмежуючись патогеном в інактивованій або атенуйованій формі). Цей патоген може бути обраний згрупи, яка включає, але не обмежується бичачим респіраторним синцитіальним вірусом та бичачим вірусом вірусної діареї. Переважно імуногенні композиції та вакцини згідно винаходу включають щонайменше дві культури або препарати вірусу згідно винаходу, включаючи BHV-1, BRV, bРІ-3 або BCV. BRSV імуногени можуть являти собою BRSV F або G або N, такі як BRSV F та/або G чи N та/або G. BHV-1 імуногени можуть являти собою gВ та/або gС та/або gD. BVDV імуногени можуть являти собою Е0 білок (gр48) та/або Е2 білок (gр53). BVDV може бути типу 1 та/або типу 2. bРІ-3 Імуногени можуть бути bРІ-3 F та/або HN. Див. також Патенти США №№6,451,770, 6,376,473, 6,224,878 стосовно імуногенів бичачих патогенів та кодуючих їх молекул нуклеїнових кислот і конструктів, які їх експресують. Таким чином, винахід включає також способи одержання цих композицій, а також набори для такого одержання. Імуногенні композиції та вакцини згідно винаходу можуть включати культуру або препарат вірусів EHV-1 та/або EHV-4 (наприклад, інактивований або атенуйований EHV-1 та/або EHV-4 або їх імуноген, антиген чи епітоп), і щонайменше один імуноген, антиген чи епітоп іншого бичачого патогену (включаючи, але не обмежуючись патогеном в інактивованій або атенуйованій формі). Цей патоген може бути обраний з групи, яка включає але 19 не обмежується вірусом кінського грипу, вірусом східного енцефаломієліту (EEV), вірусом західного енцефаломієліту (WEV), вірусом Венесуельського енцефаломієліту (VEV), агентом хвороби Лайма, Borrelia hurgdorferi, Clostridium tetani, вірусом кінського артеріїту (EAV) та вірусом сказу. Переважно імуногенні композиції та вакцини згідно винаходу можуть включати культуру або препарат вірусу EHV-1 та культуру або препарат вірусу EHV-4 згідно винаходу. EHV глікопротеїни можуть являти собою gB, gD, gB+gD, gС і gЕ. Посилання зроблено на Патенти США №№6,207,166, 6,368,603 стосовно імуногенів кінських патогенів та кодуючих їх молекул нуклеїнових кислот і конструктів, які їх експресують. Таким чином, винахід включає також способи одержання цих композицій, а також набори для такого одержання. Імуногенна композиція або вакцина згідно "винаходу, яка також включає додатковий імуногенний компонент (додатковий імуноген, антиген чи епітоп) має перевагу в тому, що індукує імунну відповідь або захист проти кількох інфекцій чи нездужань, або агентів, що їх спричиняють, водночас. Цей додатковий імуногенний компонент може бути атенуйованим або інактивованим мікроорганізмом, рекомбінантним конструктом або субодиницями (наприклад, білками, глікопротеїнами, поліпептидами або епітопами). Процедури детермінації епітопів, такі як генерація частково співпадаючих пептидних бібліотек (Hemmer В. et al., Immunology Today, 1998, 19(4), 163-168), PepScan (Geysen Η.Μ. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1984, 81 (13), 3998-4002; Geysen H.M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, 82 (1), 178-182; Van der Zee R. et al., Eur. J. Immunol., 1989, 19 (1), 43-47; Geysen H.M., Southeast Asian J. Trop. Med. Public. Health, 1990, 21 (4), 523-533; Multipin Peptide Synthesis Kits de Chiron) та алгоритми (De Groot et al., Nature Biotechnology, 1999, 17, 533561), можуть застосовуватися при здійсненні винаходу для визначення епітопів імуногенів, антигенів, поліпептидів, глікопротеїнів та подібних до них, без надмірного експериментування. Виходячи з цієї інформації, можна конструювати молекули нуклеїнових кислот, кодуючих такий епітоп; і виходячи з рівня техніки, можна конструювати вектори або конструкти, наприклад, рекомбінантні віруси чи вектори чи плазміди, що експресують імуногени, епітопи чи антигени; все це без надмірного експериментування. Імуногенні композиції або вакцинні композиції додатково включають фармацевтично або ветеринарно прийнятний ексципієнт, розбавлювач або наповнювач, і необов'язково стабілізатор та/або ад'ювант. Придатні рецептури будуть очевидними для спеціаліста в даній галузі. Рецептури можуть бути розроблені для будь-якого придатного шляху введення. Фармацевтично прийнятним носієм може бути вода або фізіологічний розчин. Інактивовані імуногенні композиції або інактивовані вакцини переважно включають щонайменше одну допоміжну речовину. Живі атенуйовані віруси можуть бути заморожені висушуванням, переважно зі стабілізатором. 89347 20 Заморожування 1 висушуванням може бути здійснене у відповідності до добре 1 відомих стандартних процедур заморожування висушуванням. Фармацевтично прийнятні стабілізатори можуть являти собою SPGA (сахарози фосфат глутамат альбумін) (Bovarnik et al., J. Bacteriology, 1950, 59: 509), вуглеводи (наприклад, сорбітол, манітол, лактоза, сахароза, глюкоза, декстран, трегалоза), натрію глутамат (Tsvetkov Т. et al., Cryobiology 1983, 20 (3): 318-23; Israeli E. et al., Cryobiology 1993, 30 (5): 519-23), білкі, такі як пептон, альбумін або казеїн, білок-містячі агенти, такі як зібране молоко (Mills С.K. et al., Cryobiology 1988, 25 (2): 148-52; Wolff E. et al., Cryobiology 1990, 27 (5): 56975), та буфери (наприклад, фосфатний буфер, лужний металофосфатний буфер). Ад'ювант може застосовуватися для того, щоб зробити висушені виморожуванням препарати розчинними. Прикладами ад'ювантів є емульсії олія-у-воді, вода-в-олії-у-воді на базі мінеральної олії чи рослинної олії та неіонні сурфактанти, такі як блочні сополімери, Tween®, Span®. Іншими придатними ад'ювантами є, наприклад, вітамін Е, сапоніни, Carbopol®, алюмінію гідроксид, алюмінію фосфат або алюмінію оксид ("Vaccine Design, The subunit and adjuvant approach", Pharmaceutical Biotechnology, vol.6, Edited by Michael F. Powell and Mark J. Newman, 1995, Plenum Press New York). Документи, цитовані в цьому описі, можуть також надати додаткову інформацію щодо ад'ювантів, а також щодо допоміжних речовин (розбавлювачів, носіїв та наповнювачів). Іншим аспектом даного винаходу є спосіб імунізації або спосіб вакцинації з використанням імуногенних композицій або вакцинних композицій згідно винаходу, відповідно. Спосіб включає щонайменше одне введення тварині достатньої кількості імуногенної композиції або вакцини згідно винаходу. Тварина може бути самцем, самкою, вагітною самкою або новонародженим. Таке введення особливо може бути здійснене шляхом внутрішньом'язової (IМ), внутрішньошкірної (ID) або підшкірної (SC) ін'єкції, або шляхом інтраназального чи перорального введення. Імуногенна композиція або вакцина згідно винаходу може бути введена шприцем або безголковим апаратом (подібним, наприклад, до Pigjet або Biojector [Bioject, Орегон, США]). Для атенуйованих композицій дози вірусу або організму або патогену, продуковані на новій культурі клітин, можуть знаходитися поміж 103 та приблизно 107 CCID50 (середні інфекційні дози культури клітин), переважно між 104 та приблизно 106 CCID50 та більш переважно близько 105 CCID50. Обсяги становлять від 0,2 до 2,0мл, переважно близько 2,0мл. Може бути здійснене одне або два введення; наприклад, дві ін'єкції з інтервалом 2-4 тижні, і переважно підсиленням через 3 тижні після першої ін'єкції. З інактивованими композиціямі вірусу або організму або патогену, продукованими на новій культурі клітин, тварині може бути введено приблизно 104-109 еквіваленту CCID50 (титр перед інактивацією), переважно близько 105-108 еквіва 21 ленту CCID50 в єдиній дозованій формі. Об'єм єдиної дозованої форми може бути між 0,2 та 5,0мл і переважно між 0,5 та 2,0мл, і більш І переважно близько 2,0мл. Може бути здійснене одне або більше введень; наприклад, дві ін'єкції з інтервалом 2-4 тижні, і переважно з підсиленням через 3 тижні після першої ін'єкції. Для субодиничних композицій, наприклад з вірусу або патогену або організму, продукованих на новій культурі клітин, тварині може бути введено приблизно від 5мкг до 500мкг, переважно від 20мкг до 50мкг. Об'єми становлять від 0,2 до 2,0мл, переважно близько 2,0мл. Може бути здійснене одне або більше введень; наприклад, дві ін'єкції з інтервалом 2-4 тижні, і переважно з підсиленням через 3 тижні після першої ін'єкції. Композиції згідно винаходу також можуть вводитися іншим ссавцям, наприклад, миші або лабораторній тварині, наприклад, для генерації поліклональних антитіл, або для приготуванням гібридом для моноклональних антитіл. Винахід далі буде описаний за допомогою прикладів, які не обмежують його суті. Приклади Приклад 1. Одержання легеневих клітин бавовняного щура (CRL) Після вирізання з умертвленої безболісним способом тварини легені вміщують до середовища культивування клітин, яке містить мінімальне есенціальне середовище F-15 (MEM F-15, Hyclone, cat#SH30024.02) та гентаміцин в концентрації 30мкг/мл. До цього середовища додають комерційно доступний антибіотик (пеніцилін та стрептоміцин) та протигрибковий засіб (амфотерицин В) в об'ємній концентрації 2%. Легені перетравлюють при 37°С в конічній центрифужній пробірці об'ємом 50мл, яка містить 25мл розчину колагенази (Sigma, cat#L-0130) і трипсин (Sigma, cat#T-8003) в концентрації 1мг/мл та 1Х потужності (що відповідає концентрації 2,5мг/мл) відповідно, у MEM F-15 з вмістом гентаміцину 30мкг/мл. Після перетравлювання протягом 30 хвилин додають сироватку бичачого плоду (FBS) (Bio Whittaker) у кінцевій об'ємній концентрації 10%. Після диспергування клітин піпеткою та прояснення рідини збирають супернатант, який містить дезасоційовані клітини, і розливають у колби по 25см2, які містять середовище MEM F-15 з вмістом гентаміцину в концентрації 30мкг/мл, та додають FBS в кінцевій концентрації 10% (по об'єму). Приклад 2. Культивування клітин CRL Розчин трипсину використовують для вимивання залишків FBS із злитого моношару клітин CRL, одержаного в Прикладі 1. Клітини, вокриті 0,1% (1Х) сумішшю свинячого трипсину з етилендіамінтетраоцтовою кислотою (EDTA) (JRH Biosciences, cat#62244-79P) (3мл на колбу 75см2, 5мл на колбу 150см2), вміщують до інкубатору при 37°С і ретельно контролюють до повного відокремлення клітин. Клітини диспергують піпеткою і збирають 3мл клітинної суспензії. В цей момент 1:4 зібраних клітин культивують у свіжому середовищі для культивування клітин, яке містить MEM F15, гентаміцин в концентрації 30мкг/мл та FBS в об'ємній концентрації 10%. 89347 22 CRL клітини вирощують при 37°С в інкубаторах с парціальним тиском СО2 5%. 1:4 частина злитого моношару зливається приблизно протягом 4 днів, а 1:8 частина продукувала злитий моношар на протязі приблизно 7 днів. Це становить пасаж. Далі клітини розмножують з пасажу 2 до пасажу 76. Після додавання кріопротектору диметилсульфоксиду (DMSO) невеличкі банки заморожують на всіх пасажах до 76-го. Банки зберігають в рідкому азоті. Клітини CRL на пасажі 21 депозитовані у Американській Колекції Типових Культур під номером входження АТСС РТА-3930. Приклад 3. Розмноження вірусу PRRS на клітинах CRL Використовувався атенуйований вірус PRRS, щодо якого доведена здатність розмножуватися на ниркових клітинах мавп. Розмноження вірусу PRRS здійснюють на моношарі клітин CRL у колбі 75см2 (колба Т75) з 50мл середовища для культивування, яке містить MEM F-15, гентаміцин в концентрації 30мкг/мл та FBS в об'ємній концентрації 10%. Перед інокуляцією вірусу клітини інкубують при 37°С протягом 24 годин до злиття. Після інокуляції з 1мл вірусу PRRS інокульовані клітини інкубують при 37°С протягом 5-7 днів. Ріст вірусів контролюють шляхом непрямого імунофлуоресцентного тестування с антитілами (IFA) і титрування матеріалу супернатанту. Після заморожування/розморожування супернатант збирають. Таким чином одержують сиру культуру вірусу PRRS. Непряме імунофлуоресцентне тестування з антитілами (IFA) Для IFA клітини трипсинізують, диспергують, збирають і ресуспендують у свіжому середовищі MEM F-15, яке містить гентаміцин в концентрації 30мкг/мл, та додають FBS в об'ємній концентрації 10%. Клітини висівають у 9б-чарункові тарілки для роботи з культурами тканин в кількості 100мкл/чарунку і дозволяють їм рости до злиття протягом ночі. Готують чотирьохкратні серійні розведення вірусів PRRS. Далі 100мкл або 200мкл розведеного вірусу вносять до кожної чарунки в ряду 96-чарункової тарілки. Тарілку вміщують до інкубатору при 37°С, з 5% СО2 та інкубують протягом 7 днів. Чарунки, які містять інфіковані CRL клітини, визначають шляхом непрямого імунофлуоресцентного тестування з антитілами (IFA) з використанням противірусного анти-PRRS моноклонального антитіла (SDOW17, одержаного з USDA; Magar R. et al., Can. J. Vet. Res., 1995, 59 (3): 232-4). Характеристика вірусу PRRS, вирощеного на культурі CRL PRRS вірус титрують у 96-чарунковій тарілці, яка містить клітни CRL. Титр розраховують з використанням методу Спермана-Карбера (SpearmanKarber) з визначенням 50% кінцевої точки і реєструють в перерахунку на мл. Результати виражають у вигляді Log10 (FAID50)/мл. Результати титрування становили 4,3 Log10 (FAID50)/мл. 23 Приклад 4. Адаптація вірусу PRRS до зростання та розмноження на клітинах CRL NADC 8 PRRS адаптують до росту на клітинах CRL. NADC 8 було одержано з Національного Центру Захворювань тварин (National Animal Disease Center, USDA). Вірус послідовно розмножують на змішаних культурах клітин CRL та клітин МА-104 (ниркові клітини африканської зеленої мавпи, батьківська клітинна лінія MARC-145), поступово зменшуючи кількість клітин МА-104. Спочатку клітини CRL висівають у співвіношенні 1:9 з клітинами МА-104 (20,000 клітин/мл CRL:180,000 клітин/мл МА-104) при 37°С, MEM F-15 з гідролізатом лактальбуміну (LAH, в об'ємній концентрації 0,%), гентаміцином в концентрації 30мкг/мл та FBS в об'ємній концентрації 10%. Коли ці змішані культури зливаються, інокулюють вірус PRRS (1мл на колбу Т75) без будь-якого повторного наповнення середовищем. Ріст вірусу контролюють шляхом непрямого імунофлуоресцентного тестування з антитілами (IFA, як описано в Прикладі 3) і титруванням матеріалу супернатанту. Інокульовані клітини інкубують при 37°С протягом 5-7 днів. Пасаж включає заморожування/розморожування, збирання супернатанту і наступну інокуляцію 1мл успішної змішаної культури з колби Т75, тобто близько 10% зібраного супернатанту. Зазначену процедуру повторюють пасажами інокулуму на змішаних культурах CRL: МА-104 у співвідношеннях 2:8, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 8:2 та 9:1, відповідно. В кінці у колбі Т75 одержують вірус, вирощений на моношарі, що складається виключно з клітин CRL, з 50мл середовища культивування, яке містить MEM F-15, гентаміцин в концентрації 30мкг/мл та FBS в об'ємній концентрації 10% (без LAH). Інокульовані CRL клітини інкубують при 37°С протягом 5-7 днів. Після заморожування/розморожування супернатант збирають. Таким чином одержують сиру культуру вірусу PRRS. IFA показує, що клітини CRL інфіковані NADC 8. Характеристика вірусу PRRS, вирощеного на культурі CRL PRRS вірус NADC 8 титрують у 96-чарунковій тарілці, яка містить клітни CRL. Культивування здійснюють, як описано раніше. Титр розраховують з використанням методу Спермана-Карбера (Spearman-Karber) з визначенням 50% кінцевої точки і реєструють в перерахунку на мл. Результати виражають у вигляді Log10 (FAID50)/мл. Результати титрування становили 4, 12 Log10 (FAID50)/мл. Інші віруси, такі як віруси ряду Nidovirales, наприклад, артевіруси або віруси родини Arteriviridae, наприклад, вірус, що підвищує лактатдегідрогеназу (LDV), вірус кінського артеріїту (EAV), вірус геморагічної лихоманки мавп (SHFV), віруси родини Coronaviridae, наприклад, коронавіруси, такі як вірус інфекційного бронхіту, собачий коронавірус, кошачий коронавірус, коронавірус людини 229Е, вірус епідемічної діареї свиней, вірус заразного гастроентериту, свинячий вірус заразного гастроентериту, свинячий респіраторний 89347 24 вірус, бичачий коронавірус, коронавірус людини ОС43, вірус гепатиту мишей, вірус свинячого гемаглютинуючого енцефаломієліту, коронавірус щурів, вірус сіалодакріоаденіту, пташиний вірус інфекційного бронхіту, коронавірус індиків, коронавірус кролів, і торовіруси, такі як кінський торовірус, свинячий торовірус, торовірус людини, бичачий торовірус, та інші віруси, які не використовують гризунів або щурів, або бавовняного щура, або легеневі клітини бавовняного щура як природного господаря, можуть бути адаптовані до росту на легеневих клітинах бавовняного щура, переважно на легеневих клітинах бавовняного щура або клітинній лінії за винаходом ("наприклад, депозитованій), з використанням описаних технік або технік, аналогічних описаним,з урахуванням особливостей PRRS. Приклад 5. Спосіб інактивації. Збирають вірус PRRS, розмножений на CRL (Приклад 3 або 4). Суспензію вірусу обробляють ультразвуком при температурі близько 5°С. Суспензію вірусу фільтрують крізь мембрану з порами 50-100мкм при температурі близько 5°С. До суспензії вірусу додають бета-пропіолактон в кінцевій об'ємній концентрації 1/3000. Після гомогенізації перемішуванням суспензію переносять до іншої стерильної колби. Інактивацію здійснюють за умови перемішування протягом 24 годин при температурі близько 5°С. рН утримують на рівні близько 7,2 шляхом додавання NaOH. Інактивовану суспензію вірусу концентрують ультрафільтрацією приблизно в 50 разів. Концентровану суспензію вірусу зберігають при -40°С. Приклад 6. Приготування інактивованох вакцини в формі емульсії на базі мінеральної олії Вакцину готують з інактивованого вірусу PRRS, одержаного в Прикладі 5 (після розморожування та розведення) згідно наступної формули: - суспензія інактивованого вірусу PRRS 167мл - олійна фаза 83мл Олійна фаза: 7% (по масі) ангідроманітолу олеату, 8% (по масі) етоксильованої олеїнової кислоти та 85% (по об'єму) світлої рідкої парафінової олії (згідно Європейської фармакопеї). Водну фазу та олійну фазу окремо стерилізують фільтрацією. Емульсію готують шляхом змішування та гомогенізації інгредієнтів за допомогою турбінного емульсифікатора Сілверсона. Одна доза вакцини містить приблизно 107,5 CCID50 (титр перед інактивацією). Об'єм однієї дози вакцини становить 2,0мл для внутрішньом'язового введення. Приклад 7. Розмноження вірусів на клітинах CRL Запаси вірусу, що рутинно використовуються для аналізів як стандарт вірусу, для яких доступні флуоресцентні реагенти антитіл (FA), титрували з використанням клітин CRL. Оскільки стандартні віруси рутинно титрують з використанням стандартних клітинних ліній, кожна має відомий титр з різним степенем відхилення. Десятикратні або чотирьохкратні розведення цих стандартних вірусів застосовуються для інокуляції клітин CRL в 96чарунковому форматі з використанням стандартного методу титрування для кожного вірусу. Після 25 7 днів інкубації тарілки фіксують ацетоном та забарвлюють відповідними FA реагентами. Титри флуоресцент-позитивних культур порівнюють з Стандарт вірусу Собачий парагрип типу 2 (СРІ-2) Собачий аденовірус типу 2 (CAV-2) Бичачий герпесвірус типу 1 (BHV-1) Кінський герпесвірус типу 1 (EHV-1) Кінський герпесвірус типу 4 (EHV-4) Бичачий ротавірус (BRV) Бичачий парагрип типу 3 (bРІ-3) Бичачий коронавірус (BCV) Свинячий репрод. & респір. (PRRSV) Титри вірусів виражають у Log10 (FAID50)/мл. Хоча у кожному випадку титри, генеровані пробами на базі CRL, були нижчими за значення для стандартних клітинних ліній, необхідно зазначити, що для цих вірусів не проводили процесу адаптації з використанням клітин CRL, які його проводили для стандартних вірусів із стандартними клітинним лініями. Це був тільки тест на визначення наявності реплікації вірусів. Інакше кажучи, за умови певних зусиль ймовірно, що концентрація живих вірусів, зростаючих на клітинах CRL може бути збільшена до значень, які будуть еквівалентними або навіть кращими за концентрацію росту вірусів на клітинних лініях, до яких вони адаптовані. Це показане на CRL-адаптованому PRRS (Приклад 4), чиї титри за тих же серійних розведень вірусу становили 5,22 та 5,34 (Log10 (FAID50)/мл), коли використовувалися CRL-клітини та MARC145-клітини (сенситивний субклон клітин МА-104), відповідно. Відмінність у титрах була такою, якою можна знехтувати. Додатково винахід описаний у наступних пронумерованих пунктах: 1. Спосіб продукування вірусу PRRS, коли готують культуру легеневих клітин бавовняного щура і вірус PRRS розмножують на цій культурі клітин. 2. Спосіб згідно п.1, в якому культура клітин включає епітеліальні клітині. 3. Спосіб продукування вірусу PRRS, коли готують культуру клітин з лінії легеневих клітин бавовняного щура і розмножують вірус PRRS на цій культурі. 4. Спосіб за п.3, коли культура включає епітеліальні клітини. 5. Спосіб продукування вірусу PRRS, коли готують культуру епітеліальних легеневих клітин бавовняного щура і розмножують вірус PRRS на цій культурі клітин. 6. Спосіб продукування вірусу PRRS, коли готують культуру клітин з лінії епітеліальних легеневих клітин бавовняного щура і розмножують вірус PRRS на цій культурі клітин. 7. Спосіб згідно пп.3 або 6, коли клітинна лінія являє собою клітинну лінію, депозитовану в АТСС під номером входження РТА-3930, або лінію легеневих клітин бавовняного щура, яка має всі ідентифікаційні характеристики клітинної лінії, депозитованої в АТСС за номером входження РТА-3930. 89347 26 титрами, одержаними для стандартних культур клітин. Результати наведені нижче. Титр/CRL 4,96 1,72 3,64 5,74 5,44 5,32 6,46 3,52 5,22 Титр/Стандартна клітинна лінія 5,6 на клітинах MDCK 5,8 на клітинах MDCK 7,1 на клітинах MDBK Титр не визначено 6,13 на клітинах Vero 6,0 на клітинах МА-104 7,0 на клітинах MDBK 4,79 на клітинах MDBK 5,34 на клітинах MARC-145 8. Спосіб за п.7, в якому клітинна лінія являє собою клітинну лінію, депозитовану в АТСС під номером входження РТА-3930. 9. Спосіб за будь-яким з пп.1-8, в якому вірус PRRS являє собою вірулентний вірус PRRS. 10. Спосіб за будь-яким з пп.1-8, в якому вірус PRRS являє собою атенуйований вірус PRRS. 11. Спосіб за будь-яким з пп.1-8, в якому вірус PRRS розмножують на клітинах і одержують сиру культуру вірусу PRRS. 12. Спосіб за будь-яким з пп.1-8, в якому вірус PRRS розмножують на клітинах, здобувають вірус PRRS з одержанням сирої культури вірусу PRRS, яку піддають очищенню з одержанням очищеної культури вірусу PRRS. 13. Спосіб за будь-яким з пп.1-8, в якому вірус PRRS розмножують на клітинах, здобувають вірус PRRS з одержанням сирої культури вірусу PRRS, яку піддають концентруванню з одержанням концентрованої культури вірусу PRRS. 14. Спосіб за будь-яким з пп.1-8, в якому вірус PRRS розмножують на клітинах, здобувають вірус PRRS з одержанням сирої культури вірусу PRRS, яку піддають очищенню та концентруванню з одержанням очищеної та концентрованої культури вірусу PRRS. 15. Спосіб за п.12, в якому сиру культуру інактивують. 16. Спосіб за п.12, в якому очищену культуру інактивують. 17. Спосіб за п.12, в якому концентровану культуру інактивують. 19. Спосіб за п.12, в якому очищену та концентровану культуру інактивують. 20. Спосіб за пп.15, 16, 17 або 18, в якому культуру інактивують хімічним агентом. 21. Спосіб за п.19, в якому хімічний агент обирають з групи, що складається з бетапропіолактону, формаліну, етиленіміну та бінарного етиленіміну. 22. Спосіб за пп.11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20, в якому культуру обробляють таким чином, щоб одержати субодиниці PRRS. 23. Спосіб за п.9, в якому вірус PRRS розмножують на клітинах і одержують атенуйований вірус PRRS. 24 Вірус PRRS або культура вірусу PRRS, одержана після розмноження вірусу PRRS на легеневих клітинах бавовняного щура. 27 89347 25 Вірус PRRS або культура вірусу PRRS, одержана після розмноження вірусу PRRS на лінії легеневих клітин бавовняного щура. 26 Вірус PRRS або культура вірусу PRRS згідно пп.23 або 24, де клітини являють собою епітеліальні клітини. 27 Вірус PRRS або культура вірусу PRRS згідно пп.23 або 24, де клітини включають епітеліальні клітини. 28. Вірус PRRS або культура вірусу PRRS згідно п.25, де клітинна лінія являє собою клітинну лінію, депозитовану в АТСС під номером входження РТА-3930, або лінію легеневих клітин бавовняного щура, яка має всі ідентифікаційні характеристики клітинної лінії, депозитованої в АТСС під номером входження РТА-3930. 29. Вірус PRRS або культура вірусу PRRS згідно п.25, де клітинна лінія являє собою клітинну лінію, депозитовану в АТСС під номером входження РТА-3930. 30. Вірус PRRS або культура вірусу PRRS, одержана шляхом здійснення способу за будьяким з пп.1-20 або 22. 31. Вірус PRRS або культура вірусу PRRS за будь-яким з пп.23-28, інактивований (інактивована). 32. Вірус PRRS або культура вірусу PRRS за будь-яким з пп.23-28, атенуйований (атенуйована). 33. Препарат субодиниць вірусу PRRS, одержаний шляхом здійснення способу за п.21. 34. Імуногенна композиція, яка включає вірус PRRS або культуру вірусу PRRS за будь-яким з пп.23-31 та ветеринарно прийнятну допоміжну речовину, розбавлювач або носій. 35. Імуногенна композиція, яка включає препарат субодиниць вірусу PRRS за п.32 і ветеринарно прийнятну допоміжну речовину, розбавлювач або носій. 36. Імуногенна композиція за п.33, яка додатково включає стабілізатор. 37. Імуногенна композиція за пп.33, 34 або 35, яка додатково включає ад'ювант. 38. Імуногенна композиція, яка включає культуру вірусу PRRS, одержану за способом згідно п.1. Комп’ютерна верстка Т. Чепелева 28 39. Імуногенна композиція, яка включає культуру вірусу PRRS, одержану за способом згідно п.3. 40. Імуногенна композиція, яка включає культуру вірусу PRRS, одержану за способом згідно будь-якого з пп.1-22. 41. Вакцина, яка включає культуру вірусу PRRS, одержану за способом згідно п.1. 42. Вакцина, яка включає культуру вірусу PRRS, одержану за способом згідно п.3. 43. Вакцина, яка включає культуру вірусу PRRS, одержану за способом згідно будь-якого з пп.1-22. 44. Вакцина, яка включає вірус PRRS або культуру вірусу PRRS за будь-яким з пп.23-31 та ветеринарно прийнятну допоміжну речовину, розбавлювач або носій. 45. Вакцина, яка включає препарат субодиниць вірусу PRRS за п.32 і ветеринарно прийнятну допоміжну речовину, розбавлювач або носій. 46. Вакцина за п.43, яка додатково включає стабілізатор. 47. Вакцина за пп.43, 44 або 45, яка додатково включає ад'ювант. 48. Спосіб імунізації свині, який включає введення свині імуногенної композиції за будь-яким з пп.33-39. 49. Спосіб вакцинації свині, який включає введення свині вакцини за будь-яким з пп.40-46. 50. Лінія легеневих клітин бавовняного щура, депозитована в АТСС під номером входження РТА-3930 або лінія легеневих клітин бавовняного щура, яка має всі ідентифікаційні характеристики клітинної лінії, депозитованої в АТСС під номером входження РТА-3930. 51. Лінія легеневих клітин бавовняного щура, депозитована в АТСС під номером входження РТА-3930. Наведений детальний опис переважних втілень даного винаходу робить зрозумілим, що винахід, визначений наведеними вище пунктами, не обмежується набором особливих деталей, наведеним у викладеному вище описі і далі можливі багато його очевидних варіацій без відхилення від форми або ідеї даного винаходу. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601