Лікарський засіб та метод блокування утворення або посилення знищення білка p24

Реферат: Винахід стосується фармацевтичної композиції для блокування утворення або посилення знищення білка Р24, до складу якої входить активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 у суміші трьох гомеопатичних розведень С12, С30 та С50, причому активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 є формою до цілої молекули рецептора CD4 із послідовністю SEQ ID NO: 1, або до частини рецептора CD4 із послідовностями, вибраними з групи, що включає SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 та SEQ ID NO: 6. UA 112752 C2 (12) UA 112752 C2 UA 112752 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ Даний винахід відноситься до лікарського засобу та методу блокування утворення або посилення знищення білку Р24. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Даний винахід стосується медичної галузі та може бути використаний для блокування утворення або посилення знищення білку Р24. Білок Р24, котрий є у організмі кожної людини, дуже відомий у даній галузі (дивіться, Е. Пападопулос-Елєопулос (Papadopulos-Eleopulos E.), В.Ф, Тернер (Turner VF), Дж. М. Пападімітріоу (Papadimitriou JM). Чи є позитивний результат імуноблотінгу доказом наявності ВІЛ інфекції? Біотехнологія (Нью-Йорк). Червень 1993 р; 11(6): 696-707). У медичній галузі, є добре відомим застосування антитіл до молекул CD4 зв'язаних з антихемокіновим рецепторами при лікуванні ВІЛ-1 (WO 01/43779 A2, A61K 47/48, 2001). Однак, у зазначених джерелах, не має жодних експериментально підтверджених даних про ефективність цього препарату. Терапевтична дія сильно розбавленої (або наднизької) форми антитіл, потенційованих гомеопатичною технологією (активована потенційована форма) була відкрита доктором Олегом Івановичем Епштейном. Патент США № 7,582,294 на лікарський засіб для лікування доброякісної гіперплазії передміхурової залози, або простатиту шляхом введення активованої гомеопатичної форми антитіл до простатоспецифічного антигену (ПСА). Наднизькі дози антитіл до γ-інтерферону проявили свою ефективність у лікуванні та профілактиці захворювань вірусного походження. Дивіться Патент США № 7,572,411, котрий зазначається у цьому документі у якості посилання. CD4 (кластер диференціації 4), або рецептор CD4 клітин імунної системи, - це глікопротеїн, котрий експресується на поверхні імунних клітин, таких як лейкоцити, Т-хелпери, регуляторні Тклітини, моноцити, макрофаги та дендритні клітини. Як і більшість поверхневих рецепторів клітин/маркерів, CD4 є членом надродини імуноглобулінів. CD4 є одним з рецепторів, який допомагає рецептору Т-клітин (РТК) з антигенпрезентуючою клітиною (АПК). Використовуючи свою частину, яка знаходиться всередині Т-клітин, CD4 підсилює сигнал, поданий РТК, залучаючи фермент, відомий як лімфоцит-специфічний білок тирозинкінази, котрий відіграє важливу роль у активації багатьох молекул, що беруть участь у сповіщенні про каскад активованих Т-клітин. CD4 також взаємодіє безпосередньо з молекулами класу MHC II на поверхні антигенпрезентуючої клітини, використовуючи свій власний позаклітинний домен. ВІЛ1 використовує CD4 для проникнення у приймаючі Т-клітини, і досягає цього зв'язуючи білок з вірусною оболонкою, відомою як gp120 з CD4. Прив'язка до CD4 продукує міграцію у конформації білка gp120, дозволяючи, таким чином, ВІЛ-1 зв'язуватися з корецептором, експресованим на приймаючій клітині. Ці корецептори є рецепторами хемокінів CCR5 або CXCR4, а яких з них використовується під час інфікування залежить від того, чи вірус інфікує макрофаги чи клітини Т-хелперів. Після структурних змін у іншому вірусному білку (gp41), ВІЛ запускає пептид до приймаючої клітини, що дозволяє зовнішній оболонці вірусу злитися з клітинною мембраною. Дивіться М.С. Міселі (Miceli MC), Дж. Р. Парнес (Parnes JR) (1993р.). "Роль CD4 і CD8 в активації і диференціації Т-клітин". Нотатки з Імунології.53: 59-122. Метою даного винаходу є створення лікарського засобу та методу блокування утворення або посилення знищення білку Р24. Рішення існуючої проблеми представлено у вигляді лікарського засобу для блокування утворення або посилення знищення білку Р24, до складу якого входить активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4. СТИСЛЕ ВИКЛАДЕННЯ ВИНАХОДУ За одним аспектом, цей винахід представляє лікарський засіб до складу якого входить активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4. За модифікацією, лікарський засіб представляє твердий носій, у який імпрегнується зазначена активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4. За цим варіантом лікарський засіб представлений у формі таблеток. Лікарський засіб до складу якого входить активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4, представлена, переважно, уформі суміші гомеопатичних розведень С12, С30 та С200. Особливо передбачено, що ця суміш імпрегнується у твердий носій. Лікарський засіб до складу якого входить активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4, представлена, переважно, у формі суміші гомеопатичних розведень С12, С30 та С50. Особливо передбачено, що ця суміш імпрегнується у твердий носій. Активована потенційована форма антитіл до CD4 може бути моноклональним, поліклональним або природним антитілом. Особливо передбачено, що активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 є поліклональним антитілом. Даний винахід 1 UA 112752 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 представляє активовані-потенційовані форми антитіл до антигену(-ів), послідовності яких описуються в технічній специфікації та заявлені у переліку патентних формул винаходу. У одному варіанті до складу лікарського засобу входить активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 отримана здійсненням послідовних сотенних розведень у поєднанні зі струшуванням кожного розведення. Застосовується вертикальне струшування. За ще одним аспектом, даний винахід відноситься до методу блокування утворення або посилення знищення білку Р24, за яким вводять активовану потенційовану форму антитіл до рецептора CD4, тим самим блокуючи утворення або посилюючи знищення білку Р24. Як правило, активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 вводиться у формі лікарського засобу. За формою модифікації, комбінація лікарського засобу вводиться перорально у вигляді твердої лікарської форми, яка містить фармацевтично прийнятний носій і зазначену активовану потенційовану форму антитіл до рецептора CD4, імпрегновану у твердий носі. За цим варіантом, зазначеною твердою формою для перорального застосування є таблетки. Варіанти та форми модифікацій надаються. Що стосується способів застосування даного винаходу, лікарський засіб може застосовуватися у від однієї до двох лікарських форм, кожна з яких вводиться від одного до чотирьох разів на день. За даним варіантом, лікарський засіб вводять двічі на день, кожен прийом має включати дві лікарські форми для перорального застосування. За іншим варіантом, лікарський засіб може застосовуватися у від однієї до двох лікарських форм, кожна з яких вводиться двічі на день. Всі варіанти та модифікації складу винаходу можуть бути використані із зазначеним способом його застосування. ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ Визначення винаходу базується на патентних формулах винаходу, перелік яких наведено у кінці цього документу. Виходячи з цих формул, нижче наведений глосарій містить відповідні визначення застосованих у формулах термінів. Термін "антитіло", у тому, значені, у якому він використовується у цьому документі, означає імуноглобулін, який специфічно прив'язується до, і таким чином визначається як зв'язаний з, певною просторовою і полярною організацією іншої молекули. Як зазначено у переліку, антитіла можуть включати в себе повний імуноглобулін або його фрагмент, можуть бути природними, поліклональними або моноклональними, та можуть включати в себе різні класи та ізотипи, такі як IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b та IgG3, IgM. Тоді як їх фрагменти можуть включати в себе Fab, Fv та F (аb')2, Fab' і т.і. Форма однини "антитіло", означає також форму множини цього терміну – "антитіла". Термін "активована потенційована форма" або "потенційована форма" відповідно, що використовується у цьому документі по відношенню до антитіл означає продукт гомеопатичного потенціювання будь-якого базового розчину антитіл. "Гомеопатичне потенціювання" означає використання методу гомеопатії задля наділення відповідної субстанції базового розчину терапевтичною дією гомеопатичного препарату. "Гомеопатичне потенціювання" може включати в себе, здійснення послідовних повторюваних розведень, поєднаних з зовнішніми методами обробки, такими, наприклад, як вертикальне (механічне) струшування. Іншими словами, відповідно до технології виготовлення гомеопатичних препаратів, базовий розчин антитіла піддають здійсненню послідовних повторюваних розведень та багаторазовому вертикальному струшуванню кожного отриманого розчину. Бажана концентрація базового розчину антитіл в розчиннику, що, як правило, складається з води або суміші води та етилового спирту, складає приблизно від 0,5 до 5,0 мг/мл. Процедура підготовки кожного компонента, тобто розчину антитіла, передбачає використання суміші трьох водних або водно-спиртових розведень 12 30 200 базового матричного розчину (матричної настоянки) антитіл розведених у 100 , 100 та 100 раз відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням (C12, C30 та C200) або використання суміші трьох водних або водно-спиртових розведень базового матричного 12 30 50 розчину (матричної настоянки) антитіл розведених у 100 , 100 та 100 раз відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням (C12, C30 та C50). Приклади гомеопатичного потенціювання описані в патентах США № 7,572,441 та 7,582,294, котрі у повній формі та за визначеною цим документом метою, зазначаються у цій заявці у якості посилань. У той час, коли термін "активована потенційована форма" використовується у патентних формулах винаходу, термін "наднизькі дози (ННД)» використовується в прикладах. Термін "наднизькі дози" став професійним терміном в даній області шляхом дослідження та використання гомеопатично розведених та потенційованих форм речовини. Термін "наднизька доза" або "наднизькі дози" є взаємозамінними і, в першу чергу, є синонімами терміну "активована потенційована форма", що використовується у патентних формулах винаходу. 2 UA 112752 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Іншими словами, антитіло вважається таким, що представлено у "активованій потенційованій формі" або у "потенційованій формі" за умови наявності трьох факторів. Поперше, "активована потенційована" форма антитіла є продуктом процесу підготовки, прийнятого у сфері виготовлення гомеопатичних препаратів. По-друге, "активована потенційована" форма антитіла повинна мати біологічну активність, визначену методами, прийнятими у сучасній фармакології. І, по-третє, біологічна активність, продемонстрована "активованою формою антитіла посиленої дії" не може бути обумовлена наявністю молекулярної форми антитіл у кінцевому продукті гомеопатичного процесу. Наприклад, активована потенційована форма антитіла може бути отримана шляхом піддавання базових, ізольованих антитіл в молекулярній формі низці послідовних розведень у поєднанні з зовнішніми впливом, таким як механічне струшування. При зменшенні концентрації, зовнішня обробка, може також супроводжуватися такими процесами, як, вплив ультразвукових, електромагнітних або інших фізичних факторів. В. Швабе (V. Schwabe) "Гомеопатичні препарати", М., 1967 р. Патенти США № 7,229,648 та № 4,311,897, котрі у повній формі та з визначеною цим документом метою, зазначаються у ньому у якості посилань, описують ті процеси, котрі є прийнятними методами гомеопатичного потенціювання в області виготовлення гомеопатичних препаратів. Результатом цієї процедури є рівномірне зменшення базової молекулярної форми антитіл у концентрації молекул. Процедура повторюється до тих пір поки не буде отримана бажана гомеопатична потенція. Для окремого виду антитіла, необхідні гомеопатичні потенції можна визначити шляхом піддавання проміжних розведень біологічним тестам за відповідною фармакологічною моделлю. "Гомеопатичне потенціювання" може включати в себе, здійснення послідовних повторюваних розведень, поєднаних з зовнішніми методами обробки, такими, наприклад, як (механічне) струшування. Іншими словами, відповідно до технології виготовлення гомеопатичних препаратів, базовий розчин антитіла піддають здійсненню послідовних повторюваних розведень та багаторазовому вертикальному струшуванню кожного отриманого розчину. Бажана концентрація базового розчину антитіл в розчиннику, що, як правило, складається з води або суміші води та етилового спирту, складає приблизно від 0,5 до 5,0 мг/мл. Процедура підготовки кожного компонента, тобто розчину антитіла, передбачає використання суміші трьох водних або водно-спиртових розведень 12 30 200 базового матричного розчину (матричної настоянки) антитіл розведених у 100 , 100 та 100 раз відповідно, що еквівалентно гомеопатичним розведенням C12, C30 та C200 або використання суміші трьох водних або водно-спиртових розведень базового матричного 12 30 50 розчину (матричної настоянки) антитіл розведених у 100 , 100 та 100 раз відповідно, що еквівалентно сотенним гомеопатичним розведенням (C12, C30 та C50). Приклади отримання бажаної потенції також наведені у патентах США № 7,229,648 та 4,311,897, котрі у повній формі та з визначеною цим документом метою, зазначаються у ньому у якості посилань. Процедура, що застосовується по відношенню до "активованих потенційованих" форм антитіл та описується в цьому документі, більш детально представлена далі. Існувало дуже багато протиріч щодо лікування суб'єктів дослідження гомеопатичними препаратами. Хоча даний винахід і оснований на застосуванні прийнятих гомеопатичних процесів для отримання "активованих потенційованих" форм антитіл, з точки зору дії, на суб'єктів дослідження, даний винахід посилається не лише на гомеопатію. Винахідником цього способу застосування було несподівано виявлено і, у прийнятій фармакологічній моделі, в повній мірі продемонстровано, що розчинник, у кінцевому рахунку, отриманий в результаті здійснення декількох послідовних розведень базової молекулярної форми антитіла, має чітко встановлену дію, котра жодним чином не пов'язана з наявністю слідів молекулярної форми антитіл у цільовому розведені. "Активована потенційована" форма антитіл, мова про яку іде у цьому документі, була перевірена на біологічну активність за допомогою прийнятних фармакологічних моделей. Експерименти зазначені нижче демонструють біологічну активність за обраними моделями. У значній мірі вона пов'язана з підвищеного противірусною та імунотропною дією, інтенсифікацією CD4 лімфоцитів та збагаченням значної кількості рецепторів на поверхні клітин CD4. Крім того, заявлена "активована потенційована" форма антитіла включає тільки ті розчини або тверді лікарські засоби, біологічну активність котрих не можна пояснити наявністю молекулярної форми антитіла, що залишилися від базового розчину. Іншими словами, хоча і передбачається, що "активована потенційована" форма антитіл може містити сліди базової молекулярної форми антитіла, кваліфікований фахівець в цій області, з будь-якою долею вірогідності, не може записати виявлену у фармакологічних моделях біологічну активність на залишки молекулярної форми антитіл, оскільки концентрація молекулярної форми антитіл, що залишається після здійснення послідовних розведень, є вкрай низькою. Оскільки винахід не 3 UA 112752 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 обмежений будь-якою конкретною теорією, біологічна активність "активованої-потенційованої" форми антитіл даного винаходу, не можна віднести на рахунок базової молекулярної форми антитіла. Перевага надається "активованій-потенційованій формі антитіла" у рідкій чи твердій формі, в котрих концентрація молекулярної форми антитіла нижча за ліміт виявлення при застосування прийнятних аналітичних методик таких, наприклад, як капілярний електрофорез та Високоефективна Рідинна Хроматографія (ВЕРХ). Особлива перевага надається "активованій-потенційованій формі антитіла" у рідкій чи твердій формі, в котрих концентрація молекулярної форми антитіла нижча числа Авогадро. У фармакології молекулярних форм терапевтичних речовин, звичайною практикою є створення кривої "доза-реакція", у якій рівень фармакологічної відповіді відображається в залежності від концентрації препарату з активним компонентом, що вводиться суб'єкту дослідження або перевіряється in vitro. Мінімальний рівень препарату, котрий продукує будь-яку видиму реакцію, називається пороговою дозою. Особливо передбачено, що "активована потенційована" форма антитіл містить молекулярне антитіло, якщо таке передбачено, у концентрації, що нижча за порогову дозу, визначену для молекулярної форми антитіла для даної біологічної моделі. Даний винахід відноситься до лікарського засобу, до складу якого входить активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4, отримана у відповідності до гомеопатичної технології потенціювання, шляхом проведення повторюваних, узгоджених розведень у поєднані зі струшуванням, як це описано нижче. Лікарський засіб, який представлений даним винаходом, особливо корисний для блокування утворення та посилення знищення білку P24. Як показано в прикладах, представлений лікарський засіб справляє неочікуваний лікувальний ефект, котрий проявляється, зокрема, у терапевтичній ефективності лікування хвороб, пов'язаних із збільшенням продукування білка P24. Даний лікарський засіб розширює арсенал препаратів, що використовуються для блокування утворення або посилення знищення білку P24. Як передбачається даним аспектом винаходу, представлений лікарський засіб може бути як у твердій, так і у рідкій формі. Активована потенційована форма антитіл, що входять до складу лікарського засобу, готується на основі базової молекулярної форми антитіла із застосуванням прийнятих у гомеопатичній практиці процедур. Базові антитіла можуть бути моноклональними або поліклональними антитілами, отриманими за результатами знаних та використовуваних процесів таких, наприклад, як ті, що описані в Імунотехнології, Г. Фрімель (G. Frimel), М., "Медицина" (Meditsyna), 1987 р., стор. 9-33; "Людські антитіла" "Моноклональні та рекомбіновані антитіла, 30 років потому" Е. Лаффлі (Laffly Е.), Р. Содойер (Sodoyer R.) – 2005 р. – Том 14. - № 1-2, стор. 33-55, що зазначаються у цьому документі у якості посилань. Моноклональні антитіла можна отримати, наприклад, за допомогою технології гібридоми (моноклонування). Початкова стадія процесу включає імунізацію, що основана на принципах, що розвиваються вже під час виготовлення поліклональних антисироваток. На подальших етапах роботи здійснюється продукування гібридних клітин, що генерують клони антитіл однакової структури. Їх індивідуальне виведення здійснюється з використанням тих же методів, що і у випадку підготовки поліклональної сироватки. Поліклональні антитіла можна отримати за допомогою активної імунізації тварин. Для цього, відповідним тваринам (наприклад, кролям) проводять серію ін'єкцій відповідного антигену (рецептора CD4). Імунна система тварин генерує відповідні антитіла, які збираються у тварин відомим всім способом. Ця процедура дозволяє виготовити моно специфічну сироватку багату антитілами. За бажанням, сироватку, що містить антитіла можна очистити, наприклад, за допомогою афінної хроматографії, фракціонування шляхом осаджування солей або іонно-обмінної хроматографії. В результаті, очищена, збагачена антитілами сироватка може бути використана в якості базового матеріалу для виготовлення активованої-потенційованої форми антитіл. Бажана концентрація базового розчину антитіл в розчиннику, що, як правило, складається з води або суміші води та етилового спирту, складає приблизно від 0,5 до 5,0 мг/мл. Процедура підготовки кожного компоненту комбінованого препарату відповідно до представленого винаходу передбачає використання суміші трьох водних або водно-спиртових 12 30 50 розведень базового матричного розчину антитіл розведених у 100 , 100 та 100 раз 12 30 відповідно, що еквівалентно гомеопатичним розведенням C12, C30 та C50 або у 100 , 100 та 200 100 раз відповідно, що еквівалентно гомеопатичним розведенням C12, C30 та C200. Для підготовки твердої лікарської форми, твердий носій обробляється необхідним розведенням, отриманим за допомогою відповідного гомеопатичного процесу. Для отримання єдиного блоку лікарського засобу, що складається з комбінації винаходу, масу носія імпрегнують з кожним 4 UA 112752 C2 5 окремим розведенням. Для підготовки бажаної комбінації лікарського засобу, підходять обидва способи імпрегнації. За обраною модифікацією, базовим матеріалом, що використовується для виготовлення активованої-потенційованої форми, котра входить до складу винаходу, є поліклональне, отримане з тваринної моделі антитіло до відповідного антигену, а саме, до рецептора CD4. Для отримання активованої потенційованої форми поліклональних антитіл до рецептора CD4, обраний антиген може бути введений в якості імуногена лабораторним тваринам, бажано, кролям. Для отримання поліклональних антитіл до рецептора CD4, можна використовувати цілісну молекулу CD4 рецептора людини наступної послідовності: 10 Послідовність SEQ ID №1. 5 UA 112752 C2 Поліклональні антитіла рецептора CD4 можна отримати використовуючи поліпептидні фрагменти рецептора CD4 обрані, наприклад, з наступних амінокислотних послідовностей: 5 Послідовність SEQ ID №2. Послідовність SEQ ID №3. 6 UA 112752 C2 Послідовність SEQ ID №4. Послідовність SEQ ID №5. 5 10 15 20 25 30 35 40 Послідовність SEQ ID №6. Прикладом процедури підготовки стартових поліклональних антитіл до рецептора CD4 може слугувати процедура описана далі. За 7-9 днів до забору крові, кролям проводять від 1 до 3х внутрішньовенних ін'єкцій потрібного антигену, щоб збільшити рівень поліклональних антитіл в системі кровообігу. При імунізації, беруться зразки крові для перевірки рівня антитіл. Як правило, максимальний рівень імунної реакції розчинного антигену досягається протягом 40-60 днів після першої ін'єкції антигену. По закінченні першого циклу імунізації, у кролів починається 30-денний реабілітаційний період, після якого проводиться повторна імунізація ще 1-3 внутрішньовенними ін'єкціями. Для отримання антисироватки, що містить потрібні антитіла, кров імунізованих кролів збирають та поміщають в 50 мл центрифужні пробірки. Згустки продукту, що утворюються на стінках пробірок видаляються дерев'яною лопаткою, і стрижень поміщають в згустку по центру пробірки. Потім, кров на одну ніч поміщають в холодильну камеру при температурі близько 40 °C. Наступного дня, згусток на лопатці видаляють, а рідину, що залишилася центрифугують протягом 10 хвилин при 13000 обертів за хвилину. Надосадова рідина є цільовою антисироваткою. Отримана антисироватка, як правило, жовтого кольору. 20 % NaN3 (вагова концентрація)додається до антисироватки до кінцевої концентрації 0,02 % і, до використання, зберігається в замороженому стані при температурі -20 °C або без NaN3 - при температурі 70 °C. Для сепарації цільових антитіл до синтази ОА з антисироватки, використовується наступна послідовність твердофазної абсорбції: 10 мл антисироватки кролів двічі розбавляють 0,15 М NaCl, після чого додають 6,26 г Na2SO4, перемішують і витримують протягом 12-16 годин при температурі 4 °C. Осад видаляється центрифугуванням, розводять в 10 мл фосфатного буферного розчину і діалізують у тому ж розчині протягом ночі при кімнатній температурі. Після видалення осаду, розчин наноситься на стовпчик ДЕАЕ-целюлози збалансований фосфатним буферним розчином. Фракція антитіла визначається шляхом вимірювання оптичної щільності елюату при 280 нм. Виділені неочищені антитіла очищають за допомогою афінної хроматографії додаючи отримані антитіла до антигену CD4, розташовані на нерозчинній матриці хроматографічного носія, з подальшим вивільненням концентрованими водними розчинами солей. Отриманий, в результаті, буферний розчин використовується в якості стартового розчину для процесу гомеопатичних розведень, який використовується для підготовки активованих потенційованих форми антитіл. Переважна концентрація стартового матричного розчину антигенно-очищених поліклональних антитіл кролика до рецептора CD4 становить 0,5-5,0 мг/мл, бажано 2,0-3,0 мг/мл. Активовану потенційовану форму антитіл до рецептора CD4 можна отримати шляхом гомеопатичного потенціювання використовуючи базовий розчин. Як правило, застосовується метод пропорційного пониження концентрації, котрий передбачає серійне розведення 1 частини 7 UA 112752 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 кожного попереднього розчину (починаючи з базового) в 9 частинах (для десяткового розведення), або в 99 частинах (для сотенного розведення), або в 999 частинах (для тисячних розведень) нейтрального розчинника, починаючи з концентрації базового розчину антитіл в розчиннику, переважно, водної чи водно-спиртової суміші, в об'ємі від 0,5 до приблизно 5,0 мг/мл, в поєднанні з зовнішнім впливом. Як правило, під зовнішнім впливом розуміють багаторазове вертикальне струшування (динамізацію) кожного розведення. Для кожного подальшого розведення до моменту досягнення необхідного рівня активності, або фактору розведення, використовуються окремі контейнери. Цей метод є загальноприйнятим у гомеопатичній практиці. Для прикладу, дивіться, В. Швабе (V. Schwabe) "Гомеопатичні лікарські засоби", М., 1967 р., стор. 14-29, що зазначається у цьому документі у якості посилання. Наприклад, для приготування 12-сотенного розведення (позначається C12), одна частина базового матричного розчину антитіл рецептора CD4 концентрацією 3,0 мг/мл розбавляють в 99 частинах нейтрального водного або водно-спиртового розчину (переважно, 15 % етилового спирту), а потім багато разів (10 і більше) струшують у вертикальному положенні, щоб створити перше сотенне розведення (позначається як C1). Друге сотенне розведення (C2) отримують з 1го сотенного розведення C1. Для підготовки 12-го сотенного розведення (С12) ця процедура повторюється 11 разів. Таким чином, 12-е сотенне розведення (C12) - це розчин отриманий у результаті 12 серійних розведень однієї частини базового матричного розчину антитіл до γінтерферону концентрацією 3,0 мг/мл у 99 частинах нейтрального розчинника в різних контейнерах, що еквівалентний сотенному гомеопатичному розведенню С12. Аналогічні процедури з відповідним коефіцієнтом розбавлення проводяться для отримання С30, С50 та С200 розведень. Для перевірки активності проміжні розведення можна перевірити використовуючи будь-яку, необхідну вам, біологічну модель. Переважною активованоюпотенційованою формою представленого лікарського засобу є суміш розведень C12, C30 та C200 або суміш C12, C30 та C50. При використанні суміші різних гомеопатичних розведень (в основному сотенних) активної речовини у якості біологічно активних рідких компонентів, кожен компонент лікарського засобу (наприклад, C12, C30, С50 C200) готується окремо відповідно до вище згаданої процедури до моменту отримання від наступного до останнього розведення (наприклад, до моменту отримання C11, C29 та C199 відповідно), а потім по одній частині кожного компоненту додають до контейнерів, дотримуючись складу суміші, і змішують з необхідною кількістю розчинника (наприклад, з 97 частинами для сотенного розведення). Можна використовувати активну речовину як суміш різних гомеопатичних розведень, наприклад, десяткових та/або сотенних (D20, C30, C100 або C12, C30, C50 або С12, С30, С200 і т.д.), ефективність яких визначається експериментально, шляхом тестування розведення у відповідній біологічній моделі, наприклад, у тих моделях, котрі описані у розділі "Приклади" цього документу. В ході зниження потенціювання та концентрації, вертикальне струшування може бути замінено зовнішнім впливом ультразвуку, електромагнітних полів або будь-якого аналогічного зовнішнього чинника, прийнятного до використання у гомеопатичній практиці. Як правило, лікарський засіб, передбачений цим винаходом, може бути як у рідкій, так і у твердій лікарській формі. Переважним рідким носієм є вода або водно-спиртова суміш. Тверда форма лікарського засобу за цим винаходом може бути отримана шляхом імпрегнування твердої форми з сумішшю активованої-потенційованої форми водного або водно-спиртового розчину активних компонентів. Як альтернатива, носій може бути послідовно імпрегнований кожним необхідним розведенням. Обидва способи імпрегнації є прийнятними. Як правило, лікарський засіб у твердій формі готується з гранул фармацевтично прийнятного носія, який попередньо був насичений водним або водно-спиртовим розведенням активованої-потенційованої форми антитіл до рецептора CD4. Тверда лікарська форма може бути в будь-якій формі, відомої у фармацевтичній галузі, а саме, у формі таблеток, капсул, пастилок і т.д. У якості неактивних фармацевтичних інгредієнтів можна використовувати глюкозу, сахарозу, мальтозу, крохмаль, ізомальтозу, ізомальт та інші моно-, оліго- і полісахариди, використовувані при виробництві фармацевтичних препаратів, а також технологічні суміші зазначених вище неактивних фармацевтичних інгредієнтів з іншими фармацевтично прийнятними наповнювачами, такими, наприклад, як ізомальт, кросповідон, цикламат натрію, натрію сахарин, безводна лимонна кислота і т.д., у тому числі мастильні матеріали, розпушувачі, сполучні речовини і барвники. Переважними носіями є лактоза та ізомальт. До складу фармацевтичної лікарської форми можуть додатково входити стандартні фармацевтичні наповнювачі такі, наприклад, як мікрокристалічна целюлоза, стеарат магнію та лимонна кислота. 8 UA 112752 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Для підготовки твердої форми для перорального застосування, 100-300 мкм гранули лактози імпрегнують водними або водно-спиртовими розчинами активованої-потенційованої форми антитіл до рецептора CD4 у співвідношенні 1 кг розчину антитіл на 5 або 10 кг лактози (від 1:5 до 1:10). Щоб здійснити імпрегнування, гранули лактози піддають насиченню зрошенням в псевдозрідженій киплячій бані (наприклад, "Hüttlin Pilotlab", виробництва компанії Hüttlin GmbH) з наступним сушінням за допомогою нагрітого потоку повітря при температурі нижче 40˚С. Певна вирахувана кількість висушених гранул (від 10 до 34 вагових частин), насичених активованою-потенційованою формою антитіл поміщають в змішувач і змішують з 25-45 ваговими частинами "ненасиченої" чистої лактози (використовується в цілях скорочення витрат, спрощення і прискорення технологічного процесу без зниження ефективності лікування), разом з 0,1-1 вагових частин стеарат магнію, і від 3 до 10 вагових частин мікрокристалічної целюлози. Отриману таблетовану масу рівномірно змішують та таблетують методом прямого напівсухого пресування (наприклад, під пресом для таблетування Корша - XL 400), щоб сформувати від 150 до 500 мг пігулок круглої форми, масою переважно 300 мг. Після таблетування, отримуємо 300 мг таблетки насичені водно-спиртовим розчином (3,0-6,0 мг/таблетка) у поєднанні з активованою-потенційованою формою антитіл до рецептора CD4 у формі суміші сотенних гомеопатичних розведень C12, C30 та C250 або C12, C30 та C200. Оскільки винахід не обмежується будь-якою конкретною теорією, вважається, що активована потенційована форма антитіл, описана у цьому документі, не містить молекулярної форми антитіл в кількості, достатній для біологічної активності, котра є характерною для такої молекулярної форми. Біологічна активність комбінованого препарату (лікарського засобу), представленого цим винаходом наочно продемонстрована в доданих до цього документу прикладах. Як правило, комбінація винаходу вводиться від одного до чотирьох разів на день. Але переважною дозою є введення однієї або двох комбінацій лікарських форм препарату двічі на день. Далі винахід ілюструється на прикладах. ПРИКЛАДИ Приклад 1. Оцінка ефективності блокування утворення або посилення знищення білку P24 наднизькими дозами кролячих поліклональних антитіл до рецептора CD4 (сумішшю гомеопатичних розведень С12 + С30 + С50) (ННД Антит-CD4)), проводилася на базі людських мононуклеарних клітин периферичної крові in vitro інфікованих штамом ВІЛ-1LAI. Мононуклеарні клітини периферичної крові людини були виділені з крові серонегативного здорового донора шляхом центрифугування на градієнті щільності Ficoll-Hypaque. Клітини стимулювали протягом 3 днів з 1 мкг/мл фітогемагглютиніном P та 5 МО/мл рекомбінантного людського інтерлейкіну-2. Для того, щоб оцінити ефективність блокування утворення або посилення знищення білку P24 продукти були поміщені у лунки, що містили 100 мкл активованих мононуклеарів за 24 години до або через 15 хвилин після інфікування клітини штамом ВІЛ-1-LAI в дозі 100 TCID50 (50 мкл посівного штаму ВІЛ-1-LAI). Перед додаванням у лунку, ННД Антит-CD4 (12,5 мкл) змішували з RPMI1640 (DIFCO) щоб досягти кінцевого обсягу зонда 50 мкл. Надосадові рідини були зібрані на 7-й день після зараження клітин. Дію продуктів вимірювали інгібуванням рівня основного нуклеокапсидного білку p24 в надосадовій рідині з людських мононуклеарних клітин периферичної крові з використанням набору Retrotek Elisa. Дослідження показали, що ННД Антит-CD4 блокують білок P24 на 86±10 % при їх додаванні у лунки за 24 години до зараження, і на 51±3 % при додаванні через 15 хвилин після зараження клітин штамом ВІЛ-1LAI. Таким чином, ця експериментальна модель продемонструвала дію наднизьких доз кролячих поліклональних антитіл до рецептора CD4 (суміші гомеопатичних розведень С12 + С30 + С50) при блокуванні утворення або посиленні знищення білку P24. 9 UA 112752 C2 10 UA 112752 C2 11 UA 112752 C2 12 UA 112752 C2 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 5 10 15 20 25 1. Метод блокування утворення або посилення знищення білка Р24, який передбачає введення активованої потенційованої форми антитіл до рецептора CD4 у суміші трьох гомеопатичних розведень С12, С30 та С50, що дозволяє блокувати утворення або посилити знищення білка Р24, причому активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 є формою до цілої молекули рецептора CD4 із послідовністю SEQ ID NO: 1, або до частини рецептора CD4 із послідовностями, вибраними з групи, що включає SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 та SEQ ID NO: 6. 2. Метод згідно з пунктом 1, який відрізняється тим, що активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 отримується шляхом здійснення послідовних сотенних розведень у поєднанні зі струшуванням кожного розведення. 3. Метод згідно з пунктом 1, який відрізняється тим, що активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 представлена у формі гомеопатичних розведень С12, С30 та С50, імпрегнованих у твердий носій. 4. Фармацевтична композиція для блокування утворення або посилення знищення білка Р24, до складу якої входить активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 у суміші трьох гомеопатичних розведень С12, С30 та С50, причому активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 є формою до цілої молекули рецептора CD4 із послідовністю SEQ ID NO: 1, або до частини рецептора CD4 із послідовностями, вибраними з групи, що включає SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 та SEQ ID NO: 6. 5. Фармацевтична композиція згідно з пунктом 4, яка відрізняється тим, що активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 отримується шляхом здійснення послідовних сотенних розведень у поєднанні зі струшуванням кожного розведення. 13 UA 112752 C2 6. Фармацевтична композиція згідно з пунктом 4, яка відрізняється тим, що активована потенційована форма антитіл до рецептора CD4 представлена у формі гомеопатичних розведень С12, С30 та С50, імпрегнованих у твердий носій. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 14