Гідроксаміди (4-сульфоніламіно)тетрагідропіран-4-карбонової кислоти

1 Сполука формули О HONH SO—Q Де Q являє собою (С-і-Сб)алкіл, (Сб-Сю)арил, (СгСд)гетероарил, (Сб-Сю)арилоксі(Сі-Сб)алкіл, (СєСю)арилоксі(Сб-Сю)арил, (Сб-Сю)арилокси(С2Сд)гетероарил, (Сб-Сю)арил(Сі-Сб)алкіл, (СєСю)арил(Сб-Сю)арил, (С6-Сіо)арил(С2Сд)гетероарил, (Сб-Сю)арил(Сб-Сю)арил(СіСє)алкіл, (Сб-Сіо)арил(Сб-Сю)арил(Сб-Сю)арил, (Сб-Сю)арил(Сб-Сю)арил(С2-Сд)гетероарил, (СгСд)гетероарил(Сі-Сб)алкіл, (С2-Сд)гетероарил(СєСю)арил, (С2-Сд)гетероарил(С2-Сд)гетероарил, (СєСю)арил(Сі-Сб)алкоксі(Сі-Сб)алкіл, (СєСю)арил(Сі-Сб)алкоксі(Сб-Сю)арил, (СєСю)арил(Сі-Сб)алкокси(С2-Сд)гетероарил, (СгСд)гетероарилоксі(Сі-Сб)алкіл, (СгСд)гетероарилоксі(Сб-Сю)арил, (СгСд)гетероарилокси(С2-Сд)гетероарил, (СгСд)гетероарил(Сі-Сб)алкоксі(Сі-Сб)алкіл, (СгСд)гетероарил(Сі-Сб)алкоксі(Сб-Сю)арил або (СгСд)гетероарил(Сі-Сб)алкокси(С2-Сд)гетероарил, де кожний з (Сб-Сю)арильних або (СгСд)гетероарильних залишків вказаних (СєСю)арилу, (С2-Сд)гетероарилу, (СєСю)арилоксі(Сі-Сб)алкілу, (Сб-Сю)арилоксі(СбСю)арилу, (Сб-Сю)арилокси(С2-Сд)гетероарилу, (Сб-Сю)арил(Сі-С6)алкілу, (С6-Сю)арил(С6Сю)арилу, (Сб-Сю)арил(С2-Сд)гетероарилу, (СєСю)арил(Сб-Сю)арил(Сі-Сб)-алкілу, (Сє Сю)арил(Сб-Сіо)арил(Сб-Сю)арилу, (С6Сю)арил(Сб-Сю)арил(С2-Сд)гетероарилу, (СгСд)гетероарил(Сі-Сб)алкілу, (С2-Сд)гетероарил(СєСю)арилу, (С2-Сд)гетероарил(С2-Сд)гетероарилу, (Сб-Сю)арил(Сі-Сб)алкоксі(Сі-Сб)алкілу, (СєСю)арил(Сі-Сб)алкоксі(Сб-Сю)арилу, (СєСю)арил(Сі-Сб)алкокси(С2-Сд)гетероарилу, (СгСд)гетероарилоксі(Сі-Сб)алкілу, (СгСд)гетероарилоксі(Сб-Сю)арилу, (СгСд)гетероарилокси(С2-Сд)гетероарилу, (СгСд)гетероарил(Сі-Сб)алкоксі(Сі-Сб)алкілу, (СгСд)гетероарил(Сі-Сб)алкоксі(Сб-Сю)арилу або (СгСд)гетероарил(Сі-Сб)алкокси(С2-Сд)гетероарилу є необов'язково заміщеним по будь-якому з атомів вуглецю на КІЛЬЦІ, здатних до утворення додаткового зв'язку за допомогою одного або декількох замісників в КІЛЬЦІ, незалежно вибраного з фтору, хлору, брому, (Сі-Сє)алкілу, (Сі-Сє)алкокси, перфтор(Сі-Сз)алкілу, перфтор(Сі-Сз)алкокси і (СєСю)арилокси, або и фармацевтично прийнятна сіль 2 Сполука за п 1, де Q являє собою необов'язково заміщений (Сб-С-ю)арил, (СєСю)арил(Сб-Сю)арил, (Сб-Сю)арилоксі(СбСю)арил, (Сб-Сю)арилокси(С2-Сд)гетероарил, (СгСд)гетероарил, (С2-Сд)гетероарил(С2Сд)гетероарил, (Сб-Сю)-арил(С2-Сд)гетероарил, (С2-Сд)гетероарил(Сб-Сю)арил, (СгСд)гетероарилоксі(Сб-Сю)арил, (Сб-Сю)арил(Сг Сб)алкоксі(Сб-Сю)арил або (С2-Сд)гетероарил(Сг Сє) ал ко кс і (Сб-С і о) а р и л 3 Сполука за п 1, де Q являє собою необов'язково заміщений (Сб-С-ю)арилоксі(СбСю)арил 4 Сполука за п 3, де кільце (Сб-Сю)арилокси вказаної (Сб-Сю)арилоксі(Сб-Сю)арильноі групи є необов'язково монозаміщеним в 4-ому положенні кільця 5 Сполука за п 1, де вказана сполука вибрана з групи, що включає пдроксіамід 4-[4-(4фторфенокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4карбонової кислоти, пдроксіамід 4-[4-(4хлорфенокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти, пдроксіамід 4-[4-(фенокси)бензолсульфоніламшо] О (О ю ю ю 55526 тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти, 7 Спосіб лікування станів, вибраних з групи, що пдроксіамід 4-[4-(4включає артрит (включаючи остеоартрит і ревматоїдний артрит), запальну хворобу кишечнику, піридилокси)бензолсульфоніламшо]хворобу Крона, емфізему, хронічну обструктивну тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти, хворобу легенів, хворобу Альцгеймера, токсичний пдроксіамід 4-[4-(4ефект трансплантації органів, кахексію, алергічні фторфеніл)бензолсульфоніламшо]реакції, пперчутливість по типу контактного дертетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти, матиту, злоякісну пухлину, покриття виразками пдроксіамід 4-[4-(4тканин, рестеноз, захворювання перюдонту, булефторфенілметокзний епідермоліз, остеопороз, ослаблення імпланси)][бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4тованого штучного суглоба, атеросклероз (вклюкарбонової кислоти, чаючи відрив атеросклеротичних бляшок), пдроксіамід 4-[4аневризму аорти (включаючи аневризму черевної (фенілметокаорти і аневризму артерій головного мозку), заси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4стійну серцеву недостатність, інфаркт міокарда, карбонової кислоти, інсульт, ішемію головного мозку, черепно-мозкову пдроксіамід 4-[4-(4травму, травму спинного мозку, нейродегенератифторфенілетоквні захворювання (гострі і хронічні), аутоімунні заси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4хворювання, хворобу Хантінгтона, хворобу Паркінкарбонової кислоти сона, мігрень, депресію, периферичну нейропатію, 6 Фармацевтична композиція для лікування стабіль, церебральну амілоїд ну анпопатію, ослабнів, вибраних з групи, що включає артрит (вклюлення уваги або інтелектуальної ДІЯЛЬНОСТІ, бічний чаючи остеоартрит і ревматоїдний артрит), запаамютрофічний склероз, розсіяний склероз, анпольну хворобу кишечнику, хворобу Крона, генез судин в рогівці очей, травму рогівки, дегенеемфізему, хронічну обструктивну хворобу легенів, рацію плями, аномальне загоєння ран, опіки, цукхворобу Альцгеймера, токсичний ефект транспларовий діабет, проростання пухлини, зростання нтації органів, кахексію, алергічні реакції, пперчутпухлини, метастази пухлини, рубцювання сітчатки, ливість по типу контактного дерматиту, злоякісну склерит, СНІД, сепсис і септичний шок у ссавця, пухлину, покриття виразками тканин, рестеноз, включаючи людину, який полягає в тому, що ввозахворювання перюдонту, булезний епідермоліз, дять вказаному ссавцеві ефективну при лікуванні остеопороз, ослаблення імплантованого штучного такого стану КІЛЬКІСТЬ сполуки за п 1 суглоба, атеросклероз (включаючи відрив атеросклеротичних бляшок), аневризму аорти (включа8 Фармацевтична композиція для лікування стану, ючи аневризму черевної аорти і аневризму артерій який може бути вилікуваний шляхом інгібування головного мозку), застійну серцеву недостатність, матриксних металопротеїназ у ссавця, включаючи інфаркт міокарда, інсульт, ішемію головного мозку, людину, що містить ефективну для такого лікуванчерепно-мозкову травму, травму спинного мозку, ня КІЛЬКІСТЬ сполуки за п 1 і фармацевтично принейродегенеративні захворювання (гострі і хронічйнятний носій ні), аутоімунні захворювання, хворобу Хантінгтона, 9 Фармацевтична композиція для лікування стану, хворобу Паркінсона, мігрень, депресію, перифериякий може бути вилікуваний шляхом інгібування чну нейропатію, біль, церебральну амілоідну анпрепролізину у ссавців, включаючи людину, що місопатію, ослаблення уваги або інтелектуальної ДІЯтить ефективну для такого лікування КІЛЬКІСТЬ споЛЬНОСТІ, бічний амютрофічний склероз, розсіяний луки за п 1 і фармацевтично прийнятний носій склероз, анпогенез судин в рогівці очей, травму 10 Спосіб інгібування матриксних металопророгівки, дегенерацію плями, аномальне загоєння теїназ у ссавця, включаючи людину, який полягає ран, опіки, цукровий діабет, проростання пухлини, в тому, що вводять вказаному ссавцеві ефективну зростання пухлини, метастази пухлини, рубцюванКІЛЬКІСТЬ сполуки за п 1 ня сітчатки, склерит, СНІД, сепсис і септичний шок 11 Спосіб інгібування репролізину у ссавців, у ссавця, включаючи людину, що містить ефективвключаючи людину, який полягає в тому, що ввону при таких лікуваннях КІЛЬКІСТЬ сполуки за п 1 і дять вказаному ссавцеві ефективну КІЛЬКІСТЬ спофармацевтично прийнятний носій луки за п 1 Даний винахід відноситься до похідних пдроксаміду (4-сульфоніламшо)тетрапдропіран-4карбонової кислоти і до фармацевтичних композицій, і до способів лікування Сполуки по даному винаходу є інгібіторами цинк-металоендопептидаз, особливо тих, які належать до підродин матриксних металопротеїназ (які також називаютьмМР або матриксином), і репролізину (також відомого як адамілзин) метцинкінів (Rawlmgs, et a l , Methods in Enzymoloqy, 248, 183 228 (1995) and Stacker, et al Protein Science 4, 823-840(1995)) Підродина ферментів МР на теперішній час містить сімнадцять членів (ММР-1, мМР-2, мМР-3, мМР-7, мМР-8, мМР-9, мМР-10, мМР-11, мМР-12, мМР-13, мМР-14, мМР-15, мМЗ-16, мМР-17, мМР18, мМР-19, мМР-20) Ферменти підродиним МР найбільш ВІДОМІ своєю роллю в регуляції обороту білків МІЖКЛІТИННИХ тканин, і в такій якості грають важливу роль в таких важливих фізіологічних процесах як репродукція, розвиток і диференціювання Крім того, ферментим МР виразно присутні в багатьох патологічних ситуаціях, в яких здійснюється аномальний метаболізм з'єднувальної тканини, Наприклад, мМР-13, фермент, що володіє сильною деградуючою активністю відносно кола гену типу II (основний тип колагену в хрящі), як показано, присутній в надмірних кількостях в остеоартритному хрящі (Mitchell, et ai , J Clm Invest 97Ю 761 (1996)) Інші ферменти мМР (ММР-2, мМР-3, мМР-8, мМР-9, мМР-12) також присутні в надмірних кількостях в остеоартритному хрящі, і інгібування деяких або всіх цих ферментів підродиним МР, як очікується, буде сповільнювати або блокувати прискорену втрату хрящової тканини, типову для хвороб суглобів, таких як остеоартрит або ревматоїдний артрит Репролізини ссавців ВІДОМІ ЯК ADAM (A Dismtegrin And Metalloprotemase) (Wolfberg et al , J Cell Biol , 131, 275 - 278 (1995)) і містять домен дизштегрину в доповнення до домену, подібного металопротеїназі У цей час ідентифіковані двадцять три різних ADAM ADAM-17, також відомий як фермент, що перетворює фактор некрозу пухлини - альфа (ТАСЕ), представляє собою найбільш відомий ADAM AD АМ-17 (Т АСЕ) є відповідальним за розщеплення пов'язаного з клітинами фактора некрозу пухлини - альфа (TNF-a також відомий в якості кахектину) TNF-a, як спостерігалося, бере участь в багатьох інфекційних і аутоімунних захворюваннях (W Friers, FEBS Letters 285, 199 (1991)) Більш ТОГО показано, що TNF-a є первинним медіатором запальної реакції, що спостерігається при сепсисі і септичному шоку (Spooner, et al , Clinical Immunology and Immunopathology, 62 S11 (1992)) Існують дві форми TNF-a, мембранний білок типу II з відносною молекулярною масою 26000 (26кДа) і розчинна форма з молекулярною масою 17кДа, що генерується із зв'язуючого клітини білка шляхом специфічного протеолітичного розщеплення Розчинна форма TNF-a з молекулярною масою 17кДа вивільняється клітиною і асоційована з шкідливими ефектами TNF-a Ця форма TNF-a є також здібною до дм в областях, віддалених від області синтезу Таким чином, інгібітори ТАСЕ запобігають утворенню розчинного TNF-a і запобігають шкідливим ефектам розчинного фактора Вибрані сполуки по даному винаходу є сильними інгібіторами агреканази, ферменту, що грає важливу роль при деградації агрекану хрящів Агреканаза, як вважають, також є ADAM Втрата агрекану з міжклітинної тканини хряща являє собою важливий фактор при розвитку таких захворювань суглобів, як остеоартрит і ревматоїдний артрит, і інгібування агреканази, як очікується, буде сповільнювати або блокувати втрату хрящової тканини при цих захворюваннях Інші ADAM, які, як показано, виражено присутні в патологічних ситуаціях, включають ADAM TS-1 (Kuno, et al , J Biol Chem , 272 556 - 562 (1997)), і ADAM 10, 12 і 15 (Wu, et аі, Biochem Biophys Res Comm , 235, 437 - 442, (1997)) Наскільки відомо, виражена присутність, наявність фізіологічних субстрат і зв'язок ADAM із захворюваннями збільшує загальну значущість ролі інгібування цього класу ферментів, яке буде зустрінуте з вдячністю Захворювання, при яких інгібування ферментівм МР і/або ADAM буде забезпечувати терапевтичну перевагу, включають артрит (включаючи остеоартрит і ревматоїдний артрит), запальну хворобу кишечнику, хворобу Крона, емфізему, 55526 гострий респіраторний дистрес-синдром, бронхіальну астму, хронічну обструктивну хворобу легенів, хворобу Альцгеймера, токсичний ефект трансплантації органів, кахексію, алергічні реакції, пперчутливість по типу контактного дерматиту, злоякісну пухлину, покриття виразками тканин, рестеноз, захворювання перюдонту, булезний епідермоліз, остеопороз, ослаблення імплантованого штучного суглоба, атеросклероз, (включаючи відрив атеросклеротичних бляшок), аневризму аорти (включаючи аневризму черевної аорти і аневризму артерій головного мозку), застійну серцеву недостатність, інфаркт міокарда, інсульт, ішемію головного мозку, черепно-мозкову травму, травму спинного мозку, нейродегенеративні захворювання (гострі і хронічні), аутоімунні захворювання, хвороба Хантінгтону, хвороба Паркінсона, мігрень, депресію, периферичну нейропатію, біль, церебральну амілоїд ну анпопатію, ослаблення уваги або інтелектуальної ДІЯЛЬНОСТІ, бічний амютрофічний склероз, неуважний склероз, анпогенез в рогівці очей, травму рогівки, дегенерацію плями сітчатки, аномальне загоєння ран, опіки, цукровий діабет, проростання пухлини, зростання пухлини, метастази пухлини, рубцювання сітчатки, склерит, СНІД, сепсис, септичний шок, і ІНШІ захворювання, що характеризуються вираженою експресією металопротеїнази або ADAM Даний винахід також відноситься до способу використання сполук по даному винаходу для лікування вказаних вище захворювань ссавців, зокрема, людей, і до фармацевтичних композицій, придатних для цього Помічено, що різні поєднанням МР і ADAM присутні в різних патологічних ситуаціях Тому шпбитори зі специфічними селективностями до індивідуальних ADAM і/абом МР можуть бути переважними для окремих захворювань Наприклад, ревматоїдний артрит являє собою запальне захворювання суглобів, що характеризується надмірними рівнями TNF і втратами складових міжклітинної тканини суглоба У цьому випадку, сполука, яка інгібує ТАСЕ і агреканазу, а також МР, такі якмМР-13, можуть являти собою переважну терапію У протилежність цьому, при захворюванні суглоба з меншим запаленням, такому як остеоартрит, можуть бути переважними сполуки, які інгібують мМР, що руйнують міжклітинну тканину, такі якмМР-13, але не ТАСЕ Автори даного винаходу також виявили, що є можливим створення інгібіторів з диференційованою активністю до металопротеаз Зокрема, наприклад, автори даного винаходу виявилися здатними створювати молекули, які селективно інгібують матриксну металопротеазу-13 (ММР-13) переважно в порівнянні з мМР-1 Інгібітори матриксної металопротеїнази і репролізину добре ВІДОМІ в літературі Зокрема, публікація РСТ WO 96/33172, опублікована 24 жовтня 1996 року, відноситься до циклічних арилсульфоніламінопдроксамових кислот, які придатні для використання в якості інгібіторів МР Патент США 5672615, публікація РСТ WO 97/20824, публікація РСТ WO 98/08825, публікація РСТ WO 98/27069, і публікація РСТ WO 98/34918, опублікована 13 серпня 1998 року, озаглавлена "Arylsulfonyl Hydroxamic Acid Derivatives", всі відносяться до циклічних гідроксамових кислот, які є придатними для використання в якості інгібіторів МР Публікації РСТ WO 96/27583 і WO 98/07697, опубліковані 7 березня, 1996 і 26 лютого 1998 року, ВІДПОВІДНО, відносяться до арилсульфоніл гідроксамових кислот Публікація РСТ WO 98/03516, опублікована 29 січня 1998 року, відноситься до фосфінатів з активністю по відношеннюм МР Публікація РСТ 98/34915, опублікована 13 серпня 1998 року, озаглавлена "N-Hydroxy-b-Sulfonyl Propionamide Derivatives" відноситься до пропюнілпдроксамідів як придатних для використання шпбіторівмМР Публікація РСТ WO 98/33768, опублікована 6 серпня 1998 року, озаглавлена "Arylsulfonylammo Hydroxamic Acid Derivatives" відноситься до N-заміщених арилсульфоніламіно гідроксамових кислот Публікація РСТ WO 98/30566, опублікована 16 липня 1998 року, озаглавлена "Cyclic Sulfone Derivatives," відноситься до циклічних сульфон гідроксамових кислот в якості шпбіторівмМР Попередня заявка на патент США 60/55208, подана 8 серпня 1997 року, відноситься до біарилпдроксамових кислот в якості шпбіторівмМР Попередня заявка на патент США серійний No 60/55207, подана 8 серпня 1997 року, озаглавлена "Aryloxyarylsulfonylammo Hydroxamic Acid Derivatives" відноситься до арилоксисульфонілпдроксамових кислот в якості шпбіторівмМР Попередня заявка на патент США 60/62766, подана 24 жовтня 1997 року, озаглавлена "The Use ofMMP-13 Selective Inhibitors For The Treatment of Osteoarthntis and Other MMP Mediated Disorders," відноситься до використання селективних інгібіторів ММР-13 для лікування запалення і інших розладів Попередня заявка на патент США серійний No 60/68261, подана 19 грудня 1997 року, відноситься до використання шпбіторівмМР для лікування утворення судин на рогівці очей і інших розладів Кожна із згаданих вище публікацій і заявок тим самим включається сюди як посилання у всій и повноті Короткий опис винаходу Даний винахід відноситься до сполуки формули О або и фармацевтичне прийнятним солям, де Q являє собою (С-і-Сб) алкіл, (Сє-Сю) арил, (С2-С9) гетероарил, (Сб-С-ю) арилокси (С-і-Сє) алкіл, (Сб-Сю) арилокси (Сє-Сю) арил, (Сє-Сю) арилокси (С2-С9) гетеро-арил, (Сб-Сю) арил (С-і-Сє) алкіл, (Се-Сю) арил (Се-Сю) арил, (С6-Сю) арил (С2-С9) гетероарил, (Сб-С-ю) арил (Сє-Сю) арил (С-і-Сє) алкіл, (Сб-С-ю) арил (Сє-Сю) арил, (Сє-Сю) арил (Се-Сю) арил, (Се-Сю) арил (С6-Сю) арил (С2-С9) гетероарил, (С2-С9) гетероарил (С-і-Сє) алкіл, (СгСд) гетероарил (Сб-Сю) арил, (Сг-Сд) гетероарил (Сг-Сд) гетероарил, (Сє-Сю) арил (С-і-Сб)-алкокси-( Сі-Сє) алкіл, (Сб-Сю) арил (С-і-Сє) алкокси (Сє-Сю) арил, (Сб-Сю) арил (С-і-Сє) алкокси (Сг-Сд) гетероарил, (Сг-Сд) гетероарилокси (Сі-Сє) алкіл, (Сг-Сд) гетероарилокси (Сє-Сю) арил, (Сг-Сд) гетероарилокси (Сг-Сд) гетероарил, (Сг-Сд) гетероарил ( d 55526 8 Сє)-алкокси (Сі-Сє) алкіл, (Сг-Сд) гетероарил ( d Сє) алкокси (Сб-Сю) арил або (Сг-Сд) гетероарил (Сі-Сє) алкокси (Сг-Сд) гетероарил, де кожний з (Сб-Сю) арильних або (Сг-Сд) гетероарил ьних залишків вказаних (Сб-Сю)арилу, (Сг-Сд) гетероарилу, (Сє-Сю) арилокси (Сі-Сє) алкілу, (Сб-Сю)арилокси(Сб-Сю)арилу, (Сє-Сю) арилокси (Сг-Сд) гетероарилу, (Сє-Сю) арил (Сі-Сє) алкілу, (Сб-Сю) арил (Сє-Сю) арилу, (Сє-Сю) арил (Сг-Сд) гетероарилу, (Сє-Сю) арил (Сє-Сю) арил (Сі-С6) алкілу, (Се-Сю) арил (С6-Сю) арил (С6-Сю) арилу, (Сб-Сю) арил (Сє-Сю) арил (Сг-Сд) гетероарилу, (Сг-Сд) гетероарил (Сі-Сє) алкілу, (Сг-Сд) гетероарил (Сб-С-ю) арилу, (Сг-Сд) гетероарил (СгСд) гетероарилу, (Сб-Сю) арил (С-і-Сє) алкокси ( d Сє) алкілу, (Сб-Сю) арил (С-і-Сє) алкокси (Сє-Сю) арилу, (Сб-С-ю) арил (С-і-Сє) алкокси (Сг-Сд) гетероарилу, (С2-Сд)-гетероарилокси (Сі-Сє) алкілу, (Сг-Сд) гетероарилокси(Сб-Сю)арилу, (Сг-Сд) гетероарилокси (Сг-Сд) гетероарилу, (Сг-Сд) гетероарил (С-і-Сб) алкокси (Сі-Сє) алкілу, (Сг-Сд) гетероарил (Сі-Сє) алкокси (Сб-Сю) арилу або (Сг-Сд) гетероарил (Сі-Сє) алкокси (Сг-Сд) гетероарилу є необов'язково заміщеним на будь-якому з атомів вуглецю на КІЛЬЦІ, здатних до утворення додаткового зв'язку, за допомогою одного або декількох заступників на кожному КІЛЬЦІ, незалежно вибраних з фтору, хлору, брому, (Сі-Сє)алкілу, (С-і-Сє) алкокси, перфтор-(Сі-Сз) алкілу, перфтор (С-і-Сз) алкокси і (С-і-Сз) арилокси, або до її фармацевтичне прийнятної солі Термін "алкіл", як він використовується тут, якщо не вказано іншого, включає насичені одновалентні вуглеводневі радикали, що містять прямі, розгалужені або ЦИКЛІЧНІ групи, або їх поєднання Термін "алкокси", як він використовується тут, включає О-алкільні групи, де "алкіл" є таким, як визначено вище Термін "арил", як він використовується тут, якщо не вказано іншого, включає органічний радикал, похідний ароматичного вуглеводню шляхом видалення одного атома водню, такий як феніл або нафтил, необов'язково заміщений 1-3 заступниками, вибраними з групи, що включає фтор, хлор, бром, перфтор (С-і-Сб) алкіл (включаючи трифторметил), (С-і-Сб) алкокси, (Сє-Сю) арилокси, перфтор (С-і-Сз) алкокси (включаючи трифторметокси і дифторметокси) і (С-і-Сб) алкіл Термін "гетероарил", як він використовується тут, якщо не вказано іншого, включає органічний радикал, похідний ароматичної гетероциклічної сполуки шляхом видалення одного атома водню, такого як піридил, фурил, піроїл, ТІЄНІЛ, ізотіазоліл, імідазоліл, бензімідазоліл, тетразоліл, піразиніл, піримідил, ХІНОЛІЛ, ІЗОХІНОЛІЛ, бензофурил, ізобензофурил, бензотієніл, піразоліл, ІНДОЛІЛ, ІЗОІНДОЛІЛ, пуриніл, карбазоліл, ізоксазоліл, тіазоліл, оксазоліл, бензтіазоліл, або бензоксазоліл, необов'язково замішений 1-2 заступниками, вибраними з групи, що включає фтор, хлор, трифторметил, ( d Сє)алкокси, (Сб-Сю)арилокси, трифторметокси, дифторметокси і (Сі-Сє)алкіл Переважні гетероарили включають піридил, фурил, ТІЄНІЛ, ізотіазоліл, піразиніл, піримідил, піразоліл, ізоксазоліл, тіазоліл або оксазоліл Найбільш переважні включають піридил, фурил або ТІЄНІЛ Переважні сполуки формули І включають такі, де Q являє собою необов'язково заміщений (СєСю)арил, (Се-Сю)арил (С6-Сю) арил, (С6-Сю) арилокси (Сб-Сю) арил, (Сє-Сю) арилокси (С2-С9) гетероарил, (С2-С9) гетероарил, (С2-Сд)гетероарил (СгСд) гетероарил, (Сб-С-ю) арил (С2-С9) гетероарил, (С2-С9) гетероарил (Сб-Сю) арил, (С2-С9) гетероарилокси (Сб-С-ю) арил, (Сє-Сю) арил (С-і-Сє) алкокси (Сб-Сю) арил, або (С2-С9) гетероарил (С-і-Сє) алкокси (Сб-Сю) арил Інші переважні сполуки формули І включають такі, де Q являє собою необов'язково заміщений (Сб-Сю) арилокси (Сє-Сю) арил Конкретні переважні сполуки формули І включають наступні сполуки Гідроксиамід 4-[4-(4фторфенокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти, Гідроксиамід 4-[4-(4хлорфенокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти, Гідроксиамід 4-[4(фенокси)бензолсульфоніламшо]-тетрапдропіран4-карбоновоі кислоти, Гідроксиамід 4-[4-(4піридилокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти, Гідроксиамід 4-[4-(4фторфеніл)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти, Гідроксиамід 4-[4-(4фторфенілметокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти, Гідроксиамід 4-[4(фенілметокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4карбонової кислоти, і Гідроксиамід 4-[4-(4фторфенілетокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4карбонової кислоти Даний винахід також відноситься до фармацевтичної композиції для лікування станів, вибраних з групи, що включає артрит (включаючи остеоартрит і ревматоїдний артрит), запальну хворобу кишечнику, хворобу Крона, емфізему, гострий респіраторний дистрес-синдром, бронхіальну астму, хронічну обструктивну хворобу легенів, хворобу Альцгеймера, токсичний ефект трансплантації органів, кахексію, алергічні реакції, пперчутливість по типу контактного дерматиту, злоякісну пухлину (таку як СОЛІДНІ ракові пухлини, включаючи рак прямої киппш, рак молочної залози, рак легенів і рак простати, і гематопоетичні ЗЛОЯКІСНІ захворювання, лейкемії і лімфоми), виразку тканин, рестеноз, захворювання перюдонту, булезний епідермоліз, остеопороз, ослаблення імплантованого штучного суглоба, атеросклероз, (включаючи відрив атеросклеротичних бляшок), аневризму аорти (включаючи аневризму черевної аорти і аневризму артерій головного мозку), застійну серцеву недостатність, інфаркт міокарда, інсульт, ішемію головного мозку, черепно-мозкову травму, травму спинного мозку, нейродегенеративні захворювання (гострі і хронічні), аутоімунні захворювання, хворобу Хантінгтона, хворобу Паркінсона, мігрень, 55526 10 депресію, периферичну нейропатію, біль, церебральну амілоідну анпопатію, $?/адрення уваги або інтелектуальної ДІЯЛЬНОСТІ, бічний амютрофічний склероз, неуважний склероз, анпогенез в рогівці очей, травму рогівки, дегенерацію плями сітчатки, аномальне загоєння ран, опіки, цукровий діабет, проростання пухлини, зростання пухлини, метастази пухлини, рубцювання сітчатки, склерит, СНІД, сепсис, септичний шок, і ІНШІ захворювання, що характеризується активністю репролізину, у ссавців, включаючи людину, що включає КІЛЬКІСТЬ сполуки формули І або и фармацевтичне прийнятної солі, ефективної при таких лікуваннях, і фармацевтичне прийнятного носія Даний винахід також відноситься до фармацевтичних композицій для інгібування (а) матриксних металопротеїназ або інших металопротеїназ, що беруть участь в деградації міжклітинної тканини, або (Ь) репролізину ссавців (таких як агреканаза або ADAM TS-1, 10, 12, 15 і 17, найбільш переважно ADAM-17) у ссавців, включаючи людину, що містить ефективну КІЛЬКІСТЬ сполуки формули І або и фармацевтичне прийнятної солі Даний винахід також відноситься до способу лікування станів, вибраних з групи, що включає артрит (включаючи остеоартрит і ревматоїдний артрит), запальну хворобу кишечнику, хворобу Крона, емфізему, хронічну обструктивну хворобу легенів, хворобу Альцгеймера, токсичний ефект трансплантації органів, кахексію, алергічні реакції, пперчутливість по типу контактного дерматиту, злоякісну пухлину, покриття виразками тканин, рестеноз, захворювання перюдонту, булезний епідермоліз, остеопороз, ослаблення імплантованого штучного суглоба, атеросклероз, (включаючи відрив атеросклеротичних бляшок), аневризму аорти (включаючи аневризму черевної аорти і аневризму артерій головного мозку), застійну серцеву недостатність, інфаркт міокарда, інсульт, церебральну ішемію, черепно-мозкову травму, травму спинного мозку, нейродегеративні захворювання (гострі і хронічні), аутоімунні розлади, хворобу Хантінгтона, хвороба Паркінсона, мігрень, депресію, периферичну нейропатію, біль, церебральну амілоїд ну анпопатію, ослаблення уваги або інтелектуальної ДІЯЛЬНОСТІ, бічний амютрофічний склероз, неуважний склероз, анпогенез в рогівці очей, травму рогівки, дегенерацію плями сітчатки, аномальне загоєння ран, опіки, цукровий діабет, проростання пухлини, зростання пухлини, метастази пухлини, рубцювання сітчатки, склерит, СНІД, сепсис, септичний шок, і інших захворювань, що характеризуються активністю металопротеїнази, і інших захворювань, що характеризуються активністю репролізину, у ссавців, включаючи людину, що включає введення вказаному ссавцеві КІЛЬКОСТІ сполуки формули І або и фармацевтично прийнятної соли, еффективної при лікуванні подібних станів Даний також відноситься до способу інгібування (а) матриксних металопротеїназ або інших металопротеїназ, що беруть участь в деградації міжклітинної тканини, або (Ь) репролізину ссавців (такого як агреканаза або ADAM TS-1, 10, 12, 15 і 17, переважно ADAM-17) у ссавців, включаючи людину, що включає введення ефективної кількос 12 11 55526 ті сполуки формули І або и фармацевтично прийнтакі як кортикостероїди і хіалуронові кислоти, такі ятної солі якхіалган і синвіск Даний винахід також визначає фармацевтичні Сполуки по даному винаходу можуть бути такомпозиції, що включають сполуки-попередники кож використані в поєднанні з протираковими засполук формули І Даний винахід також визначає собами, такими як ендостатин і анпостатин або способи лікування або профілактики розладів, які цитотоксичними лікарськими засобами, такими як можуть бути вилікувані або відвернені шляхом адріаміцин, дауноміцин, цис-платина, етопозид, інгібування матриксних металопротеїназ або інгітаксол, таксотер, і алкалоїдами, такими ж вінкрисбування репролізину ссавців, що включають вветин, і антиметаболітами, такими як метотрексат дення сполук-попередників сполук формули І Сполуки по даному винаходу можуть бути таСполуки формули І, що мають ВІЛЬНІ аміно, амідо, кож використані в поєднанні з серцево-судинними гідрокси або карбоксильні групи, можуть бути пезасобами, такими як блокатори кальцієвих каналів, ретворені в сполуки-попередники Сполукиз агентами, що понижують рівень ЛІПІДІВ, такими як попередники включають сполуки, де амінокислотстатини, фібрати, бета-блокатори, інгібітори Асе, ний залишок або поліпептиднии ланцюг з двох або антагоністи рецепторів анпотензину-2 і інгібітори більш (наприклад, двох, трьох або чотирьох) аміагрегації бляшок нокислотних залишків, які ковалентно приєднані Сполуки по даному винаходу можуть бути тачерез пептидні зв'язки до вільних аміно, гідрокси кож використані в поєднанні з агентами для груп або груп карбонових кислот сполук формули центральної нервової системи, такими як антидепресанти (такі як сертралін), ліками від хвороби 1 АМІНОКИСЛОТНІ залишки включають всі 20 існуюПаркінсона (такі як депреніл, L-допа, реквіп, мірачих в природі амінокислот, що звичайно означатекс, інгібітори МАОВ, такі як селепн, і расаплін, ються символами з трьох букв, а також включають інгібітори сотРтакі як Tasmar, інгібітори А-2, інгібі4-пдроксипролін, пдроксилізин, демозин, ізодемотори повторного витягання допамшу, антагоністи зин, 3-метилгістидин, норвалін, бета-аланш, гамаNMDA, агоністи нікотину, агоністи допаміну, і інгібіаміномасляну кислоту, цитрулін, гомоцистеш, готори нейронної синтази окислу азоту), і ліками мосерин, орнітин, і метіонін сульфон Сполукипроти хвороби Альцгеймера, такими як арицепт, попередники також включають сполуки, де карботакрин, інгібітори СОХ-2, пропетоофілін або метнати, карбамати, аміди і алкілові складні ефіри рифонат ковалентне пов'язані з вказаним заступником формули І через бічний вуглецевий ланцюг карбоніСполуки по даному винаходу можуть бути тальної групи сполуки-попередника кож використані в поєднанні з агентами проти остеопорозу, такими як дролоксифен або фосомакс і Фахівець в даній області помітить, що сполуки імунодепресивними агентами, такими як FK-506 і по даному винаходу є придатними для викорисрапаміцин тання при лікуванні широкого ряду захворювань Фахівець в даній області також помітить, що при Докладний опис винаходу використанні сполуки по даному винаходу для Приведена далі схема реакції ілюструє отрилікування конкретного захворювання, сполуки по мання сполук по даному винаходу Якщо не вказаданому винаходу можуть об'єднуватися з різними но по іншому, Q в схемах реакції і в дискусії, яка існуючими терапевтичними агентами, що викорисслідує далі, визначається також як і вище товуються при такій хворобі Схема Для лікування ревматоїдного артриту сполуки по даному винаходу можуть об'єднуватися з такими агентами, як інгібітори TNF-a, наприклад, антиTNF моноклональні антитіла і молекули імуноглобулінів рецепторів TNF (такі як Enbrel®), з малими дозами метотрексату, лефуніміду, пдроксихлорхіну, д-пеніциламшу, ауранофіну, або парентерального або перорального золота Сполуки по даному винаходу можуть бути також використані в поєднанні з існуючими терапевтичними агентами для лікування остеоартриту ВІДПОВІДНІ агенти для комбінованого використання включають стандартні нестероідні протизапалнавальні засоби (тут і далі НСПЗЛЗ), такі як піроксикам, диклофенак, протонові кислоти, такі як напроксен, флубіпрофен, фенопрофен, кетопрофен і ібупрофен, фенамати, такі як мефенамова кислота, індометацин, суліндак, апазон, піразолони, такі як фенілбутазон, саліцилати, такі як аспірин, СОХ2 інгібітори, такі як целекоксиб і рофекоксиб, анальгетики і речовини для внутрісуглобної терапії, 13 Схема 1 (продовження) Схема 1 відноситься до отримання сполук формули І Звертаючись до схеми 1, сполуки формули І отримують з карбонової кислоти формули II иляхом обробки 1-(3-диметиламшопропіл)-3етилкарбодиімідом і 1-пдроксибензтриазолом в юлярному розчиннику, такому як N,Nдиметилформамід, з подальшим доданням гідроксиламіну реакційну суміш через період часу в межах між приблизно 15 хвилинами і приблизно 1 годиною, переважно, приблизно через ЗО хвилин Гідроксиламш переважно отримують in situ з сольової юрми, такої як гідроксиламш пдрохлорид, в присутності основи, такої яктриетиламш Альтернативно, сполука формули І може бути отримана із сполуки формули II шляхом взаємодії із захищеним похідним гідроксиламіну або його сольовою формою, де гідроксильна група є захищеною в якості трет-бутилового, бензилового, алілового або 2-триметилсилілетилового простого ефіру Видалення гідроксильної захисної групи здійснюється шляхом пдрогенолізу, для бензильноі захисної групи (5% паладій на сульфаті барію є переважним каталізатором), або шляхом обробки сильною кислотою, такою як трифтороцтова кислота, для трет-бутильної захисної групи Алільна захисна група може бути видалена шляхом обробки гідридом трибутилолова і оцтовою кислотою в присутності каталізатора біс(трифенілфосфш)паладій(П) хлориду 2Триметилсилілетиловий простий ефір може бути видалений шляхом взаємодії з сильною кислотою, такою як трифтороцтова кислота або шляхом взаємодії з джерелом фтору, таким як ефірат трифториду бору Взаємодія сполуки II з пдроксиамшом, сіллю гідроксиламіну, захищеним похідним гідроксиламіну або сіллю захищеного похідного гідроксиламіну може бути також здійснена в присутності (бензтриазол-1-илокси)трис(диметиламшо)фосфоній гексафторфосфату і основи, такої яктриетиламш, в інертному розчиннику, такому як метиленхлорид Реакційну суміш перемішують при температурі в межах приблизно між 0°С і приблизно 50°С, переважно, при кімнатній температурі, протягом періоду часу в межах між приблизно 1 годиною і при 55526 14 близно 3 днями, переважно протягом приблизно 1 дня Інша процедура перетворення сполуки формули II в сполуку формули І являє собою взаємодію сполуки формули II з Обензилпдроксиламшпдрохлоридом в присутності (бензтриазол-1 -илокси)трис(диметіашно)фосфоній гексафторфосфату і триетиламшу, з використанням метиленхлориду як розчинника Подальше видалення О-бензильної захисної групи для отримання сполуки формули І здійснюється потім шляхом гідрування при тиску водню 3 атмосфери і при кімнатній температурі, з використанням 5% паладію на сульфаті барію як каталізатора Переважний розчинник являє собою метанол Час реакції може змінюватися від близько 1 години до близько 2 днів (8 годин є переважним часом) Переважна процедура для перетворення сполуки формули II в сполуку формули І являє собою взаємодію сполуки формули II з оксалілхлоридом в метиленхлориді в присутності каталітично ефективної КІЛЬКОСТІ ДМФ протягом 16 годин Отриманий хлорангідрид взаємодіє при 0°С з N,0біс(триметилсиліл)пдроксиламшом, отриманим шляхом взаємодії гідроксиламш пдрохлориду з хлортриметилсиланом в пірідині, при температурі від 0°С до кімнатної температури Продукт формули І отримують після декількох годин взаємодії при температурі від 0°С до кімнатної температури з подальшою обробкою кислим водним розчином, яка видаляє всі триметилсилільні залишки У певних випадках є переважним отримання сполуки формули І шляхом взаємодії гідроксиламіну, солі гідроксиламіну, захищеного похідного гідроксиламіну або солі захищеного похідного гідроксиламіну з активованим складним ефіром формули III Взаємодію здійснюють в інертному розчиннику, такому як N.N-диметилформамід, при температурі, що знаходиться в межах приблизно від кімнатної температури до приблизно 80°С, переважно близько 60°С, протягом періоду часу від близько 1 години до близько 2 днів Якщо використовується захищене похідне гідроксиламіну або сіль захищеного похідного гідроксиламіну, видалення захисної групи здійснюють так, як описано вище Похідне активованого складного ефіру формули III отримують шляхом обробки сполуки формули II (бензтриазол-1 илокси)трис(диметиламіно)фосфоній гексафторфосфатом і основою, такою як триетиламін, в інертному розчиннику, такому як метиленхлорид Реакційну суміш перемішують при температурі, що знаходиться між приблизно 0°С і приблизно 50°С, переважно, при кімнатній температурі, протягом періоду часу в межах між приблизно 1 годиною і приблизно 3 днями, переважно протягом приблизно 1 дня Проміжну сполуку формули II отримують шляхом омилення сполуки формули IV Взаємодія здійснюється в розчиннику, такому як водний розчин етанолу, з надлишком гідроксидів металів, таких як гідроксид натрію або гідроксид ЛІТІЮ, при температурі від близько 20°С до близько 100°С, (тобто, від кімнатної температури до температури дефлегмації розчинника), переважно близько 16 15 55526 80°С Реакційну суміш, як правило, перемішують частину структури при кімнатній температурі протягом періоду часу в Здатність сполук формули І або їх фармацевмежах між приблизно ЗО хвилинами і приблизно 1 тичне прийнятних солей (що далі також згадуютьтижнем, переважно, протягом приблизно 16 годин ся тут як сполуки по даному винаходу) інгібувати Сполуку формули IV отримують шляхом взаєметалопротеїнази або репролізин ссавців, і, як модії сполуки формули V з реакційноспроможним наслідок, демонструвати їх ефективність при лікуфункціональним похідним сульфонової кислоти ванні захворювань, що характеризуються метало(QSO2OH), наприклад, сульфонілхлоридом протеїназою або продукуванням фактора некрозу (QSO2CI), в присутності основи ВІДПОВІДНІ ОСНОВИ пухлини, продемонстрована за допомогою привевключають гідроксид натрію, триетиламш або диідених далі досліджень in vitro зопропілетиламш, переважно триетиламш ВІДПОБіологічне дослідження ВІДНІ розчинники включають диметилформамід Інгібування колагенази людини (ММР-1) (ДМФ), метиленхлорид, тетрапдрофуран, діоксан, Рекомбінатну колагеназу людини активують воду або ацетонітрил, переважно ДМФ Реакційну трипсином КІЛЬКІСТЬ трипсину оптимізують для суміш перемішують при температурі, що знахокожної порції колагенази-1, але при типовій взаєдиться в межах між близько 0°С і близько 50°С, модії використовують наступне відношення 5мкг переважно, від близько 20°С до близько 25°С трипсину на ЮОмкг колагенази Трипсин і колаге(тобто кімнатна температура), протягом періоду назу інкубують при кімнатній температурі протягом часу в межах між приблизно 10 хвилинами і при10 хвилин, потім додають п'ятикратний надлишок близно 2 днями, переважно, протягом приблизно 1 (50мг/10 мг трипсину) інгібітору трипсину з соєвих дня бобів Сполуку формули V отримують шляхом гідроГотують початкові розчини (10М) інгібіторів в лізу сполуки формули IV Конкретно, сполуку фордиметилсульфоксиді, а потім їх розбавляють, вимули VI обробляють водним розчином кислоти, користовуючи наступну схему переважно, в присутності органічного розчинника, ЮмМ -» 120мкМ -^12мкМ -» 1,2мкМ -» 0,12мкМ що не змішується, такого як етиловий ефір, диїзоДвадцять п'ять мікролітрів розчину кожної конпропіловий ефір або метиленхлорид ВІДПОВІДНІ центрації потім додають трикратно у відповідну кислоти включають соляну кислоту і сірчану кислунку 96-лункового планшета для мікрофлуореслоту Реакційну суміш перемішують при кімнатній центного аналізу Кінцева концентрація інгібітору температурі в межах між близько 0°С і близько після додавання ферменту і субстрату буде явля50°С, переважно, від близько 20°С до близько ти собою розбавлення 1 4 Позитивний контроль 25°С (тобто кімнатна температура), протягом пері(фермент, без інгібітору) розміщується в лунках оду часу між близько 10 хвилинами і близько 2 D7-D12, і негативний контроль (без ферменту, без днями, переважно, протягом близько 1 дня інгібітору) розміщується в лунках D1-D6 Сполуку формули VI отримують шляхом взаєКолагеназу-1 розбавляють до концентрації модії амінокислотної похідної формули VII із спо240нг/мл, а потім додають по 25мл у відповідну лукою формули VIII в присутності основи і розчинлунку планшета для мікрофлуоресцентного аналіника, де X являє собою СІ, Вг, І, тозилат або зу Кінцева концентрація колагенази в дослідженмезилат ВІДПОВІДНІ ОСНОВИ включають етиленглінях становить бОнг/мл коль, гідрид натрію, диїзопропіламід ЛІТІЮ або гекСубстрат (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Alaсаметилдисилазид натрію ВІДПОВІДНІ розчинники Lys(NMA)-NH2) приготовляють як 5мМ початковий включають диметиловий ефір, диметилформамід, розчин в диметилсульфоксиді, а потім розбавлятетрапдрофуран або диметилсульфоксид Реакють до 20мкМ в буфері для аналізу Аналіз ІНІЦІЮційну суміш перемішують при температурі в межах ЄТЬСЯ шляхом додавання по 50мл субстрату на від близько - 20°С до близько 25°С, переважно, від лунку планшета для мікрофлуоресцентного аналіблизько 0°С до близько 20°С (тобто кімнатна темзу з отриманням кінцевої концентрації ЮмМ пература), протягом періоду часу між приблизно ВІДЛІКИ флуоресценції (збудження ЗбОнм, ви10 хвилинами і приблизно 2 днями, переважно пущення 460нм) здійснюють в момент часу 0, а протягом приблизно 1 дня потім через 20 хвилинні інтервали Дослідження Сполуки формули VII і VIII можуть бути отрипроводиться при кімнатній температурі з типовим мані способами, добре відомими фахівцям в даній часом проведення аналізу 3 години області Приклади таких сполук включають метилГрафік залежності інтенсивності флуоресценгліцинбензофенонімін і етилгліцинбензофенонімін ції від часу будують потім як для контрольних, так і Фармацевтичне прийнятні солі кислотних сподля утримуючих колагеназу зразків (усереднюютьлук по даному винаходу є солями, утвореними з ся дані від трикратних визначень) Момент часу, основами, а саме, катіонними солями, такими як який забезпечує хороший сигнал (щонайменше, в солі лужних і лужноземельних металів, таких як п'ять разів більше ніж контроль), і який знаходитьнатрій, ЛІТІЙ, калій, кальцій, магній, а також солями ся в ЛІНІЙНІЙ частині кривій (як правило, біля 120 амонію, такими як солі амонію, триметиламонію, хвилин) вибирають для визначення значень ICso діетиламонію і трис-(пдроксиметил)метиламонію Сигнал в нульовий момент часу використовується як контроль для кожної сполуки при кожній конценПодібно цьому, кислотноадитивні солі, таких трації, і ці значення віднімають з даних для 120 кислот як неорганічні кислоти, органічні карбонові і хвилин Дані представляють на графіку як залежорганічні сульфонові кислоти, наприклад, хлорисність концентрації інгібітору від % контролю (інтентоводнева кислота, метансульфонова кислота, сивність флуоресценції інгібітору, ділена на інтенмалеїнова кислота, які також здатні взаємодіяти з сивність флуоресценції самої колагенази х 100) основною групою, такою як піридил, становлять 18 17 55526 Значення ІС50 визначають з концентрації інгібітору, Рекомбінантний стромелізин людини (ММР-3, яка дає сигнал, що становить 50% від контролю стромелізин-1) активують протягом 20 - 22 годин 2мМ ацетату п-амшофеніл-ртуті (з свіжовиготовЯкщо значення, що отримуються ICso складаленого ЮОмМ початкового розчину в 0,2н NaOH) ють менше ніж О.ОЗмМ, інгібітори досліджують при при 37°С концентраціях О.ЗмМ,О.ОЗмМ, і О.ООЗмМ Інгібування желатинази (ММР-2) ЮмМ Початкові розчини інгібіторів в диметилсульфоксиді розбавляють послідовно в буфері для Рекомбінантну желатиназу людини масою аналізу (50мМ Тріс, рН 7,5, 150мМ NaCI, ЮмМ 72кД (ММР-2, желатиназа А) активують протягом СаСЬ, і 0,05% BRIJ-35 (об'єм/об'єм)), використо1 6 - 1 8 годин 1мМ п-амшофеніл-ртуть ацетатом (з вуючи наступну схему свіжевиготовленого ЮОмМ початкового розчину в ЮмМ -» 120мкМ -^12мкМ -» 1,2мкМ -» 0,12мкМ 0,2н NaOH) при 4°С, з легким похитуванням ЮмМ Початкові розчини інгібіторів в диметилПодальші розбавлення проводяться, якщо це сульфоксиді розбавляють послідовно в буфері для необхідно, слідуючи цій же схемі Щонайменше, по аналізу (50мМ Тріс, рН 7,5, 200мМ NaCI, 5мМ чотири концентрації інгібітору для кожної сполуки СаС1 2 , 20мкМ ZnCI2 і 0,02% BRIJ-35 (об'єм/об'єм)), приготовляють в кожному дослідженні 25мкл розвикористовуючи наступну схему чину кожної концентрації, потім додають трикратно ЮмМ -» 120мкМ -^12мкМ -» 1,2мкМ -» 0,12мкМ в лунку чорного 96-лункового планшета для мікрофлуоресцентного аналізу з круглим дном ОскіПодальші розбавлення проводяться, якщо це льки кінцевий об'єм проби становить ЮОмкл, кіннеобхідно, слідуючи цій же схемі Щонайменше, в цеві концентрації інгібітору отримують внаслідок кожному дослідженні готують чотири концентрації ще одного розбавлення 1 4 (тобто ЗОмкМ -> ЗмкМ інгібітору для кожної сполуки 25мкл кожної конце-> О.ЗмкМ -> О.ОЗмкМ, і так далі) Також приготовнтрації потім додають трикратно в лунку чорного ляють трикратний абсолютний (без ферменту, без 96-лункового планшета для мікрофлуоресцентноінгібітору) і позитивний ферментний контроль (з го аналізу з круглим дном Оскільки кінцевий об'єм ферментом, без інгібітору) проби становить ЮОмкл, кінцеві концентрації інгібітору отримують внаслідок ще одного розбавленАктивований фермент розбавляють до ня 1 4 (тобто ЗОмкМ -» ЗмкМ -» О.ЗмкМ -» 200нг/мл в буфері для аналізу, додають по 25мкл О.ОЗмкМ, і так далі) Також приготовляють трикрана лунку у відповідну лунку мікропланшета Кінцетний абсолютний (без ферменту, без інгібітору) і ва концентрація ферменту при дослідженнях стапозитивний ферментний контроль (з ферментом, новить 50нг/мл (0,875нМ) без інгібітору) У початковий десяти-мМ розчин субстрату Активований фермент розбавляють до (Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg100нг/мл в буфері для аналізів, по 25мкл на лунку Lys(Dnp)-NH2) в диметилсульфоксиді розбавляють додають у відповідну лунку мікропланшета Кінцев буфері для аналізів до бмкМ Дослідження ІНІЦІва концентрація ферменту при дослідженнях стаЮЮТЬСЯ шляхом додавання 50мкл розбавленого новить 25нг/мл (0,34нМ) субстрату з отриманням кінцевої концентрації при аналізі субстрату ЗмкМ У нульовий момент часу Початковий п'яти-мМ розчин субстрат (Мсабезпосередньо записують ВІДЛІК інтенсивності Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-Nbb) в диметилсульфлуоресценції (збудження 320, випромінювання фоксиді розбавляють в буфері для аналізів до 390), і подальші ВІДЛІКИ виробляють кожні п'ятнад20мкМ Дослідження ІНІЦІЮЮТЬСЯ ШЛЯХОМ додаванцять хвилин при кімнатній температурі з допомоня 50мкл розбавленого субстрату з отриманням гою PerSeptive Biosystems CytoFluor Multi-Well кінцевої концентрації при аналізі субстрату ЮмкМ Plate Reader з приростом по 90 одиниць У нульовий момент часу безпосередньо записують ВІДЛІК інтенсивності флуоресценції (збудження 320 Будують графік залежності середньої інтенсивипромінювання 390), і подальші ВІДЛІКИ вироблявності флуоресценції ферменту і абсолютного ють кожні п'ятнадцять хвилин при кімнатній темпеконтролю від часу Один з ранніх моментів часу на ратурі з допомогою PerSeptive Biosystems ЛІНІЙНІЙ частині цієї кривої вибирають для визнаCytoFluor Multi-Well plate Reader з приростом по 90 чення значення ІС50 Значення в нульовий момент одиниць часу для кожної сполуки при кожному розбавленні віднімається із значення в більш ПІЗНІ моменти Будують графік залежності інтенсивності флучасу, і дані потім виражаються як процент від коноресценції ферменту і абсолютного контролю від тролю з ферментом (інтенсивність флуоресценції часу Один з ранніх моментів часу на ЛІНІЙНІЙ часінгібітору, ділена на інтенсивність флуоресценції тині цієї кривої вибирають для визначення значенпозитивного контролю з ферментом х 100) Будуня ІС50 Значення в нульовий момент часу для коють графік залежності концентрації інгібітору від жної сполуки при кожному розбавленні процента контролю з ферментом Значення ICso віднімається із значення в більш ПІЗНІ моменти визначають як концентрацію інгібітору, яка дає часу, і дані потім виражаються як процент від консигнал, що становить 50% від позитивного контротролю з ферментом (інтенсивність флуоресценції лю з ферментом інгібітору, ділена на інтенсивність флуоресценції позитивного контролю з ферментом х 100) БудуІнгібуванням МР-13 ють графік залежності концентрації інгібітору від РекомбшантнумМР-13 людини активують 2мМ процента контролю з ферментом Значення ICso АРМА (ацетат п-амшофенілртуті) протягом 2,0 визначають як концентрацію інгібітору, яка дає годин, при 37°С і розбавляють до 240нг/мл у бусигнал, що становить 50% від позитивного контрофері для аналізів (50мМ Тріс, рН 7,5, 200мМ хлолю з ферментом риду натрію, 5мМ хлориду кальцію, 20мМ хлориду цинку, 0,02% BRIJ 35) По двадцять п'ять мікролітІнгібування активності стромелізину (ММР-3) 20 19 55526 рів розбавленого ферменту додають на лунку 96струється за допомогою наступних досліджень m лункового планшета для мікрофлуоресцентного vitro аналізу Потім фермент при аналізі розбавляють у Спосіб оцінки активності рекомбинантного февідношенні 1 4 шляхом додавання інгібітору і субрменту, перетворюючого TNF-a страту з отриманням кінцевої концентрації в пробі Експресія рекомбінантного ТАСЕ бОнг/мл Фрагмент ДНК, що кодує сигнальну ПОСЛІДОВПочаткові розчини інгібіторів (ЮмМ) готують в НІСТЬ, препродомен, продомен і каталітичний додиметилсульфоксиді, а потім розбавляють в бумен ТАСЕ (амінокислоти 1-473), може бути ампліфері для аналізів таким же чином, як в схемі розфікований за допомогою ланцюгової реакції бавлення інгібітору для інгібування колагенази-1 полімерази з використанням бібліотеки комплемелюдини (ММР-1) По двадцять п'ять мікролітрів нтарної ДНК легеня людини як матриці Ампліфірозчину кожної концентрації додають трикратно на кований фрагмент потім клонують у вектор планшет для мікрофлуоресцентного аналізу КінpFastBac ПОСЛІДОВНІСТЬ ДНК вставки підтверджуцеві концентрації в дослідженні становлять ЗОмМ, ється для обох спіралей Бакмід, отриманий з виЗмММ, О.ЗммМ, і О.ОЗммМ користанням pFastBac у Е coh DHIOBac, трансфікують в клітини комах SF9 Вірусні частки потім Субстрат (Dnp-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Alaампліфікують до стадій Р1, Р2, РЗ Вірус РЗ інфіLys(NMA)-NH2) отримують таким же чином, як і для кують в клітини комах, як SF9, так і High Five, і виінгібування колагенази людини (ММР-1), і по 50мкл рощують при 27°С протягом 48 годин Середовидодають в кожну лунку з отриманням кінцевої конще збирають і використовують для досліджень і центрації проби ІОмкМ ВІДЛІКИ флуоресценції подальшого очищення (збудження ЗбОнМ, випущення 450нМ) прочитують в момент часу 0 і кожні 5 хвилин протягом 1 годиОтримання субстрат з гасінням флуоресценції ни Готують модельний лептидний субстрат TNF-a Позитивні контролі і негативні контролі приго(LY-ЛейцинАланінГлютамінАланшВалінтовляють трикратно, як описано для дослідженАгриншСерин-СеринЛізин(СТМР)нямМР-1 Агринін(І_У=Люцифер жовтий, Значення ІС50 визначаються так само, як при СТМК=Карбокситетраметил-Родамш)), і концентінгібування колагенази людини (ММР-1) Якщо рацію встановлюють по поглинанню на 560нм отримане значення ICso складає менше, ніж (Е56о, 60000 М-1СМ-1) по методу Geoghegan, KF, О.ОЗмМ, інгібітори потім досліджують при кінцевих "Improved method for converting an unmodified концентраціях of О.ЗмМ, О.ОЗмММ, О.ООЗмММ і peptide to an energy-transfer substrate for a О.ОООЗмМ protemase" Bioconjugate Chem 7, 385 - 391 (1995) Цей пептид включає позицію розщеплення на проІнгібування продукування TNF TNF, який розщеплюється in vivo з допомогою ТАЗдатність сполук або їх фармацевтично приСЕ йнятних солей до інгібування продукування TNF і, як наслідок, щоб продемонструвати їх ефективЕкспресія рекомбінантного ТАСЕ ність для лікування захворювань, що включають Фрагмент ДНК, що кодує сигнальну ПОСЛІДОВпродукцію TNF, демонструється за допомогою НІСТЬ, препродомен, продомен і каталітичний донаступного дослідження in vitro мен ТАСЕ (амінокислоти 1-473), ампліфікують за Моноцити людини виділяють з обробленої андопомогою ланцюгової реакції полімерази з викотикоагулянтом крові людини з використанням одристанням бібліотеки комплементарної ДНК легеностадійного методу розділення з допомогою фіня людини як матриці, Ампліфікований фрагмент кол-хайпак (2) Моноцити промивають три рази в потім клонують у вектор pFastBac ПОСЛІДОВНІСТЬ збалансованому сольовому розчині Хенкса (HBSS) ДНК вставки підтверджується для обох спіралей з двовалентними катіонами і повторно суспендуБакміду, отриману з використанням pFastBac у Е 6 ють з ЩІЛЬНІСТЮ 2 х 10 /мл в HBSS, що містить 1% coh DHIOBac, трансфікують в клітини комах SF9 BSA Диференціальні ВІДЛІКИ, ЯКІ зчитуються з виВірусні частки потім розмножуються до стадій Р1, користанням аналізатора Abbott Cell Dyn 3500, Р2, РЗ Вірус РЗ інфікують вклітини комах, як SF9, показують, що моноцити становлять оті 7 до 24% так і High Five, і вирощують при 27°С протягом 48 від загального числа клітин в цих препаратах годин Середовище збирають і використовують для досліджень і подальшого очищення 180мкл клітинної суспензії аліквотують в 96лункові планшети з плоским дном (Costar) ДодатФерментативна реакція ки сполук і LPS (кінцева концентрація 100нг/мл) Реакція, та, що проводиться на 96-лунковому дає кінцевий об'єм 200мкл Всі умови відтворюпланшеті (Dynatech) складається з 70мкл буферються трикратно Після чотирьох годин інкубації ного розчину (25мМ Hepes-HCI, pH 7,5, плюс при 37°С в інкубаторі з атмосферою зволоженого 20мкМ ZnCb), Юмкл ЮОмкМ субстрату з гасінням СОа планшети видаляють і центрифугують (10 флуоресценції, Юмкл розчину сполуки, що досліхвилин приблизно при 250 х д), і супернатанти джується в ДМСО (5%), і кількостей ферменту гвидаляють і досліджують на зміст TNF-a з викориТАСЕ, яке викликає 50% розщеплення через 60 станням набору R&D ELISA Kit хвилин - при загальному об'ємі ЮОмкл Специфічність ферментативного розщеплення амідного Інгібування продукування розчинного TNF-a зв'язку між аланіном і валіном перевіряють з доЗдатність сполук або їх фармацевтично припомогою ВЕРХ і мас-спектрометри Початкові йнятних солей до інгібування вивільнення клітинашвидкості розщеплення відстежують шляхом вими TNF-a і, як наслідок, щоб продемонструвати їх мірювання швидкості збільшення інтенсивності ефективність при лікуванні захворювань, що вклюфлуоресценції на 530нм (збудження на 409нм) чають дисрегуляцію розчинного TNF-a, демон 22 21 55526 протягом ЗО хвилин Експеримент контролюють показують, що моноцити складають від 17 до 24% таким чином 1) по базовій флуоресценції субстравід загального числа клітин в цих препаратах ту, 2) по флуоресценції повністю розщепленого 180мкл клітинної суспензії аліквотують в 96субстрату, 3) по гасінню або приросту флуоресцелункові планшети з плоским дном (Costar) Додатнції розчинами, що містять, сполуку, що досліджуки сполук і LPS (кінцева концентрація 100нг/мл) ється дає кінцевий об'єм 200мкл Всі умови відтворюються трикратно Після чотирьох годин інкубації Дані аналізують таким чином Швидкості "конпри 37°С в інкубаторі з атмосферою зволоженого трольних" реакцій, що не містять сполуки, що доСОг планшети видаляють і центрифугують (10 сліджується, опосереднюють для визначення знахвилин приблизно при 250 х д) і супернатанти вичення 100% Швидкість реакції в присутності даляють і досліджують на зміст TNF-a з викориссполуки, що досліджується порівнюють з швидкістанням набору R&D ELISA Kit тю у відсутність сполуки і табулюють як "процент від контролю, що не містить сполуки, що досліДослідження агреканази джується" Будують графіки "% від контролю" як Первинні свині хондроцити з хряща суглобів функції від логарифму концентрації сполуки, і виКІНЦІВКИ виділяють за допомогою послідовного значають положення точки, відповідної половині розщеплення трипсину і колагенази з подальшим максимального значення функції або значенню розщепленням колагенази протягом ночі і розміІС50 щують по 2 х 10 5 клітин на лунку в 48-лункові планшети при 5мкКюри/мл 35 S (1000 Кюрі/ммоль) Всі сполуки по даному винаходу мають знасірки, в планшети, покриті колагеном типу І Клітичення ІСбо, менші, ніжімкМ, переважно, менші, ніж нам надають можливість інкорпорувати мітку в їх 50нМ Найбільш переважні сполуки по даному випротеоглікановий матрикс (близько 1 тижня) при находу, є, щонайменше, в 100 разів менш сильно37°С, в атмосфері з 5% СОг діючими по відношенню до г-ММР-1, ніж у вказаних вище дослідженнях ТАСЕ У ніч перед початком дослідження моношари Дослідження моноцитів людини хондроцитів промивають два рази DMEM/1% Моноцити людини виділяють з обробленої анPSF/G, а потім залишають для інкубації протягом тикоагулянтом крові людини з використанням одночі в свіжому DMEM / 1 % FBS ностадійного методу розділення з допомогою фіНа наступний ранок хондроцити промивають кол-хайпак (2) Моноцити промивають три рази в один раз в DMEM/1%PSF/G Останній промивці збалансованому сольовому розчині Хенкса (HBSS) дозволяють осісти на планшети в інкубаторі під з двовалентними катіонами і повторно суспендучас здійснення розбавлення ють з ЩІЛЬНІСТЮ 2 х 106/мл в HBSS, що містить 1% Середовища і розбавлення можуть бути отриBSA Диференціальні ВІДЛІКИ, ЩО зчитуються з мані, як описано нижче в таблиці використанням аналізатора Abbott Cell Dyn 3500, Контрольні середовища Середовища IL-1 Розбавлення лікарських засобів Тільки DMEM (контрольні середовища) DMEM + ІІ_-1(5нг/мл) Приготування всіх початкових розчинів сполук при ЮмМ ДМСО Приготування ЮОмкМ початкового розчину кожної сполуки в DMEM в 96-лунковому планшеті Зберігання в холодильнику протягом ночі Приготування на наступний день послідовних розбавлень в DMEM з IL-1 до 5мкМ, 500нМ і 50нМ Відсмоктування останньої промивки з лунок і додавання 50мкл сполуки з вказаних вище розбавлень до 450мкл середовищ IL-1 у ВІДПОВІДНІ лунки 48-лункових планшетів Кінцеві концентрації сполуки рівні 500нМ, 50нМ і 5нМ Всі ВІЛЬНІ лунки заповнюються трикратно пробами з контролем і одним тільки IL-1 в кожній лунці Планшети мітять і використовують тільки внутрішні 24 лунки на планшеті На одному з планшетів декілька рядів лунок позначають як IL-1 (без ЛІКІВ) І контроль (без IL-1, без ЛІКІВ) 3 ЦИХ контро льних рядів періодично знімаються ВІДЛІКИ ДЛЯ відстеження виходу протеоглікану, міченого S Середовища з контролем і IL-1 додають в лунки (450мкл) з подальшим додаванням сполуки (50мкл) таким чином, щоб ініціювати дослідження Планшети шкубують при 37°С, в атмосфері з 5% СО2 При 40 - 50% вивільнення (коли число ВІДЛІКІВ на хвилину від серед IL-1 в 4 - 5 разів більше ніж в контрольних середовищах), що оцінюється по відліках сцинтиляцій в рідині (LSC) зразків середовищ, дослідження закінчують (через 9 - 1 2 годин) Середовища видаляють з всіх лунок і вміщують в СЦИНТИЛЯЦІЙНІ пробірки Додають сцинтиляційну рідину, і реєструють ВІДЛІКИ радіоактивності (LSC) Для солюбілізацм шарів клітин в кожну лунку додають 500мкл буферу з папашовим гідролізатом (0,2М Тріс, рН 7,0, 5мМ EDTA, 5мМ DTT, і 1мг/мл папашу) Планшети з розщеплюючим розчином шкубують при 60°С протягом ночі Шар клітин видаляють з планшета на наступний день і вміщують в СЦИНТИЛЯЦІЙНІ пробірки Потім додають сцинтилят, і реєструють ВІДЛІКИ зразків (LSC) Процент ВІДЛІКІВ від вивільненого ферменту визначається від загальної КІЛЬКОСТІ, присутньої в кожній лунці Визначаються середні значення по трьох точках, і віднімаються значення для контролю для кожної лунки Процент інгібування для сполуки відлічують від зразків з IL-1 в якості 0% інгібування (100% від загального числа ВІДЛІКІВ) 24 23 55526 Для введення ссавцям, включаючи людей, для вах легко здійснюють за допомогою стандартних інгібування матриксних металопротеїназ або профармацевтичних методик, добре відомих фахівдукування фактора некрозу пухлини (TNF), може цям в даній області У випадку тварин, сполуки бути використана безліч звичайних способів, можуть вводитися внутрішньом'язово або підшкірвключаючи пероральне, парентеральне і місцеве не при рівнях доз від близько 0,1 до 50мг/кг/день, введення Як правило, активну сполуку вводять переважно від 0,2 до 10мг/кг/день, в одній дозі або перорально і парентерально при дозуванні в меаж до 3 розділених доз жах від близько 0,1 і 25мг/кг маси тіла суб'єкта, що Для місцевого очного введення безпосереднє зазнає лікування, на добу, переважно від близько нанесення на підлягаюче впливу око може викори0,3 до 5мг/кг Однак обов'язково буде здійснювастовуватися в формі приготування очних крапель, тися деякі зміни дозування в залежності від стану аерозолів, гелів або мазей, або може бути вклюсуб'єкта, що зазнає лікування Обличчя, відповідачене в очний щиток з колагену (такого як полі-2льне за введення, буде в кожному випадку визнапдроксиетилметакрилат і його співполімери), або з чати відповідне дозування для індивідуального гідрофільного полімеру Матеріали можуть також суб'єкта наноситися у вигляді контактної лінзи або за допомогою локального резервуара, або як субкон'юСполуки по даному винаходу можуть вводитиктивальний препарат ся у вигляді великого числа різних лікарських форм, як правило, терапевтичне ефективні сполуДля введення в очниці, як правило, готують ки по даному винаходу присутні в таких дозованих стерильний розчин для ІН'ЄКЦІЙ активного інгредієформах при рівнях концентрації, що знаходяться в нта Можуть бути використані розчини терапевтимежах від близько 5,0% до близько 70% масових чної сполуки по даному винаходу у водному розчині або суспензії (розмір часток, менший, ніж 10 Для перорального введення, можуть бути вимікрон) Водні розчини повинні містити ВІДПОВІДНИЙ користані таблетки, що включають різні наповнюбуфер, і значення рН повинні бути встановлені вачі, такі як мікрокристалічна целюлоза, цитрат переважно між 5 і 8, якщо необхідно, і рідкий рознатрію, карбонат кальцію, фосфат дикальцію і гліріджувач спочатку повинен бути зроблений ІЗОТОцин, разом з різними розрихлювачами, такими як НІЧНИМ Для збільшення в'язкості або для сповількрохмаль (і переважно крохмаль з кукурудзи, карнення вивільнення можуть бути додані невеликі топлі і тапюки), альпнова кислота і деякі комплекКІЛЬКОСТІ полімерів (таких як целюлозні полімери, сні силікати, разом із зв'язуючими для гранулюдекстран, поліетиленгліколь, або альпнова кисловання, такими як полівшілпіролідон, сахароза, та) Такі розчини придатні для використання з межелатин і смола акації Крім того, для цілей таблетою введення в очницю Приготування всіх цих тування часто є дуже корисними мастячі агенти, розчинів в стерильних умовах легко здійснюється такі як стеарат магнію, лаурилсульфат натрію і за допомогою стандартних фармацевтичних метальк Тверді композиції подібного типу можуть тодик, добре відомих фахівцям в даній області У також бути використані як наповнювачі в желативипадку тварин, сполуки можуть вводитися в очнових капсулах, переважні матеріали в зв'язку з ницю при рівнях доз від близько 0,1 до цим також включають лактозу або молочний цу50мг/кг/день, переважно від 0,2 до 10мг/кг/день, в кор, а також високомолекулярні поліетиленгліколи одній дозі або аж до 3 розділених доз Коли для перорального введення є бажаними водні суспензії і/або еліксири, активний інгредієнт Активні сполуки по даному винаходу також може бути об'єднаний з різними підсолоджуючими можуть бути представлені у вигляді ректальних або ароматизуючими агентами, фарбувальним композицій, таких як супозиторії, або клізм, що матеріалом або барвником, і, якщо це бажане, з втримуються, наприклад, що містять звичайні осемульгуючими і/або суспендуючими агентами, а нови для супозиторіїв, такі як масло какао або ІНШІ також з такими розріджувачами як вода, етанол, гліцериди пропіленгліколь, гліцерин, і з різними подібними їх Для назального введення або введення шляпоєднаннями У випадку тварин вони переважно хом інгаляції, активні сполуки по даному винаходу містяться в кормі або питній воді при концентрації можуть бути зручно доставлені у вигляді розчину 5-5000 частин на мільйон, переважно від 25 до 500 або суспензії з контейнера із закачаним спреєм, частин на мільйон який стискується або прокачується пацієнтом, або у вигляді аерозолю з контейнера, що знаходиться Для парентерального введення (внутрішньопід тиском або розпилювача з використанням ВІДм'язового, внутрішньочеревного, підшкірного і внуПОВІДНОГО пропеланту, наприклад, дихлордифтортрішньовенного використання), як правило, пригометану, трихлорфторметану, дихлортетрафторетовляють стерильний розчин для ІН'ЄКЦІЙ тану, двоокису вуглецю або іншого ВІДПОВІДНОГО активного інгредієнта Можуть бути використані газу У випадку аерозолю, що знаходиться під тисрозчини терапевтичної сполуки по даному винахоком, стандартне дозування може визначатися ду або в кунжутному або в арахісовому маслі, або шляхом створення клапана для доставки відміряу водному розчині пропіленгліколю У водних розної КІЛЬКОСТІ Контейнер, що знаходиться під тисчинах повинен міститися буфер, і повинен бути ком або розпилювач може містити розчин або сувстановлений рН, більший, ніж 8, якщо, це необспензію активної сполуки Капсули і картріджи хідне, і рідкий розріджувач спочатку повинен бути (виготовлені, наприклад, з желатину) для викорисзроблений ІЗОТОНІЧНИМ Ці ВОДНІ розчини є придаттання в інгаляторі або при вдуванні можуть бути ними для внутрішньовенних ІН'ЄКЦІЙ Масляні розвиготовлені, як утримуючу порошкоподібну суміш чини є придатними для внутрішньосуглобних, внусполуки по даному винаходу і відповідної пороштрішньом'язових і підшкірних ІН'ЄКЦІЙ коподібної основи, такої як лактоза або крохмаль Приготування всіх цих розчинів в стерильних умо 26 25 55526 Даний винахід ілюструється за допомогою наДо розчину етилового ефіру 4ступних далі прикладів приготування і прикладів, амшотетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти (7,00 але не є обмеженим їх деталями грам, 0,0404 моль) в N.N-диметилформаміді (40мл) додають триетиламін (5,94мл, 0,043 моль) Приклад 1 Додають по частинах твердий 4-(4Гідроксиамід 4-Г4-С4фторфенокси)бензолсульфонілхлорид (12,165 фторфенокграм, 0,0424 моль) Отриману суміш перемішують си)6ензолсудьфоніламіно!тетрапдропіран-4при кімнатній температурі протягом 16 годин, і карбонової кислоти потім велику частину розчинника видаляють шля(А) Етиловий ефір 4-[Nхом випаровування у вакуумі Залишок розподіля(дифенілметилен)аміно1-тетрапдропіран-4ють між насиченим розчином бікарбонату натрію і карбонової кислоти дихлорметаном Водний шар екстрагують дихлорДо суспензії гідриду натрію (6,56 грам 0,164 метаном Об'єднані органічні шари промивають моль) в диметиловому ефірі етиленгліколю насиченим сольовим розчиномі сушать над суль(150мл) при 0°С по краплях через лійку додають фатом натрію Випаровування розчинника у вакурозчин етилового ефіру Nумі дає сирий етиловий ефір 4-[4-(4(дифенілметилен)гліцину (20,60 грам, 0,07398 фторфенокмоль) в диметиловому ефірі етиленгліколю (50мл) Розчин 2-брометилового ефіру (23,21 грам, 0,090 моль) в диметиловому ефірі етиленгліколю (50мл) потім додають приблизно протягом 5 хвилин, Юмл частинами, до розчину диметилового ефіру етиленгліколю Крижану баню видаляють і реакційну суміш перемішують при кімнатній температурі протягом 16 годин Суміш розбавляють діетиловим ефіром і промивають водою Водний шар екстрагують діетиловим ефіром Об'єднані органічні екстракти промивають насиченим сольовим розчином, сушать над сульфатом магнію, і концентрують з отриманням каламутного жовтого масла (28,692 грам) Хроматографія на силікагелі, елюювання спочатку 4л 5% етил ацетату/гексану, потім 4 літрами 10% етилацетату/гексану дає етиловий ефір 4-[І\І-(дифенілметилен)аміно]тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти у вигляді прозорого жовтого масла (16,114г, 64%) 1 НЯМР (CDCI3) 5 7,58 (д, 2Н), 7,36 (м, 4Н), 7,28 (т, 2Н), 7,08 (м, 2Н), 3,99 (м, 2Н), 3,70, (м, 2Н), 3,66 (кв, 2Н), 2,10 (м, 2Н), 1,99 (м, 2Н), 1,08 (т, ЗН) MS Мас-спектри при ХІМІЧНІЙ іонізації і при атмосферномутиску 338 (М+ + 1) (B) Етиловий ефір 4-амінотетрапдропіран-4карбонової кислоти До розчину етилового ефіру 4-[N(дифенілметилен)амшо]-тетрапдропіран-4карбонової кислоти (16,0 грам 0,047 моль) в діетиловому ефірі (120мл) додають ЇМ водний розчин соляної кислоти (ЮОмл) Суміш інтенсивно перемішують при кімнатній температурі протягом 16 годин Шари ВІДДІЛЯЮТЬ і водний шар промивають діетиловим ефіром Водний шар доводять до значення рН 10 за допомогою розбавленого водного розчину гідроксиду амонію і екстрагують дихлорметаном Органічний екстракт сушать над сульфатом натрію і концентрують з отриманням етилового ефіру 4-амшотетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти (7,128г, 71,7%) у вигляді масла 1 Н ЯМР (CDCfl3) 5 4,15 (кв, 2Н), 3,82 (м, 2Н), 3,62 (м, 2Н), 2,07 (м, 2Н), 1,60 (с, 2Н), 1,44 (м, 2Н), 1,24 (т, ЗН) 13С ЯМР (CDCfl3) d 176,48, 63,70, 61,09, 54,78, 35,05, 14,15 MS Мас-спектри при ХІМІЧНІЙ іонізації і при атмосферному тиску 210 (М+ + 1) (C) Етиловий ефір 4-Г4-Ифторфенокси)бензолсульфоніламіно!тетрапдропіран-4карбонової кислоти си)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4карбонової кислоти у вигляді янтарного масла (21,05 грам) Флеш-хроматографія на силікагелі з елююванням 25% етилацетатом/гексаном, а потім 50% етилацетатом/гексаном дає етиловий ефір 4[4-(4-фторфенокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти у вигляді майже білого кристалічного твердого продукту (12,15 грам, 71%, т п л 116-117°С) 1Н ЯМР (СОСІз) 5 7,79 (д, 2Н), 7,09 (т, 2Н) 7,02 (м, 2Н), 6,97 (д, 2Н), 5,10 (з, 1Н), 4,01 (кв, 2Н), 3,60 (м, 4Н), 2,08 (м, 2Н) 1,84 (ушир, д, 2Н), 1,23 (т, ЗН) МС Мас-спектри при ХІМІЧНІЙ іонізації і при атмосферному тиску 424 (М+ + 1) (D) 4-Г4-ИФторфенокси)бензолсульфоніламіно!тетрапдропіран-4карбонова кислота Спосіб А Розчин етилового ефіру 4-[4-(4фторфенокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4карбонової кислоти (12,1 грам, 0,0286 моль) в тетрапдрофурані (190мл) обробляють водним розчином З М гідроксиду натрію (95мл, 0,286 моль) і перемішують при кімнатній температурі протягом 4 днів Розчинник випаровують у вакуумі і залишок розподіляють між водою і діетиловим ефіром Водний шар промивають діетиловим ефіром, підкисляють до рН, рівного 1, Зн водним розчином соляної кислоти і екстрагують дихлорметаном Після промивання водою, органічний екстракт сушать над сульфатом натрію і концентрують з отриманням 4-[4-(4-фторфенокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти (11,241 грам, 99%) у вигляді жовтуватої твердої піни Спосіб В Розчин етилового ефіру 4-[4-(4фторфенокси)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4карбонової кислоти (34,19 грам, 0,807 моль) в етанолі (ЗЗОмл) обробляють водним розчином ЗМ гідроксиду натрію (ЗЗОмл, 0,990 моль) і нагрівають із зворотним холодильником протягом ночі Розчинник випаровують у вакуумі і залишок розподіляють між водою і діетиловим ефіром Водний шар промивають діетиловим ефіром, підкисляють до рН 1 водним розчином Зн соляної кислоти і екстрагують етилацетатом Після промивання водою 28 27 55526 органічний екстракт сушать над сульфатом натрію карбонової кислоти (5,941 грам, 64%, т пл 176 і концентрують з отриманням 4-[4-(4177°С) у вигляді білого кристалічного твердого фторфенокпродукту Маточну рідину випаровують і залишок кристалізують з 50% метанол/дихлорметану з си)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4отриманням ще пдроксиаміда 4-[4-(4карбонової кислоти (31,26 грам, 98%) у вигляді фторфенокбілого кристалічного твердого продукту 1 си)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4Н ЯМР (CDCI3) 5 7,73(д, 2Н), 7,03 (т, 2Н) 6,96 карбонової кислоти (0,660 грам, т пл 184 - 185°С) (м, 2Н), 6,91 (д, 2Н), 3,56 (м, 2Н), 3,43 (ушир, м, у вигляді білих голок Маточну рідину знов випароЗН), 2,01 (м, 2Н) 1,80 (ушир, д, 2Н) МС Масвують і залишок кристалізують з метаспектри при ХІМІЧНІЙ іонізації і при атмосферному + нол/дихлорметану з отриманням ще продукту тиску 394 (М -1) (- іон) (1,861 грам, т пл 176 - 177°С) Перекристалізація (Е) N-бензилоксиамід 4-Г4-Ипершої порції з метанолу/дихлорметану дає аналіфторфенокси)бензолсульфоніламіно1тичне чистий гідроксиамід 4-[4-(4тетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти фторфенокДиїзопропілетиламш (3,89 грам, 0,030 моль) і си)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4(бензотіазол-1карбонової кислоти (3,091 грам, т пл 184 - 185°С) илокси)трис(диметиламіно)фосфоній гексафторСпосіб В фосфат (13,27 грам, 0,030 моль) додають послідовно до розчину 4-[4-{4-фторфенокси)Оксалілхлорид (11,83 грам, 0,0932 моль, бензолсульфоніламіно]тетрапдропіран-41,1екв) і ДМФ (0,13мл) додають до суспензії, що карбонової кислоти (11,22 грам 0,028 моль) в безперемішується карбонової кислоти (33,25 грам, водному N.N-диметилформаміді (140мл) Отрима0,0841 моль) в сухому метиленхлориді (ЗООмл) ний розчин перемішують при кімнатній температупри кімнатній температурі Спостерігається деяке рі протягом 16 годин Потім ще додають утворення пухирців Суспензію, яка повільно стає диїзопропілетіламін (4,0мл, 0,051 моль) і Ожовтуватим розчином, перемішують протягом ночі бензилпдроксиламшпдрохлорид (5,46 грам 0,034 при кімнатній температурі У цей час, розчин пдмоль) і отриману суміш перемішують при 60°С рохлориду пдроксиламіну (7,65 грам, 0,110 моль протягом 18 годин Після концентрування у вакуумі 1,3екв) в сухому пірідині (51,4мл, 0,635 моль, залишок обробляють 0,5н водним розчином соля7,5екв) при 0°С обробляють хлортри мети лей ланої кислоти і екстрагують етилацетатом Органічном, спричиняючи утворення білого осадка Цю ний екстракт промивають насиченим водним розсуспензію перемішують при кімнатній температурі чином бікарбонату натрію, водою, і насиченим протягом ночі Обидві колби потім охолоджують до сольовим розчином Розчин сушать над сульфа0°С і додають розчин хлорангідриду кислоти до том магнію, відфільтровують і концентрують до суспензії силілованого пдроксиламіну Отриману однієї четвертої від початкового об'єму Додавансуміш перемішують при 0°С протягом 1 години і ня такого ж об'єму гексану осаджає Nпри кімнатній температурі протягом 2 годин Добензилоксиамід 4-[4-(4дають ЮООмл водного розчину 2н НСІ і перемішують при кімнатній температурі протягом 1 години фторфенокШари розділяють, водний шар екстрагують три си)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4рази етилацетатом (500мл) Об'єднані органічні карбонової кислоти (11,595г, 81,6%) у вигляді білошари промивають водою і насиченим сольовим го кристалічного твердого продукту (т пл 175 розчином і сушать над сульфатом магнію, відфіль176°С) тровують, і об'єм фільтрату зменшують до ЗООмл, 1 Н ЯМР (CDCI3) 5 7,76 (д, 2К), 7,35 (м, 5Н), 7,05 при цьому осаджується велика КІЛЬКІСТЬ білого (т, 2Н), 6,96 (м, 4Н) 5,38 (ушир с, 1Н), 4,86 (з, 2Н), кристалічного твердого продукту Його охолоджуЗ 57 (м, 2Н), 344 (м, 2Н), 2,01 (м, 2Н), 1,77 (ушир, ють протягом ночі в холодильнику Твердий прод, 2Н), 1 54 (ушир, з, 1Н) МС при ХІМІЧНІЙ іонізації і дукт збирають шляхом вакуумного фільтрування, + при атмосферному тиску 501 (М + 1) промивають холодним 1 1 етилацета(F) Гідроксиамід 4-Г4-Итом/гексаном і сушать у високому вакуумі з отрифторфенокси)бензолсульфонілманням 30,311 грамів бажаної пдроксамової кисаміноітетрапдропіран-4-карбоновоі кислоти лоти (87,8%) у вигляді білого кристалічного Спосіб А твердого продукту (т пл 189-190°С) Розчин М-бензилоксиаміду 4-[4-(41 Е ЯМР (de ДМСО) 5 10 35 (ушир, з, 1Н), 8,68 фторфенок(ушир, з, 1Н), 7,78 (ушир, з, 1Н), 7,74 (д, 2Н), 7,26 си)бензолсульфоніламшо)тетрапдроліран-4(т, 2Н), 7,16 (м, 2Н), 7,04 (д, 2Н), 3,40 (м, 2Н), 3,31 карбонової кислоти (11,28 грам, 0,0225 моль) в (м, 2Н), 1,78 (м, 4Н) 13С ЯМР (DMSO) 5 169,65, етилацетаті (600мл) обробляють 5% паладієм на 160,66, 137,50, 129,39, 122,34, 122,25, 117,75, сульфаті барію (5,0 грам) і гідрують в апараті Пар117,44, 117,24, 62,94, 58,45, 33,34 MS Масра зі струшуванням при тиску 3 атмосфери протяспектри при ХІМІЧНІЙ іонізації і при атмосферному гом 18 годин Після фільтрування через найлон тиску 409 (М+ -1) (- іон) (розмір пір 0,45мМ) для видалення каталізатора, шар на фільтрі промивають метанолом Об'єднаПриклад приготування А ний фільтрат і промивну рідину випаровують і за4-(4-Фторфенокси)бензолсульфонілхлорид лишок витягують гарячим метанолом ОхолоджуХлорсульфонову кислоту (26мл, 0,392 моль) вання дає сирий гідроксиамід 4-[4-(4додають по краплях до охолодженого на льоді 4фторфенокфторфеноксибензолу (36,9 грам, 0,196 моль) з си)бензолсульфоніламшо]тетрапдропіран-4механічним перемішуванням Коли завершується ЗО 29 55526 додавання, суміш перемішують при кімнатній темграми (90%) пературі протягом 4 годин Суміш потім виливають Приклад приготування F у воду з льодом Продукт, 4-(44-Фторбіфенілсульфонілхлорід фторфенокси)бензолсульфонілхлорид (18,6 грам, Хлорсульфонову кислоту (8,7мл, 0,13 33%), збирають шляхом фільтрування і сушать на моль) додають по краплях до 4-фторбіфенілу (10,2 повітрі грам, 59мМоль), перемішуючи при цьому на крижаній бані Перемішування продовжують з охолоПриклад приготування В джуванням на льоду протягом 0,5 години, і потім Натрій 4-(3-метилбутокси)бензолсульфонат реакційну суміш виливають на лід Отриманий Розчин 4-пдроксибензолсульфоновоі кислоти білий осадок збирають шляхом фільтрування і (10,0 грам, 43,1мМоль) і гідроксиду натрію (3,3 розчиняють в хлороформі Розчин хлороформу грам, 83мМоль) у воді (40мл) перемішують з розпромивають водою і насиченим сольовим розчичином 1-йод-З-метилбутану (11,3мл, 86,4мМоль) в ном, сушать над сульфатом магнію і концентрують ізопропанолі (60мл), і отриману суміш нагрівають з отриманням білого твердого продукту Бажаний із зворотним холодильником протягом 2 днів Ізопродукт, 4-фторбіфенілсульфоніл хлорид (4,3 пропанол видаляють шляхом випаровування у грам, 27%), ВІДДІЛЯЮТЬ від 4вакуумі Вказану в заголовку сполуку, 10,0 грам фторбіфенілсульфонової кислоти (небажаний по(87%), збирають шляхом фільтрування і промивабічний продукт) шляхом кристалізації останнього з ють ізопропанолом етилацетату і кристалізації матеріалу, що залишиПриклад приготування С вся з гексану 4-(3-Метилбутокси)бензолсульфонілхлорид Суміш натрій 4-(3Приклад приготування G метилбутокси)бензолсульфонату (2,5 грам, Натрій 4-(4-Фторбензилокси)бензолсульфонат 9,4мМоль), тюнілхлориду (Юмл) і 5 крапель К,КДо розчину 4-пдроксибензолсульфоновоі диметилформаміду нагрівають із зворотним холокислоти (5,13 грам, 22,1мМоль) у водному розчині дильником протягом 5 годин Після охолоджуван1 н гідроксиду натрію (23мл) додають розчин 4ня надлишок тюнілхлориду випаровують і залишок фторбензилброміду (3,3мл, 26,5мМоль) в етанолі витягують етилацетатом Розчин охолоджують на (20мл) Отриману суміш нагрівають із зворотним крижаній бані і додають воду Органічну фазу вихолодильником протягом 2 днів При охолоджупаровують і промивають водою і насиченим сованні і відстоюванні осаджується білий твердий льовим розчином Після сушки над сульфатом продукт Осаджений продукт, натрій 4-(4натрію розчинник випаровують з отриманням вкафторбензилокси)бензолсульфонат, 4,95 грам заної в заголовку сполуки у вигляді масла, 2,34 (74%) збирають шляхом фільтрування і промиваграма (95%) ють етилацетатом і діетиловим ефіром Приклад приготування D Приклад приготування Н Натрій 4-(24-(4-Фторбензилокси)бензолсульфонілхлорид циклопентилетокси)6ензолсульфонат До суспензії натрій 4-(4фторбензилокси)бензолсульфонату (0,5 грам, Розчин 4-пдроксибензолсульфоновоі кислоти 1,64мМоль) в метиленхлориді (5мл) додають пен(6,5 грам, 28,2мМоль) і гідроксиду натрію (2,2 грам тахлорид фосфору (275мг, 1,31мМоль) Отриману 55мМоль) у воді (15мл) змішують з розчином 2суміш нагрівають із зворотним холодильником (брометил)циклопентану (15,0 грам, 84,7мМоль) в протягом 7 годин Після охолоджування на крижаізопропанолі (40мл) і отриману суміш нагрівають із ній бані і гасіння водою (15мл) суміш екстрагують зворотним холодильником протягом 2 днів Ізоетилацетатом Органічну фазу промивають насипропанол видаляють шляхом випаровування у ченим сольовим розчином, сушать над сульфатом вакуумі Вказану в заголовку сполуку, 4,7 грам натрію і концентрують з отриманням 4-(4(57%), збирають шляхом фільтрування і промивафторбензилокси)бензолсульфонілхлориду у виють ізопропанолом гляді білого твердого продукту (130мг, 26%) Приклад приготування Е 4-(3-Метилбутокси)бензолсульфонілхлорид Приклад приготування І Суміш натрій 4-(24-(4-Хлорфенокси) бензол сул ьфонілхл ори д циклопентилетокси)бензолсульфонату (2,5 грам, Хлорсульфонову кислоту (9,7мл, 0,147 моль) 8,6мМоль), тионілхлориду (15мл), і декількох крадодають по краплях до 4-хлорфеноксибензолу пель N.N-диметилформаміду нагрівають із зворо(12,6мл, 73,4мМоль) при кімнатній температурі з тним холодильником протягом 5 годин Після охоперемішуванням Коли додавання закінчується, лоджування надлишок тюнілхлориду випаровують суміш перемішують при кімнатній температурі проі залишок витягують етилацетатом Розчин охолотягом 1 години і потім виливають у воду з льодом джують на крижаній бані і додають воду Органічну Твердий продукт збирають шляхом фільтрування, фазу ВІДДІЛЯЮТЬ і промивають водою і насиченим сушать на повітрі, і перекристалізовують з петросольовим розчином Після сушки над сульфатом лейного ефіру і етилацетату з отриманням 4-(4натрію розчинник випаровують з отриманням вкахлорфенокси)бензолсульфонілхлориду (7,43 грам, заної в заголовку сполуки у вигляді масла, 2,24 33%) 31 55526 Підписано до друку 05 05 2003 р 32 Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24