Похідні амінохіноліну і амінопіридину і їх використання як лігандів а3 аденозину

1. Сполуки загальної формули (I) C2 2 (19) 1 3 77183 4 два або три атоми азоту, або один атом азоту і X означає -CН2-, -NH-, -NR8- або атом сірки, або один атом кисню, або один атом азоту і один атом атом кисню, або сульфогрупу, або сульфоксигрусірки, необов’язково, заміщений однією або більпу, де R8 означає нерозгалужений або розгалужешою кількістю нерозгалужених або розгалужених ний С1-4 алкіл або C3-6 циклоалкіл-; С1-4 алкільних груп, нерозгалужених або розгалуn означає нуль, 1 або 2, жених С1-4 алкоксигруп або атомів галогену; і їх солі і сольвати, ізомери і їх солі і сольвати. X означає -CH2-, -NH-, -NR8- або атом сірки, або 3. Сполуки формули (IA) згідно з пунктом 2, в якій атом кисню, або сульфогрупу, або сульфоксигруR1 означає атом водню або метил; 8 пу, де R означає нерозгалужений або розгалужеR2 означає атом водню або метил; ний С1-4 алкіл або C3-6 циклоалкіл-; R3 означає феніл, тієніл або фурил; n означає нуль, 1 або 2, R9, R10, R11 і R12 означають, незалежно, атом воді їх солі і сольвати, ізомери і їх солі і сольвати. ню або нерозгалужений або розгалужений С1-4 2. Сполуки загальної формули (IA) згідно з пункалкіл, або нерозгалужений або розгалужений C1-4 том 1 алкокси, або гідрокси, або атом галогену, або 3 R9 і R12 означають атом водню і R10 і R11 утворюR 1 2 ють разом метилендіоксигрупу; (CR R )n R6 означає атом водню або ціано; 12 R X R7 означає 4-метоксифеніл, 3-метилфеніл, 36 11 R R метоксифеніл, 3-тієніл або 3-фурил, (IA) O X означає -NH- або атом кисню, і n означає 1, 7 10 N R R N і їх солі, сольвати, ізомери і їх солі і сольвати. 9 R H 4. Сполуки згідно з пунктами 1-3, які є наступними: , 3-метил-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2де R1 означає атом водню або нерозгалужений іл)бензамід; або розгалужений С1-4 алкіл; 4-метокси-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2R2 означає атом водню або нерозгалужений або іл)бензамід; розгалужений С1-4 алкіл; 3-метоксиN-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-23 R означає атом водню або нерозгалужений або іл)бензамід; розгалужений С1-4 алкіл, або феніл, тієніл або фу3,4-метилендіокси-N-(4-бензиламіно-3рил, необов’язково, заміщений однією або більціанохінолін-2-іл)бензамід; шою кількістю нерозгалужених або розгалужених N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2-іл)тіофен-3С1-4 алкільних груп, нерозгалужених або розгалукарбоксамід; жених С1-4 алкоксигруп або атомів галогену, або N-(4-[2-тієнілметиламіно]-3-ціанохінолін-2для 5- або 6-членного гетероароматичного кільця іл)тіофен-3-карбоксамід; містить один, два або три атоми азоту, або один 4-метокси-N-(4-[2-тієнілметиламіно]-3-ціанохінолінатом азоту і один атом кисню, або один атом азоту 2-іл)бензамід; і один атом сірки, необов’язково, заміщений одні3,4-метилендіокси-N-(4-[2-тієнілметиламіно]-3єю або більшою кількістю нерозгалужених або ціанохінолін-2-іл)бензамід; розгалужених С1-4 алкільних груп, нерозгалужених N-(4-[2-фурилметилaміно]-3-ціанохінолін-2або розгалужених С1-4 алкоксигруп або атомів гаіл)фуран-2-карбоксамід; логену; N-(4-[2-фурилметиламіно]-3-ціанохінолін-2R9, R10, R11 і R12, незалежно, означають атом воділ)тіофен-2-карбоксамід ню або нерозгалужений або розгалужений С1-4 і їх солі, сольвати, ізомери і їх солі і сольвати. алкіл, або нерозгалужений або розгалужений С1-4 5. Спосіб одержання сполуки загальної формули алкокси, або гідрокси або атом галогену, або (I), її солей, сольватів, ізомерів і їх солей і сольваR9 і R12 означають атом водню і R10 і R11 утворютів, де в формулі R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, X і n ють разом метилендіоксигрупу; мають значення, вказані в пункті 1, який характеR6 означає атом водню або ціано, амінокарбоніл, ризується тим, що проводять селективний гідроліз С1-4 алкоксикарбоніл або карбокси; біскарбоксаміду загальної формули (II) 7 3 R означає атом водню або нерозгалужений або R розгалужений С1-4 алкіл, або феніл, бензил, тієніл 1 2 (CR R )n або фурил, необов’язково, заміщений метилендіоксигрупою або однією або більшою кількістю неX розгалужених або розгалужених С1-4 алкільних 6 4 R R груп, нерозгалужених або розгалужених С1-4 алкоO (II) ксигруп, гідроксигруп, трифторметильних груп, ціаногруп або атомів галогену, або для 5- або 65 7 R N R N членного гетероароматичного кільця містить один, два або три атоми азоту, або один атом азоту і 7 O R один атом кисню, або один атом азоту і один атом , сірки, необов’язково, заміщений однією або більв якій R1, R2, R3, R4, R3, R6, R7, R8, X і n мають знашою кількістю нерозгалужених або розгалужених чення вказані в пункті 1, і, при бажанні, трансфорС1-4 алкільних груп, нерозгалужених або розгалумують замісники сполуки загальної формули (I), жених С1-4 алкоксигруп або атомів галогену, одержаної таким чином, один в одний за допомо 5 77183 6 гою способів відомих per se, і/або трансформують клад, риніт, відповіді на отруєння плющем, крописполуку загальної формули (I), одержану таким вниця, склеродерма, артрит), інші аутоімунні зачином, в її солі або сольвати, або вивільнюють хворювання, запального захворювання кишечнику, сполуку з її солей або сольватів, і/або розділяють хвороби Аддісона, хвороби Крона, псоріазу, ревсполуку на її ізомерні форми, або трансформують матизму, гіпертензії, розладів нейрогенних функоптично активні форми в рацемічну форму. цій, глаукоми і діабету. 6. Спосіб згідно з пунктом 5, який характеризуєть13. Застосування сполук загальної формули (I), в ся тим, що селективний гідроліз проводять в спирякій R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, X і n мають знатовому середовищі в присутності гідроксиду лужчення, вказані в пункті 1, згідно з будь-яким з пункного металу, переважно гідроксиду натрію або тів 10, 11 і 12 як антагоністів А3 рецептора для калію. виготовлення фармацевтичної композиції для лі7. Фармацевтична композиція, що містить як актикування захворювання, такого як астма, COPD і вний інгредієнт одну або більшу кількість сполук ARDS, глаукома, рак, алергічні і запальні захворюзагальної формули (I), в якій R1, R2, R3, R4, R5, R6, вання, ішемія, гіпоксія, аритмія і захворювання R7, R8, X і n мають значення, вказані в пункті 1, або нирок. їх солей, сольватів або ізомерів і їх солей, сольва14. Застосування сполук загальної формули (IA), в тів, у поєднанні з одним або більшою кількістю якій R1, R2, R3, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, X і n маекціпієнтів, що використовуються в фармацевтичють значення, вказані в пункті 2, для виготовлення ній промисловості. фармацевтичної композиції для лікування захво8. Фармацевтична композиція згідно з пунктом 7, рювань, у розвитку яких приймає участь рецепщо містить як активний інгредієнт одну або більшу тор A3. кількість сполук загальної формули (IA), в якій R1, 15. Застосування сполук загальної формули (IA), в R2, R3, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, X і n мають знаякій R1, R2, R3, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, X і n мачення, вказані в пункті 2, або їх солей, сольватів ють значення, вказані в пункті 2, згідно з пунктом або ізомерів і їх солей, сольватів, у поєднанні з 14 як A3 лігандів для виготовлення фармацевтичодним або більшою кількістю екціпієнтів, що виконої композиції для лікування захворювань серця, ристовуються в фармацевтичній промисловості. нирок, респіраторних органів і центральної нерво9. Фармацевтична композиція згідно з пунктом 8, вої системи, для інгібування захисної дії аденозину що містить як активний інгредієнт одну або більшу на ракові клітини, що ростуть, попередження декількість сполук згідно з пунктом 4. грануляції стовбурових клітин, інгібування проду10. Застосування сполук загальної формули (I), в кування цитокіну, зменшення внутрішньоокулярноякій R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, X і n мають знаго тиску, інгібування вивільнення TNF , інгібування чення, вказані в пункті 1, для виготовлення фарміграції еозинофілів, нейтрофілів і інших імунних мацевтичної композиції для лікування захворюклітин, інгібування бронхостенозу і екстравазації вань, у розвитку яких приймає участь рецептор A3. плазми. 11. Застосування сполук загальної формули (I), в 16. Застосування сполук загальної формули (IA), в 1 2 3 4 5 6 7 8 якій R , R , R , R , R , R , R , R , X і n мають знаякій R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, X чення, вказані в пункті 1, згідно з пунктом 10 як A3 і n мають значення, вказані в пункті 2, згідно з пунлігандів для виготовлення фармацевтичної компоктами 14 або 15 як антагоністів А3 рецептора для зиції для лікування захворювань серця, нирок, виготовлення протизапальних, протиастматичних, респіраторних органів і центральної нервової сиспротиішемічних, антидепресантних, антиаритмічтеми, для інгібування захисної дії аденозину на них фармацевтичних композицій, фармацевтичних ракові клітини, що ростуть, попередження дегракомпозицій для захисту нирок, протиракових фарнуляції стовбурових клітин, інгібування продукумацевтичних композицій, фармацевтичних комповання цитокіну, зменшення внутрішньоокулярного зицій для лікування хвороби Паркінсона і фарматиску, інгібування вивільнення TNF , інгібування цевтичних композицій, що підвищують когнітивні міграції еозинофілів, нейтрофілів і інших імунних функції, і композицій для лікування або попереклітин, інгібування бронхостенозу і екстравазації дження ушкодження внаслідок реперфузії міокарплазми. да, хронічного обструктивного захворювання леге12. Застосування сполук загальної формули (I), в ні (COPD) і респіраторного дистрессиндрому якій R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, X і n мають знаповнолітніх (ARDS), включаючи хронічний бронхіт, чення вказані в пункті 1, згідно з пунктами 10 або легеневу емфізему або ядуху, алергічних реакцій 11 як антагоністів А3 рецептора для виготовлення (наприклад, риніт, відповіді, індуковані на отруту протизапальних, протиастматичних, протиішемічплюща, кропивниця, склеродерма, артрит), інші них, антидепресантних, антиаритмічних фармацеаутоімунні захворювання, запального захворюванвтичних композицій, фармацевтичних композицій ня кишечнику, хвороби Аддісона, хвороби Крона, для захисту нирок, протиракових фармацевтичних псоріазу, ревматизму, гіпертензії, розладів нейрокомпозицій, фармацевтичних композицій для лікугенних функцій, глаукоми і діабету. вання хвороби Паркінсона і фармацевтичних ком17. Застосування сполук загальної формули (IА), в 1 2 3 4 5 6 7 8 позицій, що підвищують когнітивні функції, і компоякій R , R , R , R , R , R , R , R , X і n мають зназицій для лікування або попередження чення, вказані в пункті 1, згідно з будь-яким з пункушкодження внаслідок реперфузії міокарда, хронітів 14, 15 і 16 як антагоністів А3 рецептора, для чного обструктивного захворювання легені (COPD) виготовлення фармацевтичної композиції для ліі респіраторного дистрессиндрому повнолітніх кування захворювання, такого як астма, COPD і (ARDS), включаючи хронічний бронхіт, легеневу ARDS, глаукома, рак, алергічні і запальні захворюемфізему або ядуху, алергічних реакцій (напри 7 77183 вання, ішемія, гіпоксія, аритмія і захворювання нирок. 18. Сполуки загальної формули (ІА) R 1 2 R 4 R 5 R 6 R (IA) O N 10 N R N 9 R 7 R H і їх солі, сольвати, ізомери і їх солі і сольвати, в якій R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, X і n мають значення, вказані в пункті 1. 19. Сполуки загальної формули (ІІ) 3 R 2 (CR R )n X 6 4 5 R R N (III) O (II) 7 R N NH2 , в якій R , R , R , R , R5, R6, R7, R8, X і n мають значення, вказані в пункті 1, за умови, що R3 не може означати феніл, якщо R1 і R2 означають атоми водню, n = 1, X означає -NH-, R4 і R5 утворюють разом 1,3-бутадієнільну групу, і R6 означає ціано, і за наступної умови, що R3 не може означати нерозгалужений або розгалужений С1-4 алкіл або феніл, заміщений нерозгалуженим або розгалуженим С1-4 алкокси, якщо n = 0, X означає -NН- або NR8-, R8 має значення, вказані в пункті 1, R4 і R5 утворюють разом 1,3-бутадієнільну групу, і R6 означає ціано, і за наступної умови, що R3 не може означати атом водню, якщо n = 0, X означає -СН2-, R4 і R5 утворюють разом 1,3-бутадієнільну групу, і R6 означає ціано або амінокарбоніл. 21. Сполуки загальної формули (IV) 1 R 6 X 11 R 1 2 (CR R )n X 1 R R 3 (CR R )n 12 8 3 2 3 4 Cl O 7 R , в якій R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, X і n мають значення, вказані в пункті 1. 20. Сполуки загальної формули (ІІІ) Представлений винахід стосується лігандів рецептору А3 аденозину загальної формули (І), в межах цих переважних антагоністів, також як і їх солей, сольватів і ізомерів, і фармацевтичних композицій, що їх містять, використання сполук загальної формули (І), також як і їх солей, сольватів і ізомерів, одержання сполук загальної формули (І) і їх солей, сольватів і ізомерів, крім того, нових проміжних сполук загальних формул (II), (III) і (IV) і їх одержання. Аденозин є добре відомим компонентом декількох ендогенних молекул (ATP, NAD+, нуклеїнові кислоти). Крім того, він відіграє важливу регуляторну роль у багатьох фізіологічних процесах. Вплив аденозину на функції серця був досліджений ще в 1929 році. [Drury and Szentgyorgyi, J Physiol 68:213, 1929]. Ідентифікування збільшення кількості фізіологічних функцій медійованих аденозином і відкриття нових підтипів рецептору аденозину дало можливість терапевтичного використання специфічних лігандів [Poulse, S. А. і Quinn, R. J. Bioorganic and Medicinal Chemistry 6:619, 1998]. На даний час, рецептори аденозину розділені на три основні класи: А1, А2 і А3. Підтип Аi частково відповідає за інгібування аденілатциклази шляхом зв'язування з Gi протеїном мембрани, частково R 4 R 5 R 6 (IV) N NH2 , в якій R , R , і R мають значення, вказані в пункті 1, за умови, що R6 не може означати атом водню, якщо R4 і R5 означають атом водню. 4 5 6 впливає на інші системи месенджерів. Підтип А2 рецептору може в свою чергу розділений на два наступні підтипи - А2a і А2b, які є рецепторами стимулювання активності аденілатциклази. Послідовність рецепторів аденозину А3 була нещодавно встановлена з бібліотеки кДНК яєчків щурів. Пізніше було доказано, що він відповідає новому функціональному рецептору аденозину. Активування А3 рецепторів також підключено до декількох систем вторинних месенджерів: інгібування аденілатциклази, стимулювання фосфоліпази С і D. Рецептори аденозину знайдені в ряді органів і регулюють їх функції. І А1, і А2a рецептори відіграють важливу роль і центральній нервовій системі і кардіоваскулярній системі. В ЦНС, аденозин інгібує вивільнення синаптичних трансмітерів, дія яких опосередковується А1 рецепторами. В серці, рецептори А1 медіюють негативний інотропний, хронотропний і дромотропний ефекти аденозину. Рецептори аденозину А2а зосереджені у відносно високій кількості в стриатумі, проявляючи функціональну взаємодію з рецепторами допаміну у регулюванні синаптичної трансмісії. Рецептори А2а аденозину на ендотеліальних клітинах і клітинах гладких м'язів відповідають за аденозиніндуковану вазодилатацію. 9 77183 10 На основі встановленої мРНК, рецептори А2b R4 і R5 утворюють разом 1,3-бутадієнільну груаденозину широко розповсюджені в різних тканипу, необов'язково, заміщену метилендіоксигрупою нах. Вони були знайдені майже в кожному типі або однією або більшою кількістю нерозгалужених клітин, але їх експресі є найвищою в кишечнику і або розгалужених С1-4 алкільних груп, нерозгалуміхурі. Цей підтип також можливо має важливу жених або розгалужених С1-4 алкоксигруп, гідрокрегуляторну функцію у регулюванні васкулярного сигруп або атомів галогену; тону і відіграє роль у функціонуванні стволових R6 означає атом водню або ціано, амінокарбоклітин. ніл, С1-4 алкоксикарбоніл або карбокси; На противагу А1 і А2а рецепторам, розподіленR7 означає атом водню, або нерозгалужений ня в тканинах яких визначали по рівню протеїну, або розгалужений С1-4 алкіл, або феніл, бензил, присутність А2b і А3 рецепторів визначалась на тієніл або фурил, необов'язково, заміщений метиоснові рівнів їх мРНК. Виражені рівні для рецептолендіоксигрупою, або однією або більшою кількісрів А3 аденозину є досить низьким порівняно з тю нерозгалужених або розгалужених С1-4 алкільіншими підтипами і високозалежним видами. Рених груп, нерозгалужених або розгалужених С1-4 цептори А3 аденозину зустрічають перш за все алкоксигруп, гідроксигруп, трифторметильних груп, центральній нервовій системі, яєчках, імунній сисціаногруп або атомів галогену, або для 5- або 6 темі і здається є включеним у модулювання вивічленного гетероароматичного кільця - містить льнення медіатору з стволових клітин в реакції один, два або три атоми азоту, або один атом азонегайної гіперчутливості. ту і один атом кисню, або один атом азоту і один А3 антагоністи описані в літературі і належать атом сірки - необов'язково, заміщений однією або до групи флаваноїдів, похідних 1,4більшою кількістю нерозгалужених або розгалужедигідропіридинів, триазолохіназолінів, тіазолонафних С1-4 алкільних груп, нерозгалужених або розтіридинів і тіазолопіримідинів. Представлений вигалужених С1-4 алкоксигруп або атомів галогену; нахід стосується нових типів активних як антагоніX означає -СН2-, -NH-, -NR8-, або атом сірки, сти, які мають амінохінолінову структуру. або атом кисню, або сульфогрупу, або сульфоксиДля терапевтичного використання, по суті, гагрупу - де R8 означає нерозгалужений або розгарантується, що молекула не зв'язується, або зв'ялужений С1-4 алкіл або С3-6 циклоалкіл-; зується тільки у випадку дуже високої концентрації n означає нуль, 1 або 2 - і їх солі, сольвати і підтипів А1, А2a і А2b рецептору аденозину. Предізомери і солі, сольвати останніх, задовольняють ставлений винахід стосується сполук загальної згаданому вище критерію. формули (І), також як і їх солей, сольватів і ізомеДетальні значення приведених вище заміснирів, які мають високу селективність до підтипу реків приведені далі: цептору А3 аденозину. Виразом нерозгалужений або розгалужений Нашою ціллю було одержання Аз лігандів по С1-4 алкіл ми позначили метил-, етил-, пропіл-, перше з хіноліновою структурою і в межах цих пеізопропіл-, бутил-, ізобутил-, вторинний-бутил-, реважних антагоністів, які мають сильну антагоністретинний-бутил-, переважно етил- або метил-. тичну активність і проявляють високу селективВиразом нерозгалужений або розгалужений ність до А3 рецептору, тобто, вони інгібують А3 С1-4 алкокси ми позначили метокси-, етокси-, прорецептор в набагато нижчій концентрації, ніж вони покси-, ізопропокси-, бутокси-, ізобутокси-, вторинінгібують А1, А2а і А2b рецептори. Крім того, ціллю ний-бутокси-, третинний-бутокси-, переважно етобуло одержання даних стабільності, біодоступноскси- або метокси-. ті, терапевтичного індексу і токсичності, які робВиразом С3-6 циклоалкіл ми позначили циклолять можливим розробку нових сполук для викопропіл-, циклобутил-, циклопентил-або циклогекристання як лікарських засобів і які завдяки сил-. прийнятній кишковій абсорбції сполук можуть ввоВиразом 1,3-бутадієніл ми позначили (дитись перорально. СН=СН-СН=СН-)-групу, тобто піридинове кільце Ми встановили, що сполуки загальної формузаміщене R4 і R5 замісниками утворюючи бензопіли (І) - в якій ридинове кільце або його тривіальна назва хіноліR1 означає атом водню або нерозгалужений нове кільце. або розгалужений С1-4 алкіл; Гетероароматичне кільце, що містить один, R2 означає атом водню або нерозгалужений або два, або три атоми азоту, означає пірол, імідаабо розгалужений С1-4 алкіл; зол, піразол, 1,2,3-триазол, 1,2,4-триазол, піридин, R3 означає атом водню або нерозгалужений піримідин, піридазин, піразин і 1,3,4-триазин. Кільабо розгалужений С1-4 алкіл, або феніл, тієніл або ця є, необов'язково, заміщеними С1-4 алкілом, або фурил, необов'язково, заміщений однією або біалкоксигрупою, або атомом галогену. льшою кількістю нерозгалужених або розгалужеГетероароматичне кільце, що містить один них С1-4 алкільних груп, нерозгалужених або розатом азоту і один атом кисню або сірки, означає галужених С1-4 алкоксигруп або атомів галогену, оксазол, ізоксазол, тіазол, ізотіазол. Кільця є, неабо для 5- або 6 членного гетероароматичного обов'язково, заміщеними С1-4 алкілом, або алкоккільця - містить один, два або три атоми азоту, або сигрупою, або атомом галогену. один атом азоту і один атом кисню, або один атом Вираз солі сполук загальної формули (І) ознаазоту і один атом сірки - необов'язково, заміщений чає солі одержані з неорганічних і органічних кисоднією або більшою кількістю нерозгалужених або лот і основ. Переважними солями є такі, що одеррозгалужених С1-4 алкільних груп, нерозгалужених жуються з фармацевтично прийнятних кислот, як або розгалужених С1-4 алкоксигруп або атомів ганаприклад, хлорводнева кислота, сірчана кислота, логену; етансульфонова кислота, винна кислота, буршти 11 77183 12 нова кислота, фумарова кислота, яблучна кислоR9, R10, R11 і R12 означають, незалежно, атом та, лимонна кислота, і основ, наприклад, гідроксид водню, або нерозгалужений або розгалужений С1-4 натрію, гідроксид калію, етаноламін. алкіл, або нерозгалужений або розгалужений С1-4 Сольвати означає сольвати одержані з різних алкокси, або гідрокси, або атом галогену, розчинників, наприклад, з води або етанолу. або R9 і R12 означають атом водню і R10 і R11 Сполуки загальної формули (І) мають геометутворюють разом метилендіоксигрупу; ричну і оптичну ізомерію, тому винахід стосується R6 означає атом водню або ціано; сумішей геометричних ізомерів, рацемічних або R7 означає 4-метоксифеніл, 3-метилфеніл, 3оптичноактивних геометричних ізомерів, також як і метоксифеніл, 3-тієніл або 3-фурил, їх солей і сольватів. X означає -ΝΗ- або атом кисню і Переважна група сполук загальної формули (І) n означає 1 формується сполуками загальної формули (ІА), в і їх солі, сольвати, ізомери і їх солі, сольвати. якій Особливо переважними є наступні сполуки, R1 означає атом водню або нерозгалужений що відповідають приведеним вище критеріям: або розгалужений С1-4 алкіл; 3-метил-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2R2 означає атом водню або нерозгалужений іл)бензамід; або розгалужений С1-4 алкіл; 4-метокси-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2R3 означає атом водню або нерозгалужений іл)бензамід; або розгалужений С1-4 алкіл, або феніл, тієніл або 3-метокси-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2фурил, необов'язково, заміщений однією або бііл)бензамід; льшою кількістю нерозгалужених або розгалуже3,4-метилендіокси-N-(4-бензиламіно-3них С1-4 алкільних груп, нерозгалужених або розціанохінолін-2-іл)бензамід; галужених С1-4 алкоксигруп або атомів галогену, N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2-іл)тіофен-2або для 5- або 6 членного гетероароматичного карбоксамід; кільця - містить один, два або три атоми азоту, або N-(4-[2-тієнілметиламіно]-3-ціанохінолін-2один атом азоту і один атом кисню, або один атом іл)тіофен-3-карбоксамід; азоту і один атом сірки - необов'язково, заміщено4-метокси-N-(4-[2-тієнілметиламіно]-3го однією або більшою кількістю нерозгалужених ціанохінолін-2-іл)бензамід; або розгалужених С1-4 алкільних груп, нерозгалу3,4-метилендіокси-N-(4-[2-тієнілметиламіно]-3жених або розгалужених С1-4 алкоксигруп або атоціанохінолін-2-іл)бензамід; мів галогену; N-(4-[2-фурилметиламіно]-3-ціанохінолін-2R9, R10, R11 і R12, незалежно, означають атом іл)фуран-2-карбоксамід; водню або нерозгалужений або розгалужений С1-4 N-(4-[2-фурилметиламіно]-3-ціанохінолін-2алкіл, або нерозгалужений або розгалужений С1-4 іл)тіофен-3-карбоксамід, алкокси, або гідрокси або атом галогену, або ї їх солі, сольвати, ізомери і їх солі, сольвати. R9 і R12 означають атом водню і R10 і R11 утвоЗгідно з іншими його аспектами, представлерюють разом метилендіоксигрупу; ний винахід також стосується фармацевтичних R6 означає атом водню або ціано, амінокарбокомпозицій, що містять активний агент сполуки ніл, С1-4 алкоксикарбоніл або карбокси; загальної формули (І) або їх ізомери, солі і сольR7 означає атом водню або нерозгалужений вати, які переважно є пероральними композиціяабо розгалужений С1-4 алкіл, або феніл, бензил, ми, але рецептури для введення шляхом інгаляції, тієніл або фурил, необов'язково, заміщений метипарентеральні і трансдермальні рецептури також є лендіоксигрупоб, або однією або більшою кількіспредметом винаходу. Згадані вище фармацевтичтю нерозгалужених або розгалужених С1-4 алкільні композиції можуть бути твердими або рідкими, них груп, нерозгалужених або розгалужених С1-4 такими як таблетки, пілюлі, капсули, пластирі, розалкоксигруп, гідроксигруп, трифторметильних груп, чини, суспензії або емульсії. Тверді композиції, ціаногруп або атомів галогену, або для 5 або 6 перш за все таблетки і капсули є переважними членного гетероароматичного кільця - містить фармацевтичними формами. один, два або три атоми азоту, або один атом азоЗгадані вище фармацевтичні композиції одерту і один атом кисню, або один атом азоту і один жують використовуючи звичайні фармацевтичні атом сірки - необов'язково, заміщений однією або екціпієнти і використовуючи стандартні методики. більшою кількістю нерозгалужених або розгалужеСполуки загальної формули (І) можуть бути них С1-4 алкільних груп, нерозгалужених або розвикористані для лікування патологій, у розвитку галужених С1-4 алкоксигруп або атомів галогену, яких приймає участь рецептор А3. X означає -СН2-, -NH-, -NR8- або атом сірки, Сполуки представленого винаходу, що мають або атом кисню, або сульфогрупу, або сульфоксиселективну активність по відношенню до А3 рецепгрупу - де де R8 означає нерозгалужений або розтора, можуть бути використані в терапевтичному галужений С1-4 алкіл або С3-6 циклоалкіл -; і/або превентивному лікуванні дисфункцій серця, n означає нуль, 1 або 2 нирок, респіраторної системи, центральної нервоі їх солі, сольвати, ізомери і їх солі, сольвати. вої системи. Вони інгібують захисну дію аденозину Переважна група сполук загальної формули (І) на ракові клітини, що ростуть, попереджають граформується сполуками загальної формули (ІА), в нулювання стволових клітин, інгібують продукуякій вання цитокіну, зменшують внутрішньоокулярний R1 означає атом водню або метил; тиск, інгібують вивільнення TNF, інгібують міграцію R2 означає атом водню або метил; еозинофілів, нейтрофілів і інших імунних клітин, R3 означає феніл, або тієніл, або фурил; інгібують бронхостеноз і екстравазацію плазми. 13 77183 14 Виходячи з цієї дії, антагоністи А3 рецептору агентом переважно є ацилхлорид, для зв'язування аденозину представленого винаходу можуть бути кислоти може бути використаний зв'язувальний терапевтично корисні як протизапальні, протиасагент, такий як триетиламін і/або піридин, але моматичні, антиішемічні засоби, антидепресанти, жуть бути використані і інші кислотозв'язувальні антиаритміки, засоби для захисту нирок, протираагенти. кові засоби, агенти для лікування хвороби ПаркінСполуки загальної формули (III) - де значення сона і лікарські засоби, що підвищують когнітивні R1, R2, R3, R4, R5, R6, R8, X і n є такими як визначефункції. Вони можуть бути корисні при лікуванні но вище - можна одержати з сполук формули (IV) або попереджені ушкодження в наслідок реперфувикористовуючи методики відомі per se [Nan зії міокарду, хронічного обструктивного захворюZhang, Bioorg. and Med. Chem. Lett., 10, 2825, вання легені (COPD) і респіраторного дистрессин2000]. дрому повнолітніх (ARDS), включаючи хронічний Сполуки загальної формули (IV) - де значення бронхіт, легеневу емфізему або задуха, алергічних R4, R5 і R6 є такими як визначено вище - можна реакцій (наприклад, риніт, відповіді індуковані на одержати з сполук формули (V), використовуючи отруту плюща, кропивниця, склеродерма, артрит), методики відомі per se [D.L. Leysen, J. Heterocyclic інші аутоімунні захворювання, запальне захворюChem., 24, 1611, 1987]. вання кишечнику, хвороба Аддісона, хвороба КроСполуки загальної формули (V) - де значення на, псоріаз, ревматизм, гіпертензія, розлади нейR4, Rs і R6 є такими як визначено вище - можна рогенних функцій, глаукома і діабет [К. N. Klotz, одержати з сполук формули (VI), використовуючи Naunyn-Schmiedberg's Arch. Pharmacol. 362:382, методики відомі per se [Pfizer (Inc)USP 4, 175, 193]. 2000; P. G. Baraldi es P. A. Borea, TiPS 21:456, Сполуки винаходу загальних формул (І), (II), 2000]. (III) і (IV), їх одержання і біологічна активність поСполуки представленого винаходу переважно казані в наступних Прикладах, без обмеження граможуть бути використані для лікування захворюниць формули винаходу Прикладами. вань, таких як астма, COPD і ARDS, глаукома, рак, Фігура 1 представляє загальну формулу (І), алергічні і запальні захворювання, ішемія, гіпоксія, Фігура 2 представляє загальну формулу (ІА), аритмія і захворювання нирок. Фігура 3 представляє загальну формулу (II), Згідно з наступними його аспектами, предстаФігура 4 представляє загальну формулу (III) і влений винахід стосується використання сполук Фігура 5 представляє загальну формулу (IV). загальної формули (І) при лікуванні згаданих вище Фігура 6 представляє Схему 1, шлях одержанпатологій. Середня добова доза становить 1ня сполук загальної формули (І). 100мг активного інгредієнту в залежності від приПриклади роди і складності захворювання і статі, ваги і т.і. Приклад 1 пацієнту. 3-Метил-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2Наступним об'єктом винаходу є одержання іл)бензамід: сполук загальної формули (І) і проміжні сполуки В загальній формулі (І) R1 і R2 означають атозагальних формул (II) (III) і (IV). ми водню, R3 означає феніл, R4 і R5 утворюють Проміжні сполуки загальних формул (II) (III) і разом 1,3-бутадієнільну групу, R6 означає ціано, R7 (IV), які використовуються в способі одержання означає 3-метилфеніл, X означає -NH, n є 1. винаходу, є частково новими. Замісники сполук а.) 2-Аміно-3-иіано-4-хлорхінолін: загальних формул (II), (III) і (IV) мають значення Суміш 10г 2-аміно-3-ціано-4-гідроксихіноліну і приведені вище. 15мл фосфорилхлориду нагрівали при перемішуВ способі згідно з нашим винаходом бісванні при 110°С. Реакційну суміш охолоджували, карбоксамід загальної формули (II) селективно виливали в 100 л лід-вода і нейтралізували 60мл гідролізують і одержану сполуку загальної форму10% розчину гідроксиду натрію. Одержаний жовли (І), при бажанні, трансформують у її солі, сольтий осад відфільтровували, промивали 50мл води. вати або, вивільнюють з її солі, сольвату і роздіПісля висушування одержували 7,5г вказаної в ляють на її геометричні або оптичні ізомери. заголовку сполуки, Тпл.: 210°С. Замісники сполук загальної формули (І) моЯМР, Η (400МГц, ДМСО-d6): 7,21м.ч., (с, 2Н, жуть бути трасформовані в інші за допомогою віΝΗ2), 7,35-7,40м.ч., (дд, 1Н, 6-Н), 7,53-7,57м.ч., (д, домих методик. 1Н, 5-Н), 7,70-7,75м.ч., (дд, 1Н, 7-Н), 7,93-7,98м.ч., Селективний гідроліз проводять використову(д, 1Н, 8-Н) ючи спиртовий, переважно метанольний розчин б.) 2-Аміно-3-иіано-4-бензиламінохінолін гідроксиду лугу, переважно розчини гідроксиду 5г 2-аміно-3-ціано-4-хлорхіноліну і 11мл бенкалію і/або натрію, але можуть бути використані і зиламіну нагрівали при перемішуванні при 130°С. інші агенти, що сприяють гідролізу амідів. Реакційну суміш виливали в 50мл води, одержаСелективний гідроліз можна провести в широний осад відфільтровували, промивали 50мл води. кому інтервалі температур, переважно від 20°С до Блідо-жовтий осад перекристалізували з димети100°С. лформаміду одержуючи 5,2г вказаної в заголовку Сполуки загальної формули (II) - де значення сполуки. R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, X і n є такими як виТпл.: 206°С, значено вище - можна одержати за допомогою ЯМР, Η (400МГц, ДМСО-d6): 5,02-5,03м.ч., (д, декількох відомих методик, в тому числі одна по2Н, N-CH2), 6,22м.ч., (с, 2Н, NH2), 7,14-7,16м.ч., казана на Схемі 1 (Фігура 6), шляхом ацилювання (дд, 1Н, 6-Н), 7,24-7,26м.ч., (дд, 1Н, 5-Н), 7,30м.ч., сполук формули (III), використовуючи способи (с, 5Н, Ph), 7,50-7,52м.ч., (дд, 1Н, 7-Н), 8,16ацилювання відомі в органічній хімії. Ацилюючим 8,19м.ч., (д, 1Н, 8-Н), 8,30-8,33м.ч., (т, 1Н, NH) 15 77183 16 Використовуючи 2-амінометилпіридин, або 3В загальній формулі (І), R1 і R2 є атомом водамінометилпіридин, або 4-амінометилпіридин заню, R3 є фенілом, R4 і R5 разом означають 1,3мість бензиламіну, можна одержати прийнятні бутадієнільну групу, R6 означає ціано, R7 означає сполуки загальної формули III. 3-метоксифеніл, X означає -ΝΗ-, n є 1. в.) 3-Метил-N-(3-метилбензоїл)-N-(42-аміно-3-ціано-4-бензиламінохінолін, одержубензиламіно-3-ціанохінолін-2-іл)бензамід: вали як описано в Прикладі 1, перетворювали 3До розчину 5г 2-аміно-3-ціано-4метоксибензоїлхлоридом, аналогічно як описано в бензиламінохіноліну в 30мл піридину по краплям Прикладі 1, в 3-метокси-N-(3-метоксибензоїл)-N-(4при перемішуванні при 0°С додавали 6мл 3бензиламіно-3-ціанохінолін-2-іл)бензамід, який метилбензоїлхлориду. Реакційну суміш перемішупісля селективного гідролізу за способом описавали при 80°С протягом 8 годин, потім її виливали ним в Прикладі 1, давав вказану в заголовку спов 150мл лід-вода. Осад відфільтровували, двічі луку загальної формули (І). Температура плавленпромивали 40мл води. Одержаний білий кристаліня вказаної в заголовку сполуки: 186°С. чний матеріал перекристалізували з 200мл етаноПриклад 4 лу одержуючи 9,2г вказаної в заголовку сполуки, 3,4-Метилендіокси-N-(4-бензиламіно-3Тпл.: 234°С. ціанохінолін-2-іл)бензамід Використовуючи піридин-3-карбонілхлорид як В загальній формулі (І), R1 і R2 є атомом водацилюючий агент, можна одержати прийнятну ню, R3 є фенілом, R4 і R5 разом означають 1,3сполуку загальної формули II. бутадієнільну групу, R6 означає ціано, R7 означає г.) 3-Метил-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-23,4-метилендіоксифеніл, X означає -NH-, n є 1. іл)бензамід 2-аміно-3-ціано-4-бензиламінохінолін одержуДо розчину 5г 3-метил-N-(3-метилбензоїл)-Nвали як описано в Прикладі 1, перетворювали 4(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2-іл)бензаміду в метоксибензоїлхлоридом аналогічно як описано в 80мл ацетонітрилу додавали 20мл 1N метального Прикладі 1, в 3,4-метилендіокси-N-(3,4розчину гідроксиду калію. Реакційну суміш кип'яметилендіоксибензоїл)-N-(4-бензиламіно-3тили із зворотнім холодильником протягом 3 хвиціанохінолін-2-іл)бензамід, який після селективнолин, потім до неї додавали 3мл льодяної оцтової го гідролізу за способом описаним в Прикладі 1, кислоти, потім її нейтралізували 50мл 1Μ розчину давав вказану в заголовку сполуку загальної форгідрокарбонату натрію і одержані кристали відфімули (І). Температура плавлення вказаної в загольтровували. Білий кристалічний матеріал перекловку сполуки: 231°С. ристалізували з 130мл ацетонітрилу одержуючи Приклад 5 3,1г вказаної в заголовку сполуки загальної форN-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2-іл)тіофен-2мули (І). Тпл.: 230°С. карбоксамід Приклад 2 В загальній формулі (І), R1 і R2 є атомом вод4-Метокси-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2ню, R3 є фенілом, R4 і R5 разом означають 1,3іл)бензамід бутадієнільну групу, R6 означає ціано, R7 означає 1 2 В загальній формулі (І), R і R означають ато2-тієніл, X означає -ΝΗ-, n є 1. ми водню, R3 є фенілом, R4 і R5 разом означають 2-аміно-3-ціано-4-бензиламінохінолін одержу1,3-бутадієнільну групу, R6 означає ціано, R7 ознавали як описано в Прикладі 1, перетворювали у чає 4-метоксифеніл, X означає-NH-, n є 1. тіофен-2-карбонілхлорид, аналогічно як описано в 2-аміно-3-ціано-4-бензиламінохінолін, одержуПрикладі 1, в N-(2-тіофенкарбоніл)-N-(4вали як описано в Прикладі 1, перетворювали 4бензиламіно-3-ціанохінолін-2-іл)тіофен-2метоксибензоїлхлоридом, аналогічно як описано в карбоксамід, який після селективного гідролізу, за Прикладі 1, в 4-метокси-N-(4-метоксибензоїл)-N-(4способом описаним в Прикладі 1, давав вказану в бензиламіно-3-ціанохінолін-2-іл)бензамід, який заголовку сполуку загальної формули (І). після селективного гідролізу, за способом описаТемпература плавлення вказаної в заголовку ним в Прикладі 1, давав вказану в заголовку спосполуки: 197°С. луку загальної формули (І). Температура плавленПриклад 6 ня вказаної в заголовку сполуки: 188°С. N-(4-[2-тіенілметиламіно]-3-ціанохінолін-2Натрієву сіль вказаної в заголовку сполуки іл)тioфен-3-карбоксамід одержували наступним чином: В загальній формулі (І), R1 і R2 є атомом вод4-метокси-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2ню, R3 є 2-тієнілом, R4 і R5 разом означають 1,3іл)бензамід розчиняли в метанолі і до нього додабутадієнільну групу, Re означає ціано, R7 означає вали еквівалентну кількість гідроксиду натрію в 3-тієніл, X означає -NH-, n є 1. метанолі. Білий кристалічний матеріал, що випаа.) 2-аміно-3-иіано-4-(2дав в осад, відфільтровували. Тпл.: 255°С. тієнілметиламіно)хінолін Етансульфонатну сіль вказаної в заголовку 5г 2-аміно-3-ціано-4-хлорхіноліну, одержували сполуки одержували наступним чином: 4-метоксияк описано в Прикладі 1, перемішували з 11мл 2N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-2-іл)бензамід розтієнілметиламіну при 130°С протягом 3 годин. Речиняли в метанолі і до неї додавали еквівалентну акційну суміш виливали в 50мл води, одержаний кількість етансульфонової кислоти. Білий кристаосад відфільтровували, промивали 50мл води. лічний матеріал, що випадав в осад, відфільтроБлідо-жовтий матеріал перекристалізували з 25мл вували. Тпл.: 223°С. етанолу одержуючи 5,2г вказаної в заголовку споПриклад 3 луки, Тпл.: 208°С. 3-Метокси-N-(4-бензиламіно-3-ціанохінолін-22-аміно-3-ціано-4-(2-тієнілметиламіно)хінолін, іл)бензамід одержували як описано вище, перетворювали ті 17 77183 18 офен-3-карбонілхлоридом, аналогічно як описано фурилметиламіно]-3-ціанохінолін-2-іл)фуран-2в Прикладі 1, в N-(3-тіофенкарбоніл)-N-(4-[2карбоксамід, який після селективного гідролізу тієнілметиламіно]-3-ціанохінолін-2-іл)тіофен-3давав вказану в заголовку сполуку загальної форкарбоксамід, який після селективного гідролізу, за мули (І). Температура плавлення вказаної в загоспособом описаним в Прикладі 1, давав вказану в ловку сполуки: 196°С. заголовку сполуку загальної формули (І). ТемпеПриклад 10 ратура плавлення вказаної в заголовку сполуки: N-(4-[2-фурилметиламіно]-3-ціанохінолін-2223°С. іл)тіофен-3-карбоксамід Приклад 7 В загальній формулі (І), R1 і R2 є атомом вод4-метокси-N-(4-[2-тієнілметиламіно]-3ню, R3 є 2-фурилом, R4 і R5 разом означають 1,3ціанохінолін-2-іл)бензамід бутадієнільну групу, R6 означає ціано, R7 означає 1 2 В загальній формулі (І), R і R є атомом вод3-тієніл, X означає -ΝΗ-, n є 1. ню, R3 є 2-тієнілом, R4 і R5 разом означають 1,32-Аміно-3-ціано-4-(2-фурилметиламіно)хінолін, бутадієнільну групу, R6 означає ціано, R7 означає одержували аналогічно способу описаному в При4-метоксифеніл, X означає -ΝΗ-, n є 1. кладі 6, перетворювали тіофен-32-аміно-3-ціано-4-(2-тієнілметиламіно)хінолін, карбонілхлоридом за способом описаним в Прикодержували як описано в Прикладі 6, перетворюладі 1, в Ν-(3-тіофен карбоніл)-N-(4-[2вали 4-метоксибензоїлхлоридом у 4-метокси-N-(4фурилметиламіно]-3-ціанохінолін-2-іл)тіофен-3метоксибензоїл)-N-(4-[2-тієнілметиламіно]-3карбоксамід, який після селективного гідролізу, ціанохінолін-2-іл)бензамід за способом описаним в одержували аналогічно способу описаному в ПриПрикладі 1, який після селективного гідролізу дакладі 1, давав вказану в заголовку сполуку загальвав вказану в заголовку сполуку загальної формуної формули (І). Температура плавлення вказаної ли (І). Температура плавлення вказаної в заголовв заголовки сполуки: 118°С. ку сполуки: 173°С. Структури і фізичні характеристики наступних Приклад 8 сполук загальної формули (І) одержували за спо3б4-метилендіокси-N-(4-[2-тіенілметиламіно]собом описаним в Прикладі 1 показані в Таблиці 3-ціанохінолін-2-іл)-бензамід І і II. В загальній формулі (І), R1 і R2 є атомом водню, R3 є 2-тієнілом, R4 і R5 разом означають 1,3бутадієнільну групу, R6 означає ціано, R7 означає 3,4-метилендіоксифеніл, X означає-NH-, n є 1. 2-аміно-3-ціано-4-(2-тієнілметиламіно)хінолін, одержували як описано в Прикладі 6, перетворювали 3,4-метилендіоксибензоїлхлоридом в 3,4метилендюкси-N-(3,4-метилендіоксибензоїл)-N-(4[2-тієнілметиламіно]-3-ціанохінолін-2-іл)бензамід за способом описаним в Прикладі 1, який після селективного гідролізу давав вказану в заголовку сполуку загальної формули (І). Температура плавлення вказаної в заголовку сполуки: 241°С. Приклад 9 N-(4-[2-фурилметиламіно1-3-ціанохінолін-2іл)фуран-2-карбоксамід В загальній формулі (І), R1 і R2 є атомом водню, R3 є 2-фурилом, R4 і R5 разом означають 1,3бутадієнільну групу, R означає ціано, R7 означає 2фурил, X означає -NH-, n є 1. а.) 2-Аміно-3-ціано-4-(2фурилметиламіно)хінолін 5г 2-аміно-3-ціано-4-хлорхіноліну, одержували як описано в Прикладі 1, перемішували з 1мл 2фурилметиламіну (фурфуриламін) при 130°С протягом 3 годин. Реакційну суміш виливали в 50мл води, одержаний осад відфільтровували, промивали 50мл води. Блідо-жовтий матеріал перекристалізували з 20мл етанолу одержуючи 4,8г вказаної в заголовку сполуки, Тпл.: 208°С. 2-аміно-3-ціано-4-(2-фурилметиламіно)хінолін одержували, як описано вище, перетворювали фуран-2-карбонілхлоридом, за способом описаним в Прикладі 1, в N-(2-фуранкарбоніл)-N-(4-[2 19 77183 20 21 77183 22 23 Структура і фізичні характеристики проміжних сполук загальної формули (І) одержаних за способом описаним в Прикладі 1 показані в Таблиці III. 77183 24 25 Структура і фізичні характеристики проміжних сполук загальної формули (III) і (ІІІа) одержаних за способом описаним в Прикладі 1 показані в Таблиці IV. 77183 26 27 Структура і фізичні характеристики проміжних сполук загальної формули (V) одержаних за способом описаним в Прикладі 1 показані в Таблиці V. 77183 28 Приклад 167 Таблетки наступного складу одержували за відомими методиками, що використовуються в промисловості Активний інгредієнт 25мг Лактоза 50мг Авіцель 21мг Кросповідон 3мг Стеарат магнію 1мг Біологія Способи Зв'язування рецептору А3 аденозину Одержання суспензії мембран: збирали СНО клітини, що експресують hA3 рецептори шляхом промивання три рази охолодженим льодом ЕСТ, центрифугуванням при 1000об/хв протягом 10хв, гомогенізуванням протягом 15сек у буфері (50мМ Tris, 10мМ МgСІ2, 1мМ ЕДТО, рН 8,0), центрифугуванням при 43000об/хв протягом 10хв (Sigma 3K30), суспензію мембран одержують в згаданому вище буфері, зберігають аліквоти при -80°С. Протокол зв'язування: інкубують одержані CHO-hA3 мембрани (містить 2мкг протеїну) в інкубаційному буфері (50мМ Tris, 10мМ МgСІ2, 1мМ ЕДТО, 3U/мл аденозиндеамінази, рН 8,0), в присутності 0,5нМ [І25І]АВ-МЕСА (памінобензилметилкарбохамідоаденозин) (100000 29 77183 30 с/х) і 100мкМ R-PIA (N6-[L-2неспецифічна активність))*100 фенілізопропіл]аденозин) для визначення неспеЗв'язування рецептору А2b аденозину людини цифічного зв'язування або сполуки, що тестується, Протокол зв'язування: інкубують 20,8мкг мемв загальному об'ємі 50мкл протягом 1г при кімнатбран (рецепторів А2b аденозину людини трансфіній температурі. Фільтрували крізь скляноволоконкованих в НЕК-293 клітини, джерело: Receptor ний фільтр Whatman GF/B (вимочений в 0,5% поBiology, Inc.), буфер (50мМ Tris, 10мМ MgCI2, 1мМ ЕДТО, 1мМ бензамідину, 2U/мл аденозиндеаміналіетиленіміні протягом 3 годин), промивали 4 1мл зи, рН 6,5), 32,4нМ [3H]DPCPX (8-циклопентил-1,3охолодженого льодом 50мМ Tris, 10мМ МgСІ2, дипропілксантин) (800000с/х) і 100мкМ NECA (5-N’1мМ ЕДТО (рН 8,0) на 96-луночному Brandel Cell етилкарбоксамідоаденозин) для визначення неHarvester. Визначення активності: в гамалічильниспецифічного зв'язування або сполуки, що тестуку (1470 Wizard, Wallac). Інгібування [%] = 100ється, в загальному об'ємі 100мкл протягом 30хв ((активність в присутності сполуки, що тестується, при кімнатній температурі. Фільтрували крізь скля- неспецифічна активність)/(загальна активність новолоконний фільтр Whatman GF/C (вимочений в неспецифічна активність))*100 0,5% поліетиленіміні протягом 3 годин), промивали Зв'язування рецептору A1 аденозину людини Одержання суспензії мембран: збирали СНО 4 1мл охолодженого льодом 50мМ Tris, (рН 6,5) клітини, що експресують Ha1 рецептори шляхом на 96-луночному Brandel Cell Harvester. Визначенпромивання три рази охолодженою льодом СТЕ, ня активності: в 96 луночному планшеті в присутцентрифугували при 1000об/хв протягом 10хв, ності HiSafe-З суміші в гамалічильнику (1450 гомогенізували протягом 15сек у буфері (50мМ Microbeta, Wallac). Визначення активності: в 96 Tris, pH 7,4), центрифугували при 43000об/хв пролуночному планшеті в присутності HiSafe-3 суміші тягом 10хв (Sigma 3K30), одержували суспензію в гамалічильнику (1450 Microbeta, Wallac). Інгібумембран в буфері згаданому вище, зберігали аліквання [%] = 100-((активність в присутності сполуки, воти при -80°С. що тестується, неспецифічна активПротокол зв'язування: інкубують одержані ність)/(загальна активність - неспецифічна активСНО-hA1 мембрани (містить 50мкг протеїну) в інність))*100 кубаційному буфері (50мМ Tris, 3U/мл аденозинРезультати деамінази, рН 7,4), 10нМ [3Н]ССРА (2-хлор-N6Ми встановили, що сполуки є біологічно актициклопентиладенозин) (80000с/х) і 10мкМ R-PIA вними, якщо вони інгібують зв'язування радіоліга(N6-[L-2-фенілізопропіл]аденозин) для визначення нду рецепторами А3 аденозину людини з активніснеспецифічного зв'язування або сполуки, що тестю вище 80% при 1мкМ в їх еспериментальних тується, в загальному об'ємі 100мкл протягом 3г умовах. 125 при кімнатній температурі. Фільтрували крізь скляКонстанту дисоціації (Kd) [ I]AB-MECA на новолоконний фільтр Whatman GF/B (вимочений в СНО-hА3 одержаній мембрані визначали за допо0,5% поліетиленіміні протягом 3 годин), промивали могою дослідження з насиченням ізотопом використовуючи аналіз Scatchard [G. Scatchard, Ann. N. 4 1мл охолодженого льодом 50мМ Tris на 96Υ. Acad. Sci. 51:660, 1949]. IC50 переводили в конслуночному Brandel Cell Harvester. Визначення актанту спорідненості (Ki) використовуючи рівняння тивності: в 96 луночному планшеті в присутності Ченга-Прусофа (Cheng-Prusoff) [Υ. J. Cheng і W. Η. HiSafe-3 суміші в гамалічильнику (1450 Microbeta, Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22:3099, 1973]. Wallac). Інгібування [%] = 100-((активність в присуДеякі сполуки загальної формули (І), (II), (III) і тності сполуки, що тестується, - неспецифічна ак(IV) мають значну біологічну активність. Сполуки тивність)/(загальна активність - неспецифічна акзагальної формули (ІА), зазначені в пункті 2, як тивність))*100 підгрупа сполук загальної формули (І), зазначених Зв'язування рецептору А2а аденозину людини в пункті 1, проявляють найбільш сильну активПротокол зв'язування: інкубують 7мкг мембран ність. За винятком 5 сполук, значення їх Ki не пе(рецепторів А2а аденозину людини трансфікованих ревищують 20нМ. Сполуки приведені як приклади в НЕК-293 клітини, джерело: Receptor Biology, є особливо переважними. Їх значення Ki в досліInc.), буфер (50мМ Tris, 10мМ MgCI2, 1мМ ЕДТО, дженнях зв'язування рецептору А3 аденозину лю2U/мл аденозиндеамінази, рН 7,4), 20нМ [3H]CGSдини знаходяться в межах від 0,19 до 0,69нМ. 21680 (2-[п-(2-карбонілетил)фенілетиламіно]-5'-NЗначення Ki найбільш переважних сполук становетилкарбоксамідоаденозин) (200000с/х) і 50кМ лять 0,14 і 0,15нМ. NECA (5-N’-етилкарбоксамідоаденозин) для виСполуки мають пристойну біодоступність і мазначення неспецифічного зв'язування або сполуки, ють, принаймні, 10000-кратну селективність по що тестується, в загальному об'ємі 100мкл протявідношенню до А1, А2а і А2b, підтипів рецептору гом 90хв при кімнатній температурі. Фільтрували аденозину людини. крізь скляноволоконний фільтр Whatman GF/B Крім того, тривалість їх дії при внутрішньовен(вимочений в 0,5% поліетиленіміні протягом 3 гоному і оральному введенні є достатньо довгою, їх дин), промивали 4 1мл охолодженого льодом значення ED50 є низьким, їх токсикологічні і сто50мМ Tris, 10мМ МgСІ2, 1мМ ЕДТО, 0,9 NaCI (рН ронні проявлення є прийнятними. 7,4) на 96-луночному Brandel Cell Harvester. ВиДані приведені вище для сполук загальної фозначення активності: в 96 луночному планшеті в рмули (І) роблять їх прийнятними для терапевтичприсутності HiSafe-3 суміші в гамалічильнику (1450 ного застосування. Microbeta, Wallac). Інгібування [%] = 100((активність в присутності сполуки, що тестується, - неспецифічна активність)/(загальна активність 31 Комп’ютерна верстка О. Гапоненко 77183 Підписне 32 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601