Похідні спіротієнопіранпіперидину як антагоністи рецептора orl-1 для їх застосування при лікуванні алкогольної залежності та зловживання алкоголем

Реферат: Винахід стосується способу лікування розладу, спричиненого вживанням алкоголю, в людини, що включає введення людині, яка потребує такого лікування, ефективної кількості сполуки формули: R2b R2a R 1 O S R 3 N N N A . UA 113859 C2 (12) UA 113859 C2 UA 113859 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Цей винахід має відношення до застосування антагоністів рецептора ноцицептину/орфаніну FQ (NOC/OFQ), зокрема антагоністів рецептора ORL-1, для лікування розладів, спричинених вживанням алкоголю. Розлади, спричинені вживанням алкоголю, такі як алкогольна залежність і зловживання алкоголем, становлять значну проблему охорони здоров'я та соціальну проблему. Всесвітня торговельна організація (ВТО) визначила розлади, спричинені вживанням алкоголю, як "третій провідний фактор ризику передчасної смерті та інвалідності в світі". У світі приблизно 2,5 млн людей на рік вмирають від пов'язаних з алкоголем причин, з них приблизно 10 % смертей осіб молодших за 30 років. На шкідливе вживання алкоголю припадає близько 4,5 % глобального тягаря хвороб, що вимірюється роками життя, втраченими через інвалідність, крім того шкідливе вживання алкоголю є основним фактором ризику виникнення психоневрологічних захворювань та інших проблем зі здоров'ям, таких як серцево-судинні захворювання, цироз печінки і рак ротової порожнини, гортані, глотки, стравоходу, молочної залози і товстої кишки. Нинішніми стандартами медичної допомоги є налтрексон (naltrexone) і акампросат (acamprosate), які допомагають пацієнтам підтримувати абстиненцію шляхом скорочення потягу до алкоголю і блокування приємних сторін алкоголю у разі його споживання. Проте, доступні наразі методи лікування є малопридатними для лікування супутніх розладів настрою. Дійсно, налтрексон може спричинити ангедонію у деяких пацієнтів. Отже, існує потреба в поліпшених фармацевтичних терапевтичних засобах для лікування розладів, спричинених вживанням алкоголю. Рецептор ноцицептину/орфаніну FQ (NOC/OFQ), зокрема рецептор ORL-1, являє собою Gбілок-сполучений рецептор (GPCR) класу А, який експресується переважно в центральній нервовій системі та периферичній нервовій системі, а також у шлунково-кишковому тракті, гладеньких м'язах й імунній системі. Незважаючи на структурний зв'язок з опіоїдними рецепторами, система OFQ/ноцицептин не демонструє суттєвої перехресної реактивності з класичними опіоїдними рецепторами, мю, дельта і каппа. Більше того, ноцицептин демонструє антиопіоїдну активність in vivo (наприклад, повідомлялось, що ORQ/ноцицептин, природний ліганд рецептора ORL-1, демонструє антиноцицептивні властивості). Антагоністи рецептора ноцицептину/орфаніну FQ (NOC/OFQ), зокрема антагоністи рецептора ORL-1, демонструють активність, подібну до антидепресантної активності, і аноректичну активність на декількох тваринних моделях депресії і харчової поведінки. Як такі, антагоністи ORL-1 вважаються корисними для лікування депресії та/або надмірної ваги, ожиріння та/або для підтримування ваги після лікування з приводу надмірної ваги або ожиріння. Інші дослідження доводять можливість використання антагоністів при лікуванні болю, недоумства і паркінсонізму. З іншого боку, агоністи рецептора ноцицептину/орфаніну FQ (NOC/OFQ) були залучені для лікування розладів, спричинених вживанням алкоголю, тривожності, болю, анорексії, викликаної стресом, кашлю, нейрогенного сечового міхура, набряку та наркотичної залежності (дивись, наприклад, Murphy, Niall P. (2010), The Nociceptin/Orphanin FQ System as a Target for Treating Alcoholism. CNS & Neurological Disorders – Drug Tartgets 9:87-93.; та Chiou, L.C., Liao, Y.Y., Fan, P.C., Kuo, P.H., Wang, C.H., Riemer, C. and Prinssen, E.P. (2007), Nociceptin/Orphanin FQ Peptide Receptors: Pharmacology and Clinical Implications. Current Drug Targets 8:117-135.) У WO 2011/060035 і WO 2011/060217 описані деякі сполуки спіропіперидину як антагоністи ORL-1 для використання для лікування депресії, надмірної ваги, ожиріння, мігрені та для підтримування ваги. Несподівано було виявлено, що сполуки-антагоністи ORL-1 можуть бути корисними при лікуванні розладів, спричинених вживанням алкоголю, наприклад, при лікуванні зловживання алкоголем або алкогольної залежності. Отже, цей винахід пропонує сімейство сполук 4',5'дигідроспіро[піперидин-4,7'-тієно[2,3-с]пірану] з високою антагоністичною активністю відносно рецептора ORL-1 для використання при лікуванні розладів, спричинених вживанням алкоголю. За одним з аспектів цього винаходу запропонована сполука Формули I: 1 UA 113859 C2 2a 2b R R 1 R O S 3 N R N N A ; або її фармацевтично прийнятна сіль для застосування в лікуванні розладів, спричинених вживанням алкоголю; де 7 R N 4' 4 R 5 10 15 20 25 30 35 R A являє собою або ; 1 R являє собою фтор або хлор; 2a 2b кожен з R і R являє собою водень або фтор; 3 R являє собою водень, метил, гідроксиметил або (C1-C3)-алкоксиметил; 4 R вибирають з групи, до складу якої входять фтор, хлор, ціаногрупа, ціанометил, (C 1-C3)алкіл, циклопропіл, гідроксиметил, метоксигрупа, циклопропілметокси, амінокарбонілметокси, (C1-C3)-алкоксиметил, циклопропілоксиметил, циклопропілметоксиметил, 1-гідрокси-1метилетил, амінокарбонілоксиметил, метиламінокарбонілоксиметил, 5 6 диметиламінокарбонілоксиметил, амінокарбоніл, амінокарбонілметил, -CH2-NR R , гідроксіімін, 1 1 метоксіімін, морфолін-4-іл, морфолін-4-ілметил, Ar , -CH2Ar , тетрагідрофуран-2-іл, 3оксоморфолін-4-ілметил, 2-оксопіролідин-1-ілметил і 2-оксопіперидин-1-ілметил; 4" R вибирають з групи, до складу якої входять фтор, хлор, ціаногрупа, ціанометил, (C 1-C3)алкіл, циклопропіл, гідроксиметил, метоксигрупа, метоксиметил, амінокарбонілоксиметил, метиламінокарбонілоксиметил, диметиламінокарбонілоксиметил, метилкарбоніл, 5’ 6 5’ 6 амінокарбоніл, метиламінокарбоніл, диметиламінокарбоніл, -NR R , -CH2-NR R , морфолін-4-іл, 2 2 морфолін-4-ілметил, Ar , -CH2Ar , 3,3-дифторазетидин-1-ілметил, піролідин-1-ілметил, 1аміноциклопропіл, 1-метиламіноциклопропіл і 1-диметиламіноциклопропіл; 5 R являє собою водень, C1-C3 алкіл, ціанометил, -C(O)CH3 або амінокарбонілметил; 5" R являє собою водень, C1-C4 алкіл, циклопропіл, гідроксіетил, метоксіетил, -C(O)CH3 або C(O)O(C1-C3) алкіл; 6 R являє собою водень або метил; 7 R являє собою водень, фтор, хлор, метил, гідроксиметил або метокси; 1 Ar являє собою компонент, вибраний з групи, до складу якої входять імідазол-1-іл, імідазол2-іл, 2-метилімідазол-1-іл, піразол-1-іл, 1,2,3-триазол-1-іл; 1,2,3-триазол-2-іл; 1,2,4-триазол-1-іл, ізоксазол-3-іл, оксазол-5-іл і 3-метил-1,2,4-оксадіазол-5-іл; і 2 Ar являє собою компонент, вибраний з групи, до складу якої входять імідазол-1-іл, імідазол2-іл, 2-метилімідазол-1-іл, 1-метилімідазол-2-іл і 1,2,4-триазол-3-іл. В інших варіантах здійснення за цим аспектом виноходу розлади, спричинені вживанням алкоголю, являють собою алкогольну залежність і/або зловживання алкоголем. В іншому варіанті здійснення використання передбачає одночасне, роздільне або послідовне поєднання з іншим терапевтичним інгредієнтом. 2 UA 113859 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 За іншим аспектом цього винаходу пропонується фармацевтична композиція для лікування розладів, спричинених вживанням алкоголю, яка містить сполуку Формули I або її фармацевтично прийнятну сіль, і один або більше фармацевтично прийнятний(-их) наповнювач(-ів), носій(-ів) або розріджувач(-ів). В іншому варіанті здійснення цього аспекту винаходу пропонується фармацевтична композиція для лікування алкогольної залежності та/або зловживання алкоголем, яка містить сполуку Формули I або її фармацевтично прийнятну сіль і один або більше фармацевтично прийнятний(-их) наповнювач(-ів), носій(-їв) або розріджувач(-ів). В описаному нижче варіанті здійснення за цим аспектом винаходу пропонується фармацевтична композиція, яка містить сполуку Формули I або її фармацевтично прийнятну сіль і щонайменше один фармацевтично прийнятний носій, наповнювач або розріджувач й факультативно інші терапевтичні інгредієнти. За іншим аспектом цього винаходу запропонований спосіб лікування розладів, спричинених вживанням алкоголю, в людини, який включає введення пацієнтові, який потребує такого лікування, ефективної кількості сполуки Формули I або її фармацевтично прийнятної солі. В інших варіанах здійснення за цим аспектом винаходу пропонується спосіб лікування алкогольної залежності та/або зловживання алкоголем, що включає введення пацієнтові, який потребує такого лікування, ефективної кількості сполуки Формули I або її фармацевтично прийнятної солі. За іншим аспектом цього винаходу запропоноване застосування сполуки Формули I або її фармацевтично прийнятної солі у виробництві лікарського засобу для лікування розладів, спричинених вживанням алкоголю. В інших варіантах здійснення за цим аспектом винаходу розлад, спричинений вживанням алкоголю, являє собою алкогольну залежність і/або зловживання алкоголем. Сполуки для використання за цим винаходом являють собою основи, які відповідно реагують з рядом органічних і неорганічних кислот з утворенням фармацевтично прийнятних солей. Фармацевтично прийнятні солі кожної зі сполук за цим винаходом розкриті в цьому описі. Термін "фармацевтично прийнятна сіль", вжитий в цьому описі, означає будь-яку сіль сполуки Формули I, яка є по суті нетоксичною для живих організмів. Такі фармацевтично прийнятні солі та загальні методики їх одержання добре відомі в цій галузі. Дивись, наприклад, . Stahl, P et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/WileyVCH, 2008). В одному варіанті здійснення згадана сіль являє собою сіль винної кислоти. В іншому варіанті здійснення згадана сіль являє собою сіль соляної кислоти. Перевагу віддають сполукам для застосування за цим винаходом, де: 1 1) R являє собою хлор; 2a 2b 2) кожен з R і R являє собою фтор; 1 2a 2b 3) R являє собою хлор, а кожен з R і R являє собою фтор; 1 2a 2b 4) R являє собою фтор, а R і R являє собою водень; 3 5) R являє собою водень, метил, гідроксиметил або метоксиметил; 3 6) R являє собою метил; 3 7) R являє собою гідроксиметил; 1 2a 2b 3 8) R являє собою хлор, кожен з R і R являє собою фтор, і R являє собою метил; 1 2a 2b 3 9) R являє собою хлор, кожен з R і R являє собою фтор, і R являє собою гідроксиметил; 4 10) R являє собою фтор, гідроксиметил, метоксиметил або піразол-1-ілметил; 4 11) R являє собою фтор; 4 12) R являє собою гідроксиметил; 4 13) R являє собою метоксиметил; 4 14) R являє собою піразол-1-ілметил; 4 15) виконується будь-який з варіантів 1-9, яким віддається перевага, де R являє собою фтор; 4 16) виконується будь-який з варіантів 1-9, яким віддається перевага, де R являє собою гідроксиметил; 4 17) виконується будь-який з варіантів 1-9, яким віддається перевага, де R являє собою метоксиметил; 4 18) виконується будь-який з варіантів 1-9, яким віддається перевага, де R являє собою піразол-1-ілметил; 7 19) R являє собою водень, фтор або хлор; 7 20) R являє собою фтор; 1 2a 2b 7 21) R являє собою хлор, кожен з R і R являє собою фтор, і R являє собою фтор; 1 2a 2b 3 7 22) R являє собою хлор, кожен з R і R являє собою фтор, R являє собою метил, і R являє собою фтор; 3 UA 113859 C2 1 2a 2b 3 23) R являє собою хлор, кожен з R і R являє собою фтор, R являє собою гідроксиметил, і R являє собою фтор; 4" 24) R являє собою фтор, гідроксиметил, метоксиметил, метилкарбоніл або 2метилімідазол-1-іл; 4" 25) R являє собою фтор; 4" 26) R являє собою гідроксиметил; 4" 27) R являє собою метоксиметил; 4" 28) R являє собою метилкарбоніл; 4" 29) R являє собою 2-метилімідазол-1-іл; 4" 30) виконується будь-який з варіантів 1-9 або 19-23, яким віддається перевага, де R являє собою фтор; 4" 31) виконується будь-який з варіантів 1-9 або 19-23, яким віддається перевага, де R являє собою гідроксиметил; 4" 32) виконується будь-який з варіантів 1-9 або 19-23, яким віддається перевага, де R являє собою метоксиметил; 4" 33) виконується будь-який з варіантів 1-9 або 19-23, яким віддається перевага, де R являє собою метилкарбоніл; 4" 34) виконується будь-який з варіантів 1-9 або 19-23, яким віддається перевага, де R являє собою 2-метилімідазол-1-іл Певну перевагу віддають сполукам для застосування відповідно до методів і варіантів використання за цим винаходом, наведеним у представленій нижче таблиці, та їх фармацевтично прийнятним солям. 7 5 10 15 20 Таблиця Сполука 1 2 Назва [2-[4-[(2-хлор-4,4-дифтор-спіро[5H-тієно[2,3-c]піран7,4'-піперидин]-1'-іл)метил]-3-метил-піразол-1-іл]-3піридил]метанол 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-(3-фтор-2-піридил)-3-метилпіразол-4-іл]метил]спіро[5H-тієно[2,3-c]піран-7,4'піперидин] 4 Структурна формула UA 113859 C2 Таблиця Сполука 3 Назва 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[[3-метил-1-[3-(піразол-1ілметил)-2-піридил]піразол-4-іл]метил]спіро[5Hтієно[2,3-c]піран-7,4'-піперидин] 4 [4-[(2-хлор-4,4-дифтор-спіро[5H-тієно[2,3-c]піран-7,4'піперидин]-1'-іл)метил]-1-(3-фтор-2-піридил)піразол-3іл]метанол 5 2-хлор-1'-[[1-(2,6-дифторфеніл)-3-метил-піразол-4іл]метил]-4,4-дифтор-спіро[5H-тієно[2,3-c]піран-7,4'піперидин] 6 1-(2-(4-((2'-хлор-4',4'-дифтор-4',5'дигідроспіро[піперидин-4,7'-тієно[2,3-c]піран]-1іл)метил)-3-метил-1H-піразол-1-іл)-3фторфеніл)етанон 5 Структурна формула UA 113859 C2 Таблиця Сполука 7 Назва 2-хлор-4,4-дифтор-1'-[[1-[2-фтор-6-(2-метилімідазол-1іл)феніл]-3-метил-піразол-4-іл]метил]спіро[5Hтієно[2,3-c]піран-7,4'-піперидин] 8 [4-[(2-хлор-4,4-дифтор-спіро[5H-тієно[2,3-c]піран-7,4'піперидин]-1'-іл)метил]-1-(2,6-дифторфеніл)піразол-3іл]метанол 2a 5 10 15 20 25 2b Структурна формула Перевагу віддають сполукам, де кожен з R і R являє собою фтор, тому що ці сполуки мають більш сприятливий фармакокінетичний профіль, оскільки є більш стійкими до окиснювального метаболізму. Загальним результатом цього є поліпшення пероральної біодоступності згаданих сполук. Сполуки для застосування за цим винаходом і способи їх одержання відомі в цій галузі, а ці сполуки характеризуються як ефективні та селективні антагоністи рецептора ORL-1. Їх можна одержати відповідно до відомих схем синтезу способами, добре відомими та визнаними в галузі цій. Дивись, наприклад, WO 2011/060035 і WO 2011/060217. Дані, одержані в доклінічних дослідженнях на тваринах, підтверджують роль антагоністів рецептора ORL-1 у лікуванні розладів, спричинених вживанням алкоголю, таких як зловживання алкоголем та алкогольна залежність. Зокрема, було виявлено, що певні антагоністи рецепторів ORL-1 ефективні на моделях розладів, спричинених вживанням алкоголю, гризунів. Щоб продемонструвати ці властивості запропонованих сполук, зразкові сполуки були випробовані в описаних нижче in vivo дослідженнях: Самовведення етанолу в пацюків, які віддають перевагу алкоголю Шляхом спрямованої селекції одержали декілька ліній пацюків, які віддають перевагу алкоголю, такі тварини відповідають критеріям перевіреної тваринної моделі алкоголізму. Зокрема, вони добровільно споживають фармакологічно значущі рівні етанолу за умов відсутності обмеження споживання їжі або води, вони п'ють етанол у надмірних кількостях з причини його сп'янювального ефекту, а не заради його смаку, запаху або калорійності, підтримують сп'яніння протягом тривалого періоду часу, здійснюють роботу, щоб отримати доступ до етанолу, і, в разі тривалого доступу, в них розвивається алкогольна толерантність і залежність (дивись, наприклад, Lester, D and Freed, E.X. (1973) Criteria for an animal model of alcoholism. Pharmacology Biochemistry & Behavior 1:103-107). Такі лінії пацюків, в тому числі лінії пацюків, які віддають перевагу алкоголю, (P) і лінії пацюків Marchigian Sardinian, які віддають перевагу алкоголю, (msP) вважаються придатними для оцінки потенційних фармакологічних терапевтичних засобів для розладів, спричинених вживанням алкоголю, оскільки вони 6 UA 113859 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 відповідають зазначеним вище критеріям і з огляду на те, що агенти, які знижують споживання алкоголю в людей, в тому числі налтрексон і акампросат, зменьшують споживання етанолу в цих ліній. Для оцінки потенційної терапевтичної антиадиктивної активності нових антагоністів ноцицептину/ORL-1 у пацюків ліній Р і msP можуть використовуватись оперантні методи і методи вільного вибору самовведення. Оперантне самовведення у пацюків лінії P Пацюків-самиць лінії P одержують з приватної колонії (компанія Taconic, Germantown, штат Нью-Йорк) і утримують парами. Для зменшення ступеню відмови від етанолу, спричиненої новизною, пляшку з водою у клітці, за два дні до проведення оперантної виробки навичок, замінюють на пляшку, яка вміщує 15 % розчин етанолу у воді (в об'ємному відношенні, у воді). Упродовж останньої частини експерименту пацюки одержують ad libitum доступ до води і стандартного лабораторного корму, без доступу до етанолу в клітці. Пацюків навчають натискати важіль для збільшення дози етанолу впродовж щоденних 30хвилинних сеансів, що проводяться в стандартних оперантних камерах для пацюків, ці камери розташовані в камерах з шумозаглушуванням (компанія МЕР Associates, Inc, St. Albans, штат Вермонт). Ці камери складаються з двох стінок з нержавіючої сталі та двох прозорих стінок з плексигласу. Сітчаста підлога в оперантних камерах складається з прутків нержавіючої сталі діаметром 0,5 см, розміщених на відстані приблизно 1,5 см один від одного. Кожна оперантна камера вміщує два висувних оперантних важелі, розташовані на висоті приблизно 6 см над сітчастою підлогою і на відстані 13 см один від одного. На ділянці між важелями розташовується вбудований жолоб, через який підіймається чашечна напувалка (об'єм 0,1 мл) для доставки відповідної числу випадкових натискань кількості етанолу (15 % (в об'ємному відношенні) розчин у воді). Для підкріплення реакції, над важелем, на який було здійснено натискання, впродовж 4-секундного доступу до чашечної напувалки запалюється світловий подразник. Взаємодія подразників і поведінкових реакцій контролюється та реєструється персональним комп'ютером для оффлайн-аналізу (компанія MED Associates, Inc, St. Albans, штат Вермонт). Під час оперантної виробки навичок натискання на будь-який з важелів вважається вірною реакцією і винагороджується 0,1 мл збільшенням дози етанолу. Після того, як пацюки навчаться натискати на важіль задля одержання винагороди у вигляді етанолу, випадкове натискання замінюють так, щоб підкріплювались натискання на один важіль (активний важіль) із застосуванням режиму з фіксованим відношенням підкріплень (FR-1), в той час як натискання на другий (неактивний) важіль вже не підкріплюються. Після досягнення стабільного базового рівня натискання за режимом підкріплення FR-1 кількість випадкових натискань збільшують до рівня FR-2, а потім ще раз до рівня FR-3 так, що кожне підкріплення вимагає 3 натиски важеля. Після досягнення стабільного базового рівня натискання за режимом підкріплення FR-3, випадкове натискання змінюють на режим з прогресуючим відношенням підкріплень впродовж кожного експериментального сеансу, внаслідок чого пацюки для одержання кожної винагороди у вигляді етанолу мають поступово працювати все важче. Зокрема, вимоги до кількості натискань збільшуються так: усі пацюки починають кожний сеанс за режимом підкріпленя FR-1; після трьох підкріплень режим підвищується до FR-2; після трьох підкріплень на цьому рівні, режим збільшується на два до FR-4; після трьох підкріплень, режим збільшується на два до FR6; і так далі (дивись, наприклад, Oster S.M., Toalston, J.E., Kuc, K.A., Pommer, T.J., Murphy, J.M., Lumeng, L., Bell, R.L., McBride, W.J. and Rodd, Z.A. (2006) Effects of multiple alcohol deprivations on operant ethanol self-administration by high-alcohol-drinking replicate rat lines. Alcohol 38:155-164). Кожен сеанс триває в цілому 30 хв, після чого всі подразники вимикаються, і важелі втягуються. Після завершення сеансу реєструють кількість натискань на активний та неактивний важелі, і точку розриву, яка визначається як найвище значення FR, досягнуте впродовж сеансу. Кількість спожитого етанолу розраховують за числом натисків активного важеля і переводять у г на кг маси тіла спожитого EtOH. За 60 хв до сеансу пацюкам за "перехресним" планом експерименту в складі групи суб'єктів, перорально вводять носій або досліджувану сполуку в діапазоні доз 3 мг на кг маси тіла, 10 мг на кг маси тіла або 30 мг на кг маси тіла (об'єм дози 3 мл на кг маси ® тіла, розчиненої в носії, що складається з 20 % Captisol у 25 мМ фосфатному буфері при рН 2), або неселективний антагоніст опіоїдного рецептора налтрексон (10 мг на кг маси тіла) як позитивний контроль (3-4-денний період вимивання між наступними прийомами). За окремим варіантом, за "перехресним" планом експерименту, пацюкам за 30 хв до сеансу перорально вводять носій або дозу 30 мг на кг маси тіла досліджуваної сполуки (об'єм дози 1 мл/кг, ® розчинену в носії, що складається з 20 % Captisol в 25 мМ розчині фосфатного буфера). Зразкові сполуки досліджували по суті так, як описано вище, і встановили, що вони знижують мотивоване етанолом реагування і, отже, споживання етанолу пацюками лінії P при проведенні дослідження в режимі з прогресуючим відношенням числа підкріплень. Сполуку 1 і 7 UA 113859 C2 сполуку 2 досліджували по суті, як описано вище, і встановили, що вони знижують мотивоване етанолом реагування, як представлено в Таблиці 1. Важливо відзначити, що антагоністи ORL-1 не впливають на кількість натискань на неактивний важіль (р>0,05), що вказує на відсутність неспецифічних рухових побічних впливів. 5 Таблиця 1 Сполука Налтрексон Доза Середня кількість натискань важеля (носій) Середня кількість натискань важеля (обробка лікарським засобом) 106,33 412,58 1 (вільна основа) 10 30 2 (тартрат) 10 15 20 25 30 35 40 45 30 376,23 55,8 % 143,31 432,5 23,7 % 191,25 3 4,6 % 330 10 Зменшення у зіставленні з носієм 75,4 % 61,9 % (Дисперсійний аналіз: Сполука 1: F(4,55)=5,2, p=0,001; Сполука 2: F(1,24)=16,8, p