Антитромботичні азациклоалкілалканоілпептиди та псевдопептиди, фармацевтична композиція, що їх містить, спосіб профілактики або лікування тромбозу у ссавців (варіанти)

1 Азациклоалкилалканоилпептиды и псевдопептиды формулы —NH-CH-C Z кесон в которой А обозначает-Н, В обозначает алкил, Z обозначает Н (СО)—G где Е обозначает - Н, F обозначает - Н, алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, гидроксиалкил, аралкил, замещенный аралкил, G обозначает циклоалкил, алкил, OR1 или NR1R2, где R1 и R2 независимо обозначают - Н, алкил и г обозначает 0 или 1, R обозначает -Н, алкил, m обозначает 1-5, п обозначает 0-6, и р обозначает 1-4, или его фармацевтически приемлемая соль 2 Соединение по п 1, отличающееся тем, что F обозначает -Н, алкил, гидроксиметил, циклоалкил, циклоалкилалкил, аралкил, замещенный аралкил 3 Соединение по п 2, отличающееся тем, что F обозначает -Н, алкил, гидроксиметил, циклоалкил, циклоалкилалкил 4 Соединение по п 1 формулы і A /" I Я 1 ;СИ 2 )гС— N ~—(CHjbC—NH-CH-C—NH-CH-C—L В I СНгСООН I J в которой А обозначает -Н, В обозначает алкил, J обозначает -Н, алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, аралкил, замещенный аралкил, L обозначает OR1 или NR1R2, где R1 и R2 независимо обозначают -Н, алкил, m обозначает 1-5, п обозначает 2-6, и р обозначает 1 или 2, или его фармацевтически приемлемая соль 5 Соединение по п 4, отличающееся тем, что А обозначает -Н, В обозначает алкил, J обозначает -Н, алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, m обозначает 3, и п обозначает 3 или 4 6 Соединение по п 5, отличающееся тем, что А обозначает -Н, В обозначает алкил, J обозначает алкил, циклоалкил или циклоалкилалкил, R1 и R2 независимо обозначают -Н, алкил, m обозначает 3, п обозначает 3 или 4, и р обозначает 1 7 Соединение по п 5, которое представляет собой г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]валин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-О-валин, г\|-[М-[М-(3-(пиперидин-4-ил)пропаноил)-г\1этилглицил] аспартил]валин, г\|-[М-[М-(5-(пиперидин-4-ил)пентаноил)-г\1этилглицил] аспартил]валин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)г\1этилглицил]-аспартил]-1_-а-циклогексил глицин, О 00 ю 44258 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-циклогексилаланин, г\|-[М-М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]норлейцин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил-1_-а-(2,2-диметил)проп-3ил глицин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-1_-р-цис-декагидронафт-2илаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-а-аминоциклогексанкарбоновая кислота, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-циклогексил-О-аланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-декагидронафт-1илаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-циклооктилаланин, г\|-[М-[М-[-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-адамант-1-илаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-(4циклогексил)циклогексилаланин, г\|-[г\|-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-циклогептилаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-ациклогексилпропил глицин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-циклооктилметилаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-циклопентилаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-1_-р-декагидронафт-1илаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-1_-а-(2циклогексилэтил)глицин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]фенилаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-р-(1,2,3,4)-тетрагидронафт5-илаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-1_-р-нафт-1-илаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-1_-р-нафт-2-илаланин, г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]-1-р циклогексилаланинамид, N-[N-[N-(4-(nHnepHflHH-4-Hn)6yTaHOHn)-Nэтилглицил]-аспартил]-р-циклооктилаланинамид, N-[N-[N-(4-(nHnepHflHH-4-Hn)6yTaHOHn)-Nэтилглицил]-аспартил]-рциклогексилметилаланинамид, 1Ч-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мэтилглицил]-аспартил]-рциклогексилаланинэтиламид, этиловый эфир N-[N-[N-(4-(nnnepnflHH-4ил)бутаноил)-1\1-этилглицил]-аспартил]-1_-рциклогексилаланина, этиловый эфир N-[N-[N-(4-(nnnepnflHH-4ил)бутаноил)-1\1-этилглицил]-аспартил]-рциклогексилметилаланина, 3-адамант-1-илпропил-М-[М-(4-(пиперидин-4ил)бутаноил)-М-этилглицин]аспартат, 2-циклогексил-М-[М-[М(4-(пиперидин-4ил)бутаноил)-1\1-этилглицил]аспартил]этиламин, N-[N-[N-(4-(nHnepHflHH-4-Hn)6yTaHOHn)-Nэтилглицил]-аспартил]-ациклогексилметилэтаноламин, или их фармацевтически приемлемые соли 8 Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что содержит антитромботически эффективное количество азациклоалкилалканоилпептида или псевдопептида по п 1 и фармацевтически приемлемый носитель 9 Фармацевтическая композиция по п 8, содержащая антитромботически эффективное количество азациклоалкилалканоилпептида или псевдопептида по п 4 и фармацевтически приемлемый носитель 10 Способ профилактики или лечения тромбоза у млекопитающих, нуждающихся в такой терапии, отличающийся тем, что вводят терапевтически эффективное количество азациклоалкилалканоилпептида или псевдопептида по п 1 11 Способ по п 10, отличающийся тем, что вводят терапевтически эффективное количество азациклоалкилалканоилпептида или псевдопептида по п 4 12 Способ профилактики или лечения тромбоза у млекопитающих, нуждающихся в таком лечении, отличающийся тем, что вводят терапевтически эффективное количество композиции по п 8 13 Способ по п 12, отличающийся тем, что вводят терапевтически эффективное количество композиции по п 9 Настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим антитромбоническую активность Более конкретно, изобретение касается азацикло алкилалканоилпептидов и псевдопептидов, которые ингибируют агрегацию тромбоцитов и образование тромбов у млекопитающих и которые применимы для профилактики и лечения тромбоза, связанного с такими патологическими состояниями, как инфаркт миокарда, тромботический ин сульт, поражение периферической артерии и диссеминированное внутрисосудистое свертывание Гемостаз, биохимия свертывания крови, представляет собой чрезвычайно сложный феномен, посредством которого нормальная цельная кровь и ткань тела самопроизвольно останавливают кровотечение из поврежденных кровеносных сосудов Эффективный гемостаз требует комбинированной активности сосудистых, тромбоцитарных 44258 и плазматических факторов, а также регулируемоарал кил гуанидиноал кил пептидных миметических го механизма для предотвращения избыточного соединений, которые проявляют активность ингисвертывания Дефекты, отсутствие или избыток бирования агрегации тромбоцитов, и описывает любого из этих компонентов могут привести к геконкретно ряд моно- и диметоксифенилпептидных моррагическим или тромботическим последстмиметических соединений и бифенилалкилпепвиям тидное миметическое соединение Адгезия тромбоцитов, разрастание и агрегаПатент США №4857508 (Adams, et al), выданция на внеклеточных матриксах являются ценный 15 августа 1989г, описывает ряд гуанидинотральными событиями в образовании тромба Эти ал кил пептидных производных, содержащих консобытия опосредованы семейством адгезивных цевые аралкильные заместители, которые гликопротеинов, т е фибриногена, фибронектина проявляют активность ингибирования агрегации и фактора фон Виллебранда Фибриноген предтромбоцитов, и описывает конкретно ряд содерставляет собой кофактор агрегации тромбоцитов, жащих О-метилтирозин, бифенил и нафтил произтогда как фибронектин поддерживает присоедиводных, имеющих концевую амидную группу нение тромбоцитов и реакции разрастания, а факHaverstick, D М , et al , в Blood 66 (4), 946-952 тор фон Виллебранда важен для присоединения (1985) описывают ряд синтетических пептидов, тромбоцитов к субэндотелиальному матриксу и включающих в себя Arg-Gly-Asp-Ser и Gly-Arg-Glyраспространения на нем Сайты связывания для Asp-Ser, способных ингибировать индуцированфибриногена, фибронектина и фактора Фон Вилную тромбином агрегацию тромбоцитов лебранда были обнаружены на белковом комPlow, Е F , et al , Proc Natl Acad Sci USA 79, плексе мембран тромбоцитов, известном как гли3711 -3715 (1982) описывают, что тетрапептид копротеин lib / Ilia глицил-І_-пролил-І_-аргинил-І_-пролин ингибирует связывание фибриногена с тромбоцитами челоАдгезивные гликопротеины, подобные фибривека ногену, не связываются с нормальными покоящимися тромбоцитами Однако, при активации тромЗаявка Франции №86/17507 от 15 12 1986г, боцита агонистом, таким как тромбин или раскрывает, что тетра-, пента-и гексапептидные аденозиндифосфат, тромбоцит изменяет свою производные, содержащие последовательностьформу, возможно, делая сайты связывания GPIIb/ Arg-Gly-Asp-применимы в качестве антитромботиIlia доступными для фибриногена Соединения в ческих средств объеме данного изобретения блокируют рецептор Патент США №4683291 (Zimmerman, et al), фибриногена, ингибируя, таким образом, агрегавыданный 28 июля 1987г, сообщает, что ряд пепцию тромбоцитов, и при введении в форме фартидов, состоящих из 6-40 аминокислот, содержамацевтических композиций, содержащих такие щих последовательность-Arg-Gly-Asp-, является соединения, применимы для предотвращения и ингибиторами связывания тромбоцитов лечения тромбообразующих заболеваний, таких ЕПВ №0319506, опубликованная 7 июня как инфаркт миокарда, тромботический инсульт, 1989г, раскрывает ряд тетра-, пента-и гексапеппоражение периферической артерии и диссемитидных производных, содержащих последованированное внутрисосудистое свертывание тельность-Arg-Gly-Asp-, являющихся ингибиторами агрегации тромбоцитов Известно, что присутствие Arg-Gly-Asp (RGD) является необходимым в фибриногене, фибриВ патенте США №5023233 сообщается, что ноине и факторе фон Виллебранда для их взаициклические пептидные аналоги, содержащие помодействия с рецептором поверхности клетки следовательность Gly-Asp, являются антагони(Ruoslahti E , Pierschbacher, Cell 1986, 44, 517-18) стами рецептора фибриногена По-видимому, две другие аминокислотные послеВ ожидающих решения заявка США довательности также принимают участие в функ№№07/677006, 07/534385 и 07/460777, поданных ции присоединения тромбоцитов фибриногена, а 28 марта 1991г, 7 июня 1990г и 4 января 1990г, именно, Gly-Pro-Arg и последовательность додесоответственно, а также в U S Patent №4952562 и капептида His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-GlyInternational Application №PCT/US90/05448, поданAsp-Val Показано, что небольшие синтетические ной 25 сентября 1990г, описываются пептиды и пептиды, содержащие RGD или додекапептид, псевдопептиды, содержащие амино-, гуанидиносвязываются с рецептором тромбоцитов GPIIb / группу, имидизалоил, и/или аминоалканоил и алIlia и конкурентно ингибируют связывание фибрикеноил, являются антитромботическими агентами ногена, фибронектина и фактора фон ВиллебранИзвестно, что пептиды и псевдопептиды, сода, а также ингибируют агрегацию активированных держащие аминогруппу и радикалы гуанидиноалтромбоцитов (Plow, et al , Proc Natl Acad Sci USA кил и алкенилбензоил, фенилалканоил и фени1985, 82, 8057-61, Ruggen, et al , Proc Natl Acad лалкеноил, являются антитромботическими Sci USA 1986, 5708-12, Ginsberg, et al , J Biol агентами (заявка США №07/475, поданная 5 февChem 1985, 260, 3931-36, Gartner, et al , J Biol раля 1990, №PCT/US91/02471, поданная 11 апреChem 1987, 260, 11, 891-94) ля 1991 г, опубликованная как International Application №WO92/13117, 29 октября 1992) Известно, что содержащие индолил соединения, включающие в себя гуанидиноалканоил-и В патенте США № 5053392, поданном 1 дегуанидиноалкеноиласпартил, являются ингибитокабря 1989 и переуступленном тому же правопрерами агрегации тромбоцитов (Tjoeng, et al , патент емнику и имеющем тех же авторов, что и данное США №5037808 и №4879313) изобретение, сообщается, что содержащие алканоил и (замещенный алканоил) аза цикл оал кил Патент США №4992463 (Tjoeng et al), выданформил-производные аспарагиновой кислоты явный 12 февраля 1991 г, описывает ряд арил- и 44258 8 ляются ингибиторами агрегации тромбоцитов ной выше, причем активность наблюдается после перорального введения этих соединений В патенте США № 5064814, поданном 5 апреля 1990 г теми же авторами и переуступленном Как в предшествующем тексте, так и во всем тому же правопреемнику, сообщается, что произэтом изобретении следующие ниже термины буводные N-замещенной азациклоалкилкарбонил дут иметь следующие значения (если нет других (циклический аминоацил) аспаргиновой кислоты указаний) NH являются антитромботическими агентами Производные азациклоалкилформилглициласпаргино"Амидино" обозначает группу с ~ ~ 2 вой кислоты являются антитромботическими аген"Замещенная амидино" обозначает амидинотами также согласно патенту США №5051406, группу, N - замещенную на одном или обоих атоподанному 10 октября 1989г и переуступленному мах азота одним или более алкилом, циклоалкитому же правопреемнику, который является пралом, циклоал кил циклоал килом, вопреемником данного изобретения циклоалкилал килом,/ал кил циклоал кил ал килом, ЕР заявка №0479481, опубликованная 8 апреарилом или аралкилом ля 1992г, описывает "Алкил" обозначает насыщенную алифатичеазациклоалкилалканоилглициласпартиламинокисл скую углеводородную группу, которая может быть оты в качестве антагонистов рецептора фибринопрямой или разветвленной, имеющую приблизигена тельно 1-20 атомов углерода в цепи РазветвленЕР заявка №0478362, опубликованная 1 апреная группа обозначает, что группа низшего алкиля 1992 г, описывает азациклоалкилалкаеоилпепла, такая как метил, этил или пропил, тидил-р-аланины в качестве антагонистов рецепприсоединена к линейной цепи алкила Предпочтора фибриногена тительными прямыми или разветвленными алДанное изобретение касается азациклоалкикил ьными группами являются группы "низшего лалканоилпептидов и псевдопептидов, которые алкила", представляющие собой алкильные групингибируют агрегацию тромбоцитов и тромбообпы, имеющие от 1 до приблизительно 10 атомов разование углерода Наиболее предпочтительные группы Соединения данного изобретения имеют низшего алкила имеют от 1 до приблизительно 5 формулу 1 атомов углерода Я і—G—N-fCH,4-C-NH-CH-C-2 'Г: • В К ' Р (і) < CHjCOOH в которой А представляет собой-Н, В представляет собой алкил, Z представляет собой В которой Е обозначает-Н, F обозначает-Н, алкил, циклоалкил, циклоалкилал кил, гидроалкил, аралкил, замещенный аралкил, G обозначает циклоалкилал кил OR1 или NR1R2 где R1 и R2, независимо обозначают-Н, алкил, R обозначает 0 или 1, R обозначает-Н, алкил, М обозначает 1-5, N обозначает 0-6, и р обозначает 1-4, или являются их фармацевтически приемлемой солью Кроме того, данное изобретение касается фармацевтических композиций, содержащих такие соединения, и способов профилактики или лечения тромбоза у млекопитающих, требующих такого лечения, предусматривающих введение таких соединений и фармацевтических композиций Данное изобретение характеризуется заметной и пролонгированной антитромботической активностью соединений формулы 1, представлен "Циклоалкил" обозначает насыщенную карбоциклическую группу, имеющую одно или более колец, имеющих приблизительно 3-10 атомов углерода Предпочтительные циклоалкильные группы включают в себя циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и декагидронафтил "Циклоал кил ал кил" обозначает группу алкила, замещенную циклоалкильной группой Предпочтительные циклоал кил ал килы включают в себя циклопентилметил, циклогексилметил, циклогексилэтил, декагидронафт-1-илметил и декагидронафт2-ил метил "Алкилциклоалкил" обозначает циклоалкил, замещенный алкилом Примерами алкилциклоалкилов являются 1-,2-,3-или 4-метил или этилциклогексил "Ал кил циклоалкилал кил" обозначает алкил, замещенный алкил-циклоалкилом Примеры алкилциклоалкилалкила включают в себя 1-, 2-,3-или 4-метил-или этилциклогексилметил или 1-,2-,3-или 4-метил-или этилциклогексилэтил "Азациклоалкан" обозначает насыщенное алифатическое кольцо, содержащее атом азота Предпочтительные азациклоалканы включают в себя пирролидин и пиперидин "Природная а-аминокислота" обозначает глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, серии, треонин, фенилаланин, тирозин, триптофан, цистеин, метионин, пролин, гидроксипролин, аспарагиновую кислоту, аспарагин, глутамин, глутаминовую кислоту, гистидин, аргинин, орнитин и лизин "а-углеродная боковая цепь природной ааминокислоты" обозначает часть молекулы, которая замещает а-углерод природной ааминокислоты Примеры а-углеродных боковых цепей природных а-аминокислот включают в себя изопропил, метил и карбоксиметил для валина, аланина и аспарагиновой кислоты, соответственно "Арил" обозначает фенил или нафтил "Замещенный арил" обозначает фенил или нафтил, замещенные одним или более заместителями арильной группы, которые могут быть одинаковыми или различными, где "заместитель арильной группы" включает в себя алкил, алкенил, алкинил, арил, аралкил, гидроксигруппу, алкоксигруппу, арилоксигруппу, аралкоксигруппу, гидроксиалкил, ацил, формил, карбоксигруппу, алкеноил, ароил, галоген, нитрогруппу, тригалогенметил, цианогруппу, алкоксикарбонил, арилоксикарбонил, аралкоксикарбонил, ациламиногруппу, ароиламиногруппу, карбамоил, алкилкарбамоил, диалкилкарбамоил, арил карбамоил, аралкил карбамоил, алкилсульфонил, алкилсульфинил, арилсуль-фонил, арилсульфинил, аралкилсульфонил, аралкилсульфинил или-NRaRk, где Ra и Кь обозначают независимо водород, алкил, арил или аралкил 44258 10 с Е, образует 4-, 5-, 6-или 7-членное азациклоалкановое кольцо Еще более предпочтительный класс соединений данного изобретения описывается более предпочтительным классом соединений, в которых F обозначает-Н, алкил, гидроксиметил, 1гидроксиэтил, меркаптометил, 2-метилтиоэтил, карбоксиметил, 2-карбоксиэтил, 4-аминобутил, 3гуанидинопропил, циклоалкил, циклоалкилалкил, алкилциклоалкил, алкилциклоалкилалкил или, в комбинации с Е, образует 4-,5-,6-или 7-членное кольцо азациклоалкана Наиболее предпочтительный класс соединении данного изобретения описывается еще более предпочтительным классом соединений, в которых В обозначает алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, алкилциклоалкил или алкилциклоалкилалкил Особый вариант данного изобретения описывается формулой II "Аралкил" обозначает алкил, замещенный радикалом арилом Предпочтительные аралкильные группы включают в себя бензил, нафт-1-илметил, нафт-2-илметил и фенетил "Замещенный аралкил" обозначает аралкил, замещенный арильной частью одного или более заместителей арильной группы "Гетероциклил" обозначает 4-15-членную моноциклическую или полициклическую систему, в которой один или более атомов в кольце представляют собой элемент, иной, чем углерод, например, азот, кислород или серу Предпочтительные гетероциклильные группы включают в себя пиридил, пиримидил и пирролидил "Замещенный гетероциклил" обозначает гетероциклил, замещенный одним или более заместителями арильной группы "Гетероциклоалкил" и "замещенный гетероциклилалкил" обозначают алкил, который замещен гетероциклилом и замещенным гетероциклилом, соответственно Предпочтительный класс соединений данного изобретения описывается формулой 1, в которой F обозначает-Н, алкил, гидроксиметил, 1гидроксиэтил, меркаптометил, 2-метилтиоэтил, карбоксиметил, 2-карбоксиэтил, 4-аминобутил, 3гуанидинопропил, циклоалкил, циклоалкилалкил, алкилциклоалкил, ал кил циклоалкилалкил, арил, замещенный арил, аралкил, замещенный аралкил, гетероциклил, замещенный гетероциклил, гетероциклилалкил, замещенный гетероциклилалкил или, в комбинации с Е, образует 4-,5-,б-или 7членное азациклоалкановое кольцо, при условии, что гетероциклилалкил иной, чем индол-Зил мети л Более предпочтительный класс соединений данного изобретения описан в виде предпочтительного класса соединений, в которых F обозначает-Н, алкил, гидроксиметил, 1-гидроксиэтил, меркаптометил 2-метилтиоэтил, карбоксиметил, 2карбоксиэтил, 4-аминобутил, 3-гуанидинопропил, циклоалкил, циклоалкилалкил, алкилциклоалкил, алкилциклоалкилалкил, арил, замещенный арил, аралкил, замещенный аралкил или, в комбинации и . . и и п СН2}—С— N 4 C H A ~ C - N H - C H - C ~ N H — C H - C - L р " В ' СНгСООН J в которой А обозначает-Н, В обозначает алкил, J обозначает-Н, алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, аралкил, замещенный аралкил, L обозначает OR1 или NR1R2 где R1 и R2 обозначают независимо-Н, алкил, m обозначает 1-5, п обозначает 1 или 2, р обозначает 1 или 2, или является фармацевтически приемлемой солью этого соединения Более предпочтительный вариант данного изобретения описывается соединениями особого варианта, в которых А обозначает-Н, В обозначает алкил, J обозначает-Н, алкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, m обозначает 3 и п обозначает 3 или 4 Наиболее предпочтительный особый вариант данного изобретения описывается соединениями более предпочтительного особого варианта, в котором А обозначает-Н, В обозначает алкил, J обозначает алкил, циклоалкил или циклоалкилалкил, R1 и R2 независимо обозначают-Н, алкил, m обозначает 3, п обозначает 3 или 4 и р обозначает 1 Характерные соединения данного изобретения включают в себя г\І-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\Іэтилглицил]-аспартил]валин, г\І-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\Іэтилглицил]-аспартил]-О-ванил, г\|-[М-[М-(3-пиперидин-4-ил)пропаноил)-г\1этилглицил]-аспартил]валин, г\І-[г\І-[г\І-(5-(пиперидин-4-ил)пропаноил)-Тэтилглицил]аспартил]валин, г\І-[М-[М-(4-пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\І 11 44258 12 этил глицил]-аспартил]-І_-а-циклогексил глицин, этилглицил]аспартил]-ациклогексилпропил глицин, І\І-[г\І-[г\І-(4-пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Іэтилглицил]-аспартил]-р-циклогексилаланин, М-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мэтилглицил]аспартил]-р-циклооктилметилаланин, М-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мэтилглицил]аспартил]норлейцин, N-[N-[N-(4-(nHnepHflHH-4-Hn)6yTaHOHn)-Nэтилглицил]аспартил]-р-циклопентилаланин и г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]-1_-а-(2,2-диметил)проп-3этиловый эфир N-[N-[N-(4-(nnnepnflHH-4ил глицин, ил)бутаноил)-г\1-этилглицил]-аспартил]-рциклогексилметилаланина, М-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мэтилглицил]аспартил]-1_-р-декагидронафтил-1и их фармацевтически приемлемые соли илаланин, Соединения данного изобретения содержат асимметричные центры Эти асимметричные ценг\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1тры могут быть независимо в R-конфигурации или этилглицил]аспартил]-1_-а-(2-циклогексилэтил) в S-конфигурации Данное изобретение включает глицин, в себя отдельные стереоизомеры и их смеси М-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-МСоединения данного изобретения могут приэтилглицил]аспартил]фенил-аланин, меняться в форме свободного основания или киМ-[г\1-[г\1-(4-пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мслоты или в форме их фармацевтически приемэтилглицил]аспартил]-1_-р-нафт-1-илаланин, лемой соли Все эти формы находятся в объеме М-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мданного изобретения этилглицил]аспартил]-1_-р-нафт-2-илаланин, Если соединение данного изобретения замег\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1щено основным радикалом, то могут быть образоэтилглицил]аспартил]-1_-рваны соли с кислотой, которые являются более циклогексилаланинамид, удобной формой для использования, и на практиЭтиловый эфир N-[N-[N-(4ке применение такой формы соли равнозначно (пиперидин)бутаноил)-г\1-этилглицил]аспартил]-1_применению формы свободного основания КиР-циклогексилаланина, слоты, которые можно применять для получения 2-циклогексил-г\1-[М-[г\1-(4-(пиперидин-4солей с кислотами, включают в себя предпочтиил)бутаноил)-г\1-этилглицил]-аспартил]-этиламин, тельно те кислоты, которые дают при объединег\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1нии со свободным основанием фармацевтически этилглицил]аспартил]-1_-р-цис-декагидронафт-2приемлемые соли, т е соли, анионы которых явилаланин, ляются нетоксичными для организма животного в 3-адамант-1-илпропил-1\1-[г\1-(4-(пиперидин-4фармацевтических дозах этих солей, так что поил)бутаноил)-г\1-этилглицил]аспартат, лезные антитромботические свойства, присущие г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1свободным основаниям, не исчезают вследствие этилглицил]аспартил]-апобочных эффектов, приписываемых анионам аминоциклогексанкарбоновая кислота, Хотя предпочтительны фармацевтически приемМ-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Млемые соли основных соединений, все соли с киэтилглицил]аспартил]-р-циклогексил-О-аланин, слотой применимы в качестве источников формы М-[г\1-[г\1-(4-пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мсвободного основания, даже если конкретная соль, per se , желательна только в качестве проэтилглицил]аспартил[-р-декагидронафт-1межуточного продукта, например, при образоваилаланин, нии соли только для целей очистки или идентифиМ-[г\1-[г\1-(4-пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мкации или при использовании ее в качестве этилглицил]аспартил]-рпромежуточного продукта в приготовлении фарциклогексилаланинэтиламид, мацевтически приемлемой соли при помощи иоМ-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мнообменной процедуры Фармацевтически приемэтилглицил]аспартил]-р-циклооктилаланин, лемыми солями в объеме данного изобретения М-[г\1-[г\1-(4-пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мявляются соли, полученные из следующих кислот этилглицил]аспартил]-аминеральных кислот, таких как соляная кислота, циклогексилметилэтаноламин, серная кислота, фосфорная кислота и сульфамиМ-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мновая кислота, и органических кислот, таких как этилглицил]аспартид]-руксусная кислота, лимонная кислота, молочная циклогексилметилаланинамид, кислота, винная кислота, малоновая кислота, меМ-[М-[І\І-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Ітансульфоновая кислота, этансульфоновая киэтилглицил]аспартил]-р-адамант-1-илаланин, слота, бе н зол сул ьфо новая кислота, пМ-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мтолуолсульфокислота, циклогексилсульфаминоэтилглицил]аспартил]-р-(1,2,3,4)-тетрагидронафтвая кислота, хинная кислота и т п Соответствую5-илаланин, щие соли с кислотами включают в себя гидрохлоМ-[М-[І\І-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Ірид, сульфат, фосфат, сульфамат, ацетат, цитрат, лактат, тартрат, малонат, метансульфонат, этанэтилглицил]аспартил]-р-(4сульфонат, бен зол сул ьфо нат, п -толуол сул ьфо нат, циклогексил)циклогексилаланин, циклогексилсульфамат и хиннат, соответственно М-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-Мэтилглицил]аспартил]-р-циклогептилаланин, Соли с кислотами соединений данного изоМ-[М-[І\І-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Ібретения получают либо растворением свободноэтилглицил]аспартил]-р-циклооктилаланинамид, го основания в водном или водно-спиртовом расМ-[г\1-[г\1-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-М 44258 13 14 творе или других подходящих растворителях, сохарактерным схемам реакции держащих подходящую кислоту, и выделением Соединения данного изобретения можно легко соли выпариванием раствора, либо реакцией свополучить при помощи процедур стандартного пепбодного основания и кислоты в органическом растидного синтеза в твердой фазе или в фазе растворителе, причем в этом случае соль отделяется твора с применением исходных материалов и/или сразу или она может быть получена концентриролегко доступных промежуточных продуктов из пованием раствора ставляющих химических компаний, таких как Aldnch или Sigma (Н Paulsen, G Merz, V Weichart, Если соединение изобретения замещено ки"Solid Phase Synthesis of O-Glycopeptide слотной частью молекулы, то соли с основанием Sequences", Angew Chem Int Ed Engl 27 (1988), могут быть образованы и они являются абсолютно H Mergler, R Tanner, J Gosteh, and P Grogg, более удобной формой для применения, и на "Peptide Synthesis by a Combination of Solid-Phase практике применение такой соли равнозначно and Soluti on Methods I A New Very Acid-Labile применению формы свободной кислоты ОсноваAnchor Group for the Solid-Phase Synthesis of Fully ния, которые можно применять для получения Protected Fragments Tetrahedron letters 29, 4005 солей с основаниями, включают в себя предпоч(1988), Mernfield, R B "Solid Phase Peptide тительно те основания, которые при взаимодейстSynthesis after 25 Years The Design and Synthesis вии со свободной кислотой образуют фармацевof Antagonists of Glucagon", Makromol тически приемлемые соли, т е соли, катионы Chem Macromol Symp 19,31(1988) которых являются нетоксичными для организма животного в фармацевтических дозах этих солей, Предпочтительным способом получения сотак что полезные антитромботические свойства, единений данного изобретения является жидкоприсущие свободной кислоте, не исчезают вследфазный способ, изображенный в Схеме 1 ниже ствие побочных эффектов, приписываемых катиоСхема, I нам Фармацевтически приемлемыми солями в объеме данного изобретения являются соли, полученные из следующих оснований гидроксида натрия, гидроксида калия, гидроксида кальция, гидроксида алюминия, гидроксида лития, гидроксида магния, гидроксида цинка, аммиака, этилендиамина, N-метилглутамина, лизина, аргинина, орнитина, прокаина, N-бензилфенетилдиамина, диэтиламина, холина, г\І,г\Г-бензилфенетиламина, пиперазина, трис(гидроксиметил)аминометана, гидроксида тетраметиламмония и т п Соли металлов соединений данного изобретения можно получить контактированием гидроксида, карбоната или подобного реактивного соединения выбранного металла в водном растворителе с формой свободной кислоты данного соединения Используемым водным растворителем может быть вода или смесь воды с органическим растворителем, предпочтительно спиртом, таким как метанол или этанол, или кетоном, таким как ацетон, алифатическим простым эфиром, таким кактетрагидрофуран, или сложным эфиром, таким как этилацетат Такие реакции обычно проводят при комнатной температуре но их можно проводить, при желании, с нагреванием Соли аминов соединений данного изобретения можно получить контактированием амина в водном растворителе со свободной кислотной формой данного соединения Подходящими водными растворителями являются вода и смеси воды со спиртами, такими как метанол или этанол, простыми эфирами, такими как тетрагидрофуран, нитрилами, такими как ацетонитрил, или кетонами, такими как ацетон Подобным образом можно получить также соли с аминокислотами Соединения этого изобретения можно получать в соответствии с описанными ниже последовательностями реакций или их можно получать способами, известными в данной области Исходные материалы, применимые в получении соединений этого изобретения, известны или коммерчески доступны или они могут быть приготовлены известными способами или по описанным здесь CHjCOOH в которой А, В, Е, F, G, R, m, n, p и г имеют определенные выше значения, А1, Е1, F, G1, и R1 обозначают А, В, Е, F, G, и R, соответственно, или они защищены их аналогами или замещены предшественниками заместителей, и Р1, Р2, и РЗ обозначают защитные группы для аминокислот Соединения данного изобретения получают обычно в результате первоначального присоединения подходящей аминокислоты или другой подходящей группы Z (предшественника), где Z имеет указанное выше значение, которая содержит свободный первичный и вторичный амин, со свободной частью карбоновой кислоты защищенного производного аспарагиновой кислоты Функциональные группы аспарагиновой кислоты или любые функциональные группы предшественника Z группы, которые не должны соединяться, защищены, если необходимо, блокирующими группами для предотвращения перекрестной реакции во время процедуры присоединения, так же как и производные аминокислот и производные азациклоалкилалкановой кислоты, применяемые в последующих стадиях синтеза Эти блокирующие группы включают в себя N-a-третбутилоксикарбонил (ВОС), бензилоксикарбонил (CBZ), бензил, метил, т-бутил, 9флуоренилметилоксикарбонил (FMOC), 2 15 44258 16 (триметилсилил)-этил и 4-метокси-2,3,6(см , например, Green, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley, New York, 1981) Селектриметилбезолсульфонил тивная защита или депротектирование могут быть Предпочтительным защищенным производтакже необходимыми или желательными, чтобы ным аспарагиновой кислоты является рсделать возможными превращение или удаление бензиловый эфир ВОС-аспарагиновой кислоты существующих заместителей и получение в поВзаимодействие проводят способами, известными следующей реакции конечного целевого продукта в этой области Предпочтительным способом проведения соединения является объединение амина Далее изобретение поясняется иллюстративи карбоновой кислоты в подходящем апротонном ными примерами В следующих далее примерах, органическом растворителе, например, метиленесли нет других указаний, а-аминокислоты, котохлориде или диметилформамиде (DMF), в присутрые могут иметь хиральные а-углероды, находятствии подходящих связующих веществ Предпочся в L-конфигурации тительным связующим агентом является Если нет других указаний, сообщаемые данизопропилхлорформат в присутствии Nные масс-спектрального анализа получали спосометилпиперидина Другим предпочтительным свябом Lou Resolution Fast Atom Bombard-ment, прозующим агентом является гидрохлорид 1-(3водимым на VG70SE с "рассчитанными" диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (EDC) величинами (М + Н)+ Спектральные данные в присутствии 1-гидроксибензотриазола (НОВТ) и ядерного магнитного резонанса получают на триэтиламина Еще одним предпочтительным Brucker ACF300, в D2O Флэш-хроматографию связующим агентом является хлорангид-рид выполняли на силикагеле Жидкостная хроматобис(2-оксо-3-оксазолидинил)-фосфоновой кислография высокого разрешения (ЖХВР, HPLC) проты (BOP-СІ) в присутствии триэтиламина ведена на Dynamax 60A, 8 микрон С-18 колонке с обращенной фазой Полученный защищенный продукт селективно освобождается от защитных групп известными Пример 1 способами с образованием N-концевого свободног\І-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\Іго амина части аспарагиновой кислоты Предпочэтилглицил]аспартил]-р-циклогексилаланин тительным способом для удаления ВОС группы является обработка трифторуксусной кислотой в апротонном органическом растворителе, например, метиленхлориде Затем полученный, освобожденный от защитЫ' 'СООН ных групп продукт соединяют с N-защищенным Nзамещенным производным глицина или рсоон аланина, имеющим свободную карбоксильную группу Затем полученный продукт освобождают А р-циклогексилаланин (1, 12г) растворяют в от N-защитных групп Полученный свободный метаноле (50мл) и пропускают газообразный хлоамин затем соединяют с подходящей защищенной ристый водород через раствор в течение приблиазациклоалкилалкановой кислотой и этот продукт зительно 15 минут Раствор выпаривают в вакууосвобождают от защитных групп (депротектируют) ме и перегоняют в виде азеотропа с толуолом из известными способами, получая конечный проосадка, получая метиловый эфир р-циклогексил-Lдукт аланина в виде соли гидрохлорида В другом предпочтительном способе соединеВ р-бензиловый эфир BOC-L-аспарагиновой ния данного изобретения можно получать тверкислоты (1,27г) растворяют в метиленхлориде дофазными способами, хорошо известными в этой (20мл) Раствор охлаждают до 0°С и добавляют Nобласти В таком твердофазном способе Сметилпиперидин (0,48мл), а затем изопропилконцевой остаток связывают по карбоксильной хлорформиат (3,94мл) Этот раствор перемешичасти с нерастворимой смолой, например, остаток вают при 0°С в течение приблизительно 2 минут и можно связать в виде сложного эфира полимера добавляют гидрохлорид метилового эфира рn-алкоксибензилового спирта Способом, подобциклогексил-Ьаланина (0,88г) Раствору дают соным жидкофазному способу, защищенную аминогреться до комнатной температуры и перемешикислоту или другие остатки добавляют по одному вают в течение ночи Раствор выпаривают в вадо тех пор, пока вся последовательность не будет кууме и остаток распределяют между построена на полимере Затем это соединение этилацетатом (200мл) и 1н соляной кислотой депротектируют и выделяют из смолы стандарт(НС1) (50мл) Органический слой промывают 1н ными способами, получая конечное соединение НС1, насыщенным раствором бикарбоната наВо время получения соединений данного изотрия, солевым раствором, сушат над сульфатом бретения или полупродуктов их синтеза может магния, фильтруют и выпаривают в вакууме, побыть желательно или необходимо предотвратить лучая метиловый эфир І\І-[ВОС-І_-аспартил(рперекрестную реакцию между химически активбензиловый эфир)]-р-циклогексил-1_-аланина ными заместителями, иными, чем те, которые С Метиловый эфир І\І-[ВОС-І_-аспартил(рприсутствуют у природных или других аминокисбензиловый эфир)]-р-циклогексилаланина (2,01 г) лотах Эти заместители могут быть защищены растворяют в метиленхлориде (15мл) Раствор стандартными защитными группами, которые заохлаждают до 0°С и добавляют трифторуксусную тем могут быть удалены или сохранены, если некислоту (5мл) в течение периода приблизительно обходимо, известными способами для получения 1мин Этот раствор перемешивают при 0°С в тецелевых продуктов или промежуточных продуктов 17 44258 18 чение 2 часов, выпаривают в вакууме и остаток фенилфосфоранилиден)ацетат (68,6г) Раствор поглощают в этилацетат, после чего органический перемешивают при комнатной температуре в тераствор промывают насыщенным раствором бичение приблизительно 18 часов, выпаривают в карбоната натрия до тех пор, пока промывки не вакууме и остаток поглощают в этилацетате Расстанут щелочными Этот органический раствор твор этилацетата промывают водой, 5% НС1, 5% промывают солевым раствором, сушат над сульраствором гипохлорита натрия, водой, солевым фатом магния, фильтруют и выпаривают в вакуураствором, сушат над сульфатом натрия, фильтме, получая метиловый эфир І_-аспартил(рруют и выпаривают в вакууме, получая метил-4бензиловый эфир)-р-циклогексил-1_-аланина (|\|-ВОС-пиперидин-4-ил)транс-кротонат І Метил-4-(І\І-ВОС-пиперидин-4-ил)трансD Используя процедуру Примера 1В, описанкротонат (11,5г) растворяют в метаноле (200мл) и ную выше, с последующей процедурой удаления добавляют палладий/уголь (Зг) и эту смесь качают защитных групп согласно примеру С, получают под водородом при 50psi(344737,85l~la) в течение метиловый эфир 1\1-этилглицил-1_-аспартил-(р18 часов Смесь фильтруют, добавляют к раствобензиловый эфир)-1_-р-циклогексил-1_-аланина из ру свежий катализатор и гидрогенизацию повтометилового эфира 1_-аспартил-(р-бензиловый ряют Смесь фильтруют и выпаривают в вакууме, эфир)-р-циклогексил-1_-аланина и N-BOC-Nполучая метил-4-(г\І-ВОС-пиперидин-4-ил)бутират этил глицина J К смеси 1N водного гидроксида натрия Е Смешивают 4-пиридинуксусную кислоту (100мл) и метанола (200мл) добавляют метил-4(Юг) и оксид платины (1,0г) в уксусной кислоте (г\|-ВОС-пиперидин-4-ил)бутират (10,1 г) и смесь (100мл) и смесь качают под водородом при 50psi перемешивают при комнатной температуре в те(344734,85Па) в течение приблизительно 18 чачение приблизительно 18 часов Смесь выпарисов Смесь фильтруют и раствор выпаривают в вают в вакууме, разбавляют водой и промывают вакууме и перегоняют в виде азеотропа с тотуоэфиром Водную часть подкисляют 5% НС1, экстлом из остатка, получая 2-(пиперидин-4-ил) уксусрагируют этилацетатом и органический раствор ную кислоту промывают водой, солевым раствором, сушат над F 2-(пиперидин-4-ил)уксусную кислоту (11,6г) сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают в растворяют в 1N водном растворе гидроксида навакууме, получая 4-(І\І-ВОС-пиперидин-4трия (200мл) и раствор охлаждают до 0°С К нему ил)масляную кислоту по каплям добавляют раствор ди-третК Раствор 4-(І\І-ВОС-пиперидин-4бутилдикарбоната (18,0г) в тетрагидрофуране ил)масляной кислоты (0,91 г) в метиленхлориде (THF) (100мл) и смеси дают нагреться до комнат(50мл) охлаждают до 0°С и добавляют хлорангидной температуры и перемешивают в течение пририд бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфиновой киблизительно 18 часов Далее смесь выпаривают в слоты (ВОР-С1) (0,86г) и триэтиламин (0,47мл) вакууме для удаления THF и остаток смешивают с Раствор перемешивают при 0°С в течение приводой и промывают этилацетатом Этилацетат близительно 10 минут и добавляют метиловый добавляют к водному слою и смесь подкисляют эфир 1\1-этилглицил-1_-аспартил(р-бензиловый 1NHC1 Органический слой отделяют и водный слой экстрагируют этилацетатом Объединенные эфир)-1_-р-циклогексил-1_-аланина (1,52г) в миниорганические порции промывают водой, солевым мальном количестве метиленхлорида с послераствором, сушат над сульфатом магния, фильтдующим добавлением по каплям триэтиламина руют и выпаривают в вакууме, получая N-BOC-2(0,47мл) в метиленхлориде в течение приблизи(пиперидин-4-ил)уксусную кислоту тельно 15 минут Смесь перемешивают при 0°С в течение приблизительно 1 часа при комнатной G І\І-ВОС-2-(пиперидин-4-ил)уксусную кислоту температуре в течение приблизительно 18 часов (15,8г) растворяют в THF (150мл) и добавляют Смесь выпаривают в вакууме и остаток поглощакаплями 1М боран / THF (70мл) ют в этилацетат Этот органический раствор проРаствор перемешивают при комнатной темпемывают 1NHC1, насыщенным раствором бикарборатуре в течение приблизительно 20 часов и доната натрия, солевым раствором, сушат над бавляют по каплям 1N раствор гидроксида натрия сульфатом магния, фильтруют, упаривают в ва(200мл) THF выпаривают в вакууме и водный оскууме и остаток очищают флаш-хроматографией с таток экстрагируют этилацетатом Раствор в этилэлюцией 60% этилацетатом в гексанах, получая ацетате промывают водой, сушат над сульфатом метиловый эфир N-[N-[N-(4-(N-BOC-nnnepHflHH-4натрия, фильтруют, выпаривают в вакууме, полуил)бутаноил)-г\1-этилглицил]аспартил(рчая 1\1-ВОС-2-(пиперидин-4-ил)этанол бензиловый эфир)]-- р-циклогексилаланин Н Раствор оксалилхлорида (11,8г) в метиленL Метиловый эфир N-[N-[N-(4-(N-BOCхлориде (180мл) охлаждают до-70°С и добавляют пиперидин-4-ил)бутаноил-І\Іпо каплям диметилсульфоксид (DMSO) (8,9мл) Раствор перемешивают при-78°С в течение приэтилглицил]аспартил(р-бензиловый эфир)]-рблизительно 3 минут и добавляют раствор N-BOCциклогексилаланина, (1,79г) растворяют в мета2-(пиперидин-4-ил)этанола (14,3г) в метиленхлоноле (40мл) и добавляют 10% палладий на угле риде (250мл) в течение периода приблизительно (0,25г) Эту смесь качают под водородом при 10 минут Раствор перемешивают в течение при50psi(344737, 85Па) в течение приблизительно 18 близительно 1 часа и добавляют Nчасов Смесь фильтруют через целитовую подушметилморфолин (21,6г) в течение приблизительно ку и фильтрат упаривают в вакууме, получая ме15 минут Раствору дают нагреться до комнатной тиловый эфир N-[N-[N-(4-(N-BOC-nnnepHflHH-4температуры и, после приблизительно 30 минут, ил)бутаноил)-1\1-этилглицил]-аспартил]-рдобавляют метил (трициклогексилаланин Эфир растворяют в метаноле 19 44258 20 (20мл) и добавляют 1N водный раствор гидроксиг\|-[М-[М-4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1да натрия (10мл) Смесь перемешивают при комэтилглицил]аспартил]-О-валин натной температуре в течение приблизительно 4 часов, разбавляют водой (25мл) и подкисляют 1NHC1 до рН2 Эту смесь экстрагируют этилацетатом (3 х 100мл) и раствор в етилацетате сушат над сульфатом магния, фильтруют и выпаривают в вакууме, получая N-[N-[N-(4-(N-BOC-nnnepHflHHсоон 4-ил)бутаноил)-г\1-этилглицил]аспартил]-рM S , Рассчитано 471, найдено 471, ЯМР, 5 = циклогексилаланин 4,10-3,98 (м, 2Н), 3,85 (с, 2Н), 3,28 (к, 2Н), 3,23М N-[N-[N-(4-(N-BOC-nnnepHflHH-43,10 (м, 2Н), 2,82-2,58 (м, 4Н), 2,28 (т, 2Н), 2,02 (к, ил)бутаноил)-г\1-этилглицил]аспартил]-р1Н), 1,80-1, 65 (м, 2Н), 1,50-1,28 (м, ЗН), 1,25-1,00 циклогексилаланин (1,39г) растворяют в метилен(м, 4Н), 0,95 (т, ЗН), 0,78-0,65 (м, 6Н) хлориде (15мл) и раствор охлаждают до 0°С Пример 5 Трифторуксусную кислоту (5мл) добавляют и расг\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1твор перемешивают при 0°С в течение приблизиэтилглицил]аспартил]-1_-а-2,2-диметил)проп-3тельно 2,5 часов Раствор выпаривают в вакууме ил глицин и остаток разводят водой, замораживают и лиофилизируют Остаток очищают HPLC (ЖХВР) с обращенной фазой с элюцией градиентом 40-80% метанола в воде, содержащего 1,0% трифторуксусную кислоту Нужные фракции объединяют и лиофилизируют, получая г\І-[г\І-[г\І-(4-пиперидин-4ил)-бутаноил)-1\1-этилглицил]аспартил]-рциклогексилаланин в виде соли трифторуксусной кислоты М S, рассчитано 525, Найдено 525, ЯМР, 5 = 4,58-4,48 (м, 1Н) , 4, 35-4,22 (м, 1Н) , 3,88 (с, 2Н),3,32 (к, 2Н),3,28-3,10 (м, 2Н), 2,88-2,60 (м, 4Н), 2,33 (т, 2Н), 1,85-1,70 (м, 2Н), 1,62-1,35 (м, ЮН), 1,30-1,06 (м, 5Н), 1,04-0,65 (м, 8Н) Используя процедуры представленного выше примера 1 следующие соединения получают из соответствующих исходных материалов Пример 2 г\|-[М-[М-(4-пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]валин соон соон М S , Рассчитано 499, найдено 499, ЯМР 5 = 4,63-4,55 (м, 1Н), 4,30-4,20 (м, 1Н), 3,38 (с, 2Н), 3,33 (к, 2Н), 3,30-3,15 (м, 2Н), 2,88-2,60 (м, 4Н), 2,35 (т, 2Н), 1,85-1,75 (м, 2Н), 1,73-1,35 (м, 5Н), 1,30-1,08 (м, 4Н), 1,03 (т, ЗН), 0,78 (с, 9Н) ПРИМЕР 6 г\|-[М-[М-(4-пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]норлейцин СООН О соон соои соон М S Рассчитано 471, найдено 471, ЯМР, 5 = 4,15-4,05 (м, 2Н), 3,90 (с, 2Н), 3,30 (к, 2Н), 3,303,15 (м, 2Н), 2,90-2,60(м, 4Н), 2,33 (т, 2Н), 2,05 (к, 1Н), 1,85-1,72 (м, 2Н), 1,55-1,35 (м, ЗН), 1,30-1,08 (м, 4Н), 1,02 (т, ЗН) , 0,70 (д, 6Н) Пример 3 N-[N-[N-(4-nnnepHflHH-4-Hn)-Nэтилглицил]аспартил]фенилаланин о HN Н О Ц ^ соон «О^-^ , ОТ»' М S , Рассчитано 485, найдено 485, ЯМР, 5 = 4,59-4,50 (м, 1Н), 4,20-4,10 (м, 1Н), 3,85 (с, 2Н), 3,32 (к, 2Н), 3,25-3,10 (м, 2Н), 2,85-2,55 (м, 4Н), 2,30 (т, 2Н), 1,82-1,50(м,4Н), 1,50-1,30 (м, ЗН), 1,28-1,05 (м, 8Н), 0,98 (т, ЗН), 0,75-0,60 (м, ЗН) Пример 7 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]-1_-р-нафт-1-илаланин соон М S , рассчитано 519, найдено 519, ЯМР, 5 = 7,20-6,95 (м, 5Н), 4,55-4,35 (м, 2Н), 3,73 (с, 2Н), 3,30-2,40 (м, ЮН), 2,25 (т, 2Н), 1,75-1,60 (м, 2Н), 1,45-1,25 (м, ЗН), 1,20-0,97 (м, 4Н), 0,92 (т, ЗН) Пример 4 М S , Рассчитано 569, найдено 569, ЯМР, 5 = 8,00-7,15 (м, 7Н), 4,60-4,45 (м, 2Н), 3,71 (с, 2Н), 3,65-3,50(м, 2Н), 3,40-2,98 (м, 4Н), 2,70-2,42 (м, 4Н), 2,21 (т, 2Н), 1,70-1,45 (м, 2Н), 1,40-0,96 (м, 7Н), 0,92 (т, ЗН) Пример 8 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]-1_-р-нафт-2-илаланин 44258 21 М" 'СООН соои М S , Рассчитано 569, найдено 569, ЯМР, 5 = 7,65-7,03 (м, 7Н), 4,60-4,45 (м, 2Н), 3,41с,Н), 3,202,01 (м, ЗН), 3,00-2,71 (м, ЗН), 2,68-2,40 (м, 4Н), 1,98 (т, 2Н), 1,68-1,42 (м, ЗН), 1,25-0,85 (м, 6Н), 0,71 (т, ЗН) Пример 9 І\І-[М-[М-(3-(пиперидин-4-ил)пропаноил)-І\Іэтилглицил]аспартил]-валин 22 раствором, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпарив ют в вакууме, получая этиловый эфир р-циклогексилаланина В Используя процедуру примера 1B-JM (за исключением гидролиза водным гидроксидом натрия стадии 1L) получают целевой продукт М S , Рассчитано 553, найдено 553, ЯМР 5 = 4,4 (1Н, м), 4,1 (2Н, д), 3,2-3,5 (5Н, м), 2,7-3,0 (5Н, М), 2,4 (2Н, т), 1,9 (2Н, д), 1,4-1,7 (7Н, м), 0,7-1,4 (18Н, м) Пример 12 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]-1_-р-циклогексилаланинамид О соон соон М S , Рассчитано 547, найдено 457, ЯМР, 5 = 4,62 (м, 2Н), 3,90 (с, 2Н), 3,33 (м, 4Н), 2,66 (м, 4Н), 2,37(т, 2Н), 2,16 (м, 1Н), 2,03 (м, 1Н), 1,78 (м, 2Н), 1,44(м, 2Н), 1,20 (м, 2Н), 1,00 (м, ЗН), 0,78 (д, 6Н) Пример 10 І\І-[М-[М-(5-(пиперидин-4-ил)пентаноил)-І\Іэтилглицил]аспартил]-валин СООН соон М S , Рассчитано 485, найдено 485, ЯМР, 5 = 4,20-4,05 (м, 2Н), 3,92 (с, 2Н), 3,33 (м, 2Н), 3,283,15 (м, 2Н), 2,90-2,61 (м, 4Н), 2,34 (т, 2Н), 2,06 (м, 1Н), 1,85-1,70 (м, 2Н), 1,55-1,32 (м, ЗН), 1,30-1,12 (м, 6Н), 1,06 (т, ЗН), 0,81 (д, 6Н) Пример 11 Этиловый эфир 1\1-[М-[1\1-(4-(пиперидин-4ил)бутаноил)-г\1-этилглицил]-аспартил]-1_-рциклогексилаланина і н соон о А р-циклогексилаланин (1,5г) растворяют в абсолютном этиловом спирте (75мл) и раствор охлаждают до0°С Тионилхлорид (1,1мл) добавляют по каплям в течение 10-15 минут, раствору дают нагреться до комнатной температуры и затем перемешивают при комнатной температуре в течение приблизительно 18 часов Реакционную смесь выпаривают в вакууме, перегоняют в виде азеотропа с толуолом 2 раза и остаток поглощают в этилацетат Раствор в этилацетате промывают водой, 1N гидроксидом натрия, водой, со левым СООН О А N-ВОС-р-циклогексилаланин (2,0г) и триэтиламин(1,03мл) растворяют вместе в THF (100мл) и раствор охлаждают до-20°С Добавляют изобутилхлорформиат (1,06мл) и раствор перемешивают при-20°С в течение приблизительно 30 минут Добавляют насыщенный раствор аммиака в метаноле (20мл) и раствору дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают его при комнатной температуре в течение приблизительно 18 часов Раствор выпаривают в вакууме и остаток растворяют в этилацетате Раствор в этилацетате промывают водой, 5% НС1, насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой, солевым раствором, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают в вакууме, получая N-BOC-pциклогексилаланинамид В N-ВОС-р-циклогексилаланинамид (2,0г) растворяют в этилацетате (100мл) и газообразный хлористый водород НС1 побулькивают через раствор и перемешивают раствор при комнатной температуре в течение приблизительно 18 часов Раствор выпаривают в вакууме и перегоняют 2 раза в виде азеотропа с толуолом, получая рциклогексилаланинамид в виде гидрохлорида С Используя процедуру примера 1В-1М (за исключением гидролиза водным гидроксидом натрия примера 1L) получают целевой продукт М S , Рассчитано 524, найдено 524, ЯМР, 5 =8,4 (1Н, д), 8,1 (1Н, д), 4,2 (2Н, к), 4,1 (1Н, с), 3,9 (4Н, к), 3,4 (2Н, к), 3,3 (4Н, д), 2,8-3,0 (6Н, м), 2,4 (2Н, т), 2,2 (1Н, м), 1,8 (4Н, д ), 1,4-1,7 (7Н, м), 0,71,3 (ЮН, м) Пример 13 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]-1_-а-циклогексил глицин N "СООН СООН А Раствор метилового эфира гидрохлорида с 23 44258 24 нафтил)аланина (2,0г) и 5% родия на оксиде алюа-фенилглицина (1,0г) в THF (25мл) охлаждают до миния (1,0г) объединяют в метаноле (50мл), со0°С и добавляют триэтиламин (1,38мл) К этой держащем уксусную кислоту (1,0мл), и смесь касмеси добавляют раствор ди-трет-бутилдикарбона чают в атмосфере водорода при 50psi в течение (1,08г) в THF (25мл) и смеси дают нагреться до приблизительно 18 часов Смесь фильтруют, выкомнатной температуры и перемешивают при паривают в вакууме и остаток растворяют в этилкомнатной температуре в течение приблизительно ацетате Этот органический раствор промывают 18 часов Раствор выпаривают и остаток раствоводой, 5% раствором бикарбоната натрия, водой, ряют в етилацетате (200мл) и органический рассолевым раствором, сушат над сульфатом натвор промывают 1NHC1, насыщенным раствором трия, фильтруют и выпаривают в вакууме, полубикарбоната натрия, солевым раствором, сушат чая метиловый эфир 1_-р-декагидронафт-1над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают илаланина в вакууме, получая метиловый эфир N-BOC-aфенил глицина В Метиловый эфир N-BOC-a-фенилглицина (1,2г) растворяют в метаноле (50мл), содержащем уксусную кислоту (1мл) Добавляют 5% родий на порошке оксида алюминия (0,60г) и смесь качают под водородом при 50psi в течение приблизительно 18 часов Смесь фильтруют, выпаривают в вакууме и остаток растворяют в эти] ацетате Этот органический раствор промывают водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой, солевым раствором, сушат над сульфатом магния, фильтруют, выпаривают в вакууме, получая метиловый эфир N-BOC-a-циклогексилглицина С Используя процедуру Примера 1В-1М получают целевой продукт М S , Рассчитано 511, найдено 511, ЯМР, 5 = 4,62-4,55 (1Н, м), 4,06 (2Н, м), 3,85 (2Н, с), 3,30 (2Н, к), 3,23-3,10 (2Н, м), 2,85-2,55 (4Н, м), 2,30 (2Н, т), 1,83-1,60 (ЗН, м), 1,59-1,32 (8Н, м), 1,300,75 (12Н, м) Пример 14 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартид]-1_-р-декагидронафт-1илаланин w XO0H соон А р-(1-нафтил)аланин (2,0г) перемешивают в насыщенном растворе HCI / метанол в течение приблизительно 2 часов при комнатной температуре Смесь выпаривают в вакууме и дважды перегоняют в виде азеотропной смеси с толуолом из остатка Остаток суспендируют в метиленхлориде, добавляют N-метилморфолин (1,02мл) и смесь охлаждают до 0°С Добавляют ди-третбутилдикарбонат (2,02г) и 4диметиламинопиридин (DM АР) (0,8г), раствору дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают его при комнатной температуре в течение приблизительно 2 часов Смесь промывают 5% НС1, водой, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают в вакууме, получая метиловый эфир г\1-ВОС-р-(1-нафтил) аланина В Метиловый эфир N-BOC-p-(1 С Используя процедуру примера 1В-1М получают целевой продукт М S , Рассчитано 579, найдено 579, ЯМР, 5 = 4,1-4,3 (м, 1Н), 3,8-4,1 (м, 2Н), 2,6-2,9 (м, 4Н), 2,3 (м, 1Н), 2,0 (м, Н), 1,8 (д, ЗН), 0,5-1,6 (м, ЗЗН) Пример 15 2-циклогексил-г\І-[М-[г\І-(4-(пиперидин-4ил)бутаноил)-г\1-этилглицил]-аспартил]-этиламин соон А 2-Фенилэтиламин (2,0г) растворяют в метиленхлориде и раствор охлаждают до 0°С Добавляют ди-трет-бутилдикарбонат (4,0г) и DM АР (0,4г) Раствору дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают его при комнатной температуре в течение приблизительно 18 часов Раствор промывают 5% НС1, водой, фильтруют и выпаривают в вакууме, получая N-BOC-2фенилэтиламин В N-BOC-2-фенилэтиламин (3,1 г) и 5% родия на оксиде алюминия (1,1 г) объединяют в метаноле (40мл), содержащем уксусную кислоту (1,0мл) Смесь качают под водородом при 50psi в течение приблизительно 20 часов Смесь фильтруют, выпаривают в вакууме и остаток растворяют в этилацетате Этот органический раствор промывают водой, 5% раствором бикарбоната натрия, водой, солевым раствором, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и выпаривают в вакууме, получая N-BOC-2-циклогексилэтиламин С Используя процедуру примера 1В-1М (за исключением гидролиза водным пероксидом натрия примера 1L) получают целевой продукт М S , Рассчитано 481, найдено 481, ЯМР, 5 = 3,9 (с, 2Н), 3,35 (д 4Н) 3,25 (д, 4Н), 2,6-2,9 (м, 8Н), 2,35 (т, 2Н), 2,15 (т, 1Н), 1,8 (4Н, д), 1,4-1,7 (м, 7Н), 0 9-1,3 (м, 12Н), 07 (т, 2Н) Пример 16 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]-1_-а-(2-циклогексилэтил) глицин 25 44258 COOH А Используя процедуру примера 13А метиловый эфир 1\1-ВОС-а-(2-фенилэтил)глицина получают из L-гомофенилаланина В При помощи в основном процедуры примера 14В (выше) N-BOC-a-(2циклогексилэтил)глицин (метиловый эфир) получают из метилового эфира N-BOC-a-(2фенилэтил) глицина С При помощи процедур примера 1В-1М получают целевой продую" М S , Рассчитано 539, найдено 539, ЯМР, 5 = 4,60-4,55 (м, 1Н), 4,20-4,08 (м, 1Н), 3,85 (с, 2Н), 3,29 (к, 2Н), 3,25-3,12 (м, 2Н), 2,84-2,55 (м, 4Н), 2,29 (т, 2Н), 1,83-1,65 (м, 2Н), 1,63-1,32 (м, ЮН), 1,28-0,81(м, 13Н), 0,79-0,56(м, 2Н) С использованием процедур представленных выше примеров из подходящих исходных материалов получают следующие соединения Пример 17 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]-1_-р-цис-декагидронафт-2илаланин 26 соон М S , Рассчитано 497, найдено 497, ЯМР, 5 = 4,60-4,55 (м, 1Н), 4,05 (с, 1Н), 3,90 (с, 1Н), 3,30 (к, 2Н), 3,25-3,12 (м, 2Н), 2,85-2,55 (м, 4Н), 2,35 (т, 1Н), 2,11 (т, 1Н), 1,90-1,70 (м, 4Н), 1,53-1,32 (м, 6Н), 1,30-1, 06 (м, 7Н), 1,05-1,85 (м, ЗН) Пример 20 г\|-[М-[М-(4(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилгексил]аспартил]-р-циклогексил-О-аланин СООН соон М S , Рассчитано 525, найдено 525, ЯМР, 5 = 4,60-4,55 (м, 1Н), 4,32-4,20 (м, 1Н), 4,05 (с, 1Н), 3,85 (с, 1Н), 3,32 (к, 2Н), 2,25-3,12 (м, 24), 2,85-2,60 (м, 4Н), 2,32 (т, 1Н), 2,12 (т, 1Н), 1,85-1,68 (м, 2Н), 1,60-1,32 (м, 10Н), 1,28-0,60 (м, 13Н) Пример 21 г\І-[г\І-[г\І-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І_этилглицил]аспартил]-р-декагидронафт-1илаланин соон соон М S , Рассчитано 579, найдено 579, ЯМР, 5 = 4,7(м, 1Н), 4,3 (м, 1Н), 4,1 (д, 2Н), 3,3-3,7 (м, 5Н), 2,6-2,8 (м, 5Н), 2,5 (т, 2Н), 2,3 (т, 1Н), 1,9 (д, 2Н), 1,3-1,8 (м, 14Н), 0,9-1,3 (м, 14Н), 0,7-0,8 (м, ЗН) Пример 18 3-адамант-1-илпропил-1\1-[г\1-(4-(пиперидин-4ил)бутаноил)-г\1-этилглицил]аспартат СООН соон S , Рассчитано 579, найдено 579, ЯМР, 5 = 4,1-4,3 (1Н, м), 3,8-4,1 (2Н, м), 3,1-3,4 (4Н, м), 2,62,9 (4Н, м), 2,3 (1Н, м), 2,0 (1Н, м), 1,8 (ЗН, д), 0,51,6 (33Н, м) Пример 22 М-[г\І-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\Іэтилглицил]аспартил]-рциклогексилаланинэтиламид СООН М S , Рассчитано 548, найдено 548, ЯМР (DMSO-d6), 5 = 4,65-4,50 (м, 1Н), 4,05-3,85 (м, 4Н), 3,35-3,15 (м, 4Н), 2,90-2,50 (м, 4Н), 2,30 (т, 2Н), 2,18 (т, 1Н), 1,94 (д, 2Н), 1,85-1,35 (м, 20Н), 1,321,12 (м, 4Н), 1,10-0,90 (м, 5Н) Пример 19 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]-ааминоциклогексанкарбоновая кислота соон М S , Рассчитано 552, найдено 552, ЯМР, 5 = 4,55-4,45 (м, 1Н), 4,20-4,06 (м, 1Н), 4,05-3,85 (м, 2Н), 3,40-3,25 (м, 2Н), 3,28-3,15 (м, 2Н), 3,10-2,90 (м, 2Н), 2,88-2,55 (м, 4Н), 2,40-2,25 (м, 1Н), 2,202,05 (м, 1Н), 1,85-1,70 (м, 2Н), 1,60-1,32 (м, 9Н), 1,30-0,62 (м, 17Н) Пример 23 М-[г\І-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\І 27 зтилглицил]аспартил]-р-циклооісгилаланин 44258 28 к), 3,1-3,1 (6Н, м), 2,4-2,98 (5Н, ), 2,3 (1Н, м), 2,0 (1Н,м), 1,8 (4Н, м), 1,2-1,7 (16Н, і), 1,0-1,2 (6Н, м), 0,8-1,0 (ЗН, м) Пример 27 І\І-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Іэтилглицил]аспартил]-р-(1,2,3,4)-тетрагидронафт5-илаланин соон S , Рассчитано 553, найдено 553, ЯМР, 5 = 4,1-4,3 (1Н, м), 3,8-4,1 (2Н, м), 3,1-3,4 (4Н, м), 2,62,9 (4Н, м), 2,3 (1Н, м), 2,0 (1Н, м), 1,8 (2Н, д), 0,51,6 (31Н, м) Пример 24 І\І-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Іэтилглицил]аспартил]-ациклогексилметилэтаноламин соон М S , Рассчитано 573, найдено 573, ЯМР, 5 = 6,9 (д, 4Н), 4,7 (м, 1Н), 4,3 (м, 1Н), 4,1 (д, 2Н), 3,33,7 (м, 6Н), 2,6-3,1 (м, 12Н), 2,5 (т, 2Н), 2,3 (т, 1Н), 1,9 (д, 2Н), 1,2-1,8 (м,16Н), 1,1 (т, 2Н), 1,0 (т, 2Н) Пример 28 І\І-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Іэтилглицил]аспартил]-р-(4циклогексил)циклогексилаланин соон М S , Рассчитано 511, найдено 511, ЯМР, 5 = 4,60-4,45 (м, 1Н), 4,10-3,75 (м, ЗН), 3,45-3,15 (м, 6Н), 2,90-2,60 (м, 4Н), 2,35 (т, 1Н), 2,00-2,08 (м, 1Н), 1,88-1,75 (м, 2Н), 1,62-1,35 (м, 8Н), 1,30-1,08 (м, 7Н), 1,10-0,60 (м, 8Н) Пример 25 І\І-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Іэтилглицил]аспартил]-рциклогексилметилаланинамид М S , Рассчитано 607, найдено 607, ЯМР, 5 = 4,2-4,3 (1Н, м), 3,9-4,1 (2Н, м), 3,1-3,4 (5Н, м), 2,62,9 (5Н, м), 2,3 (1Н, м), 2,0 (1Н, м), 1,8 (ЗН, д), 0,91,6 (32Н, м), 0,7-0,8(ЗН,м) Пример 29 І\І-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Іэтилглицил]аспартил]-р-циклогептилаланин соон M S , Рассчитано 538, найдено 538, ЯМР, 5 = 4,60-4,50 (м, 1Н), 4,15-4,00 (м, 1Н), 4,00-3,80 (м, 2Н), 3,35 (к, 2Н), 3,30-3,15 (м, 2Н), 2,90-2,62 (м, 4Н), 2,35 (т, 1Н), 2,15 (т, 1Н), 1,88-1,75 (м, 2Н), 1,65-1,40 (м, 9Н) 1,30-0,88 (м, 14Н), 0,85-0,65 (м, 2Н) Пример 26 |\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)этилглицил]аспартил]-р-адамант-1-илаланин СООН О М S , Рассчитано 577, найдено 577, ЯМР, 5 = 4,5-4,1 (1Н, м), 4,1-4,2 (1Н, м), 3,9 (2Н, д), 3,2 (2Н, соон О М S , Рассчитано 539, найдено 539, ЯМР, 5 = 4,60-4,55 (м, 1Н), 4,35-4,25 (м, 1Н), 4,08 (с, 1Н), 3,35 (к, 2Н), 3,33-3,20 (м, 2Н), 2,90-2,60 (м, 4Н), 2,35 (т, 1Н), 2,18 (т, 1Н), 1,90-1,75 (м, 2Н), 1,701,10 (м, 22Н), 1,10-0,85 (м, ЗН) Пример 30 І\І-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-І\Ізтилглицил]аспартил]-р-циклооісгилаланинамид 44258 ЗО 2Н), 1,0-1,8 (м, 16Н) Пример 34 Этиловый эфир г\І-[г\І-[г\І-(4-(пиперидин-4ил)бутаноил)-г\1-этилглицил]аспартил]-рциклогексилметилаланина 29 HN L б к соон ° М S , Рассчитано 551, найдено 551, ЯМР, 5 = 4,46 (дд, 1Н, Н-12), 4,18 (м, 1Н, Н-14), 3,89 (д, 1Н, Н-11), 3,69 (д, 1Н, Н-11), 3,31 (к, 2Н, Н-9), 3,18 (дт, 2Н, Н-1а), 2,74 (дт, 2Н, Н-1е), 2,65 (дд, 2Н, Н-13), 2,25 (т, 2Н, Н-8), 1,85-1,10 (м, 26Н, Н-3 - Н-7 и Н15-Н-23), 1,06 (т, ЗН, Н-10) Пример 31 М-[г\І-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\Іэтилглицил]аспартил]-а-циклогексил пропил глицин О М s , Рассчитано 553, найдено 553, ЯМР, 5 = - 4,60 (м, 1Н), 4,30 - 4,15 (м, 1Н), 4,10 (с, 1Н), (с, 1Н), 3,35 (к, 2Н), 3,35 - 3,20 (м, 2Н), 2,90 (м, 4Н), 2,40 (т, 1Н), 2,15 (т, 1Н), 1,90 -1,75 (м, 1,75 - 1,45 (м, 10Н), 1,35 - 1,15 (м, 6Н), 1,12 (м, 9Н), 0,85-0,60 (м, 2Н) Пример 32 М-[г\І-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\Іэтилглицид]аспартил]-р-циклооктилметилаланин 4,70 3,95 2,60 2Н), 0,90 •О— он ч соон M S , Рассчитано 567, найдено 567, ЯМР, 5 = 4,05 - 4,15 (м, 1Н, 14), 3,75 - 4,00 (м, 2Н, 11 и 18), 3,10 - 3, 30 (м, 4Н, 19 и 26 эк), 2,50 - 2,80 (м, 4Н, 15 и26акс), 2,05-2,25 (м, 2Н, 21), 0,75-1,75 (м, 31Н, 1 -10, 20 и 22-25) Пример 33 г\|-[М-[М-(4-(пиперидин-4-ил)бутаноил)-г\1этилглицил]аспартил]-р-циклопентилаланин соон М S , Рассчитано 511, найдено 511, ЯМР, 5 = 4 7 (м, 1Н), 4,3 (м, 1Н), 4,1 (д, 2Н), 3,3-3,7 (м, 5Н), 2,8 (т, 2Н), 2,7 (м, ЗН), 2,5 (т, 2Н), 2,3 (т, 1Н), 1,9 (д, О О HIM ^ соон М S , Рассчитано 567, найдено 567, ЯМР, 5 = 4,30 - 4,10 (м, 1Н), 4,10 - 3,80 (м, ЗН), 3,35 (к, 2Н), 3,30 - 3,15 (м, 2Н), 2,90 - 2,60 (м, 4Н), 2,40 - 2,10 (т, 2Н), 1,90 - 1,70 (м, 2Н), 1,65 - 1,40 (м, ЮН), 1,35 0,85 (м, 18Н), 0,85 - 0,60 (м, 2Н) Соединения в объеме данного изобретения ингибируют агрегацию тромбоцитов путем ингибирования связывания фибриногена с активированными тромбоцитами и другими адгезивными гликопротеинами, участвующими в агрегации тромбоцитов и свертывании крови, и применимы в предотвращении и лечении тромбоза, связанного с некоторыми патологическими состояниями, такими как инфаркт миокарда, тромботический инсульт, поражение периферической артерии и диссеминированное внутрисосудистое свертывание у человека и других млекопитающих Соединения этого изобретения могут обычно вводиться перорально или парентерально в лечении или предотвращении связанных с тромбозом патологических состояний Соединения этого изобретения могут быть приготовлены в виде формы для введения любым стандартным путем, и изобретение включает в его объем фармацевтические композиции, содержащие, по меньшей мере, одно соединение изобретения, приспособленное для использования в медицине и ветеринарии Такие композиции могут быть изготовлены общепринятыми способами с применением одного или более фармацевтически приемлемых носителей или наполнителей Подходящие носители включают в себя разбавители или наполнители, стерильные водные среды и разнообразные нетоксичные органические растворители Композиции могут быть приготовлены в виде таблеток, капсул, лепешек, пастилок, карамели, порошков, водных суспензий или растворов, растворов для инъекций, эликсиров, сиропов и т п и могут содержать один или более агентов, выбранных из группы, включающей в себя подслащивающие агенты, ароматизаторы, красители и консерванты, для обеспечения фармацевтически приемлемого препарата Конкретный носитель и отношении ингибирующего агрегацию тромбоцитов и тромбообразование соединения к носителю определяют на основании растворимости и химических свойств этих соединений, на основании конкретного способа введения и стандартной фармацевтической практики Например, в производстве таблеток можно применять наполнители, такие как лактоза, цитрат натрия, карбонат кальция и кислый фосфат каль 31 44258 32 ция (Са2НРО4), и различные дезинтеграторы, ингибирования АДФ-индуцированной агрегации такие как крахмал, альгиновая кислота и некототромбоцитов ex vivo основан на тесте Zucker, рые комплексные силикаты, вместе со смачиваю"Platelet Aggregation Measured by the Photoelectric щими агентами, такими, как стеарат магния, лауMethod", Methods in Enzymology 169, 117-133 рилсульфат натрия и тальк Для капсул лактоза и (1989) высокомолекулярные полиэтиленгликоли являютТест агрегации тромбоцитов ся предпочтительными фармацевтически приемПолучение фиксированных-активированных лемыми носителями При изготовлении водных тромбоцитов суспензий для перорального применения носиТромбоциты изолировали из концентратов четель может быть эмульгирующим или суспендиловеческих тромбоцитов при помощи гельрующим агентом Разбавители, такие как этанол, фильтрационного способа, описанного Marguene, пропиленгликоль, глицерин и хлороформ и их G А , et al , J Biol Chera 254, 5357-5363 (1979) и комбинации, могут быть использованы, а также и Ruggen, Z M , et al , J Clm Invest 72, 1-12 (1983) другие материалы Тромбоциты суспендируют при концентрации 2 х 10-8 клеток/мл в модифицированном не содержаДля парентерального введения можно исщем кальция буфере Tyrode, содержащем 137мМ пользовать растворы или суспензии этих соедихлорид натрия, 2мМ хлорид магния, 0,42мМ нений в кунжутном или арахисовом масле или Na2HPO4, 11/9мМ NaHCO3, 2,9мМ КС1, 5,5мМ водных растворах полипропиленгликоля, а также глюкозу, ЮмМ HEPES, при рН7,35 и 0,35% челостерильные водные растворы растворимых фарвеческий сывороточный альбумин (HSA) Эти мацевтически приемлемых солей, описанных промытые тромбоциты активировали добавлениздесь Растворы солей этих соединений особенно ем человеческого а-тромбина при конечной конпригодны для целей внутримышечной и подкожцентрации 2Е/мл, с последующим добавлением ной инъекции Водные растворы, втом числе расингибитора тромбина 1-2581 в конечной концентворы солей в чистой дистиллированной воде, трации 40мкМ К активированным тромбоцитам также применимы для внутривенного введения добавляют параформальдегид до конечной конпри условии, что их рН должным образом довецентрации 0,50% и инкубируют их при комнатной ден, они содержат подходящий буфер, сделаны температуре в течение 30 минут Фиксированные изотоничными при помощи достаточных количеств активированные тромбоциты затем собирают ценсолевого раствора или глюкозы и простерилизотрифугированием при 650хд в течение 15 минут ваны нагреванием или микрофильтрацией Осадки тромбоцитов промывают 4 раза указанным Схема приема при выполнении способа этого выше буфером Tyrode с 0,35% HSA и ресуспендиизобретения такова, что она обеспечивает максируют в том же буфере до концентрации 2 x 1 0 клемальную терапевтическую ответную реакцию, поток на мл ка не будет получено улучшение, и после этого минимальный эффективный уровень, при котором Анализ агрегации тромбоцитов достигается успокаивающий эффект В общем, Фиксированные активированные тромбоциты пероральная доза может быть между приблизиинкубируют с выбранной дозой тестируемого сотельно 0,1мг/кг и приблизительно 100мг/кг, предединения, испытываемого на ингибирование агрепочтительно между 0,1мг/кг и 20мг/кг и наиболее гации тромбоцитов, в течение 1 минуты и агрегапредпочтительно между приблизительно 1мг/кг и цию инициируют добавлением фибриногена 20мг/кг, а внутривенная доза равна приблизительчеловека до конечной концентрации 250мкг/мл но 0,1мкг/кг-100мкг/кг, предпочтительно между Для регистрации агрегации тромбоцитов исполь0,1мкг/кг и 50мкг/кг, имея в виду, что в выборе зовали анализатор агрегации тромбоцитов Profiler подходящей дозы в каждом конкретном случае Model PAP-4 Степень ингибирования агрегации следует учитывать вес пациента, общее состоявыражали в виде процента скорости агрегации, ние здоровья, возраст и другие факторы, которые наблюдаемой в отсутствии ингибитора 1С50, т е могут влиять на ответную реакцию на лекарственколичество ингибитора, необходимое для сниженое средство Лекарственное средство можно ния скорости агрегации на 50%, рассчитывали вводить перорально 1-4 раза в день, предпочтизатем для каждого соединения (см , например, тельно два раза в день Plow, Е F , et al , Proc Natl Acad Sci USA 82, 8057-8061 (1985)) Следующие фармакологические тесты оценивают ингибиторную активность этих соединений данного изобретения в отношении медиированнои фибриногеном агрегации тромбоцитов, связывания фибриногена со стимулируемыми тромбином тромбоцитами и ингибирование АДФиндуцированной агрегации тромбоцитов ex vivo Результаты этих тестов коррелируют с ингибиторными свойствами in vivo соединений данного изобретения Тест агрегации тромбоцитов основан на тесте, описанном в Blood 66 (4), 946-952 (1985) Тестсвязывания фибриногена по существу является тестом Ruggen, Z М , et al , Proc Natl Acad Sci USA 83, 5708-5712 (1986) и Plow E F , et al , Proc Natl Acad Sci USA 82, 8057-8061 (1985) Тест Анализ связывания фибриногена Тромбоциты промывают для освобождения откомпонентов плазмы способом градиента плотности альбумина Walsh,Р N et al ,Br J Haema tol 281 -296 (1977), модифицированным TrapamLombardo, V, et al, J Clm Invest 76, 1950-1958 (1985) В каждой экспериментальной смеси тромбоциты в модифицированном буфере Tyrode (Ruggen.Z M ,et al , J Clm Invest, 72, 1-12 (1983) стимулируют человеческим а-тромбином при 2225°С в течение 20 минут (3,125 х 1011 тромбоцитов на литр и тромбин при 0,1 NIH единиц/мл (NIHНациональный институт здоровья США) Затем добавляют гирудин при 25-кратном избытке (ед /ед) за 5 минут перед добавлением 1251 33 44258 34 меченого фибриногена и испытуемого соедине2000об/мин, получая бедную тромбоцитами ния После этого конечное число тромбоцитов в плазму (РРР) Число тромбоцитов в PRP опредесмеси равно 1 х 1011 тромбоцитов/литр После ляют при помощи счетчика Коултера (Coulter инкубирования в течение дополнительных 30 миElectronics, Hialeah.FL) Если концентрация тромнут при 22-25°С связанный и свободный лиганд боцитов в PRP больше 300000 тромбоцитов/мкл, отделяют центрифугированием 50мкл смеси через то PRP разбавляют РРР для доведения числа ЗООмкл 20% сахарозы при 12000хд в течение 4 тромбоцитов до 300000 тромбоцитов на мкл Заминут Затем осадок тромбоцитов отделяют от тем аликвоты PRP (250мкл) помещают в силикоостальной смеси для определения связанной с низированные стеклянные кюветы (7,25 х 55мм, тромбоцитами радиоактивности НеспецифичеBio/Data Corp Horsham, PA) Затем к PRP добавское связывание измеряют в смесях, содержащих ляют эпинефрин (конечная концентрация 1мкМ) и немеченый лиганд При анализе кривых связывапроводят инкубирование в течение 1 минуты при ния с применением анализа Скетчарда неспеци37°С Затем к PRP добавляют стимулятор агрегафическое связывание получают в виде приспоции тромбоцитов АДФ при конечной концентрации собленного параметра из изотермы связывания ЮмкМ Агрегацию тромбоцитов наблюдают спекпри помощи компьютеризованной программы трофотометр и чески с применением пропускающе(Munson, Р J , Methods Enzymology, 92, 542-576 го свет агрегометра (Bio/Data Platelet Aggregation (1983)) Для определения концентрации каждого Profiler, Model PAP-4, Bio/ Data Corp , Horsham, ингибиторного соединения, необходимой для инPA) Для испытуемого соединения скорость измегибирования на 50% связывания фибриногена со нения (падения) пропускания света и максимальстимулированными тромбином тромбоцитами ное пропускание света (максимум агрегации) ре(icAq), каждое соединение тестировали при 6 или гистрируются в двух повторностях Данные более концентрациях с 1251-меченым фибриногеагрегации тромбоцитов даются в виде процентноном при концентрации 0,176мкмолей/литр го снижения (среднее ± SEM) в падении или мак(60мкг/мл) 1С50 получают путем построения крисимальной агрегации по сравнению с данными, вой оставшегося связывания фибриногена в завиполученными в случае контрольных PRP, пригосимости от логарифма концентрации соединения товленных из проб крови, взятых перед введенив пробе ем тест соединения Ингибирование АДФ-индуцируемой агрегации тромбоцитов ex vivo Экспериментальный протокол Контрольные пробы крови получают за 5-10 минут перед введением тест соединения нечистокровным собакам весом от 10 до 20кг Соединение вводят внутрижелудочно, через желудочный зонд, или перорально, в виде желатиновых капсул Затем получают пробы крови (5мл) с интервалом 30 минут в течение 3 часов и при 6, 12 и 24 часах после дозирования Каждую пробу крови получают венепункцией головной вены и собирают непосредственно в пластиковый шприц, содержащий одну часть 3,8% цитрата натрия на девять частей крови Агрегация тромбоцитов собак ex vivo Пробы крови центрифугируют при ЮООоб/мин, в течение 10 минут для получения богатой тромбоцитами плазмы (PRP) После удаления PRP пробу центрифугируют еще 10 минут при Соединения данного изобретения обнаруживают заметную активность в вышеописанных тестах и рассматриваются как применимые в профилактике и лечении тромбоза, связанного с некоторыми патологическими состояниями Антитромботическая активность в тесте агрегации тромбоцитов собак ex vivo прогнозирует подобную активность в человеке (см , например, Catalfamo, J L , and Dodds, W Jean, "Isolation of Platelets from Laboratory Animals", Methods Enzymol 169, Part A, 27 (1989)) Результаты тестирования соединений данного изобретения описанными выше способами, представлены в таблице ниже Также представлены в таблице результаты сравнительного теста для 44(пиперидил)бутаноилглициласпартилтриптофана , т е соединения, описанного в European Patent Application № 0479481 Ингибирование АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов ex vivo Соединение примера № 2 3 9 1 4 6 5 11 12 7 8 Ингибирование агрегации фиксированных тромбоцитов (IC50MKM) Доза (мг/кг) 0,027 0,064 0,77 0,026 0,72 0,130 0,082 0,064 0,097 0,110 0,068 10 10 5 10 10 10 5 5 5 5 % ингибирования агрегации тромбоцитов ex vivo после перорального введения 1ч Зч 6ч 12ч 24ч 90 60