Спосіб одержання іммобілізованих клітин бактерій

Спосіб одержання іммобілізованих клітин бактерій, що включає введення в суспензію бактерій реагентів, який відрізняється тим, що як бактерії використовують бактерії, вирощені на мінеральнобілковому поживному середовищі, а як реагенти використовують пероксид водню й хлорид кальцію. Корисна модель відноситься до області біотехнології, зокрема, екотехнології, і може бути використана при створенні і виробництві бактерійних препаратів медичного, сільськогосподарського і природоохоронного призначення, зокрема для синтезу різних біологічно активних речовин, одержання високоактивних біокаталізаторів на основі іммобілізованих клітин мікроорганізмів, рослин, а також культивуємих тканинних клітин тварин. З існуючого рівня техніки, який відноситься до даної області, найближчим до корисної моделі, що заявляється, є спосіб отримання іммобілізованих кліток бактерій у вигляді біофлоків, який здійснюється шляхом введення в суспензію бактерій дівінілстірольного латексу в концентрації 200-800мг/л ["Спосіб біохімічного очищення стічних вод", Авт. Свід. №1172887, Інформаційний листок про науково-технічне досягнення, КазНДІНТІ, 1987, №87-31, с 1-2]. Корисна модель, що заявляється, співпадає з відомим способом одержання іммобілізованих клітин бактерій у вигляді біофлоків по наступній сукупності суттєвих ознак, а саме: здійснюється шляхом введення в суспензію бактерій реагентів. Проте, відомий спосіб отримання біофлоків бактерій, один із видів агрегації клітин, не забезпечує технічного результату корисної моделі, яка заявляється, що обумовлене використовуванням в способі як реагента дівінілстірольного латексу {відходів виробництва при синтезі каучуку), який є неприродною сполукою, може приводити до втрати активності бактерій і забруднювати навколишнє середовище. Задача, на рішення якої направлена корисна модель, полягає в удосконаленні способу отри мання іммобілізованих клітин бактерій шляхом заміни синтетичного реагенту на речовини, що є компонентами природних водоймищ та інших еконіш. Поставлена задача розв'язується в способі отримання іммобілізованих клітин бактерій шляхом введення в мікробну суспендовану культуру бактерій реагентів тим, що згідно предмету корисної моделі як бактерії використовують бактерії, вирощені на мінерально-білковому поживному середовищі, а як реагенти використовують пероксид водню і хлорид кальцію. Запропонований спосіб отримання іммобілоованих клітин бактерій у вигляді біофлоків здійснюють таким чином. Бактерійну масу суспендованих клітин, наприклад, бактерій роду Pseudomonas, вирощують на мінерально-білковому поживному середовищі, що включає азот, фосфор, калій, натрій і пептон, рН=7,0 протягом 48 годин. Отримання біофлоків здійснюють шляхом послідовного введення в суспендовану культуру клітин бактерій пероксиду водню і хлориду кальцію в кількості 10'6моль/л і 0,036моль/л, відповідно. Флокуляція біомаси суспендованих клітин відбувається через 5-10хв. після внесення реагентів. Біофлоки випадають в осад, тобто здійснюється їх седиментація. Одержані за пропонованим способом іммобілізовані клітини бактерій у вигляді біофлоків зберігають високу життєздатність на рівні >90% живих клітин в рідиннофазному середовищі, а також при закріпленні на твердофазному носії (наприклад, на торфі, глиністих мінералах, піску, рослинних залишках, стулках молюсків та ін.) протягом 2 років і 00 о о О) 10028 більш із збереженням фенотипічних властивостей, метаболічної, в тому числі, синтетичної активності. Для контролю кількості життєздатних клітин певна кількість мікробного препарату, що містить іммобілізовані клітини бактерій, наприклад, Pseudomonas, розтирають у фарфоровій ступці з фізіологічним розчином. Потім готують ряд послідовних розведень з послі дуючим висівом на тверді поживні середовища і подальшим підрахунком життєздатних клітин після інкубації. Показник життєздатності (ПЖ) визначається як відношення вмісту живих клітин до загального вмісту в популяції п^. І ЇЖ = ВМІСТ ЖИВИХ КЛІТИН .л... 100 /о. загальнийвміст клітин впопуляції [Пуста К.А., Жизнеспособность иммобилизованных клеток микроорганизмов и методы её определения в сб. Иммобилизованные клетки в биотехнологии, Пушино, ОНТИНЦБИ АН СССР, 1987, с.132-140]. Приклад 1. Бактерійну масу суспендованих клітин, наприклад, бактерій роду Pseudomonas, вирощують на мінерально-білковому поживному середовищі що містить азот, фосфор, калій, натрій І пептон, рН=7,0 протягом 48 годин. Отримання іммобілізованих клітин бактерій у вигляді біофлоків здійснюють шляхом послідовного введення в мікробну суспензію клітин пероксиду водню і хлориду кальцію в кількості 10" моль/л і 0,036моль/л, відповідно, (t=30°C, щільність культури 1 -Ю^сл-мл"1). Комп'ютерна верстка А. Попік Після внесення кожного реагенту суспензію перемішують протягом 5хв. Далі через 5-10хв. після внесення реагентів відмічають флокуляцію біомаси і седіментацію біофлоків. Одержані іммобілізовані клітини бактерій (бюфлоки) володіють високою життєздатністю (>90% клітин) на протязі 2 років і більш із збереженням фенотипічних ознак і метаболічної активності. Приклад 2. Бактерійну масу суспендованих клітин, наприклад бактерій роду Pseudomonas, вирощують на класичному поживному середовищі - м'ясопептонному бульйоні, без включення до складу середовища мінеральних компонентів {азот, фосфор, калій, натрій), рН=7,0 протягом 48 годин. При послідовному внесенні в мікробну суспензію клітин пероксиду водню і хлориду кальцію в кількості 10" 6 моль/л і 0,036моль/л, відповідно, біофлоки не утворюються. Технічний результат не досягається. Приклад 3. Бактерійну масу суспендованих клітин, наприклад бактерій роду Pseudomonas, вирощують на мінеральному середовищі, що містить азот, фосфор, калій, натрій без включення до складу середовища білкового компоненту (пептону), рН=7,0 протягом 48 годин. При послідовному внесенні в мікробну суспензію клітин перекису водню і хлориду кальцію в кількості 10"6моль/л і 0,036моль/л, відповідно, біофлоки не утворюються. Технічний результат не досягається. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освгти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601