Спосіб одержання фосфатиділсеріну

Изобретение относится к химии природных соединений, а именно к спо собам получения индивидуальных фосфолипидов. Цель изобретения - повьнаение выхода целевого продукта. Мозг крупного .рогатого скота гомогенизируют смесью хлороформа и метанола. Полученный экстракт концентрируют выпариванием, растворяют в хлороформе и переосаждают ацетоном при соотношении компонентов (0,9-1,I):(19-21). Затем суммарные фосфолипиды растворяют в метаноле, целевой продукт осаждают хлористым кадмием в массовом соотношении с липидами (0,8-0,84):(53-60). Осадок растворяют в хлороформе, хроматографируют, осаждают и высушивают. В сравнении с прототипом выход целевого продукта увеличивается в 2-3 раза. Изобретение относится к химии природных соединений, а именно к способам получения индивидуальных фосфолипидов, которые могут быть использованы при изучении структуры и функций биологических мембран, а также для получения липосомальных препаратов и биологически активных эмульсий. Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта. Способ осуществляют следующий образом. Мозг крупного рогатого скота измельчают гомогенизацией и экстрагируют смесью хлороформа и метанола. Полученный экстракт упаривают до липидного масла» которое растворяют в хлороформе и переосаждают ацетоном при соотношении (0,9-1,I):(19-21). Полученные суммарные фосфолипиды растворяют в метаноле и осаждают целевой продукт хлористым кадмием при массовом соотношении липидов и хлористого кадмия (58-60):(0,30-0,84). Осадок растворяют в хлороформе, обрабатывают раствором трилона Б, упаривают и проводят колоночную хроматографию для очистки фосфатидилсерина, выход которого составляет 2,3-2,5 гр с 1 кг мозга крупного'рогатого скота, П р и м е р . Мозг крупного рогатого скота очищают от соединительной ткани и мозговой оболочки, 1 кг мозга нарезают и гомогенизируют порциями по 100 г в смеси хлороформа и метанола при соотношении 2:1 (500 мл). Гомогенаты объединяют и проводят экстрак 14-90 [ It 4 1 - Л 1 (Л 00 ел 1553215 цию в течение 3 ч при комнатной тем-і пературе и постоянном перемешивании. Осадок отделяют фильтрованием и удаляют, а экстракт упаривают до липид- ^ ного масла. Полученное липидное масло растворяют в 100 мл хлороформа и к нему прибавляют охлажденный до -20 С ацетон в количестве 2000 мл (соотношение 1:20). Полученную смесь в с т р я - (0 хивают в течение 20 мин. Осадок липидов отделяют фильтрованием и смешивают с 2 л охлажденного до -20 С ацетона. Смесь встряхивают в течение 25 мин. Осадок отделяют фильтрованием и про- 15 цесс повторяют еще 3 р а з а . Выход суммарных фосфолипидов составляет 58 г. Суммарные фосфолипиды растворяют в 7 л метанола и к полученному раствору прибавляют 0,30 г хлористого 20 кадмия, растворенного в 2 мл воды (соотношение по массе фосфолнпиды и хлористый кадмий 5 8 : 0 , 8 0 ) . Полученную смесь перемешивают и выдерживают в течение 1 ч при комнатной температу25 ре до формирования осадка, который отделяют фильтрованием и затем р а с т воряют в 50^5 мл хлороформа, обрабатывают последовательно 500 мл 0,5% раствора трилоиа Б и дважды дистиллированной водой по 350 мл. Хлороформный раствор, обогащенный фосфатидилсерином, обезвоживают 0 , 3 кг натрия сернокислого прокаленного и упаривают в вакууме при температуре не бо35 лее 35°С, Полученное липидное масло растворяют в 20 мл хлороформа и наносят на колонку (размером 2,8*30 см), заполненную ДЕАЕ-сефадексом А-25 в ацетатной форме, уравновешенную смесью хлороформ - метанол ( 3 0 : 2 0 ) , Ко- 40 лонку последовательно промывают ЇОООш смеси хлороформа и метанола ( 1 : 1 ) , 1000 мл метанола, Фосфатидилсерин элюируют 2100 мл смеси хлороформ - уксусная кислота ( 1 : 6 ) . Полу- 45 ченный элюат смешивают с 1000 мл Редактор В.Трубченко хлороформа и 1400 мл воды. Нижний хлороформный слой отделяют, а верхний дополнительно экстрагируют 800 мл хлороформа. Хлороформные растворы объединяют н последовательно промывают 1000 мл воды, насыщенным раствором бикарбоната натрия до рН 8,0, Затем хлороформный раствор промывают 1000 мл воды, обезвоживают 0,5 кг прокаленного натрия сернокислого и упаривают до объема 20-25 мл. Фосфатидилсерин осаждают 400 мл охлажденного до -2П°с этанола из полученного хлороформного раствора. Смесь выдерживают при -20°С в течение J ч, а з а тем выпавший*осадок отделяют и высушивают в вакууме в течение 3 ч . Выход хроматографически чистого фосфатидилсерина 2,4 г, В сравнении с прототипом увеличивается выход фосфатидилсерина в 2-3 раза (2,3-2,5 г выделяют с помощью предлагаемого способа из 1 кг сырья, а по прототипу из такого же количества сырья только 0,3-1,2 г целевого продукта). Ф о р м у ла и з о б р е т е н и я Способ получения фосфатидилсерина путем гомогенизации тканей головного мозга крупного рогатого скота, э к с т ракции, концентрирования экстракта, растворения его в хлороформе, хроматографии, элюции, осаждения целевого продукта с последующим его высушиванием, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, перед хроматографией к экстракту добавляют ацетон до объемного соотношения к хлороформу ( 0 , 9 '* 1 ) : ( 19-21), отделяют осадок, растворяют его и осаждают хлористым кадмием при массовом соотношении к суммарным фосфолипидам (0,80-0,84) : :(58-60). Составитель В.Литовченко Техред Л.Олийнык Корректор Т,Палий Заказ 887/ДСП Тираж 149 Подписное ВНИИПИТосударсгвенного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская н а б . , ' д . 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101