Спосіб діагностики гарячки західного нілу

Спосіб діагностики гарячки Західного Нілу, що включає виявлення антитіл в реакції зв'язування комплементу, який відрізняється тим, що як діагностикум використовують антиген, виготовлений методом сахарозо-ацетонової екстракції із вірусу Західного Нілу штаму № 4270, отриманого у вигляді мозкової суспензії лабораторних мишей. (19) (21) u200511873 (22) 12.12.2005 (24) 17.07.2006 (46) 17.07.2006, Бюл. № 7, 2006 р. (72) Лозинський Ігор Миколайович, Білецька Галина Вацлавівна, Козловський Михайло Михайлович, Семонишин Оксана Богданівна, Друль Оксана Стефанівна, Федорук Володимир Ілліч, Шоломей Михайло Володимирович (73) ЛЬВІВСЬКИЙ НАУКОВО-ДОСЛІДНИЙ ІНСТИ 3 15568 Отриману завісину мозкової тканини центрифугують при 1000-1500об/хв протягом 10хв. Рідину, що утворилась над осадом, використовують для зараження наступної партії мишей, інфікований мозок котрих використовується для приготування антигену. Приклад приготування антигену методом сахарозо-ацетонової екстракції. Із отриманої інфікованої тканини мозку мишей на 8,5% охолодженому розчині сахарози готують 20% завісину, додаючи на 1 мозок 0,4мл 5% розчину сахарози. Тричі завісину обробляють охолодженим до -15°С хімічно чистим ацетоном: двічі із розрахунку 1 об'єм завісини на 20 об'ємів ацетону, а третій раз невелику, довільну кількість. Обробку ацетоном проводять шляхом додавання по краплях підготовленої мозкової суспензії в центрифужні стакани з охолодженим ацетоном при безперервному помішуванні скляною паличкою. Кожного разу після обробки ацетоном суміш центрифугують на холоді 10хв. при 1800об/хв і надосадкову рідину видаляють. Антиген міститься в осаді, котрий висушують під вакуумом до перетворення його в сухий порошок. Утворений осад розчиняють боратним буферним розчином рН 9,0 до об'єму вихідної завісини мозку, ретельно розмішують скляною паличкою, залишають на 18-20 год. при +4°С для повної гідратації, після чого центрифугують на холоді (-4°С) 1 год. при 10000 об/хв. Антигеном є рідина, що утворилась над осадом. Для інактивації антиген обробляють бетапропіолактоном 1:1000 протягом 30хв при кімнатній температурі, перемішуючи завісину через 5-10хв. Дію бетапропіолактону нейтралізують 14% розчином гіпосульфіту натрію (на 10мл антигену додають 1,2мл 14% розчину гіпосульфіту) [5]. Отримані цим методом антигени штамів N4270 і Eg-101, після контролю на залишкову інфекційність і нешкідливість для білих безпородних мишей, використовували в РЗК для порівняльного титрування сироваток гарячкових хворих і рекон Комп’ютерна верстка А. Крулевський 4 валесцентів. Постановку РЗК здійснювали загально прийнятим методом. Як видно із даних титрування, при виявленні сероконверсій у хворих і перехворілих на гарячку Західного Нілу, сахарозо-ацетоновий антиген, приготований із штаму № 4270, виявився чутливішим і більш специфічним ніж антиген штаму Eg-101. Він виявляє у вищому відсотку число серопозитивних до вірусу гарячки Західного Нілу осіб (81,2% проти 69,2-72,8%) і у вищих титрах (1:56,7 проти 1:34,4 1:35,1) комплементзв'язуючі антитіла. Таким чином, штам №4270 вірусу Західного Нілу, відповідаючи регламентованим параметрам відбору штамів-кандидатів для виробництва імунобіологічних препаратів, забезпечує вищий діагностичний ефект порівняно з аналогічним ефектом прототипного штаму. Використання цього штаму для приготування сахарозо-ацетонового діагностикуму дозволяє підвищити антигенну і біологічну активність діагностикуму та підвищити достовірність діагностики захворювань гарячкою Західного Нілу в Україні. Джерела інформації: 1. Львов Д.К., Клименко С.М., Гайдамович С.Я. // Арбовирусы и арбовирусные инфекции. - М.: Медицина, - 1989. - 335 с. 2. Виноград И.А. Арбовирусы в Украинской ССР и их медико-биологическое значение: Дис. ... д-ра мед. наук. - Львов, 1983. - 505 с. 3. Пат. 7905 України, МПК C12N 7/00. Штам вірусу Західного Нілу (Virus Nili Occidentalis) №4270 для виготовлення специфічних імунобіологічних препаратів. / І.М. Лозинський, Г.В. Білецька, М.М. Козловський та ін. // Заявка №20041210204 від 13.12.2004. – Опуб. 15.07.2005. Бюл. №7. 4. Лозинський І.М., Виноград І.А. Арбовіруси та арбовірусні інфекції у лісостеповій зоні України // Мікробіол.журнал. - 1998. - т. 60, № 2. - С.49-60. 5. Арбовирусы. Сборник научных трудов. - Москва, 1986. - 180с. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601